噬菌体生物扩增技术在结核分枝杆菌药敏检测中的应用

目的探讨噬菌体生物扩增技术(PhaB)在结核分枝杆菌(MTB)耐药研究中的应用价值。方法应用PhaB法同时测定233株结核分枝杆菌分离株对异烟肼(INH)、链霉素(SM)、利福平(RFP)及左旋氧氟沙星(LEV)的耐药性,并用改良罗氏培养法(LJ)做对照,比较两种方法的检测结果。结果PhaB法检测INH、SM、RFP、LEV的药敏结果与改良罗氏培养法药敏结果相比符合率分别为97.4%、96.6%、95.3%、96.9%。同时检出耐多药菌株26株,占11.1%。结论PhaB法能快速进行结核分枝杆菌的药敏检测并与金标法LJ符合率高,可作为基层结防单位MTB耐药性的快速筛选方法。     

噬菌体扩增技术快速检测结核分枝杆菌的临床应用

结核病细菌学检查主要靠痰涂片和培养的方法,阳性率只有30％左右。结核菌培养则需1-2mo。结核抗体检测假阳性率、假阴性率都很高。FAST-plaqueTB噬菌体扩增技术检测结核杆菌,具有特异性和灵敏度高的优点,而且快速、简便。     

噬菌体生物扩增法快速鉴定结核分枝杆菌的临床价值

目的:探讨噬菌体生物扩增法(Phab)快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法:应用Phab、罗氏法及涂片法共同检测236例痰标本。结果:痰标本3种方法检测结果比较:236份临床确诊的活动性肺结核患者痰标本,涂片、罗氏培养和Phab法检查结果分别有64份(27.1%)、78份(33.1%)和114份(48.3%)阳性;比较Phab与涂片和培养的阳性检测率,Phab检出率远高于涂片法,差异有统计学意义(χ2=77.706,P<0.01),Phab检出率高于罗氏法检出率,差异有统计学意义(χ2=95.678,P<0.01)。结论:FASTPlaque TB方法能快速、简便地检测结核分枝杆菌,且检出率较高,可作为结核病诊断的重要方法。     

应用分枝杆菌噬菌体试剂盒检测结核杆菌

目的:评价分枝杆菌噬菌体试剂盒(fastplaqueTBTM)对结核病的诊断价值。方法:应用fastplaqueTB法及涂片法分别检测结核病患者的临床标本。结果:45份结核标本中fastplaqueTB法阳性25份(55.6%),涂片法阳性13例(28.9%)。结论:FastplaqueTB法能快速简便、高效地检测结核分枝杆菌,可作为结核病诊断的重要方法。     

噬菌体生物扩增法检测脓肿型颈部淋巴结结核患者脓液中结核分枝杆菌

目的探讨噬菌体生物扩增法在检测脓肿型颈部淋巴结结核患者脓液中结核分枝杆菌的临床应用价值,寻找一快速检测方法。方法采用噬菌体生物扩增技术对21例脓肿型颈部淋巴结结核患者的脓液标本进行检测,同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养。结果噬菌体生物扩增法阳性率为47.6%（10/21）,涂片抗酸染色阳性率为28.6%（6/21）,罗氏培养阳性率为42.8%（9/21）。检验所需时间：传统的罗氏培养法需8周,而噬菌体生物扩增法仅需2d。结论噬菌体生物扩增法检测颈淋巴结脓液中结核分枝杆菌阳性率高于传统方法,且耗时明显缩短。 关键词：颈部淋巴结结核;结核分枝杆菌;噬菌体生物扩增法     

噬菌体生物扩增法在关节结核诊治中的临床应用研究

目的 探讨噬菌体生物扩增法(phage amplified biologically assay,PhaB)快速检测关节结核脓液中结核分枝杆菌的临床应用价值.方法 采用PhaB技术对关节结核患者36例,非结核性关节炎患者20例关节液中的结核分枝杆菌进行检测,同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养.结果 36例关节结核积液,PhaB阳性率为47.2%(17/36)、涂片抗酸染色阳性率为2.7%(1/36)、罗氏培养阳性率为5.5%(2/36).20 例非结核性关节炎患者PhaB、涂片抗酸染色、罗氏培养特异性均为100.0%.结论 PhaB法检测关节积液中结核分枝杆菌只需2d,操作简便、灵敏度高、特异性强,不需要特殊仪器设备,可作为诊断关节结核的一种好方法.     

