原代培养新生大鼠海马神经元实验技术的建立

目的：摸索应用适合培养条件获取新生大鼠海马神经元的技术方法。方法：采用较低浓度、短时的酶消法配合应用含B-27的特殊培养基培养海马神经元细胞。结果：培养出的新生大鼠海马神经元结构特征明显且生长良好,有较高纯度。结论：本方法可以稳定地获得较高纯度的新生大鼠海马神经元。     

新生大鼠海马神经元原代培养及膜片钳全细胞记录

目的探讨一种适用于膜片钳全细胞记录的海马神经元培养方法。方法选择鼠龄在1d内的Wistar大鼠,迅速断头,取双侧海马,神经基础培养基添加B-27及L-谷氨酰胺进行神经元原代培养,培养至第10天时,使用免疫荧光技术配合神经元特异性核蛋白NeuN进行细胞鉴定;神经元的电生理特征由膜片钳全细胞记录。结果该方法所培养神经元状态良好,经鉴定发现纯度可高达100%,通过膜片钳全细胞法可记录到自发性动作电位及自发性兴奋性突触后电流。结论本方法操作简便、高效,所培养的海马神经元状态良好,适用于膜片钳全细胞记录。     

大鼠鼠胚海马神经细胞原代培养及神经元鉴定

目的建立大鼠鼠胚海马神经元原代培养的方法。方法取孕龄17-18天的Wistar大鼠腹中胎鼠,血清培养法进行海马神经元的原代培养,然后用倒置显微镜进行形态学观察和神经元特异性烯醇化酶免疫组织化学方法进行神经元的鉴定。结果培养8天后的海马神经元经形态学和组织化学方法观察证实神经细胞发育成熟。结论大鼠鼠胚海马神经元原代培养是一种新型的培养方法,具有明显的优势。     

一种大鼠海马神经元的原代培养方法

目的 建立一种简便高效的海马神经元的原代培养方法.方法 无菌环境下取新生SD大鼠(24 h内)海马,清洗、剪碎,以0.25%胰蛋白酶消化,200目滤网过滤,混合培养,约5 d后加入阿糖胞苷抑制神经胶质细胞的生长.采用免疫细胞化学方法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达情况,观察海马神经元形态.结果 海马神经元纯度≥90%.神经元接种3 d后具有典型的形态特征,13～14 d突起形成密集的神经纤维网络,14 d后细胞出现凋亡.结论 本实验方法步骤简便,可获得纯度较高的海马神经元,为研究与海马神经元相关的疾病提供了实验基础.     

新生大鼠海马神经元的原代培养与鉴定

目的:探讨建立简便高效的大鼠海马神经元原代培养的纯化方法。方法:(1)离体培养新生24 h内SD乳鼠海马神经元,每天在倒置相差显微镜下进行神经元的形态学观察;(2)MTT法检测培养不同时间段神经元的活力变化,并绘制生长曲线;(3)纯化培养9 d神经元利用免疫荧光染色法检测β-微管蛋白Ⅲ(β-tublinⅢ)的表达率。结果:(1)倒置相差显微镜下观察原代培养的海马神经元,刚分离种植时可见神经细胞为圆形,24 h大多数细胞贴壁,3 d细胞突起增大、增粗,培养5~7 d神经元胞体丰满,突起交织成的网络更密集,培养14~16 d后,神经元开始退化;(2)生长曲线结果发现海马神经元体外培养经历了4个时期,即生长潜伏期、对数生长期、平台期、生长停滞期;(3)经β-tublinⅢ鉴定海马神经元纯度为(93.0%±2.5%)。结论:本实验方法步骤简便,可获得纯度较高的海马神经元,为研究与海马神经元相关的疾病提供了实验基础。     

