谷红注射液中2种成分对脑缺血大鼠氨基酸类神经递质释放的协同作用

目的探讨谷红注射液中乙酰谷酰胺和羟基红花黄色素A对脑缺血大鼠氨基酸类神经递质释放的协同作用。方法 Longa法建立改良型大脑中动脉局灶性栓塞模型。24只大鼠随机分为模型组、乙酰谷酰胺组(300 mg/kg)、羟基红花黄色素A组(4 mg/kg)、谷红注射液组(10 mL/kg),通过微透析技术在海马区采样,联合高效液相-电化学(HPLC-ECD)法测定天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(GABA)含有量。结果脑缺血期间,4种氨基酸含有量明显升高;给药后与模型组比较,给药组Asp、Glu含有量和Glu/GABA比值显著降低(P0.05,P0.01),其中谷红注射液组Glu/GABA比值的降低程度更显著(P0.01)。结论谷红注射液中乙酰谷酰胺和羟基红花黄色素A对维持脑缺血大鼠海马区兴奋-抑制性氨基酸神经递质的平衡具有一定协同作用。     

HPLC测定谷红注射液中羟基红花黄色素A的含量

目的:建立HPLC测定谷红注射液中羟基红花黄色素A含量的分析方法。方法:采用Agilent Extend C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以乙腈-含0.5%三乙胺的1%冰醋酸溶液(9∶91)为流动相,流速:1.0mL·min-1,检测波长:403nm,柱温:35℃。结果:羟基红花黄色素A浓度在0.007936～0.1984mg·mL-1线性关系良好(r=0.9999,n=6),平均加样回收率为99.7%(RSD=1.3%,n=9)。结论:本方法操作简便、准确,重复性好,可有效控制该制剂的质量。     

HPLC测定谷红注射液中羟基红花黄色素A的含量

目的：建立HPLC测定谷红注射液中羟基红花黄色素A含量的分析方法。方法：采用Agilent Extend C18（4．6mm×250mm,5μm）色谱柱,以乙腈-含0．5％三乙胺的1％冰醋酸溶液（9：91）为流动相,流速：1．0mL·min^-1,检测波长：403nm,柱温：35℃。结果：羟基红花黄色素A浓度在0．007936～0．1984mg·mL^-1线性关系良好（r=0．9999,n=6）,平均加样回收率为99．7％（RSD=1．3％,n=9）。结论：本方法操作简便、准确,重复性好,可有效控制该制剂的质量。     

HPLC法同时测定不同品种红花中4种黄酮类

目的建立HPLC法同时测定不同红花Carthamus tinctorius L.(Safflower)中羟基红花黄色素A、芦丁、木犀草素、槲皮素的含有量。方法红花60%甲醇提取物的分析采用Agilent ZORBAX SB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相乙腈-0.5%乙酸,梯度洗脱;体积流量0.5 mL/min;柱温25℃;检测波长300 nm。结果羟基红花黄色素A、芦丁、木犀草素、槲皮素分别在17.36～282(R~2=0.999 7)、1.68～181.84(R~2=0.999 5)、0.52～8.71(R~2=0.999 5)、5.17～94.68(R~2=0.999 4)μg/mL的范围内线性关系良好,平均加样回收率96.83%～98.39%,RSD 1.13%～2.36%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于红花的质量控制。     

谷红注射液中羟基红花黄色素A在大鼠体内的药动学研究

目的研究谷红注射液中羟基红花黄色素A在大鼠体内的药代动力学特征,比较单体状态与注射液中羟基红花黄色素A药代动力学差异。方法 HPLC法测定经尾静脉注射给药后大鼠血浆中羟基红花黄色素A的浓度,运用PKSolver 2.0软件拟合药时曲线,对药代动力学参数进行分析。结果羟基红花黄色素A单体与谷红注射液中羟基红花黄色素A的主要药代动力学参数α、β、t1/2α、t1/2β、C0、V、CL、AUC0-150、AUC0-inf分别为(0.306 9±0.136 4)和(0.091 8±0.079 3)/min,(0.016 4±0.003 1)和(0.010 5±0.003 0)/min,(2.738 6±1.163 4)和(22.020 0±19.970 3)min,(43.819 9±8.607 7)和(74.941 1±32.794 3)min,(21.309 8±2.957 3)和(26.579 9±3.763 5)μg/m L,(0.098 1±0.013 5)和(0.078 6±0.010 7)L/kg,(0.003 4±0.000 5)和(0.001 2±0.000 2)(L/kg)/min,(567.774 4±66.149 7)和(1 391.658 0±159.754 7)(min·μg)/m L,(625.723 0±96.292 6)和(1 734.929 2±222.467)(min·μg)/m L。结论与羟基红花黄色素A单体比较,谷红注射液中羟基红花黄色素A在大鼠体内的AUC明显增大。     

