大鼠IgE依赖组胺释放因子基因的克隆表达及其功能研究

目的:获得原核表达的可溶性大鼠IgE依赖组胺释放因子(rHRF),并检测其诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能.方法:克隆Wistar大鼠rHRF基因完整编码区序列并在BL21细胞中进行原核表达,纯化的可溶性重组rHRF刺激卵清蛋白变应原致敏的大鼠肺肥大细胞,利用荧光分光光度法测定组胺释放量.结果:测序证实克隆基因与GenBank中大鼠IgE依赖组胺释放因子(又称翻译控制肿瘤蛋白)mRNA序列的一致性为97%,推测的氨基酸序列一致性为95%.SDS-PAGE显示重组rHRF相对分子质量(Mr)约为24 000;重组rHRF诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺不依赖变应原,且呈剂量依赖关系. 结论:rHRF具有不依赖变应原诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能,可能在Ⅰ型超敏反应过程中发挥重要作用,为进一步研究rHRF的免疫学功能打下基础.     

类胰蛋白酶抑制剂对人大肠肥大细胞组胺释放的影响

目的 :研究类胰蛋白酶抑制剂 (TPI)对人大肠肥大细胞释放组胺的影响。方法 :大肠组织经胶原酶和透明质酸酶消化后 ,将细胞成分用全HBSS重新悬浮。肥大细胞在LP4试管中于37℃条件下与各种刺激剂反应 15min而完成激发过程。激发液中的组胺水平用以玻璃纤维为基础的荧光方法测定。结果 :4种TPI中 ,高浓度的亮抑酶肽素和鱼精蛋白可刺激人大肠肥大细胞释放组胺 ;而TLCK和乳铁蛋白则无明显的刺激作用。 4种TPI均可以剂量依赖的方式抑制抗IgE抗体诱导的大肠肥大细胞释放组胺。最大浓度的亮抑酶肽素(2 0 0mmol/L)、TLCK(10 0mmol/L)、乳铁蛋白 (30mmol/L)和鱼精蛋白 (10 0mg/L) ,可分别抑制 4 8.7%、36 .7%、4 0 .2 %和 34.1%的组胺释放。在 37℃条件下 ,将 4种TPI同大肠肥大细胞预培养 2 0min ,与未进行预培养相比较 ,它们对抗IgE抗体诱导的组胺释放无明显改变。 4种TPI还可抑制CI诱导的组胺释放 ,抑制范围在 2 5 %～ 32 %之间。与抗IgE抗体诱导的组胺释放则不同 ,与大肠肥大细胞预培养 2 0min ,与未进行预培养相比较 ,亮抑酶肽素和TLCK对CI诱导的组胺释放的抑制作用明显增强 ;而鱼精蛋白则无此作用。结论 :我们首次发现TPI可抑制人大肠肥大细胞IgE抗体依赖和非IgE抗体依赖的组胺释放 ,提示TPI可望成为炎症性肠     

组胺对人结肠肥大细胞类胰蛋白酶释放的调节作用

探讨组胺对人结肠肥大细胞类胰蛋白酶释放的调节作用。经酶消化后获取人结肠组织肥大细胞,激发后行多种干预实验。用酶联免疫吸附试验法测定类胰蛋白酶。结果发现组胺可诱导人结肠肥大细胞释放类胰蛋白酶,浓度为100μg/L时组胺释放量最大,为基础值的3．5倍。浓度为10μg/L时对人肥大细胞的刺激强度与10mg/L的抗IgE抗体相似。组胺的作用从加样后10s开始,5min后完成。百日咳毒素和抗霉素A联合2．脱氧-D-葡萄糖可显著抑制组胺诱导人结肠肥大细胞释放类胰蛋白酶。100及1000μg/L的组胺与抗IgE抗体或离子载体钙同时加入细胞中,诱导类胰蛋白酶释放的能力低于组胺单独作用组。结论为组胺可激活人结肠肥大细胞,还以自身放大机制调节肥大细胞的脱颗粒过程。     

