PLP不同肽段诱导EAE模型的对比研究

目的建立不仅与多发性硬化(multiple sclerosis，MS)临床表现、病理特征接近而且病程相似的较为理想的复发一缓解型实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)模型。方法应用髓鞘蛋白脂质蛋白(proteolipid potein，PLP)多肽的两种免疫优势表位肽段PLP139-151和PLP178-191免疫雌性SJL／J小鼠，制作复发缓解型EAE(relapse remitting experimental autoimmune encephalomyelitis，RR—EAE)模型，观察其体重及神经功能评分的变化，应用HE、Luxol fas tblue髓鞘染色等方法观察模型的组织形态学改变。结果两种PLP肽段免疫的小鼠发病均具有缓解一复发的特点，出现明显的神经系统体征；小鼠发病时脑和脊髓组织显示明显的血管鞘形成、卫星现象和炎性细胞浸润以及脱髓鞘改变。结论PLP两种肽段均可诱发RR-EAE模型，这与临床MS的缓解一复发病程更相似，更能表现MS的临床特点，是研究MS的较为理想的动物模型。     

TGF-β1、BMP-2联合诱导BMSCs向软骨细胞分化的体外研究

目的：探讨转化生长因子β1 (TGF一β1 )和骨形态发生蛋白2（BMP-2）诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)下向软骨细胞表型转化的可能性，探讨二者在诱导MSCs向软骨细胞表型分化过程中的相互作用以及MSCs作为软骨组织工程种子细胞的可能性。方法：取取健康Wistar大鼠骨髓，用全骨髓贴壁法筛选获得MSCs，体外培养传代并鉴定。采用特定的诱导培养使MSCs向软骨细胞分化，按培养基内添加生长因子的不同分成3个实验组和对照组。实验组分别为：TGF—β1 + BMP-2联合应用组(TGF—β1 10 ng／ml、BMP-2 100 ng／m1)；TGF-β1单独应用组(TGF—β1 10 ng／m1)；BMP-2单独应用组(BMP-2 100 ng／m1)；对照组不添加任何生长因子。实验组及对照组组于诱导14天后，分别进行阿利新蓝染色和二甲基亚甲兰（DMB）比色法定性定量检测糖胺聚糖（GAG）的分泌表达，免疫组化法检测软骨特异性Ⅱ型胶原的表达．结果：3个实验组在阿利新蓝染色和软骨特异性Ⅱ型胶原疫组化法检测中均有不同程度的阳性表达，糖胺聚糖（GAG）的定量检测中，TGF—β1 + BMP-2联合应用组的GAG含量明显高于其它组（(P< 0.05)．结论：TGF－β1、BMP-2联合作用更能促进MSCs向软骨细胞诱导分化，分泌软骨特异性基质，有可能成为软骨组织工程较理想的种子细胞来源。     

细胞因子和凋亡相关基因在小鼠帕金森病模型中的表达

帕金森病是一种多发于老年的神经系统退行性疾病，它的发病机制有以下推测：氧化应激；神经营养因子的缺乏；内源性和外源性神经毒素。近年来研究表明，在人帕金森病病例及小鼠帕金森病模型中都观察到了黑质内神经元的凋亡，而且白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-2、IL-4、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF-α)等细胞因子的表达在人帕金森病脑和小鼠帕金森病模型脑中也有上调。本研究拟探讨凋亡基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和B细胞淋巴瘤／白血病-2X相关蛋白(Bax)与炎症因子IL-1α和IL-10在帕金森病脑中的表达部位、表达时间以及凋亡基因与细胞因子之间的相互关系。     

小胶质细胞在PLP_(139-151)诱导SJL小鼠EAE模型中的作用研究

目的观察髓鞘蛋白脂质蛋白139-151(proteolipid protein,PLP_(139-151))诱导SJL小鼠构建的复发缓解型的实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型复发期脑内小胶质细胞的病理改变。方法应用100μg、150μg PLP_(139-151)多肽片段免疫SJL小鼠构建复发缓解型EAE模型(分别简称为100μg PLP组、150μg PLP组),另设健康对照组(对照组;采用与实验组等体积溶媒处理),观察35 d。观察两组EAE小鼠的发病情况及神经功能残疾进展评分差异,选择发病快、神经功能残疾进展评分高者(计为EAE组)观察复发期小胶质细胞活化情况。EAE组于复发期疾病高峰时,对照组于相同时间点,取小鼠大脑皮层组织,应用免疫组织化学(immunohistochemical,IHC)染色及免疫荧光(immunofluorescence,IF)染色比较两组小胶质细胞的活化情况。结果 150μg PLP组小鼠在两个发病高峰(分别为免疫第13、28天)均早于100μg PLP组(分别为免疫第15天、31天),神经功能评分第2次发病高峰高于100μg PLP组(3.00±0.79 vs. 1.75±0.90,t=2.33,P0.05),第1次发病高峰与100μg PLP组差异无统计学意义(P0.05),故选择150μg PLP组(计作EAE组)观察复发期(免疫后第28天)小胶质细胞活性。与对照组相比,EAE组小鼠复发期大脑皮层中小胶质细胞的活化明显增多,组织染色上表现为Iba-1表达增高,细胞体积增大,细胞突起增多。结论 150μg PLP_(139-151)多肽片段免疫SJL小鼠构建的复发缓解型EAE模型复发期小鼠大脑皮层小胶质细胞明显活化。     

