EGFR纳米抗体抑制雌激素依赖的人子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖与迁移

纳米抗体是骆驼来源的一种轻链缺失的抗体,具有与单克隆抗体相似的抗原结合特异性和亲和力,此外还具有分子量小、稳定性好、易于制备等优点,因而具有巨大的生物医药应用价值。本研究利用基因工程技术在大肠杆菌中成功制备出了高纯度的EGFR纳米抗体(antiEGFRnano)。CCK-8法检测细胞增殖及迁移实验(细胞划痕实验和Transwell法检测)证明,重组的EGFR纳米抗体具有显著的抑制子宫内膜癌细胞增殖及迁移的活性,这为靶向EGFR治疗子宫内膜癌提供了一种全新的思路和方法。     

王不留行提取物对内皮细胞增殖、迁移及其黏附的作用评价

目的体外分析王不留行抑制人微血管内皮细胞(HMEC)增殖、迁移和黏附的有效部位。方法SRB法测定药物干预细胞增殖的IC50和药物作用时间与药效学的关系;划线灼伤法研究细胞迁移;体外基质胶分析药物对细胞黏附能力的影响;HE染色观察药物对细胞染色体的影响。结果王不留行有效部位对HMEC增殖抑制的IC50为3.60mg.L-1,加药4h后起作用。加药48h后HMEC迁移受到明显抑制(迁移率为40.33%,对照组迁移率为77.68%)。加药组细胞黏附受到明显抑制,且呈浓度依赖关系。结论王不留行提取物能明显抑制内皮细胞增殖、迁移及黏附,因此具有潜在的价值用于抑制血管生成。     

大鼠肝实质及非实质细胞分离和质量检测

目的　探索分离肝实质细胞及非实质细胞的合理条件。方法　应用胶原酶 /蛋白酶E消化分离和低速离心技术 ,以细胞活率、细胞产量和细胞纯度等指标检测细胞质量。结果　在 37℃ ,0 5g·L-1的胶原酶作用 30min ,80 0r·min-1离心条件下 ,肝实质细胞产量 (98× 10 9± 4× 10 9·L-1)、纯度 (97%± 2 % )和活率 (>90 % )最好。胶原酶和蛋白酶E合用 ,肝非实质细胞产量最高 (2 8 6× 10 9± 3 7× 10 9·L-1) ,Kupffer细胞纯度合理 (16 0 %± 3 5 % ) ,且Kupffer细胞含量符合体内正常分布。结论　本实验方法分离细胞对于进一步研究肝实质 ,尤其肝非实质细胞功能有实际意义。     

四丁基丙二胺对人MG63骨髓瘤细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响

目的分析新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutylpropanediamine,TBP)对人骨髓瘤MG63细胞生长的影响及其机制。方法 MTT法用于分析细胞增殖,流式细胞分析用于细胞周期和凋亡细胞鉴定,琼脂糖凝胶电泳用于分析DNA片段化,Western blot用于分析细胞凋亡相关蛋白的表达水平,Transwell技术用于分析细胞的迁移能力。结果TBP明显抑制MG63细胞的增殖和迁移能力,抑制效应呈时间和剂量依赖性。流式细胞分析发现,TBP干扰细胞周期,导致G1和G2期细胞比例升高,但S期细胞比例明显下降,同时凋亡细胞数量大幅增加。TBP处理后,细胞染色体DNA出现凋亡细胞典型的DNA片段化现象,细胞质中促凋亡蛋白Bax和细胞色素C含量明显升高。结论 TBP具有抑制人骨髓瘤MG63细胞增殖的药理活性,其机制与抑制细胞周期和诱导细胞凋亡有关,提示TBP具有用于临床骨髓瘤治疗的潜在价值。     

人参总甙及单体对脐血CD34+细胞体外增殖及分化的影响

目的：探讨人参总甙、人参皂甙单体对脐血CD34^ 细胞体外增殖及分化的影响。方法：用MethoCult^TM H4435半固体培养基加入不同浓度的人参总皂甙(GS)、Rgl、Rbl，计数CFU—E、BFU—E、CFU—GM集落。结果：GS、人参皂甙单体Rg1、Rb1具有刺激脐血CD34^ 细胞集落形成的作用，人参皂甙单体的作用优于GS。不同浓度的人参皂甙对脐血CD34^ 细胞集落刺激不同，但其集落形成能力明显高于对照组。GS的最佳浓度为50mg／L，Rg1和Rb1最佳浓度为5mg/L。高浓度的GS、Rgl、Rb1集落形成能力下降，但并不显示抑制作用。结论：人参总甙、人参皂甙单体能促进造血干或祖细胞增殖，并且能诱导定向分化，具有类似生长因子和协同生长因子作用。     

