BXSB小鼠肝、肾、脾脏器中C－myc和N－ras原癌基因的表达

用同位素标记ｃＤＮＡ探针的斑点杂交方法观察了ＢＸＳＢ小鼠肝、肾、脾脏器中Ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓ原癌基因的表达情况。结果表明ＳＬＥ发病较重的４～６月龄ＢＸＳＢ雄鼠脾脏和肾脏均表达Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ，肝脏未见表达。ＳＬＥ发病较轻的４～６周龄ＢＸＳＢ雄鼠仅发现脾脏表达Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ。ＢＸＳＢ小鼠肝、肾、脾各脏器均无Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ表达。本研究结果提示Ｃ－ｍｙｃ基因可能参与ＢＸＳＢ小鼠淋巴细胞异常活化和狼疮性肾炎的发生。     

BXSB小鼠肝、肾、脾脏器中C－myc和N－ras原癌基因的表达

用同位素标记ｃＤＮＡ探针的斑点杂交方法观察了ＢＸＳＢ小鼠肝、肾、脾脏器中Ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓ原癌基因的表达情况。结果表明ＳＬＥ发病较重的４～６月龄ＢＸＳＢ雄鼠脾脏和肾脏均表达Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ，肝脏未见表达。ＳＬＥ发病较轻的４～６周龄ＢＸＳＢ雄鼠仅发现脾脏表达Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ。ＢＸＳＢ小鼠肝、肾、脾各脏器均无Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ表达。本研究结果提示Ｃ－ｍｙｃ基因可能参与ＢＸＳＢ小鼠淋巴细胞异常活化和狼疮性肾炎的发生。     

白介素6基因给药对BXSB狼疮小鼠发病的影响

目的 为了进一步观察白介素６（ＩＬ－６）在系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）发病中的作用。方法 采用基因工程方法构建了真核表达载体ｐｃＤＮＡＷ３－ＩＬ－６,并经体内和体外实验检验到被其转染的高效表达ＩＬ－６和ＩＬ－６ｍＲＮＡ。先后２次（第六１,第２０天）将这种质粒多点肌注于１２只３．５月龄雄性ＢＸＳＢ狼疮小鼠,每次每只１００μｇ,同时用等量空载体质粒（ＰｃＤＮＡ３）肌注于１０只同龄雄性ＢＸＳＢ狼疮小鼠作对照     

IL—10基因给药对BXSB狼疮小鼠发病的影响

目的：为了观察白细胞介素10（IL－10）在系统性红斑狼疮（SLE）发病中的作用。方法：通过基因工程方法构建了真核表达载体pcDNA3－IL－10，采用基因给药方式先后两次将质粒DNA直接肌注于3．5月龄雄性BXSB狼疮小鼠．同时给对照组小鼠注射等量空载体质粒pcDNA3。结果：发现IL－10在该鼠体内过表达可导致其血清ANA滴度、IL－6水平及肾脏IgG沉积明显增加，而尿蛋白和血清GPT水平及肾脏C3沉积无明显差异。结论：提示IL－10在SLE发病中可能具有病理性作用，阻止或减少IL－10的分泌及作用，也许有助于SLE的治疗。     

转化生长因子β基因在BXSB狼疮小鼠肾脏中的表达

目的研究转化生长因子（ＴＧＦ β）与狼疮性肾炎进展的关系。方法采用同位素标记ｃＤＮＡ探针Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交方法,检测了自发狼疮性肾炎的ＢＸＳＢ小鼠肾脏组织中ＴＧＦ βｍＲＮＡ水平。结果发现与狼疮性肾炎发病较轻的６月龄雌性ＢＸＳＢ小鼠相比较,狼疮性肾炎发病较重的６月龄雄性ＢＸＳＢ小鼠肾脏表达ＴＧＦ βｍＲＮＡ的量显著增加（Ｐ＜０．０１）,是对照雌鼠表达量的６倍。结论提示ＴＧＦ β可能在狼疮性肾炎肾小球细胞外基质的病理性积聚和肾小球硬化的形成过程中起重要作用。     