黄芩甙治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的实验研究

目的研究黄芩甙治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的可能性及有效性。方法应用髓鞘脂质蛋白(PLP)139-151免疫SJL/J小鼠诱发慢性复发-缓解型EAE模型,研究黄芩甙对PLP139-151诱导的小鼠淋巴结细胞增殖反应及干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)分泌的作用,使用流式细胞技术检测黄芩甙对EAE小鼠淋巴结细胞CCR5表达的影响;通过神经功能评分观察黄芩甙治疗EAE的有效性。结果黄芩甙可抑制PLP139-151诱导的淋巴结细胞增殖反应及IFN-γ的分泌,提高IL-4的分泌(P<0.001),有效降低EAE小鼠淋巴结细胞CCR5的表达;显著改善EAE小鼠神经功能评分(P<0.01),使发病时间延迟(P<0.01)。EAE小鼠发病数和死亡数较对照组减少,但差异并无统计学意义(P>0.05)。结论黄芩甙可有效治疗EAE,为黄芩甙用于临床多发性硬化的治疗提供了实验依据。     

清开灵有效治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎

目的　研究清开灵治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎 ( EAE)的可能性及有效性。方法　应用蛋白脂质蛋白1 39- 1 51 ( PLP1 39- 1 51 )免疫 SJL/ J小鼠诱发慢性复发 -缓解性 EAE模型 ,研究清开灵对 PLP1 39- 1 51 诱导的小鼠淋巴结细胞增殖反应及 γ-干扰素 ( IFN-γ)分泌的作用 ,并通过神经功能评分观察清开灵治疗 EAE的有效性。结果　清开灵可抑制 PLP1 39- 1 51 诱导的淋巴结细胞增殖反应及 IFN-γ的分泌 ( P <0 .0 0 1 ) ,有效改善 EAE小鼠神经功能评分 ( P <0 .0 1 ) ,使发病时间延迟 ( P <0 .0 1 )。EAE小鼠发病数和死亡数较对照组减少 ,但其差异并无显著性 ( P>0 .0 5 )。结论　清开灵可有效治疗 EAE,为清开灵用于临床治疗多发性硬化提供了实验依据。     

髓鞘蛋白脂质蛋白多肽139—151诱发实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型

目的 用髓鞘蛋白脂质蛋白多肽（PLP）139-151诱发实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型。方法 应用PLP139－151抗原加完全福（氏）佐剂免疫SWXJ小鼠。结果 免疫14－20d后小鼠即发病,发病率为80％,而且多数呈缓解－复发型。病理学证实发病小鼠脑和脊髓内具有典型的脱髓鞘改变和炎性细胞浸润。结论 以PLP139－151为抗原免疫SWXJ小鼠诱发EAE,具有模型稳定、发病率高和缓解－复发的特点,是研究多发性硬化较理想的动物模型。     

人脑胶质瘤免疫抑制因子TGFβ_2及TGFβ_1的基因表达

目的　研究人脑胶质瘤主要免疫抑制因子转化生长因子TGFβ2 及TGFβ1的基因表达与其胶质瘤恶性程度的关系。方法　采用Northern杂交、免疫组化和Western杂交法检测了 5 0例胶质瘤、3例恶性胶质瘤体外细胞系和 8例正常脑组织TGFβ2 的表达水平。同时检测其同型异构体TGFβ1的表达水平。结果　正常脑组织几无TGFβ2 和TGFβ1表达 ,而胶质瘤均表达 2 .8和 /或 5 .1kb的TGFβ2 mRNA片段和约 2 5 0 0 0u及 30 0 0 0u的蛋白 ;TGFβ2 和TGFβ1表达水平随肿瘤恶性程度增高而增高。结论　TGFβ2 和TGFβ1表达水平与肿瘤恶性程度呈正相关 ,TGFβ2 和TGFβ1可作为恶性胶质瘤免疫基因治疗的候选基因。     