新型化合物F-2对人肺癌NCI-H520细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的：探讨新型化合物F-2对人非小细胞肺癌NCI-H520细胞增殖迁移及凋亡的影响。方法： CCK-8实验检测肺癌细胞增殖情况;采用划痕实验检测化合物对H520细胞迁移的情况;倒置显微镜观察化合物刺激对细胞形态的影响;流式细胞术实验检测化合物对细胞凋亡的影响;Western blot实验检测化合物对细胞迁移及凋亡相关蛋白表达的影响。结果：化合物对H520细胞增殖有明显的抑制作用,且与浓度和时间呈依赖性关系。划痕实验结果表明化合物能够明显抑制肿瘤细胞迁移,并且western blot 实验结果表明化合物处理H520细胞后可上调Ｅ-cadherin的表达,下调N-cadherin蛋白的表达。Annexin-V／PI双染法结果显示,化合物可诱导H520细胞发生凋亡,且随着药物浓度增加凋亡率上升,并且增加了BaX/BcL-2蛋白表达比率。结论：化合物能够明显抑制肺癌细胞的增殖、迁移及诱导细胞凋亡,可能是通过阻断肿瘤细胞EMT过程,调节细胞凋亡过程中相关基因表达从而发挥抗肿瘤作用。     

新化合物D261抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖及其作用机制

<正>肺癌是当今恶性肿瘤死亡率最高的癌症。早期肺癌主要以手术治疗为主,并辅以放疗化疗。但是化疗药物毒副作用大,且抗药性在一些肿瘤靶向性药物中逐渐显现。因此,亟需新的抗肿瘤药物。天然产物是小分子新药的主要来源。我们在对天然小分子化合物的筛选过程中发现D261(从固体发酵物中提取,纯度大于95%)具有潜在的抗肿瘤活性,且对非小细胞肺癌的抑制作用最显著。因此,本文对D261影响非小细胞肺癌NCI-H460及其相关机制作了初步     

B,T淋巴细胞免疫表型染色分析

应用免疫组化方法探讨Ｂ，Ｔ淋巴细胞免疫表型染色的特异性和交叉反应性，发现Ｂ细胞表型标志的ＣＤ２０和ＣＤ７４细胞对非何杰金氏淋巴瘤染色阳性率达８８．２％～１００％，但ＣＤ７４特异性不强，而ＣＤ２０表现出高度的特异性，交叉反应性为０％，Ｔ细胞表型标志的ＣＤ４５ＲＯ，ＣＤ４３和ＣＤ３对Ｔ细胞非何杰金氏淋巴瘤染色阳性率达８５．７％～１００％，但ＣＤ４５ＲＯ和ＣＤ４３特异性不强，而多克隆性的ＣＤ３仅与５．９     

尿石素C对胶质母细胞瘤生物学行为的调控作用及机制

目的　探讨尿石素C（UC）对胶质母细胞瘤（GBM）U251和U87 MG细胞生物学行为的影响及调控机制。方法　将U251和U87 MG细胞分为0、20、40、80、120和160 μmol/L UC处理组,通过CCK-8法分别检测各组细胞24、48和72 h时增殖率。将细胞分为0、40、80和120 μmol/L UC处理组,通过细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,划痕愈合实验检测24 h和48 h时细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测24 h时细胞侵袭能力,流式细胞术检测24 h时细胞凋亡率及细胞周期,Western blot检测AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）和丝裂原活化蛋白激酶p38（p38 MAPK）蛋白表达水平和磷酸化水平。结果　与0 μmol/L组比较,U251细胞中不同浓度UC组于48 h开始增殖率均降低,而U87 MG细胞中40 μmol/L及以上浓度组于48 h时增殖率开始降低（P＜0.05）。与0 μmol/L组比较,40、80和120 μmol/L组U251和U87 MG细胞的克隆形成率、24 h和48 h时的细胞迁移能力和24 h时的细胞侵袭能力降低,且均呈浓度依赖性（P＜0.05）。与0 μmol/L组比较,120 μmol/L组U251和U87 MG细胞凋亡率均增加,40、80和120 μmol/L组U251和U87 MG细胞周期均阻滞在S期（P＜0.05）。与0 μmol/L组比较,40、80和120 μmol/L组U251和U87 MG细胞中p-AMPK和p-p38 MAPK水平均升高,80和120 μmol/L组U251细胞中p-ERK水平升高,但仅120 μmol/L组U87 MG细胞p-ERK水平升高（P＜0.05）。结论　一定浓度的UC可抑制GBM细胞增殖、迁移和侵袭,诱导肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞,其机制可能与调控AMPK/ERK/p38 MAPK信号通路有关。     