腺苷对原代培养的大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的作用

目的在离子通道水平研究腺苷对原代培养的大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道(BKCa)的作用。方法采用新生24h的乳鼠,取出海马,清除表面血管,以胰酶消化和巴氏管吹打的方法制备海马神经元,细胞培养6～8d后,MAPⅡ染色鉴别神经元表面标志;采用全细胞膜片钳技术,对细胞进行封接、破膜并记录BKCa通道电流,以细胞旁方式给药观察不同浓度腺苷对BKCa通道的作用。结果原代培养的海马神经元上可以成功记录到BKCa电流,其为一组幅值较大,可以快速激活且几乎不失活的外向电流;腺苷(1～100μmol/L)可以增大BKCa电流,浓度越高,增长幅度越大;100μmol/L腺苷对BKCa电流的影响具有电压依赖性,同时它还可以使BKCa电流的激活曲线负向漂移。结论腺苷可以增大海马神经元BKCa电流幅值,这可能是腺苷作为内源性抗癫痫物质发挥抗癫痫作用的机制之一。     

新生大鼠海马神经元的改良培养

探讨体外培养高纯度神经元的方法。方法：体外培养新生大鼠海马神经干细胞,再使神经干细胞在无血清N2添加剂培养基条件下向神经元方向分化。结果：从新生大鼠海马组织培养出的神经干细胞,表达巢蛋白,神经干细胞的分化细胞绝大部分表达MAP2,极少数几个细胞表达GFAP。结论：通过本实验方法可获得高纯度的神经元,为后续实验奠定基础。     

新生大鼠纹状体神经元ATP敏感钾通道的特性

为确定纹状体神经细胞膜上存在ＡＴＰ敏感钾通道，用膜片钳技术在培养新生的大鼠纹状体神经元上记录了单通道电流。在细胞贴附式时，胞外给予ＮａＣＮ可诱发一种电导为６０ｐＳ的钾离子单通道，其激活不依赖于膜电位。去极化使通道平均开放时间和开放概率增大。在内面向外式时，ＡＴＰ或优降糖（ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ）均可抑制通道活动，通道激活不依赖于胞内Ｃａ￣（２＋）。结果表明，大鼠纹状体神经细胞膜上存在一种６０ｐＳ的ＡＴＰ敏感钾通道。     

新生大鼠纹状体神经元ATP敏感钾通道的特性

为确定纹状体神经细胞上存在ＡＴＰ敏感钾通道，用膜片钳技术在培养新生的大鼠纹状体神经元上记录了单通道电流。在细胞贴附式时，胞外给予ＮａＣＮ可诱发一种电导为６０ｐＳ的钾离子单通道，其激活不依赖于膜电位。去极化使通道平均开放时间和开放概率增大。     

氧化苦参碱对大鼠海马神经元细胞钠通道的影响

目的 研究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对培养的新生大鼠海马神经元细胞膜钠电流作用,探讨OMT在离子通道水平的作用机制.方法 采用原代培养新生大鼠海马神经元细胞,应用全细胞膜片钳技术,观察不同浓度OMT对培养8～12天的大鼠海马神经元细胞膜钠通道的作用.结果 OMT对海马神经元细胞膜钠电流有明显的抑制作用(n=20,P＜0.05),且这种作用具有浓度依赖性,OMT对钠电流作用的半数抑制浓度为(46.1±1.3)μmol/L.在30μmol/L时,OMT可使钠电流Ⅰ～Ⅴ曲线显著上移,并且改变钠电流的翻转电位,但不影响激活电位和峰电位.通道动力学显示OMT可以促进钠电流复活曲线向右移动,减慢通道由失活状态恢复到激活状态的过程,但对激活曲线和失活曲线则没有明显的作用.结论 OMT呈浓度依赖性和电压依赖性抑制大鼠海马神经元细胞膜钠电流,并且抑制钠通道的复活过程.     