环介导等温扩增技术在检测痰标本结核分枝杆菌中的应用

目的评价结核分枝杆菌环介导等温扩增技术（LAMP）快速检测试剂盒的临床应用效果。方法选取肺结核患者183例（肺结核组）和非肺结核患者120例（对照组）。采用涂片抗酸染色、罗氏培养法和LAMP对痰标本进行检测,采用结核分枝杆菌核酸扩增荧光检测试剂盒（TB- PCR）检测罗氏培养与LAMP结果不符的标本,分析LAMP与罗氏培养的检出率及两者的符合率。结果去除经鉴定为非结核分枝杆菌的10例标本,涂片抗酸染色、罗氏培养法和LAMP的阳性检出率分为64.1%（111/173）、64.7%（112/173）、78.6%（136/173）。LAMP与抗酸染色、罗氏培养阳性检出率的差异有统计学意义（P＜0.01）,抗酸染色与罗氏培养比较差异无统计学意义（P＞0.05）。以罗氏培养为金标准,LAMP检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为88.5%（108/122）、82.3%（149/181）、77.1%（108/140）、91.4%（149/163）,LAMP检测与罗氏培养的符合率为84.8%（257/303）。结论结核分枝杆菌环介导等温扩增技术的灵敏度和特异度高,具有简单易行、快速准确的特点,在肺结核患者的早期诊断中将发挥重要作用。     

噬菌体生物扩增技术在结核分枝杆菌利福平耐药性检测中的应用

目的评价噬菌体生物扩增技术(PhaB法)在结核分枝杆菌(MTB)利福平(RFP)耐药性检测中的应用价值.方法采用PhaB法检测临床78例肺结核患者痰标本中MTB对利福平的耐药性,并与比例法比较.结果以比例法为评价标准,PhaB法利福平耐药性检测的灵敏度、特异性、准确度分别为84.0%、94.33%、91.03%.结论 PhaB法检测痰标本中结核分枝杆菌对利福平的耐药性具有较高的敏感性和特异性,与比例法符合率高,且简便快速,不需要特殊仪器设备,可作为MTB耐药性检测的快速筛选方法.     

噬菌体生物扩增法快速鉴定结核分枝杆菌的临床价值

目的探讨噬菌体生物扩增法(Phab)快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值.方法应用Phab、罗氏法及涂片法共同检测236例痰标本.结果痰标本3种方法检测结果比较236份临床确诊的活动性肺结核患者痰标本,涂片、罗氏培养和Phab法检查结果分别有64份(27.1%)、78份(33.1%)和114份(48.3%)阳性;比较Phab与涂片和培养的阳性检测率,Phab检出率远高于涂片法,差异有统计学意义(X2=77.706,P＜0.01),Phab检出率高于罗氏法检出率,差异有统计学意义(X2=95.678,P＜0.01).结论FASTPlaque TB方法能快速、简便地检测结核分枝杆菌,且检出率较高,可作为结核病诊断的重要方法.     

噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌在诊断肺结核中的价值

目的:研究应用噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌在肺结核诊断中的价值。方法:应用噬菌体生物扩增法对416例肺结核和168例非结核性肺部疾病患者的痰标本进行检测,评价其对肺结核的诊断价值及同细菌学检查方法是否存在差异。结果:噬菌体生物扩增法诊断菌阳肺结核的敏感度为98.5%,诊断菌阴肺结核的敏感度为63.3%,诊断肺结核的总敏感度为75.0%;诊断肺结核的特异度为95.2%;噬菌体生物扩增法阳性检出率为75.0%,高于细菌学检查方法33.2%(P<0.005)。结论:噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌在诊断肺结核中有较好的灵敏度和特异度,是辅助诊断和鉴别诊断肺结核的有效手段。     

噬菌体裂解法在肺结核分枝杆菌耐药性检测中的应用

目的探讨噬菌体裂解法在基层结核病防治机构实验中的应用价值。方法应用噬菌体裂解法检测临床108例痰标本中结核分枝杆菌对利福平（R）、异烟肼（H）、链霉素（S）、乙胺丁醇（E）的耐药性,并与比例法比较。结果以比例法检测结果为标准,噬菌体裂解法检测利福平（R）、异烟肼（H）、链霉素（S）、乙胺丁醇（E）耐药性的敏感性、特异性及准确性分别为100.0%、96.0%和96.3%,87.5%、95.7%和94.4%,76.2%、100.0%和95.4%,75.0%、96.0%和94.4%。噬菌体裂解法检测利福平（R）、异烟肼（H）、链霉素（S）、乙胺丁醇（E）药敏结果与比例浓度法检测药敏结果符合率分别为96.3%、94.4%、95.4%、94.4%。结论噬菌体裂解法检测痰标本中结核分枝杆菌对利福平（R）、异烟肼（H）、链霉素（S）、乙胺丁醇（E）的耐药性具有较高的敏感性、特异性和准确性,与比例法比较,具有较高的符合率,且简便快速。     

结核分枝杆菌噬菌体试剂盒的研制与初步评价

目的:研制能快速检测标本中结核分枝杆菌的噬菌体试剂盒,并对之在临床上的应用做出初步评价.方法:采用不同方法对噬菌体的生产和保存工艺进行探讨,并且观察该方法中所用试剂的稳定性.建立噬菌体快速检测结核分枝杆菌的方法,分别用噬菌体法与传统培养法检测34份临床标本中的结核分枝杆菌,以培养法作为金标准观察噬菌体法的敏感度、特异度和符合率.结果:①在37℃环境中采用琼脂双层法进行噬菌体扩增生产,48 h后采用孵育-过滤法收集,可以获得较为理想的产量且简单易行.②噬菌体以液体形式4℃保存或以噬菌体宿主菌的无细胞菌苗作为保护剂进行真空冻干后4℃保存,28周后效价下降不足10的一个数量级.③噬菌体法中的重要试剂:辅助细菌和杀病毒剂,4℃保存40周均具有良好的稳定性.④34份痰标本培养4周,其中 2份污染,29份阳性,3份阴性;噬菌体法检测标本中结核分枝杆菌的敏感度、特异度和符合率分别为86.2%(25/29)、66.7%(2/3)、84.4%(27/32).结论:噬菌体法在48 h内可以快速检测标本中的结核分枝杆菌活菌,并且具有以试剂盒形式进行商业化生产的可行性,将有助于临床结核病的快速诊断.     

SEPTIC技术快速检测结核分枝杆菌

目的评价SEPTIC(sensing of phage-triggered ion cascade)技术在结核分枝杆菌快速检测中的应用价值。方法制备纳米阱微芯片,用于检测噬菌体感染细菌时导致细胞内离子释放发生的微范围内的电位变化。调整大肠杆菌、结核分枝杆菌、耻垢分枝杆菌及其相应噬菌体的浓度。将细菌和噬菌体等体积混合,37℃孵育1 min,取5μl混合液滴于探针上,30 s后开始采集数据,每2 min采集一个数据文件,共采集10 min,计算机分析采集结果。结果当结核分枝杆菌与分枝杆菌噬菌体D29混合反应时,在0~8 min内显示了非常明确的1/f功率谱特征,而且功率谱强度明显高于阴性反应的功率谱,并出现了明确的电压超出±4σ范围的波形,持续约0.2 s的时间,可认为发生了一次细菌被噬菌体感染的事件,表明探针明确地捕获了细菌被噬菌体感染的事件。结论SEPTIC技术能在较短时间内检测、鉴定出活菌的存在,有可能为结核分枝杆菌的检测提供一种简便、快捷的方法。     

