己酮可可碱对1型糖尿病的免疫干预治疗

1型糖尿病是一种由T细胞介导的胰腺β细胞自身免疫性损害为特征的,器官特异性的自身免疫性疾病。目前有些研究尝试用环孢素、完全弗氏佐剂、卡介苗、谷氨酸脱羧酶、烟酰胺、口服胰岛素等方法,通过免疫抑制或刺激来保护β细胞,预防疾病发生或延缓其进展,但是由于所使用药物的不良反应或不确切的作用使他们在临床应用中受到限制[1～3]。己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)以往主要用于治疗血管功能障碍性疾病,近年研究发现其具有抗炎及免疫调节作用,可抑制多种细胞因子的生成,故将其试用于1型糖尿病的免疫干预治疗。本文对此作一综述以期较为全…     

己酮可可碱对NOD小鼠胰岛B细胞caspase表达的影响

目的：观察己酮可可碱（PTX）对自发1型糖尿病模型NOD小鼠的早期干预治疗效果，探索其保护B细胞作用的分子生物学机制。方法：8周龄、雌性NOD小鼠随机分为2组：PTX组32只，对照组33只。实验开始后第1天和第14天时，NOD鼠均腹腔注射1次环磷酰胺（200mg／kg）。PTX组按给药剂量为每次5mg／kg，于实验的第0～3天、第13～16天每日注射3次；第4～12天、第17～26天时每日2次。     

己酮可可碱对小鼠急性脑缺血的保护作用研究

目的　研究己酮可可碱 (PentoxifyllinePTX)对急性脑缺血所致小鼠大脑功能改变的保护作用。 方法　采用双侧颈总动脉不完全和完全结扎法及小鼠快速断头法 ,观察小鼠在急性脑缺血时的所产生的神经症状、存活时间和脑细胞的改变及己酮可可碱 (PTX)的保护作用。结果　 2 5、5 0mg·kg -1的PTX可以显著减少急性不完全性脑缺血致小鼠神经症状的发生 ,减少小鼠大脑细胞的坏死百分率 ;可以显著延长急性完全性脑缺血小鼠断头张口喘气时间并能增加小鼠耐缺氧的存活时间。结论　PTX对小鼠急性完全和不完全性脑缺血具有保护作用。     

己酮可可碱对2型糖尿病并急性脑梗塞的组织纤溶系统的影响

目的 探讨己酮可可碱对2型糖尿病合并急性脑梗塞的组织纤溶的影响。方法 对42例2型糖尿病合并急性脑梗塞的患者随机应用己酮可可碱治疗，用药前后对患者进行t-PA(组织纤溶酶原激活物活性)与PAI-1(纤维酶原激活抑制物活性)的测定。并与用低分子右旋糖酐治疗33例脑梗塞患者进行对照。结果 己酮可可碱治疗组后PAI-1明显好转。t-PA活性明显增强。结论 己酮可可碱能明显改善2型糖尿病合并脑梗塞的组织纤溶状态。     

己酮可可碱对内毒素肺损伤大鼠炎性细胞因子变化的干预作用

目的　观察内毒素性肺损伤大鼠肺组织及外周血炎性细胞因子的变化 ,探讨己酮可可碱 (pentoxifylline ,PTX)的干预作用。方法　 72只雄性Wistar大鼠分为 :①内毒素 1h组 (n =6) ,②内毒素 2h组 (n =6) ,③内毒素 4h组 (n =6) ,④内毒素 6h组 (n =12 ) ,⑤生理盐水对照组 (n =12 ) ,⑥PTX 1h组 (n =6) ,⑦PTX 2h组 (n =6) ,⑧PTX 4h组 (n =6) ,⑨PTX 6h组(n =12 )。采用静脉注射LPS的方法复制内毒素性肺损伤模型 ,PTX组致伤后立即静脉注射PTX 2 0mg/kg ,并以 6mg·kg-1 ·h-1 维持。各组动物于设定的时相点放血活杀 ,用ELISA法或胸腺细胞增殖法测定血清TNF α、IL 6、IL 8含量及IL 1活性 ;斑点杂交检测肺组织中TNF α、IL 1β、IL 6、IL 8mRNA表达。 结果　①内毒素致伤后各组肺组织内TNF α、IL 1β、IL 6、IL 8mRNA的表达强度 ,均非常显著高于生理盐水对照组 (P <0 0 1)。PTX治疗后 ,内毒素致伤大鼠肺组织内TNF α、IL 1β、IL 6、IL 8mRNA的相对含量较未接受PTX治疗大鼠有一定程度的减少。②内毒素致伤后各组血清中TNF α、IL 1、IL 6、IL 8含量或活性均非常明显高于生理盐水对照组 (P <0 0 1)。PTX 6h组血清中TNF α、IL 1、IL 6、IL 8含量或活性 ,明显低于内毒素 6h组(P <0 .0 1)。结论　内毒素肺     