吡拉西坦对海马神经元钙激活钾通道的作用

目的 研究吡拉西坦对原代培养海马神经元钙激活钾通道（KCa通道）的作用,以揭示吡拉西坦抗缺血性脑损伤的电生理机制。方法 应用膜片钳制技术记录原代培养的海马神经元的单通过电流活动,经p-CLAMP软件进行微机采样储存数据和数据的分析处理。结果 吡拉西坦对KCa通道具有明显的激活作用,增加通道开放概率,缩短通道关闭时间（P＜0．01）。结论 吡拉西坦可能通过激活KCa通道而对缺血神经元具有保护作用。     

Effect of etomidate on voltage-dependent potassium currents in rat isolated hippocampal pyramidal neurons

Background Previous studies demonstrated general anesthetics affect potassium ion channels, which may be one of the mechanisms of general anesthesia. Because the effect of etomidate on potassium channels in rat hippocampus which is involved in memory function has not been studied, we investigated the effects of etomidate on both delayed rectifier potassium current （IK（DR）） and transient outward potassium current （I_K（A）） in acutely dissociated rat hippocampal pyramidal neurons.Methods Single rat hippocampal pyramidal neurons from male Wistar rats of 7-10 days were acutely dissociated by enzymatic digestion and mechanical dispersion according to the methods of Kay and Wong with slight modification. Voltage-clamp recordings were performed in the whole-cell patch clamp configuration. Currents were recorded with a List EPC-10 amplifier and data were stored in a computer using Pulse 8.5. Student＇s paired two-tail t test was used for data analysis. Results At the concentration of 100 μmol/L, etomidate significantly inhibited IK（DR） by 49.2% at ＋40 mV when depolarized from -110 mV （P 〈0.01, n=8）, while did not affect IK（A） （/1=8, P 〉0.05）. The IC50value of etomidate for blocking IK（DR）was calculated as 5.4 μmol/L, with a Hill slope of 2.45. At the presence of 10 μmol/L etomidate, the V1/2 of activation curve was shifted from （17.3±1.5） mV to （10.7±9.9） mV （n=8, P 〈0.05）, the V1/2 of inactivation curve was shifted from （-18.3±2.2） mV to （-45.3±9.4） mV （n=8, P 〈0.05）. Etomidate 10 μmol/L shifted both the activation curve and inactivation curve of IK（DR））to negative potential, but mainly affected the inactivation kinetics.Conclusions Etomidate potently inhibited IK（DR） but not IK（A） in rat hippocampal pyramidal neurons. IK（DR） was inhibited by etomidate in a concentration-dependent manner, while IK（A） remained unaffected.     

PTD-BDNF对海马神经元钠、钾、钙离子通道的影响

目的研究PTD-BDNF对大鼠海马神经元细胞钠、钾、钙离子通道的影响。方法全细胞膜片钳技术记录海马神经元细胞电压依赖性钠、钾、钙通道电流,观察并分析PTD-BDNF对离子通道电流的影响。结果与对照组比较,PTD-BDNF、BDNF使海马神经元钠通道电流强度峰值分别增加39.35%和41.99%（n=4,P〈0.01）;使钠通道电流-电压关系曲线下移（n=4,P〈0.01）;使海马神经元钙通道电流强度峰值分别增加39.20%和38.72%（n=4,P〈0.01）;使钙通道电流-电压关系曲线下移（n=4,P〈0.01）;使海马神经元钾通道电流IA、IK在20mv刺激处分别比对照组降低29.03%、28.06%和29.76%、33.38%;使钾电流-电压关系曲线下移（n=4,P〈0.01）。PTD-BDNF与BDNF两者之间比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论PTD-BDNF显示了与脑源性神经营养因子相似的电压依赖性离子通道的调节作用,说明PTD-BDNF与脑源性神经营养因子在调节神经元静息膜电位、神经兴奋性方面有相同的分子基础。     

