银杏种子中胰蛋白酶抑制剂的分离纯化

胰蛋白酶抑制剂（trypsin inhibitor,TI）是一个功能上的概念,泛指具有胰蛋白酶抑制作用的多肽或蛋白质,对胰蛋白酶、纤溶酶、溶酶体酶等多种蛋白酶均有抑制作用。胰蛋白酶抑制剂在自然界的分布十分广泛,因此,本研究初步推断在银杏种子中含有胰蛋白酶抑制剂,将对其进行提取分离。银杏（Ginkgo biloba L.）科属种植物,原产于我国,     

α1—抗胰蛋白酶等对修饰胰蛋白酶的作用

用葡聚糖T2000修饰的胰蛋白酶,对α_1-抗胰蛋白酶的抑制作用、对尿素的变性作用以及对胃蛋白酶的消化作用的耐受力均高于天然胰蛋白酶。     

大鼠肝组织羟脯氨酸的测定

报道大鼠肝组织羟脯氨酸的测定方法。结果发现，在肝组织的匀浆液中加入适量的胰蛋白酶，可使测得的羟脯氨酸含量无论是正常或肝纤维化组均较末加胰蛋白酶者明显增高（P＜0．01）。其原因可能与胰蛋白酶分解组织匀浆中胶原蛋白，使更多的羟脯氨酸释放有关。同时，确定了肝组织在缓冲液中的较佳浓度，当肝组织浓度为20％时，其羟脯氨酸含量达到最高值，在正常组和肝纤维化组之间有统计学意义（P＜0．01）。     

肾上腺皮质细胞的体外培养方法和初步应用

用不同浓度的胶原酶和胰蛋白酶在不同作用时间下进行肾上腺皮质细胞的分离,得出最适条件为0.0625％胰蛋白酶消化30min和Img/ml胶原酶消化60min。其中胶原酶的细胞得率、细胞存活率及存活时间均略高于胰蛋白酶。oortrosyn Z刺激皮质细胞分泌皮质酮的最适终末浓度为125pg/ml。在此浓度刺激下,4月龄大鼠与20月龄大鼠皮质细胞的皮质酮分泌有极显著差异,说明随着月龄的增加。大鼠的肾上腺皮质功能有所减退。     

类胰蛋白酶及其抑制剂研究进展

研究人员在利用胰蛋白酶对肥大细胞进行酶组织化学染色时发现,肥大细胞能够被染色,说明其中存在着具有胰蛋白酶活性的物质.人们对该物质纯化后发现,它是由肥大细胞释放的,并且其胰蛋白酶样活性90%以上来自一种酶,因此命名该酶为类胰蛋白酶(tryptase).由于该酶是肥大细胞含量最丰富的一种分泌性介质,且在多种疾病的进程中起到诱导作用[1],因此类胰蛋白酶及其抑制剂已经成为近年来炎症及其相关疾病研究领域的热点.     

胰蛋白酶抑制剂研究进展

胰蛋白酶抑制剂(Trypsin inhibitor,TI)泛指具有抑制胰蛋白酶活性作用的一类物质，其分子量一般都比较小，作用机制清楚，是研究蛋白质构效关系的合适材料。在蛋白质的一级结构、溶液构象、晶体结构、作用机制、功能区域拆分、构象重组、基因结构与表达等方面的研究工作中是一个较为理想的研究对象。作为基因表达的初级产物，蛋白酶     

胰蛋白酶诱导肺上皮细胞分泌白细胞介素-8的作用

目的:探讨胰蛋白酶对人上皮细胞白细胞介素-8(IL-8)分泌的影响.方法:人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的胰蛋白酶和/或胰蛋白酶抑制剂进行刺激.刺激时间为2 h、8 h和16 h.用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平.结果:经过16 h的培养,胰蛋白酶可引起浓度相关性IL-8释放,胰蛋白酶在浓度1μg/L时就可引起IL-8的释放量增加,3 μg/L时诱导IL-8的释放量达高峰,为基础分泌量的5倍,但随着胰蛋白酶浓度的增加,IL-8的释放量反而下降.胰蛋白酶抑制剂可以抑制胰蛋白酶诱导IL-8释放的作用.时间相关曲线表明,胰蛋白酶从2 h起即可引起IL-8释放,16 h达高峰.结论:胰蛋白酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8,表明它能积极参与呼吸道的炎症过程.     