来氟米特对BXSB狼疮鼠免疫状况的影响

目的：观察来氟米特对BXSB小鼠免疫状况的影响。方法：48只3月龄的雄性BXSB小鼠分为4组,治疗前后测定24h尿蛋白;治疗后检测血清抗dsDNA抗体以及肾脏免疫复合物。结果：治疗后,来氟米特组的尿蛋白、抗dsDNA抗体明显低于地塞米松和生理盐水组（P〈0.01）,也低于环磷酰胺组,但其组间差异无统计学意义（P〉0.05）;来氟米特组的肾脏免疫复合物低于其他治疗组（P〈0.05或P〈0.01）。与生理盐水组相比,来氟米特组小鼠的生存期明显延长（χ^2=4.56,P〈0.05）。结论：来氟米特可显著改善BXSB小鼠的免疫状况,能延缓BXSB狼疮鼠的疾病进程。     

系统性红斑狼疮患者转录因子T-bet和GATA3基因的表达

目的 观察转录因子T-bet和GATA3与系统性红斑狼疮(SLE)病情的关系,探讨T细胞在SLE中的发病机制.方法 利用半定量PCR及实时荧光定量PCR技术检测活动期SLE患者、稳定期SLE患者、正常人外周血单一核细胞(PBMC)中T-bet和GATA3mRNA表达状况.结果 GATA3实时荧光定量PCR△Ct值:活动期(8.92±1.29)明显低于稳定期(12.20±1.18)和正常人(11.80±0.80),所以活动期患者GATA3mRNA表达明显高于稳定期患者和正常人,差异具有非常显著性(P<0.01);半定量PCR显示活动期(0.15±0.15)也明显高于稳定期(0.04±0.05)和正常人(0.03±0.03),差异有显著性(P<0.05);两种方法均显示稳定期患者与正常人GATA3表达差异无显著性(P>0.05).T-bet实时荧光定量PCR△Ct值:活动期为10.52±0.82,稳定期为9.93±1.13,正常人为10.23±1.32;半定量PCR:活动期为0.30±0.23,稳定期为0.28±0.14,正常人为0.22±0.11,两种方法均显示活动期患者、稳定期患者、正常人T-bet表达差异无显著性(P>0.05).结论 调控Th2细胞的转录因子GATA3的升高可能与SLE活动有关,而调控Th1细胞的转录因子T-bet可能与SLE活动无关.     

抗菌肽LL-37,HBD-2和HBD-3在颜面播散性粟粒状狼疮皮损中的表达

目的 探讨颜面播散性粟粒状狼疮(lupus miliaris facici,LMF)的发病机理.方法 选择2001年1月-2009年12月本科门诊20例颜面播散性粟粒状狼疮患者和15例银屑病患者皮损及10例色素痣边缘正常皮肤的石蜡切片,用免疫组化法观察LL-37,HBD-2和HBD-3的表达.结果 与正常组皮肤比较,LL-37,HBD-2和HBD-3在LMF的表皮全层高表达,以中上层为著(P均＜0.001);在毛囊、皮脂腺、小汗腺、血管壁、组织细胞和巨细胞的胞浆亦有高表达;它们在银屑病皮损中为中表达和高表达;但是HBD-2和HBD-3在LMF皮损中的表达强度显著高于银屑病皮损(P均＜0.001),LL-37的表达则与银屑病相似(P＞0.05).结论 抗菌肽LL-37,HBD-2和HBD-3均参与LMF的免疫反应过程.     

甲基结合蛋白MeCP2与mbd2在SLE患者中的表达

目的　探讨甲基结合蛋白MeCP2及去甲基化酶mbd2基因的表达异常在SLE发病中的作用。方法　以RT-PCR方法检测SLE缓解期、活动期患者与正常人外周血单一核细胞（PBMC）中MeCP2及mbd2基因的表达水平,并进行相关性分析。结果　SLE活动期、缓解期及正常人对照组PBMC中MeCP2的表达差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。SLE缓解期患者PBMC中mbd2的表达水平显著高于正常人对照组（t = 12.8,P ＜ 0.01）;SLE活动期患者PBMC中mbd2表达显著高于SLE缓解期（t = 20.0,P ＜ 0.01）。SLE患者PBMC中mbd2的表达与SLEDAI评分呈正相关（r = 0.737,P = 0.0001）。正常人对照组PBMC中mbd2的表达与MeCP2的表达呈正相关（r = 0.550,P = 0.0222）。结论　在正常情况下,MeCP2和mbd2的表达相互制约,在SLE患者中这种关系被破坏。     