ACTH和吗啡对创伤痛大鼠海马锥体神经元NMDA受体通道的抑制

目的 探讨创伤痛大鼠海马锥体神经元NMDA受体通道动力学特性的变化ACTH和吗啡的作用。方法 实验以双侧踝关节离断大鼠为创伤痛模型，应用细胞贴附式膜片钳技术。结果 在正常7－10d大鼠急性分离的海马CA1区锥体神经元上，记录到多数膜下的NMDA受体通道有两个电导水平，分别为50pS及38pS,以50pS占多数，且以短开放为主，但也有长开放通道。38pS电导仅有短开放通道。大鼠双侧踝关节完全离断后2h,50pS有38pS短开放通道，50pS长开放通道的开放概率和开放时间均比正常对照组显著增加还出现了38pS长开放通道。在50pS短开放通道的记录中，ACTH^1-24和吗啡可显著抑制创伤大鼠海马CA1区锥体神经元NMDA受体通道的开放概率和开放时间；预中入阿片受体拮抗剂纳络酮能阻断上述的抑制效应。结论 ACTH和吗啡对伤害性信息传递的调制作用可能与其通过阿片受体抑制创伤大鼠海马NMDA受体通道动力学特性的变化有关。     

缺氧缺糖对大鼠大脑皮层神经元电压依赖性钾通道的影响

目的：研究在缺氧缺糖状态下，大鼠大脑皮层神经元膜电压依赖性钾通道的开关动力学变化。方法：急性分离大鼠大脑皮层神经元和细胞贴附膜片钳技术。结果：与对照组相比，在缺氧缺糖状态下，电压依赖性钾通道开放时间常数τ１和τ２分别由对照组的０．４２９ｍｓ和８．２０９ｍｓ增加至１．８５５ｍｓ和１７．４６４ｍｓ（Ｐ＜０．０１），关闭时间常数τ和通道的电流幅度无明显变化。结论：缺氧缺糖可导致大鼠皮层神经元电压依赖性钾通道开放显著增加，对胞外钾离子聚集起重要作用，从而提高细胞的兴奋性，参与神经元的损伤。     

K+v通道亚型在急性缺氧性肺血管收缩中的作用研究

目的 探讨K+v通道亚型在急性缺氧性肺血管收缩(HPV)中的作用.方法 Wistar大鼠30只随机分为两组:常氧对照组和低氧组,采用酶消化的方法 获得单个肺动脉血管平滑肌细胞(PASMC).将分离细胞经a-actin免疫组化鉴定为PASMC细胞.采用膜片钳技术记录PASMC静息膜电位(Em)和电压门控性钾通道电流(Ikv).细胞内灌流Kvl.2、Kvl.3、Kvl.5、Kv2.1抗体混合液(1:125),探讨钾通道在HPV中的作用.结果 低氧组膜电位明显去极化,细胞内灌流Kvl.2、Kvl.3、Kvl.5、Kv2.1抗体混合液可显著抑制常氧对照组PASMC的Ikv,使Em去极化,细胞内灌流Kvl.2、Kvl.3、Kvl.5、Kv2.1抗体混合液对低氧组PASMC的Ikv和Em均无显著影响.结论 Kvl.2、Kvl.3、Kvl.5、Kv2.1可能是氧敏感型通道,并可能介导了急性缺氧性肺血管收缩.     

锌对新生大鼠海马神经元bcl-2 mRNA表达的影响

目的：观察微量元素锌对新生大鼠海马神经元细胞凋亡抑制基因ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达的影响。探讨锌影响中枢神经系统发育的分子机制。方法;采用无血清培养Ｗｉｓｔａｒ新生儿大鼠海马神经元细胞,分别在无血清培养液中加入不同浓度的ＺｎＳＯ４溶液培养７ｄ,采用图像分析技术分析其生长分化情况;收集海马神经元细胞,利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术检测海马神经元ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达情况。结果：锌可通过提高ｂｃｌ－２ｍＲＮ     

The effect of coriaria lactone on NMDA receptor mediated currents in rat hippocampal CA1 neurons

Epileptogenesis of (CL) has been verified bymany studies. We can establish an ideal animalmodel of epilepsy on the basis of these studiesll' ZJ.Homeostasis of cytoplasmic free Ca2 is the basisfor neuron to perform its normal functions. Theabnormal elevation of cytoplasmic free Ca2 is thekey step in the triggering of a series of pathologicalchanges"'. Our past findings showed that CLcould elevate LCa' j, of hippocampal neurons[4].But there was no report about the way thoughwhich CL ele…