丝氨酸蛋白酶对肥大细胞IL-4分泌的影响

目的探讨凝血酶、胰蛋白酶和类胰蛋白酶等丝氨酸蛋白酶对肥大细胞P815分泌IL-4的影响。方法肥大细胞培养后用凝血酶、胰蛋白酶、类胰蛋白酶单独或与相应抑制剂凝血酶抑制剂、大豆胰蛋白酶抑制剂、α抗胰蛋白酶抑制剂、亮肽素结合处理肥大细胞,收集上清并用ELISA方法检测IL-4的水平。结果胰蛋白酶、类胰蛋白酶以浓度依赖的方式促进肥大细胞P815分泌IL-4。大豆胰蛋白酶抑制剂和α抗胰蛋白酶能阻断胰蛋白酶引起的肥大细胞IL-4分泌(P0.05)。亮肽素能阻断类胰蛋白酶引起的肥大细胞IL-4分泌(P0.05)。而凝血酶对肥大细胞IL-4的分泌功能无影响。结论胰蛋白酶和类胰蛋白酶刺激肥大细胞IL-4分泌。     

一种具有胰蛋白酶抑制活性的半夏蛋白的纯化与N端氨基酸序列分析

目的分离纯化具有胰蛋白酶抑制活性的半夏蛋白,分析其对胰蛋白酶的抑制活性、抑制机制与N端氨基酸序列。方法采用以胰蛋白酶为配体的亲和色谱和Sephadex G-50凝胶过滤法,从半夏蛋白粗提液的40%(NH_4)_2SO_4沉淀中分离纯化活性半夏蛋白;采用12%SDS-PAGE鉴定其纯度,并估算其相对分子质量;采用Ed-man降解法分析其N-端氨基酸序列。结果纯化的活性半夏蛋白经SDS-PAGE检测呈现单一条带,相对分子质量为1.4×10～4;比活力为1059.012U/mg,活力回收率为24.40%;对胰蛋白酶的质量抑制比为1:4.72,抑制常数(Ki)为7.17×10～(-6)mol/L;其N端前6个氨基酸残基顺序为DPVVDG。结论该活性半夏蛋白是一种丝氨酸蛋白酶抑制刺,为胰蛋白酶的竞争性抑制剂。     

不同来源胰蛋白酶对染色体G显带的影响

目的:观察不同来源胰蛋白酶对染色体G显带的影响.方法:常规外周血染色体制备,G显带.用捷达801形态分析系统采集并测量,用SPSS 10.0统计软件处理.结果:发现相同浓度,来源于猪、羊、牛的胰蛋白酶在G显带中的作用不尽相同,其中牛胰蛋白酶具有使染色体拉长的作用.结论:G显带过程中用牛胰蛋白酶消化可提高分辨率.     

牛磺熊去氧胆酸对谷丙转氨酶活性的影响

通过测定谷丙转氨酶（ＧＰＴ）活力的方法，观察了牛磺熊去氧胆酸（ＴＵＤＣＡ）对ＧＰＴ的作用。发现ＴＵＤＣＡ对ＧＰＴ呈抑制作用。且随其浓度的增加，抑制作用增强，当ＴＵＤＣＡ浓度为０．８３３ｍｇ／ｍｌ时，对ＧＰＴ的抑制率达到８１％。动力学实验还表明，增加底物浓度，并不能消除ＴＵＤＣＡ对ＧＰＴ活力的抑制作用，Ｋｍ值不变，Ｖｍ值作减小，Ｋｍ／Ｖｍ值增大，呈现出非竞争性抑制作用。同时用ＣＣｌ４小鼠肝损伤模型，     

应用胰蛋白酶分离豚鼠耳蜗内毛细胞

目的：采用胰蛋白酶孵育后机械分离法以获得单离的豚鼠耳蜗内毛细胞。方法：豚鼠被迅速断头处死，暴露耳蜗，在解剖显微镜下去除耳蜗侧壁，经胰蛋白酶消化并轻轻吹打，以获得单离的豚鼠耳蜗内毛细胞。静置后在倒置相差显微镜下观察。结果：本法每侧耳分离出活性好的内毛细胞约5～20个，多数分离的内毛细胞能存活5h左右。结论：此技术能提供足量的单离内毛细胞，用于内毛细胞的电生理性质等研究。     

人轮状病毒体外持续感染机理的研究

本文从人轮状病毒的产生、感染及增殖周期三个水平研究胰蛋白酶对人轮状病毒持续感染株的影响,以便探讨人轮状病毒体外持续感染的机理.研究结果发现,Mads-105细胞经胰蛋白酶处理后不能明显提高病毒产量,且人轮状病毒持续感染株经胰蛋白酶处理后和维持液中含胰蛋白酶对病毒在MA-104细胞中增殖亦无显著影响(P>0.05),从而表明人轮状病毒持续感柒株已失去对胰蛋白酶的依赖性.其对胰蛋白酶依赖性的突变可能是造成人轮状病毒体外持续感染的机理之一.     