Pelizaeus—Merzbachers病:一种罕见原因的X—连锁隐性遗传的髓鞘形成障碍

Pelizaeus—Merzbachers病(PMS)是一种罕见的X—连锁陷性遗传病,是由于蛋白脂质蛋白(Proteolipid Protein,PLP)基因突变所致。它以婴儿期发病,存在眼球震颤及慢性进行性的锥体束征、肌张力障碍和小脑征候为特征。尽管PLP基因已克隆并且对全部基因序列已有较为精确的了解,已研究的家系中仅约25％在基因的7号外码子处显示可检测到的突变。这种情况可能是由于特异性突变机制如捻接部位(Splice site)突变引起的,且曾被证实。对于曾经研究过的家系来说,仅一个家系的PLP基因呈现全缺失,而大多数家系则有不同的突变,这也是     

人脑胶质瘤免疫抑制因子TGFβ2及TGFβ1的基因表达

目的 研究人脑胶质瘤主要免疫抑制因子转化生长因子TGFβ2及TGFβ1的基因表达与其胶质瘤恶性程度的关系。方法 采用Northern杂交,免疫组化和Western杂交法检测了50例胶质瘤,。3例恶笥胶质瘤体外细胞系和8例正常脑细胞TGFβ2的达表水平,同时检测其同型异构体TGFβ1的表达水平,结果 正常脑组织几无TGFβ2和TGFβ1表达,而胶质瘤均表达2．8和或5．1kb的TGFβ2mRNA片段和约25000u及30000u的蛋白,TGF和TGFβ1表达水平随肿瘤恶性程度增高而增高,结论 TGFβ2和TGFβ1表达水平与肿瘤恶性程度呈正相关,TGFβ2和TGFβ1可作为恶性胶质瘤免疫基因治疗的侯选基因。     

SAH交通性脑积水病人脑脊液中转化型生长因子β_1水平升高

转化型生长因子β_1(Transforming growfh factor—β_1,TGF—β_1)是一种调节细胞外基质蛋白生成的多功能多肽,主要起源于血小板,正常情况下脑脊液(CSF)中缺乏,但在蛛网膜下腔出血(SAH)时可释放入蛛网膜下腔。作者最近已发现人重组TGF—β_1椎管内注射可在小鼠诱发交通性脑积水,提示CSF中存在活性型TGF—β_1。本研究目的是确定TGF—β_1与SAH后交通性脑积水的关系。 选择24例SAH病人,年龄39～78岁,平均61.2岁;男9例,女15例。1例病因未明,23例系脑动脉瘤破裂,行动脉瘤结扎术并放置脑池引流。80天内CT随访发现13例发生脑室扩大伴有脑室周围低密度,其中11例临床有痴呆、尿失禁和步态障碍,诊断为交通性脑积水,并行脑室腹膜(VP)分     

神经营养因子诱导及其对缺血性脑损伤的保护作用

神经生长因子(NGF)、脑源性神经生长因子(BDNF)、肿瘤生长因子—β1(TGF—β1)、睫状神经营养因子(CNTF)和成纤维细胞生长因子(FGFs)是神经营养因子(NTF)家族的重要成员。神经元在发育过程中对微量NTF的有限供应存在着竞争，能成功获取NGF的细胞则存活，反之则死亡。在病理情况下，如脑缺血时，NGF对受损神经细胞具有保护作用。白介素—1(IL-1)、肿瘤坏死因子(TNF)、c—fos、c—jun基因的表达上升对     

咖啡因慢性干预对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎影响的观察

目的：探讨不同剂量咖啡因慢性干预对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的影响及其分子免疫学机制。方法：C57BL／6小鼠随机分为CFA阴性对照组,EAE阳性对照组,咖啡因饮水干预组（1mg·k-1,10mg·kg-1,30mg·kg-1）。使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）抗原诱导小鼠EAE模型,咖啡因干预至EAE造模后第20天与对照组小鼠同期处死为止。观察小鼠行为学变化、中枢炎症细胞浸润和损害程度、检测中枢细胞因子IL-17、IFN—γ、TGF—β的mRNA表达含量。结果：咖啡因干预组,特别是30mg·kg-1组的病情严重程度减轻,中枢炎症细胞浸润程度下降,促炎因子表达降低,抑炎因子表达上升。结论：慢性咖啡因干预,可通过降低促炎因子的表达,升高抑炎因子的表达,减轻小鼠EAE的炎症损伤。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的磁共振研究

