Rho激酶抑制剂对大鼠脑缺血/再灌注后海马神经元损伤的保护作用

目的探讨Rho激酶抑制剂（盐酸法舒地尔）对大鼠脑缺血/再灌注（I/R）后海马CA1区神经元存活的影响。方法采用Pulsinelli-Brierley四血管阻塞全脑缺血模型,缺血前30 min腹腔注射盐酸法舒地尔15mg/kg,缺血15 min后再灌注5天,断头取脑,石蜡切片,焦油紫染色,图像分析测定单位面积内焦油紫染色细胞总和,并与I/R组、生理盐水组及假手术组比较,进行形态学分析。结果盐酸法舒地尔明显减少了脑I/R所致的海马CA1区神经元损伤,与I/R组比较存活细胞数明显增多（P〈0.05）。结论盐酸法舒地尔对脑缺血/再灌注所致海马CA1区神经元损伤具有明显的保护作用。     

亚低温通过PI3K/Akt途径对脑缺血/再灌注起保护作用

目的通过观察亚低温（32℃，3h）对大鼠全脑缺血／再灌注5天后海马CA1区锥体细胞的保护作用及P13K抑制剂LY294002的作用，探讨亚低温神经保护的可能机制。方法采用四动脉结扎法建立大鼠脑缺血模型，15min全脑缺血后再灌注5天。大鼠随机分为假手术组、常温缺血／再灌注组、低温缺血／再灌注组、低温缺血／再灌注给药组和低温缺血／再灌注溶剂对照组。给药方法为缺血前20min脑室注射。复灌5天后用焦油紫染色法检测海马CA1区的细胞。结果3h亚低温可有效降低大鼠缺血／再灌注5天后海马CA1区细胞的死亡；缺血前20min脑室注射P13K抑制剂LY294002显著抑制了3h亚低温对海马CA1区细胞的保护作用。结论3h亚低温对大鼠15min全脑缺血有确切的保护作用。P13K／Akt信号通路介导了亚低温的保护作用。     

HPK1在缺血性脑损伤中的作用

目的观察HPK1对sD大鼠全脑缺血／再灌注后海马CA1区锥体细胞的作用。方法采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型,缺血15min后分别灌注30min、3h、6h、24h、3天和5天。大鼠随机分为假手术组、缺血／再灌注组、缺血／再灌注给药组和缺血／再灌注溶剂对照组。缺血／再灌注给药组再分为2组,分别脑室注射100g／L的HPK1 AS—ODNs、HPK1 MS—ODNs,每24h注射1次,连续3天,在最后一次注射24h后行四动脉结扎全脑缺血。使用免疫沉淀和焦油紫染色法等技术检测相关信号蛋白的表达、活化水平及神经元细胞的死亡。结果在大鼠海马神经元中有HPK1的表达,脑室注射AS—ODNs大鼠海马CA1区存活锥体细胞明显增多。结论HPK1反义寡核苷酸对缺血／再灌注引起的海马神经元凋亡具有保护作用。     

缺血早期Genistein对海马CA1区神经元保护作用机制的研究

目的 探讨缺血早期Genistein对脑缺血/再灌注后大鼠海马CA1区神经元的保护作用及其可能的机制.方法 采用四动脉结扎建立大鼠全脑缺血模型.实验动物随机分为假手术组、缺血/再灌注组、溶剂对照组、Genistein处理组.缺血5 min时,溶剂对照组、Genistein处理组分别尾静脉注射二甲基亚砜（l ml/kg）和Genistein（1 mg/kg）.Western blot和免疫荧光法检测大鼠海马CA1区HAX-1蛋白的表达,焦油紫染色法观察海马CA1区神经元的存活情况.结果 与对照组比较,Genistein处理组在再灌注3h时HAX-1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,免疫荧光实验结果与此一致.焦油紫染色结果显示,Genistein处理组与对照组相比较,海马CA1区存活的神经元细胞明显增加（P＜0.05）.结论 缺血早期Genistein对脑缺血造成的神经元损伤有明显的保护作用,这一作用可能是通过增加HAX-1蛋白表达水平来实现的.     

7-NI和AMT在脑缺血再灌注中保护作用的比较

目的探讨神经型一氧化氮合酶（nNOS）的抑制剂7-硝基吲唑（7-nitroindazole,7-NI）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的抑制剂AMT（2-Amino-5,6-dihydro-6-methyl-4H-1,3-thiazine）对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区细胞的保护作用.方法建立SD大鼠全脑缺血动物模型,处理组大鼠每组在缺血前20min给药,缺血15 min后再灌注5天,应用焦油紫染色方法检测7-NI和AMT对大脑海马CA1区细胞的保护作用.结果假手术组海马CA1区细胞无死亡,缺血对照组几乎全部死亡,7-NI组保护37.4%,DMSO组几乎全部死亡;AMT组保护82.3%;生理盐水组几乎全部死亡.结论AMT对大鼠脑缺血复灌后海马CA1区细胞的保护作用大于7-NI的保护作用.     