肝素对人肥大细胞组胺分泌的调节作用

目的　研究肝素对人肥大细胞组胺释放的影响。方法　经酶消化后的肺和扁桃体组织的细胞成份同肝素、抗人IgE抗体或钙离子导入剂共同培养 ,以特制的纤维玻璃为基础的方法测量组胺。结果　经 15和 4 5min培养 ,肝素对人肺和扁桃体组织肥大细胞组胺释放无明显影响。而将肝素与抗IgE抗体同时加入酶悬浮的肺肥大细胞中 (预培养时间为 0min) ,肝素可抑制 5 0 %的抗IgE抗体诱导的组胺释放 ,且抑制率与肝素浓度呈正相关。肝素对抗IgE抗体引起的扁桃体肥大细胞的组胺释放无抑制作用 ,对钙离子导入剂诱导的肺和扁桃体的肥大细胞组胺释放无明显影响。结论　本实验首次发现肝素可以抑制抗IgE抗体诱导的人肺肥大细胞组胺释放 ,因此在肺部的变态反应性炎症中可能起到一定的预防和治疗作用     

腺苷和抗IgE抗体对哮喘患者BALF中肥大细胞分泌组胺的影响

目的 :研究支气管哮喘 (哮喘 )患者支气管肺泡灌洗液 (BALF)中肥大细胞的功能特性。方法 :2 9例轻度哮喘患者BALF中的细胞经冲洗后 ,加入含抗IgE抗体、腺苷、缓冲液或腺苷 +抗IgE抗体的LP4试管中进行激发试验。检测BALF肥大细胞中的组胺释放量。结果 :腺苷浓度达 10 0 μmol/L时 ,仍无明显刺激组胺释放的作用 ,仅在浓度高达 10 0 0 μmol/L时 ,方可诱导哮喘患者BALF中肥大细胞释放约 17%的组胺。抗IgE抗体的浓度大于 1× 10 -4g/L时对哮喘患者BALF中肥大细胞的释放组胺有明显的促进作用 ;仅 3× 10 -5g/L的抗IgE抗体与腺苷联合应用的实测值 ,明显高于对应的单独作用组的相加值。结论 :哮喘患者BALF中的肥大细胞对腺苷的刺激反应较差 ,但对抗IgE抗体刺激的反应性明显增强。仅低浓度的抗IgE抗体和腺苷具有协同作用。     

不同尘螨过敏原诱导组胺释放能力分析

目的:研究用肥大细胞组胺体外定向释放模型分析重组尘螨过敏原Der f 1和Der f 2的致敏差异性.方法:用重组尘螨致敏原Der f 1、 Der f 2免疫C57/BL6小鼠,收集小鼠腹腔致敏肥大细胞(PMC),在96酶标板孔中分别按不同比例混合尘螨致敏组分诱导PMC定向释放组胺,荧光法检测其释放水平.结果:Der f 1、 Der f 2及两者的混合物都能引起PMC释放组胺,其致敏效果Der f 2明显高于Der f 1,Der f 1、 Der f 2混合致敏组胺释放量未见高于单组分致敏者.牛奶和虾的粗提液与空白对照不能引起PMC组胺的明显释放.结论:尘螨混合组分未能引起比单独Der f 1或Der f 2强的组胺释放,两者间不存在协同效应.组胺释放量随Der f 2比例升高而升高,推测在尘螨过敏中Der f 2起主要作用.尘螨与牛奶、虾之间不存在交叉反应.     

抗原及非特异触发剂诱发大鼠肥大细胞释放组胺的比较

<正> 不同的触发剂可通过不同的方式诱导肥大细胞释放组胺。特异性抗原与联结在细胞膜上的IgE抗体交联,导致细胞激活,快速分泌与颗粒有关的介质。除免疫触发外,肥大细胞释放组胺可由抗IgE、钙离子载体A23187、compound 48/80、ConA和碱性多肽等非特异触发剂介导。这些试剂表现出许     