目的研究动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小 鼠中枢神经系统的MR表现。方法使用PLP139-151免疫接种雌性SJL／J小鼠诱导EAE。分别取复发期和缓解期 的EAE小鼠行脑和脊髓常规MR及Gd—DTPA增强MR扫描,并做组织病理学检查。结果PLP139-151能较好的诱 导出慢性复发-缓解型EAE模型,Gd-DTPA增强MR检查能充分显示血脑屏障的破坏,反映脑和脊髓的病灶,而且 显示的病灶相对信号强度复发期明显高于缓解期,在病灶处均可见炎症细胞浸润,髓鞘脱失,病灶周围或远离病灶 处炎症反应轻微。结论Gd—DTPA增强MR检查能准确反映血脑屏障的破坏,病变累及部位及病变程度,为今后使 用药物干预EAE判断疗效、指导进行较准确的病变部位取材时提供了一种更为客观的手段。     

人羊膜间充质干细胞移植对阿尔茨海默病转基因小鼠的行为学和β-淀粉样蛋白的影响

背景：研究发现APP基因与阿尔茨海默病发病密切相关。β-淀粉样蛋白是阿尔茨海默病患者脑内老年斑的主要成分，基因突变和外界环境的影响能破坏β-淀粉样蛋白的动态平衡，从而引发或加速阿尔茨海默病的产生和发展。 目的：探讨人羊膜间充质干细胞尾静脉移植对阿尔茨海默病转基因小鼠学习记忆能力及脑组织β-淀粉样蛋白表达的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2008-05/10在郑州大学微生物学与免疫学教研室和河南省中医药治疗研究院完成。 材料：健康剖宫产产妇志愿捐献的羊膜，由郑州大学第一附属医院产科提供。APP转基因鼠29只，PCR技术鉴定转APP-基因小鼠9只，作为正常组；转APP+基因小鼠20只，随机分为细胞移植组、对照组，10只/组。 方法：无菌条件下体外分离培养人羊膜间充质干细胞，传至第3代将细胞浓度调整为1×109 L-1，经尾静脉注入0.5 mL至细胞移植组小鼠体内；对照组经尾静脉注入同体积的生理盐水；正常组小鼠不给予任何干预措施。 主要观察指标：采用Morris水迷宫测定小鼠逃避潜伏期、穿越平台次数及在平台象限的时间，刚果红染色观察小鼠脑组织内β-淀粉蛋白的表达。 结果：定位航行试验中，移植前与正常组比较，细胞移植组、对照组小鼠逃避潜伏期差异均有显著性意义（P < 0.05）；移植后2周细胞移植组小鼠逃避潜伏期与正常组基本相似（P > 0.05），但明显短于对照组（P < 0.05）。空间探索试验中，移植前后小鼠穿越平台次数及其在平台象限的时间3组间比较差异均无显著性意义（P > 0.05）。移植后1个月，正常组未见或仅见极少量的β-淀粉样蛋白沉积，细胞移植组淀粉样蛋白的沉积明显少于对照组。 结论：人羊膜间充质干细胞尾静脉移植能促进阿尔茨海默病转基因小鼠空间定位及学习记忆能力的提高，且减少小鼠脑内β-淀粉样蛋白的沉积。     

TSP1/TGFβ与垂体瘤血管生成及侵袭性的关系

目的探讨TSP1／TGFβ及相关因子与垂体瘤血管生成、侵袭性的关系及意义。方法取46例垂体瘤手术标本，应用半定量RT-PCR检测TSP1及其受体CD36与TGFfi的表达，采用免疫组化检测TSP1／TGFβ及MVD，并分析TSP1／TGFβ表达与侵袭性、MVD等因素之间的关系。结果侵袭组TSP1表达明显低于与非侵袭组，而TGFβ表达则相反；两组间MVD、CD36的表达无统计学意义；TSP1表达与侵袭性呈负相关，TGFβ与侵袭性及MVD呈正相关。结论TSP1／TGFβ在垂体瘤发生发展中起重要作用，并影响血管生成及侵袭性，有望成为治疗垂体瘤的新靶点。     