预缺血抑制脑缺血诱导GluR6巯基亚硝基化机制的研究

目的 观察预缺血对SD雄性大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区锥体细胞的保护作用,并探讨其可能的机制.方法 采用四动脉结扎法构建大鼠预缺血模型和全脑缺血模型,缺血6 min后分别灌注6 h或5天.大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、预缺血/再灌注组、预缺血/再灌注溶剂对照组和预缺血/再灌注给药组.预缺血/再灌注给药组腹腔注射5 mg/kg MK801.主要运用SDS-PAGE、免疫印迹和焦油紫染色法等技术检测相关信号蛋白的表达、活化水平及神经元细胞的死亡情况.结果 大鼠缺血/再灌注6 h,预缺血/再灌注组和预缺血/再灌注溶剂对照组的GluR6的巯基亚硝基化水平较缺血/再灌注组明显降低,而预缺血/再灌注给药组较缺血/再灌注组没有明显变化;各组间GluR6的蛋白表达量并没有明显变化.大鼠缺血/再灌注5天后,预缺血/再灌注组和预缺血/再灌注溶剂对照组海马CA1区细胞的存活数量较缺血/再灌注组明显增加,而预缺血/再灌注给药组较缺血/再灌注组没有明显变化.结论 预缺血通过NMDA受体下调大鼠全脑缺血/再灌注诱导的KA受体亚基GluR6的巯基亚硝基化,从而发挥拮抗缺血性脑损伤的作用.     

预缺血再灌注通过NMDA受体介导海马CA1区ERK5激活的研究

目的 研究脑缺血及预缺血再灌注后大鼠海马脑区细胞外信号调节激酶5（ERK5）的磷酸化（激活）规律以及NMDA受体抑制剂盐酸氯胺酮（开他敏）对其激活的影响.方法 采用SD大鼠四动脉结扎缺血及预缺血模型,给药组大鼠在缺血前20 min腹腔给予盐酸氯胺酮30 mg/kg.用免疫印迹法分析不同条件下大鼠海马ERK5的蛋白表达量和激活情况;焦油紫染色观察缺血及预缺血对大鼠海马神经元的作用.结果 盐酸氯胺酮显著抑制了预缺血再灌注后ERK5的激活,而ERK5的蛋白表达量在以上相同处理条件下无明显变化;焦油紫染色观察示预缺血对大鼠海马神经元具有保护作用.结论 预缺血再灌注具有神经元保护作用,这种保护作用与NMDA受体有关,为临床治疗脑中风提供理论依据.     

外源性NO供体对脑缺血/再灌注神经元的保护作用

目的观察外源性一氧化氮（NO）供体硝普钠（SNP）和亚硝基谷胱甘肽（GSNO）对脑缺血/再灌注过程中c-jun N末端激酶3（JNK3）磷酸化的影响,及其对再灌注海马CA1区锥体神经元的作用。方法采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型。SNP（5 mg/kg）溶于生理盐水,间隔1.5 h分别腹腔注射3次,第1次注射时间在全脑缺血前30 min。GSNO（100μg/kg）溶于生理盐水,缺血前20 min于侧脑室注射给药。大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、缺血/再灌注溶剂对照组、缺血/再灌注给予SNP组和缺血/再灌注给予GSNO组,缺血15 min后分别灌注1天或5天。利用免疫印迹、免疫沉淀和焦油紫染色法检测相关蛋白的表达、磷酸化水平及神经元细胞的存活。结果给予SNP组和GSNO组与生理盐水对照组相比,能够显著抑制脑缺血/再灌注过程中JNK3的磷酸化,并且能显著提高再灌注过程中海马CA1区锥体神经元的存活。结论外源性NO供体能够抑制脑缺血/再灌注过程中JNK3的磷酸化,进一步对海马CA1区锥体神经元发挥了保护作用。本研究为外源性NO对脑卒中的有效治疗提供了参考价值。     

美金胺对缺血性脑损伤保护作用的研究

目的 观察美金胺对SD雄性大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区锥体细胞的保护作用,并研究其可能的机制.方法 采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型,缺血15 min后分别灌注6 h或5天.大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、缺血/再灌注给药组和缺血/再灌注溶剂对照组.缺血/再灌注给药组腹腔注射20mg/kg美金胺.使用免疫印迹、免疫沉淀和焦油紫染色法等技术检测相关信号蛋白的表达、活化水平及神经元细胞的死亡.结果 大鼠缺血/再灌注5天后,缺血/再灌注给药组海马CA1区细胞的存活数量较缺血/再灌注组和缺血/再灌注溶剂对照组明显增加;缺血/再灌注6 h,缺血/再灌注给药组N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体亚基2A(NR2A)、突触后密集区蛋白95(PSD-95)、非受体型蛋白酪氨酸激酶(Src)三者间免疫沉淀的蛋白量及NR2A的酪氨酸磷酸化水平较缺血/再灌注组和缺血/再灌注溶剂对照组明显降低,而三者的表达量没有明显变化.结论 美金胺通过抑制NR2A、PSD-95、Src三者结合及Src介导的NR2A的酪氨酸磷酸化抑制了缺血后NMDA受体功能的增强,从而对大鼠缺血性脑损伤有保护作用.     

葛根素对大鼠缺血性脑损伤的保护作用

［摘要］目的: 观察葛根素对大鼠全脑缺血/再灌注后神经元的保护作用,并探讨其可能的机制。方法： 采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型, 缺血15 min后再灌注。将50只大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、给药组(细分为高、低剂量组)和对照组。给药方式为静脉注射。使用蛋白质印迹、焦油紫染色法及TUNEL法检测神经型一氧化氮合酶（neuronal NO synthase, nNOS)表达、nNOS活化水平及神经元细胞的存活情况。结果： 给药组大鼠海马CA1区细胞的存活数量较缺血/再灌注组明显增加(P<0.05),TUNEL法检测结果与其一致;给药组nNOS(Ser847)磷酸化水平较缺血/再灌注组明显增强(P<0.05),而其表达量没有明显变化。结论： 葛根素通过负向调节nNOS催化活性,减少NO生成,降低其神经毒性,对大鼠缺血性脑损伤有保护作用。