己酮可可碱对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用

目的 观察己酮可可碱对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠相关肺损伤的保护作用,并探讨其可能的发病机制.方法 36只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组.采用5%牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射的方法,复制大鼠SAP相关肺损伤模型.治疗组在模型制作前30min给予己酮可可碱.12h后分别对胰腺损伤、肺损伤程度进行病理评分,测定肺系数、胰腺湿重、血清淀粉酶,用ELISA法检测血清和支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6、IL-1β含量,用半定量RT-PCR法检测肺组织中NF-κB p65 mRNA的表达.结果与模型组比较,治疗组胰腺及肺损伤程度明显减轻;其血清和支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显下降,肺组织中NF-κB p65 mRNA的表达亦明显减少.结论己酮可可碱对SAP相关急性肺损伤具有保护作用,其机制可能与抑制肺组织中NF-κB p65 mRNA的表达,从而抑制促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β的产生相关.     

己酮可可碱对腹膜纤维化形成的干预作用

目的 探讨己酮可可碱(PTX)对SD大鼠腹膜纤维化病变的影响和可能的机制.方法 将大鼠随机分成3组:对照组,模型组和治疗组(PTX组).用4.25%含糖腹膜透析液 脂多糖腹腔注射制作腹膜纤维化模型,即模型组;PTX组同时每日给予PTX 6 mg/kg腹腔注射.5周后行2 h腹膜平衡试验测定腹膜功能,留取血液及腹膜透析液用ELISA法测定血管内皮生长因子(VEGF)浓度,并留取壁层腹膜组织做苏木精-伊红、Masson染色,RT-PCR检测肠系膜组织VEGF mRNA表达水平.结果 ①模型组及PTX组的壁层腹膜较对照组增厚,而PTX组较模型组明显减轻;②模型组及PTX组大鼠超滤量及2 h透析液葡萄糖浓度/0 h透析液葡萄糖浓度(D2/D0)比值均较对照组减少(均P<0.05),其中模型组较PTX组明显减少;与对照组比较,模型组及PTX组大鼠透析液尿素浓度/血浆尿素浓度(Durea/Purea)比值有明显增加(均P<0.05),其中模型组较PTX组增加明显;③PTX组腹透液及血清中VEGF浓度,肠系膜组织VEGF mRNA表达较模型组明显下降(均P<0.05).结论 己酮可可碱能有效地预防腹膜纤维化,其机制可能与调节VEGF的表达有关.     

己酮可可碱对新生大鼠缺血缺氧性脑病的干预作用

目的观察己酮可可碱（PTX）对新生大鼠缺血缺氧性脑病（HIE）模型的干预作用。方法建立新生大鼠HIE模型，72只出生7d的Wistar大鼠随机分为假手术组，HIE模型组和PTX组，于缺血缺氧后72h取左脑，测定脑组织水含量、大脑皮层神经细胞内游离钙离子浓度、SOD、MDA、NOS及NO。结果与HIE模型组相比，PTX组脑组织含水量、游离钙离子浓度和MDA、NOS以及NO水平均显著降低（P〈0．05；P〈0．01；P〈0．05；P〈0．05；P〈0．05），SOD水平显著升高（P〈0．05）。结论PTX对新生大鼠缺血缺氧后脑组织有保护作用，其机制可能与PTX改善能量代谢及减少局部细胞毒性物质有关。     

T细胞接种对NOD鼠糖尿病的预防作用

目的 探讨Ｔ细胞接种（ＴＣＶ）对Ｉ型糖尿病的预防作用。方法 ４周龄未发病的雌性ＮＯＤ鼠用１８周龄新近发病的ＮＯＤ鼠脾细胞制得的Ｔ细胞疫苗接种,检测ＴＣＶ对ＮＯＤ鼠糖尿病和胰岛炎的影响。结果 ＴＣＶ可以降低糖尿病发病率及血糖平均水平,减轻胰岛单个核细胞的浸泡程度。结论 ＴＣＶ可以诱导宿主产生自身免疫低反应性。     