壳寡糖激活巨噬细胞的机制

目的：探讨巨噬细胞结合、内吞壳寡糖以及壳寡糖激活巨噬细胞的机制。方法：利用荧光物质2-氨基吖啶酮标记壳寡糖，在激光共聚焦显微镜下观察巨噬细胞内吞壳寡糖的过程，流式细胞仪分析细胞的荧光强度，通过竞争性抑制实验及钙离子、胰蛋白酶、秋水仙碱对内吞的影响来确定巨噬细胞内吞壳寡糖的机制。通过RT—PCR方法检测TNF—α来反映结合及内吞过程对壳寡糖刺激巨噬细胞的影响。结果：巨噬细胞可结合内吞壳寡糖。内吞易受温度影响，37C较迅速（〈2min），4C只能结合不能内吞。EDTA可抑制巨噬细胞内吞壳寡糖；经胰蛋白酶预处理的巨噬细胞摄取壳寡糖的能力大大降低，终止胰蛋白酶后巨噬细胞摄取壳寡糖的能力得到恢复。秋水仙碱预处理可明显抑制巨噬细胞摄取壳寡糖，并呈剂量依赖性。0．1mol／L甘露糖可抑制壳寡糖对巨噬细胞的刺激作用。结论：甘露糖受体介导的吞饮是巨噬细胞内吞壳寡糖的一条重要途径，甘露糖受体在壳寡糖激活巨噬细胞中起重要作用。     

去乙酰基壳聚糖在亲和层析纯化胰蛋白酶中的应用

首次用环氧氯丙烷活化的去乙酰基壳聚糖（Ｃｈｉｔｏｓａｎ）为载体，鸡卵粘蛋白（Ｏｖｏｍｕ－ｃｏｉｄ，简称ＣＨＯＭ）为配基，制备了胰蛋白酶（Ｔｒｙｐｓｉｎ）的亲和吸附剂，纯化效率与琼脂糖（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ）相近，为４７倍，纯化的Ｔｒｙｐｓｉｎ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳为单一区带。表明Ｃｈｉｔｏｓａｎ可以代替Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ作为亲和层析的载体。     

乌司他丁对多器官的保护作用

急危重疾病、重大手术、器官移植及其引发的病理过程可以对机体器官产生不同程度的损害,而有效的药物应用可能会降低各主要器官的损害程度。乌司他丁是从健康成年男性尿液中分离纯化出来的一种胰蛋白酶抑制剂,无免疫原性,可抑制胰酶、溶酶体、炎性介质的过度释放,抑制心肌抑制因子的产生,清除氧自由基,稳定溶酶体膜,改善微循环,对全身各主要脏器产生重要的器官保护作用。     

牛磺熊去氧胆酸的获取方法及药理研究进展

牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)是熊胆中的主要药理活性成分,临床上主要用于治疗与胆汁酸代谢异常相关的疾病。目前,市场上提供熊胆制品的唯一渠道是通过引流取胆法,但是该法目前受到相关条例的限制,因此有必要找到新的获取熊胆制品的方法。综述TUDCA的药理研究进展及人工合成TUDCA的方法尤其是生物合成法的研究进展。     

BrdU免疫组织化学染色方法的改进（漂片法）

目的改进用漂片法进行BrdU免疫组织化学染色时的封闭液,以减少组织切片破损。方法用5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU）标记大鼠踏转轮运动中所引起增殖细胞,通过ABC免疫组织化学方法染色。在染色过程中,比较不同的封闭液（羊血清、牛血清白蛋白、胰酶抑制剂）减少脑片破损的效果。结果踏转轮运动可使大鼠海马齿状回BrdU阳性细胞数明显多于对照组。加入不同的封闭液后,组织片破损率明显下降,尤其是加入牛血清白蛋白和胰酶抑制剂组,但胰酶抑制剂组有非特异性染色。结论牛血清白蛋白是较理想的封闭液。     

应用胰蛋白酶／DNA酶消化法分散人绒毛膜滋养层细胞

目的：获得人绒毛膜滋养层细胞,方法：应用胰蛋白酶／DNA酶消化法进行消化,经光镜和电镜观察。结果：我们获得了人绒毛膜滋养层细胞。结论：取人妊娠45－55天刮宫术后的绒毛,甲胰蛋白酶消化可得到绒毛滋养层细胞。