重组腺病毒介导金黄色葡萄球菌肠毒素A基因在小鼠B16黑素瘤细胞中的表达

目的 研究金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因通过重组腺病毒介导转染入B16黑素瘤细胞中的表达情况。方法 用RT-PCR和流式细胞仪检测SEA基因在B16黑素瘤细胞中的表达。结果 在转染SEA基因的B16黑素瘤细胞中检测到SEA基因的转录,并于转染后24h开始有SEA蛋白的表达,到72h表达量达最高值87.22,之后减弱,直到168h仍有少许表达。结论 SEA基因可以在B16黑素瘤细胞中表达,为下一步黑素瘤的基因治疗奠定基础。     

双氢青蒿素对狼疮性BXSB小鼠的作用

目的探讨双氢青蒿素治疗红斑狼疮的机理。方法选择雄性BXSB小鼠50只,分成空白组(生理盐水)、对照组(强的松)和实验组(双氢青蒿素),采用Macart和直接免疫荧光方法检测BXSB小鼠尿蛋白、脾脏T细胞亚群和B细胞。结果BXSB小鼠尿蛋白量依次减低为空白组>实验组>对照组,P<0.01。对照组的CD4T细胞和CD8T细胞低于空白组,P<0.05。实验组的CD4T细胞和CD8T细胞高于空白组,P<0.01。B细胞降低顺序为空白组>实验组>对照组,P<0.01。结论双氢青蒿素通过抑制B淋巴细胞增殖,促进CD4T细胞和CD8T细胞的增殖,尤其是CD8T细胞增殖明显,减少B细胞分泌自身抗体,从而达到治疗红斑狼疮的作用。     

系统性红斑狼疮纤溶活性的实验研究

采用发色底物显色法和酶联免疫吸附法测定了系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）动物模型ＢＸＳＢ小鼠发病前后血中组织型纤维蛋白溶解酶原激活物（ｔ－ＰＡ）和ｔ－ＰＡ抑制物（ＰＡＩ）的含量及活性，同时观察了肾组织病理及尿蛋白量的变化。实验结果表明：发病后小鼠尿蛋白量明显增加，肾小球免疫复合物沉积，毛细血管腔闭塞，管壁增厚，纤维蛋白沉积；血中ｔ－ＰＡ活性明显低于未发病小鼠。提示ＳＬＥ血栓形成与血中ｔ－ＰＡ活性低下有关。     

BXSB小鼠肾脏组织中Ⅰ型白介素Ⅰ受体mRNA的表达

目的为了研究Ⅰ型白介素Ⅰ受体（IL-1Rt1）基因表达与狼疮性肾炎进展的关系。方法采用32P同位素标记cDNA探针狭线印迹杂交方法，检测自发狼疮性肾炎的BXSB小鼠肾脏组织中IL-1Rt1基因mRNA的转录水平。结果发现与狼疮性肾炎发病较轻的3月龄雄性BXSB小鼠相比较，狼疮性肾炎发病较重的6月龄雄性BXSB小鼠肾脏组织表达IL-1Rt1 mRNA的量显著增加（P〈0.05）。结论IL-1Rt1 mRNA的异位大量表达是狼疮性肾炎肾小球细胞外基质病理性积聚的重要原因，可能会引起肾小球结构和功能多方面的改变，在狼疮性肾炎的进展和肾小球硬化的形成过程中起重要作用。     

来氟米特治疗BXSB狼疮鼠的实验研究

目的 探讨来氟米特是否可改善BXSB小鼠的免疫状况和肾脏损害,为临床治疗系统性红斑狼疮(SLE)提供实验依据。方法 3月龄雄性BXSB小鼠分为4组,治疗前后测定尿蛋白;治疗后检测血清尿素氮、肌酐、抗dsDNA抗体以及肾脏免疫复合物。结果 ①各组小鼠治疗前的尿蛋白差异无显著性(P>0.05);②治疗后,来氟米特组的尿蛋白、抗dsDNA抗体明显低于地塞米松组和生理盐水组(P<0.01),而且低于环磷酰胺组,但其组间差异无统计学意义(P>0.05);③来氟米特组的血清尿素氮、肌酐及肾脏免疫复合物均低于其他治疗组(P<0.05或P<0.01)。④与生理盐水组相比,来氟米特组小鼠的生存期明显延长(x²=4.56,P<0.05)。结论 来氟米特可显著改善BXSB小鼠的免疫状况和肾脏功能,能延缓BXSB狼疮鼠的疾病进程。     