YAP1靶向抑制剂CA3对人子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的 探讨YAP1靶向抑制剂CA3对人子宫内膜癌Ishikawa和RL95-2细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法 采用不同浓度CA3处理Ishikawa和RL95-2细胞,利用CCK-8和克隆形成试验检测细胞增殖能力,微板检测系统检测细胞内ROS水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测YAP1、MCM5、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果 与对照组相比,CA3处理组能够明显降低细胞生存率、减少克隆形成数目、增强细胞内ROS水平和诱导细胞凋亡,下调YAP1、MCM5和Bcl-2蛋白表达水平,但对Bax蛋白表达水平没有影响。结论 CA3靶向沉默YAP1抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,起到明显的抗肿瘤作用,有望成为临床干预和治疗子宫内膜癌的潜在药物。     

白细胞介素－1对粒系细胞和红系细胞的正负调节作用

应用重组人白细胞介素－１β（γｈＩＬ－１β）对小鼠骨髓和外周血粒系细胞与红系细胞作用的研究表明：ＩＬ－１单剂量腹腔注射后ｄ７红系造血细胞明显减少，网织红细胞在ｄ８显著下降。５～１０万Ｕ·ｋｇ－１剂量范围内ＩＬ－１促进粒系细胞的增殖和分化成熟。应用流式细胞仪对骨髓细胞周期分析显示骨髓大体积细胞在注射ＩＬ－１后ｄ３Ｓ期细胞明显增多。我们的结果表明ＩＬ－１抑制红系造血细胞的分化增殖，在适当的剂量范围内促进粒系细胞的增殖和分化成熟。其作用的分子基础是诱导造血细胞的细胞周期变化。     

干细胞技术的专利分析

通过分析干细胞技术相关专利,研究干细胞技术的发展现状,并推测未来技术的发展方向,指出未来干细胞技术的发展更应侧重于加快基础研究到应用的转化,促进产业的发展;另外还分析了干细胞技术主要专利申请人的专利布局策略,并对比我国和其他国家或地区在干细胞技术专利申请方面的差异,以期对我国创新主体未来的技术研发方向及专利布局有所启示。     

大蒜素对人横纹肌肉瘤RD细胞的作用及其机制

目的：探讨大蒜素（ allicin）对人横纹肌肉瘤RD细胞增殖和凋亡的作用及其相关机制。方法应用不同浓度大蒜素（5,10,20,30μg/ml）作用人横纹肌肉瘤RD细胞株24h,采用MTT比色法检测不同浓度大蒜素下RD细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测不同浓度大蒜素作用后RD细胞的凋亡率。结果 MTT比色法检测各实验组增殖抑制率分别为（25.82±1.75）%、（31.04±1.61）%、（36.32±1.61）%、（42.58±3.88）%;流式细胞仪检测对照组及各实验组凋亡率分别为（5.23±0.80）%、（7.07±0.83）%、（10.60±2.51）%、（15.70±1.79）%、（19.33±0.72）%。以上检测各组间比较差异均有统计学意义（ P<0.05）。结论大蒜素能有效抑制RD细胞的增殖,诱导其凋亡。     

他汀类药物抗肿瘤作用机制的研究进展

他汀类药物属于3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制剂,近年来大量的临床研究显示,他汀类药物也具备抗肿瘤作用。他汀类药物可以通过抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭和迁移、抗肿瘤血管生成、增强抗肿瘤免疫等发挥抗肿瘤作用。因此总结了他汀类药物的抗肿瘤作用机制,期望为他汀类药物进一步应用于肿瘤的治疗提供科学依据和理论支撑。     