成年大鼠持续性脑缺血后TGFβ_1蛋白表达与凋亡的关系

目的 :观察成年大鼠持续性局灶脑缺血后 TGFβ1 蛋白表达与缺血后凋亡的关系。方法 :单侧大脑中动脉近端电凝术建立大鼠持续性局灶脑缺血模型。缺血后 1h,实验组经尾静脉注射氟美松 (5 mg/ kg) ,对照组注射相同容积的生理盐水。缺血后 3h～ 12 0 h取材 ,分别用免疫组织化学 SP法和原位末端标记 TUNEL法标记 TGFβ1 蛋白表达细胞和凋亡细胞。结果 :持续性局灶脑缺血后 TGFβ1 蛋白呈双相性 ,主要分布在梗塞灶周围区域。TGFβ1 的表达可被氟美松抑制 ,同时缺血后神经细胞凋亡也加重。结论 :大鼠持续性局灶脑缺血后梗塞灶周围区域 TGFβ1 蛋白表达可能有减轻缺血后神经细胞凋亡的作用。     

miR －181c抑制胶质母细胞瘤细胞株 T98G侵袭能力的机制

目的：探讨miRNA －181c（miR－181c）抑制胶质母细胞瘤（GBM ）细胞株T98G侵袭的机制。方法应用实时定量PCR、蛋白质印迹法（Western Blot）检测miR－181c与转化生长因子β（TGF－β）相关基因的表达水平,应用Transwell实验检测miR－181c与TGF－β对胶质瘤细胞侵袭的影响,利用分子克隆技术设计、克隆目的基因的3'端非翻译区（3'－UTR）及其突变区域,通过荧光素酶分析miR－181c与目的基因的直接结合情况。结果 miR－181c转染后与TGF－β通路相关基因转化生长因子β受体1（TGFBR1）、TGFBR2和转化生长因子β受体相关蛋白1（TGFBRAP1）的mRNA及蛋白表达水平下降,差异有统计学意义（P ＜0．05）,miR－181c通过影响TGF－β信号减弱T98G细胞的侵袭性,且TGFBR1、TGFBR2和TGFBRAP1的3'－UTR是miR －181c的直接作用靶点。结论 miR－181c可能通过调控 TGF －β信号通路抑制胶质瘤细胞株 T98G的侵袭能力,可以做为GBM 治疗的重要分子。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的基因芯片研究

目的 用4096点基因芯片筛选实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型有表达差异的基因。方法 将4096条基因cDNA产物按微矩阵排列点样在玻片上。以髓鞘蛋白脂质蛋白多肽139-151及福氏佐剂为抗原免疫SJL小鼠，取免疫后3-4周急性发病的小鼠及同代正常小鼠各6只，每一只急性发病的小鼠及其对照为一组，分别取全脑组织，于-80℃冰箱保存。提取小鼠全脑组织总RNA，RT-PCR逆转录成cDNA。标记cDNA探针，分别用cy3-dUTP、cy5一dUTP标记正常小鼠和实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的cDNA。将基因芯片和杂交探针变性后杂交，洗干。用Scan Array 4000扫描芯片，GenePix Pro3．0软件分析cy3、cy5两种荧光信号的强度和比值。结果1-6组中筛选出差异表达的数据分别为43、30、176、76、294和129项。这些基因在与两种探针杂交时表现出一定的差异。6个组中一致发现表达异常的基因涉及了免疫相关基因、细胞骨架蛋白基因、细胞周期相关基因、能量代谢相关基因、蛋白质合成相关基因、信号转导及离子通道相关基因等广泛的基因变化。结论 除免疫相关基因外，细胞骨架蛋白相关基因、能量代谢相关基因、蛋白质合成相关基因、细胞周期相关基因、离子通道相关基因等可能参与了自身免疫性脑脊髓膜炎的发病。     

氟美松对大鼠局灶性脑缺血后小胶质细胞变化及转化生长因子β_1蛋白表达的作用

目的　从缺血后小胶质细胞变化和转化生长因子 β1 (TGFβ1 )蛋白表达等方面 ,研究糖皮质激素对持续性局灶性脑缺血的影响及其机制。方法　健康成年雄性SD大鼠 90只 ,随机分为假手术组、生理盐水组及氟美松组 ,采用左侧大脑中动脉近端电凝术制备模型。术后 1h ,生理盐水组静脉注射 0 5ml生理盐水 ,氟美松组静脉注射氟美松 (0 5mg·kg- 1 ·d- 1 )。常规HE染色 ,计算并比较氟美松组和生理盐水组的梗死灶体积。免疫组织化学SP法检测TGFβ1 蛋白表达。凝集素法检测小胶质细胞。半定量分析阳性细胞的数量。结果　氟美松处理组与生理盐水组比较 ,缺血 6h至 5d的梗死灶体积显著增加 ;缺血 12h、2 4h及 3d等时间点 ,小胶质细胞密度明显低于生理盐水组 ;5d时未见凝集素阳性的小胶质细胞 ;缺血 6h、2 4h及 3d ,TGFβ1 阳性细胞密度比生理盐水组减少。结论　氟美松可抑制缺血梗死灶边缘区域小胶质细胞反应和TGFβ1 蛋白表达 ,这可能是氟美松加重成年大鼠持续性局灶性缺血性脑损伤的机制之一。