甲壳低聚糖对NOD鼠糖尿病的预防作用

目的 :探讨甲壳低聚糖对NOD鼠糖尿病的预防作用机制。方法 :将 5周龄未发病的NOD小鼠分为糖尿病预防组和对照组。预防组用 3 %甲壳低聚糖溶液作饮用水 ,对照组用冷开水作饮用水 ,连续 15周 ,定期测血糖 ,称体重 ,实验末计算糖尿病的发病率 ,HE染色观察胰岛炎。结果 :对照组 12周龄即出现高血糖 ,而预防组至实验结束仅有少数出现高血糖 ,两组相比具有显著差异性 (P <0 0 1)。NOD鼠预防组糖尿病发病率 (2 5% )低于对照组 (79% ) (P <0 0 5) ,同时减轻胰岛炎的严重程度 (P <0 0 5)。结论 :甲壳低聚糖对NOD鼠糖尿病的确有预防作用 ,其机制可能与甲壳低聚糖的非特异性免疫调节作用 ,及抗氧化等有关。     

细粒棘球蚴抗原B对NOD小鼠1型糖尿病的预防作用

目的探讨细粒棘球蚴抗原B(抗原B)对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠1型糖尿病免疫机制的影响。方法将造模成功的20只NOD小鼠依据随机数字表法分为抗原B处理组和生理盐水处理组,各10只。记录并比较两组小鼠初始/成模后/用药后1、2、3周的体质量和血糖变化值。运用酶联免疫吸附测定法检测小鼠血清中白细胞介素(IL)2/IL-10的水平;运用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测胰腺组织中两种细胞因子的表达量。结果在用药后3周各组小鼠之间体质量比较差异有统计学意义(P<0.05),生理盐水处理组体质量下降明显;生理盐水处理组血糖上升水平较抗原B处理组高(P<0.05)。酶联免疫吸附测定结果显示,抗原B处理组IL-2水平较生理盐水处理组低,血清IL-10水平高于生理盐水处理组(P<0.05)。荧光定量PCR结果:抗原B处理组IL-2 mRNA表达量较生理盐水处理组显著下调,IL-10显著上调(P<0.05)。结论细粒棘球蚴抗原B可以降低IL-2水平,升高IL-10水平,暂可认为使Th1/Th2细胞发生免疫偏移,向着有利于胰岛保护的方向,细粒棘球蚴抗原B可能有预防或治疗1型糖尿病的作用。     

甲壳低聚糖对NOD小鼠降血糖作用观察

目的 观察甲壳低聚糖对NOD小鼠降血糖作用。方法 对NOD小鼠测血糖值，分成高血糖组(I)和低血糖组(Ⅱ)。对I、Ⅱ又分别随机分成对照组I-1、Ⅱ-1和治疗组I-2、Ⅱ-2，治疗组用30%甲壳低聚糖作饮用水，对照组用冷开水作饮用水，连续15周，定期测定各组血糖值。结果 治疗组I-2有58％降血糖作用显著，42％降血糖有效，血糖较长时间得到控制，寿命延长，治疗组Ⅱ-2血糖未见升高。对照组I-1寿命很短，对照组Ⅱ-1陆续出现高血糖。结论 甲壳低聚糖对NOD小鼠高血糖有治疗作用和控制血糖作用，能延长NOD小鼠生存期。     

NOD小鼠1型糖尿病的自然发病特性

1型糖尿病由于自身免疫的损害造成胰岛β细胞破坏,引起胰岛素绝对缺乏,呈现高血糖症状。目前仍无有效的根治方法。非肥胖型糖尿病小鼠(NOD)能自然发生1型糖尿病,是目前研究1型糖尿病的主要动物模型。该品系小鼠有独特H2g7单倍体(Kd、I Ag7、I Enull、Db),通常于4～5周龄开始出现胰岛炎,进行性破坏胰岛β细胞,于12周龄时出现明显糖尿病症状,至30周龄时雌性小鼠累计发病率可达到80%,而雄性小鼠则不到20%。     