杨梅酮对人肺腺癌A549细胞凋亡和细胞周期的影响

目的检测杨梅酮对体外人肺腺癌细胞A549细胞凋亡和细胞周期的影响。方法采用流式细胞仪分别检测各组的细胞早期凋亡率和细胞周期百分率。结果杨梅酮能显著增加A549细胞早期凋亡率和G0/G1期的细胞比例,并且细胞凋亡率与杨梅酮浓度具有较好的量效关系。结论杨梅酮能显著增加体外人肺腺癌细胞A549细胞早期凋亡率,并可使A549细胞周期阻滞在G0/G1期。     

尼美舒利联合吉西他滨对人非小细胞肺癌NCI-H1975细胞增殖和凋亡的影响

目的研究尼美舒利联合吉西他滨对人非小细胞肺癌NCI-H1975细胞增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法测定尼美舒利联合吉西他滨对NCI-H1975细胞生长的抑制作用。流式细胞仪检测尼美舒利(100μmol/L)组、吉西他滨(20 nmol/L)组和联合用药(尼美舒利100μmol/L+吉西他滨20 nmol/L)组对NCI-H1975细胞周期和凋亡的影响。Western blotting检测各组对Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达的影响。结果尼美舒利对NCI-H1975细胞的生长具有抑制作用,且呈剂量相关性,IC50为(298.76±2.79)μmol/L;吉西他滨的IC50为(78.64±3.14)nmol/L,尼美舒利与吉西他滨联合作用后,能明显增加后者对NCI-H1975细胞增殖的抑制作用,二者有明显的协同作用。尼美舒利联合吉西他滨将细胞阻滞在G0/G1期,而S和G2/M期均有所减少。与单药组相比,联合用药组能显著升高细胞的凋亡率(P0.05)。与单药组相比,联合用药组明显下调Bcl-2蛋白的表达(P0.05),上调Bax和Cleaved caspase-3蛋白的表达(P0.05)。结论尼美舒利联合吉西他滨能明显抑制肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其效果优于单用吉西他滨组,其机制与影响细胞周期调控,下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平有关。     

干细胞在眼科的研究进展

近年来,以干细胞为核心的组织工程学研究标志着再生医学时代的到来。干细胞在眼科领域的应用研究也取得了长足进展。胚胎干细胞和成体干细胞在受损眼表修复重建和各种视网膜疾病的治疗研究中都具备巨大的潜力。干细胞与组织工程的结合为解决目前眼科发展面临的问题提供了丰富的材料来源和崭新的探索思路。     

奥曲肽对肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用

目的 :探讨奥曲肽抑制肝癌细胞生长的作用。方法 :人肝癌细胞SMMC 772 1培养于含 10 %胎牛血清、10 0U·ml-1青霉素、链霉素的RPMI16 40培养液中。以 4个稀释度 10 -5、10 -4、10 -3 、10 -2 g·L-1将奥曲肽加入培养液 ,于加药后第 4 8h行MTT比色实验检测生长抑制率。奥曲肽浓度为 10 -3 g·L-1时于0、6、12、2 4、36h行DNA染色分析细胞周期。结果 :MTT比色法测定显示奥曲肽抑制肝癌细胞的生长 ,在浓度为 10 -5、10 -4、10 -3 、10 -2 g·L-1作用 4 8h生长抑制率分别为 9.33%、 12 .70 %、 19.70 %、2 0 .93%。药物作用 12、2 4h ,G0 -G1期细胞比例增加 ,G2 -M期细胞比例减少。结论 :奥曲肽抑制体外培养的人肝癌细胞的增殖 ,机制可能是将肝癌细胞阻滞于G0 -G1期 ,阻止细胞进入G2 -M期。     

类胰蛋白酶对肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的 观察类胰蛋白酶对肝星状细胞(HSC)增殖及I型胶原mRNA表达的影响,探讨类胰蛋白酶在肝纤维化中的作用.方法 用Percoll密度梯度离心法分离、培养大鼠HSC,经系列浓度类胰蛋白酶作用后,分组进行如下实验:用噻唑兰比色法(MTT)检测HSC的增殖:用RT-PCR法检测I型胶原mRNA的表达.结果 肥大细胞(MC)类胰蛋白酶(1～100ng/ml)能够促进HSC增殖及I型胶原mRNA的表达,此作用呈剂量依赖性(各实验组与对照组比较,P＜0.05).结论 肥大细胞类胰蛋白酶可直接作用于HSC,参与肝纤维化过程.