CRISPR-Cas系统在结核分枝杆菌检测中的应用前景

<正>结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染性疾病。随着新型冠状病毒的大流行,2022年结核病成为全球仅次于新型冠状病毒感染传染病死因^[1],严重危害全球人民的生命与健康。虽然目前有众多的检测手段,但据世界卫生组织(WHO)估计仍有近一半的病例未能确诊。近年来基于成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-Cas,CRISPRCas)系统发展迅速,其研发成果已应用于基因编辑和体外分子诊断,     

噬菌体生物扩增法测定痰标本结核分枝杆菌利福平耐药性

目的建立快速测定痰标本中结核分枝杆菌利福平（RFP）耐药性的噬菌体生物扩增法,探讨其在临床应用的可行性。方法噬菌体生物扩增法测定362份涂阳痰标本结核分枝杆菌对RFP的耐药性,并与罗氏绝对浓度法结果进行比较,对不符合的样本,用基因芯片的方法分析rpoB基因的突变情况。结果362份涂阳痰标本,培养阳性360份,菌种初步鉴定有17份样本为非结核分枝杆菌,噬菌体生物扩增法RFP耐药为123份,敏感的196份,两法结果一致的为88．6％,如以绝对浓度法药敏结果为标准,则噬菌体生物扩增法测定利福平耐药的敏感性为93-3％,特异性为87．9％,阴性预测值为96．4％,阳性预测值为78．9％,准确性为89．7％,涂阳等级（1＋～3＋）与实验的有效性相关。结论噬菌体生物扩增法测定痰标本利福平的耐药性只需2d,可作为快速筛诜方法府用千临床．     

噬菌体裂解法在结核菌检测中的研究进展

噬菌体生物扩增法(PhaB)是一项接近于细菌培养的微生物学实验室技术,它能快速准确地检出结核分枝杆菌以及检测结核菌的药物敏感性,近年来在结核病诊断研究中备受关注。PhaB是一种敏感度和特异性均较高的方法。本文就分枝杆菌噬菌体的特性、在快速检测结核菌及药敏试验中应用研究进展予以综述。     

结核分枝杆菌的分子生物学检测研究进展

结核病是严重威胁人类健康的传染病之一，痰及病变组织检出结核杆菌是结核病最可靠的诊断。但是从目前情况来看，由于检出率低，如果单纯以痰结核菌检查作为唯一的诊断标准会造成大部分结核病人漏诊。在全国第三次肺结核流行病学调查中，痰菌阴性的肺结核病人（包括痰涂片及痰培养未查到结核菌者）占肺结核病人的60％-70％E21，所以迫切需要发展先进的分子检测技术，以提高结核杆菌的检出率。     

结核分枝杆菌恒温荧光检测技术临床应用评价研究

目的 评估恒温荧光（RealAmp）检测技术在结核病临床诊断中的应用价值。方法 2013年5～8月,在上海市肺科医院、山东省胸科医院和广州市胸科医院,门诊医生连续纳入初诊肺结核可疑症状者,每例患者留取1份合格痰标本。实验室人员对痰标本同时进行涂片染色荧光显微镜镜检、液体培养和RealAmp检测,培养阳性菌株进行16S-23S间隔区测序菌群鉴定。以临床诊断结果为金标准,比较涂片镜检、液体培养和RealAmp检测结核分枝杆菌的敏感度和特异性。结果 与临床诊断结果比较,涂片镜检、液体培养和RealAmp检测结核分枝杆菌的敏感度分别为17.16%、39.45%和39.72%,RealAmp检测特异性为91.61%。RealAmp检测敏感度高于涂片镜检（χ²=134.42,P<0.05）,与液体培养试验相当。结论 RealAmp检测操作简单,敏感度较高,能够提高涂阴肺结核患者的检出。