NOD鼠胰岛细胞FasL/Fas凋亡通路的动态变化

目的:观察雌性NOD鼠在不同病程时,胰腺细胞因子mRNA和凋亡因子mRNA的表达,及胰岛内细胞因子和凋亡因子蛋白的表达.方法:54只雌性NOD鼠随要分为C1、C2、C3三组各18只,分别于4周龄,15周龄和30周龄(或发病时)处死,摘取胰腺.RT-PCR法检测胰腺IFN-γ、IL-10、Fas,FasL和CPP32mRNA的表达水平.HE染色观察胰岛炎程度.SP免疫组化染色观察胰岛内胰岛细胞及炎症细胞Fas,FasL及CPP32蛋白表达水平.结果:随病程的进展胰腺Fas、IFN-γ mR-NA的表达水平增加(P＜0.05),IL-10mRNA三组间无显著性差异.C2和C3组胰腺FasL、CPP32mRNA水平较C1组明显增强(FasL、P＜0.05;CPP32,P＜0.01),C2与C3组比较无显著差异.胰腺Fas、CPP32mRNA与IFN-γmRNA的表达水平呈正相关(相关系数γ=0.677,0.530),与IL-10mRNA的表达不相关(γ=-0.427,-0.464).免疫组化染色显示:C1、C2、C3组胰岛细胞FasL均高表达,三组间无显著差异(P＞0.05),Fas、CPP32的表达在C1组组弱表达,C2、C3组表达增强.C2、C3与C1组之间均有统计学差异(P＜0.05),C2与C3组比较无显著差异.C1组几无炎症细胞浸润,C2与C3组之间比较炎症细胞Fas、FasL、CPP32的表达无显著性差异.结论:在NOD鼠糖尿病发病中Th1细胞因子起主导作用;FasL/Fas凋亡通路参与NOD鼠胰岛β细胞的破坏;Th1细胞因子IFN-γ能上调胰腺FasL/Fas凋亡通路.     

NOD/SCID雌性小鼠动情周期的观察

目的：观察NOD/SCID小鼠动情周期及卵巢切除术后阴道涂片的变化。方法：连续观察9天NOD/SCID鼠,每日进行两次阴道涂片,计算动情周期时间及发生率。卵巢切除后,阴道涂片并观察阴道涂片变化。结果：NOD/SCID小鼠动情周期为4-6天。有规律动情的小鼠占80%。阴道口状态与动情周期无明显相关。卵巢切除术后,阴道涂片呈动情后期或动情间期改变。结论：采用阴道脱落细胞涂片法可判断NOD/SCID雌性小鼠的动情周期及特点,NOD/SCID雌性小鼠卵巢切除手术有效。     

The H1-receptor antagonist cetirizine ameliorates high-fat diet-induced glucose intolerance in male C57BL/6 mice,but not diabetes outcome in female non-obese diabetic (NOD) mice

Abstract

Background. It has been proposed that the histamine 1-receptor (H1-receptor) not only promotes allergic reactions, but also modulates innate immunity and autoimmune reactions. In line with this, we have recently reported that the H1-receptor antagonist cetirizine partially counteracts cytokine-induced beta-cell signaling and destruction. Therefore, the aim of this study was to determine whether cetirizine affects diabetes in NOD mice, a model for human type 1 diabetes, and glucose intolerance in high-fat diet C57BL/6 mice, a model for human glucose intolerance.

Methods. Female NOD mice were treated with cetirizine in the drinking water (25 mg/kg body weight) from 9 until 30 weeks of age during which precipitation of diabetes was followed. Male C57BL/6 mice were given a high-fat diet from 5 weeks of age. When the mice were 12 weeks of age cetirizine was given for 2 weeks in the drinking water. The effects of cetirizine were analyzed by blood glucose determinations, glucose tolerance tests, and insulin sensitivity tests.

Results. Cetirizine did not affect diabetes development in NOD mice. On the other hand, cetirizine treatment for 1 week protected against high-fat diet-induced hyperglycemia. The glucose tolerance after 2 weeks of cetirizine treatment was improved in high-fat diet mice. We observed no effect of cetirizine on the insulin sensitivity of high-fat diet mice.

Conclusion. Our results suggest a protective effect of cetirizine against high-fat diet-induced beta-cell dysfunction, but not against autoimmune beta-cell destruction.     