胚胎胸腺移植治疗BXSB小鼠自发性系统性红斑狼疮的研究

目的 通过胚胎胸腺移植治疗BXSB小鼠自发性系统性红斑狼疮(SLE),了解SLE的发病机制以及胚胎胸腺移植的临床应用前景。方法 将正常胚胎小鼠胸腺移植于50d大小的雄性BXSB小鼠体内,定期检测小鼠尿蛋白、血清抗核抗体、血尿素氮、血肌酐,肾小球免疫球蛋白沉着情况及因SLE而死亡的情况,连续观测5个月。结果 移植组5、6、7月龄小鼠尿蛋白、血抗核抗体、血尿素氮及肌酐均明显低于5月龄对照组小鼠;地塞米松治疗组结果与移植组小鼠相似;移植组及地塞米松治疗组SLE的死亡率明显减低;移植后和地塞米松治疗后各月龄小鼠肾小球免疫球蛋白沉着阳性率与对照组差异无显著性。结论 胚胎胸腺移植能改善BXSB小鼠肾功能,降低血抗核抗体滴度,延长小鼠的寿命,疗效与地塞米松治疗类似,胚胎胸腺移植治疗BXSB小鼠自发性SLE有较好的近期疗效,胸腺的缺陷在BXSB小鼠的致病中起重要作用,胚胎胸腺移植有望应用于临床SLE的治疗。     

系统性红斑狼疮患者及其家庭成员外周血基因表达谱的研究

目的 研究家族性SLE患者、一级亲属和正常人外周血基因表达谱的改变,探讨家族性SLE发病机制。方法 首先从外周血提取总RNA,逆转录合成单链、双链cDNA后,体外转录合成生物素标记的cRNA与基因芯片进行杂交,再通过抗原抗体反应机制标记上荧光染料Cy3后,使用基因芯片扫描仪进行图像扫描。使用分析软件进行表达差异和聚类分析。结果 在3000多个基因中,鉴定出59个基因存在表达差异,其中有34个基因表达上调,25个基因表达下调,这与散发性SLE患者的表达差异基因基本相同。在34个表达上调基因中,有22个基因在SLE患者和其未患病的姐妹中都表达上调;在25个表达下调的基因中,有17个基因在SLE患者和其未患病的姐妹中都表达下调。聚类分析显示根据外周血基因表达谱可明确地将SLE患者、未患病亲属及正常人对照区分开。结论 该基因芯片技术有较高的重复性和稳定性,能有效地进行家族性SLE疾病相关基因的初步筛选。     

系统性红斑狼疮患者16号染色体候选基因表达研究

目的 研究已发现16号染色体存在系统性红斑狼疮(SLE)易感位点,结合基因芯片结果,选择16号染色体OAZ、CARD15、DNAJA2、IL-4R4个基因作为候选基因进行表达研究。方法 SLE患者42例(以SLEDAI进行活动性评分),正常人对照36例,抽提静脉全血RNA,逆转录为cDNA,加入相应的Taqman引物、探针在ABIPrism7900型高通量荧光定量PCR仪上进行荧光实时定量PCR,采用看家基因GAPDH进行标化。结果 SLE患者OAZ基因表达水平为正常人对照的2.22倍,CARD15为2.51倍,均显著高于正常人对照(P<0.01);DNAJA2为1.19倍,与正常人比较差异无显著性;IL-4R为0.47倍,显著低于正常人对照(P<0.01)。结论 SLE患者16号染色体存在疾病相关基因,OAZ、CARD15表达增高,IL-4R表达降低,这些基因参与了不同的调控通路,需要进行结构与功能相关性的研究以进一步明确。