人肥大细胞的IgE依赖性组胺和类胰蛋白酶分泌

目的　利用人结肠组织的肥大细胞和肥大细胞激活的体外研究系统评价人肥大细胞释放类胰蛋白酶和组胺的能力及其机制。方法　经酶悬浮的人结肠肥大细胞与抗IgE抗体共同培养后记录浓度相关曲线和时间关系曲线。类胰蛋白酶用酶联免疫吸附试验的方法测量 ,而组胺则由一种以玻璃纤维为基础的荧光比色法测量。结果　抗IgE抗体可引起浓度相关性的组胺和类胰蛋白酶释放 ,最大组胺和类胰蛋白酶分泌量分别比基础分泌量超出 2 .7和 2 .5倍以上。抗IgE抗体的作用从加样后 10s开始 ,6min后达高峰并至少持续 15min。百日咳毒素和代谢抑制剂能够分别抑制抗IgE抗体引起的组胺和类胰蛋白酶释放。百日咳毒素还能够减少自发性类胰蛋白酶释放。结论　人结肠肥大细胞在受到抗IgE抗体刺激时具有平行释放类胰蛋白酶和组胺的能力 ,这个过程与肥大细胞膜G蛋白偶联受体的激活有关 ,并消耗能量。肥大细胞自发性释放组胺和类胰蛋白酶的功能可能是通过不同的机制实现的。     

中华眼镜蛇毒金属蛋白酶诱导人肥大细胞释放组胺的作用

目的： 探索中华眼镜蛇毒金属蛋白酶(MT)对人肥大细胞释放组胺的诱导作用及其机制。 方法： 用肝素凝胶和Superdex75亲和力凝胶纯化MT。将手术切除的人肺、大肠和扁桃体组织在37 ℃用Ⅰ型胶原酶和Ⅰ型透明质酸酶消化, 悬浮细胞均匀地加入含MT、刺激剂或缓冲液的试管中,进行激发实验并用荧光显色法测量上清液的组胺水平。 结果： 纯化后的MT在SDS-PAGE上呈1条带。MT能诱导人肺、大肠和扁桃体肥大细胞发生剂量依赖性组胺释放。浓度低至0.03 mg/L时, MT就能诱导大肠肥大细胞显著性的组胺释放, 但对于肺和扁桃体的肥大细胞，MT的最低有效浓度分别为0.3 mg/L和30 mg/L。 MT诱导大肠和肺肥大细胞组胺释放，12 min时达高峰，而扁桃体肥大细胞的组胺释放则在8 min时达高峰。人大肠、肺和扁桃体肥大细胞经代谢抑制剂和百日咳毒素预处理后，MT诱导其释放组胺的作用明显减弱。缺乏外源性钙、镁离子时，MT诱导肥大细胞释放组胺的能力也明显减弱。 结论： MT可能通过G蛋白偶联受体途径激活人肥大细胞，从而参与毒蛇咬伤人体后所发生的病理生理过程。     

血管活性肠多肽及降钙素基因相关肽对大鼠腹腔肥大细胞组胺释放的作用

目的:研究血管活性肠多肽(Vasoactive intestinal peptide,VIP)及降钙素基因相关肽(Calcitonin gene relatedpeptide,CGRP)对大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒的诱导作用;了解神经多肽与肥大细胞的相互关系。方法:分离、纯化SD大鼠腹腔肥大细胞;应用不同浓度的VIP和CGRP作用于大鼠腹腔肥大细胞后,同位素放射液态闪烁法检测肥大细胞的组胺释放、45Ca摄入的变化;同时观察大鼠腹腔肥大细胞经5×10-6mol/L VIP受体抑制剂L-8-K处理后,对VIP诱导脱颗粒作用的影响。结果:5×10-6mol/L的VIP作用后大鼠腹腔肥大细胞组胺释放及45Ca摄入明显增加,并且这种变化与VIP呈剂量效应关系;CGRP对大鼠腹腔肥大细胞组胺释放无诱导作用;L-8-K作用后,肥大细胞对VIP的诱导活化作用无改变。结论:VIP可引起肥大细胞钙内流增加,进一步诱导肥大细胞脱颗粒、释放组胺等生物活性物质,产生生物学效应;这种作用是受体非依赖性的,且与VIP的分子构型有关。