The H1-receptor antagonist cetirizine ameliorates high-fat diet-induced glucose intolerance in male C57BL/6 mice,but not diabetes outcome in female non-obese diabetic (NOD) mice

Background It has been proposed that the histamine 1-receptor (H1-receptor) not only promotes allergic reactions, but also modulates innate immunity and autoimmune reactions. In line with this, we have recently reported that the H1-receptor antagonist cetirizine partially counteracts cytokine-induced beta-cell signaling and destruction. Therefore, the aim of this study was to determine whether cetirizine affects diabetes in NOD mice, a model for human type 1 diabetes, and glucose intolerance in high-fat diet C57BL/6 mice, a model for human glucose intolerance.Methods Female NOD mice were treated with cetirizine in the drinking water (25 mg/kg body weight) from 9 until 30 weeks of age during which precipitation of diabetes was followed. Male C57BL/6 mice were given a high-fat diet from 5 weeks of age. When the mice were 12 weeks of age cetirizine was given for 2 weeks in the drinking water. The effects of cetirizine were analyzed by blood glucose determinations, glucose tolerance tests, and insulin sensitivity tests.Results Cetirizine did not affect diabetes development in NOD mice. On the other hand, cetirizine treatment for 1 week protected against high-fat diet-induced hyperglycemia. The glucose tolerance after 2 weeks of cetirizine treatment was improved in high-fat diet mice. We observed no effect of cetirizine on the insulin sensitivity of high-fat diet mice.Conclusion Our results suggest a protective effect of cetirizine against high-fat diet-induced beta-cell dysfunction, but not against autoimmune beta-cell destruction.     

NOD1及COX-2在脂肪组织中表达与妊娠期糖尿病相关性研究

目的 检测核苷酸结合寡聚化结构域1(NOD1)和环氧合酶2(COX-2)在妊娠糖尿病患者脂肪组织中的表达,揭示NOD1和COX-2在妊娠糖尿病发病机制中的意义.方法 应用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹(Western Blot)技术检测体质指数(BMI)匹配的80例正常葡萄糖耐量孕妇(NGT组)和80例妊娠糖尿病者(GDM组)剖宫产后脂肪组织中NOD1基因mRNA和COX-2蛋白水平.结果 GDM组NOD1 mRNA相对表达量为(3.148±1.037),明显高于NGT组的(0.975±0.296),差异有统计学意义(P＜0.01).GDM组脂肪组织中COX-2蛋白表达水平(1.672±0.452)较NGT组(0.768±0.272)显著升高(P＜0.01),NOD1和COX-2表达升高与糖尿病胰岛素抵抗具有密切相关性(P＜0.01).结论 脂肪组织中NOD1和COX-2表达的升高可能是GDM患者胰岛素抵抗的重要原因,在GDM发病中起到关键作用.     

棘球蚴抗原B对小鼠1型糖尿病拮抗作用研究

目的:探讨细粒棘球蚴抗原B对小鼠1型糖尿病的拮抗作用及其机制。方法:30只雄BALB/c小鼠随机分为三组:肌内注射细粒棘球蚴抗原B加糖尿病成模组(A组,10只);肌内注射生理盐水加糖尿病成模组(B组,10只);对照组(C组,10只)。A组给予细粒棘球蚴抗原B,B组给予相同剂量的生理盐水,均为连续5 d,随后A组、B组均给予小剂量链脲佐菌素诱导1型糖尿病,C组未予任何处理。动态观察血糖变化,至3周末剖杀小鼠,留取血清,取胰腺组织切片HE染色,进行胰岛炎评分,用ELISA测定血清白介素-2(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)水平。结果:给药后,小鼠血糖逐渐升高,分别在第3天、成模后1周、成模后2周及成模后3周,B组血糖水平分别显著高于A组和C组(P<0.05);A组胰岛可见淋巴细胞浸润不多,而B组胰岛可见较多淋巴细胞浸润;糖尿病模型建立3周末,A组小鼠血清IL-4水平高于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.05),A组小鼠血清IFN-γ水平低于B组(P<0.05)。结论:细粒棘球蚴抗原B对小鼠实验性1型糖尿病具有拮抗和保护作用,其机制可能与Th1/Th2免疫偏移有关。