HPLC法同时测定红花注射液中3种活性成分

目的建立同时测定红花注射液中紫丁香苷、羟基红花黄色素A与(8Z)-癸烯-4,6-二炔-1-O-β-D-葡萄糖苷3种活性成分的反相高效液相色谱法。方法红花注射液0.45μm微孔滤膜滤液分析采用Phenomenex Luna C18色谱柱(4.60 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,柱温30℃,检测波长265 nm。结果紫丁香苷、羟基红花黄色素A与(8Z)-癸烯-4,6-二炔-1-O-β-D-葡萄糖苷分别在0.101~2.02μg(r=0.999 6),0.216~4.32μg(r=0.999 7),0.510~10.2μg(r=1)范围内线性关系良好;平均加样回收率分别为97.4%、102.3%、100.3%,RSD分别为2.1%、2.1%、1.5%。结论本法准确、简单、重复性好,能更好地控制红花注射液的质量。     

UPLC-MS/MS同时测定双黄连片中5种有效成分的含量

目的:建立同时测定双黄连片中5种有效成分含量的UPLC-MS/MS分析方法。方法:采用BEHC₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱,流速0.4 mL·min^-1,采用电喷雾电离源(ESI),多反应离子监测(MRM) 扫描方式。结果:10种被测物呈良好的线性关系(r>0.999);精密度、重复性和稳定性良好;加样回收率在96.00%~104.67%,RSD均<3%。结论:所建立的方法准确、快捷,重复性好,可用于双黄连片中绿原酸、连翘苷、连翘酯苷A、木樨草苷、芦丁5种有效成分的含量的同时测定。     

UPLC-MS/MS同时测定双黄连口服液中17种有效成分

目的建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定双黄连口服液中17种成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘苷、芦丁、黄芩素、黄芩苷、野黄芩苷、汉黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖苷、汉黄芩素、千层纸素A)的分析方法。方法采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-甲醇(4∶1)-0.4%甲酸水为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.4 m L/min,柱温40℃,采用电喷雾电离源(ESI),多反应离子监测(MRM)扫描方式进行检测,分析时间为7 min。结果所测17种有效成分在测定质量浓度范围内线性关系良好,r2均大于0.990 1,实验精密度、准确度和稳定性良好,平均加样回收率为95.81%~102.42%,所测5批样品中17种成分定量范围依次为新绿原酸782.68~1 034.27μg/m L、绿原酸786.35~1 103.77μg/m L、隐绿原酸898.00~1 238.94μg/m L、咖啡酸82.85~115.17μg/m L、3,5-二咖啡酰奎宁酸226.02~461.63μg/m L、3,4-二咖啡酰奎宁酸191.59~404.21μg/m L、异连翘酯苷243.62~298.51μg/m L、连翘酯苷A 978.43~1 487.37μg/m L、连翘苷351.97~435.82μg/m L、芦丁41.19~75.65μg/m L、黄芩素40.28~73.73μg/m L、黄芩苷10 080.54~10 820.35μg/m L、野黄芩苷40.88~50.51μg/m L、汉黄芩苷187.73~204.85μg/m L、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖苷144.92~335.08μg/m L、汉黄芩素9.30~25.58μg/m L、千层纸素A 7.51~16.58μg/m L。结论方法简单、快速、准确度及灵敏度高、专属性好,可用于双黄连口服液中3大类17个主要成分的快速定量测定。     

HPLC波长切换法同时测定复方当归注射液中4种有效成分的含量

目的:建立HPLC波长切换技术同时测定复方当归注射液中羟基红花黄色素A、绿原酸、阿魏酸和咖啡酸含量的方法.方法:以Symmetry Shield RP18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)为色谱柱,甲醇-0.1％磷酸水溶液为流动相,流速为0.8 mL/min,检测波长分别为327 nm(0～16.0 min,绿...     

UPLC-MS/MS法同时测定木蝴蝶中10个有效成分

目的建立UPLC-MS/MS方法同时测定木蝴蝶中木蝴蝶苷A、木蝴蝶苷B、黄芩苷、黄芩素、白杨素、高车前素、野黄芩素、金丝桃苷、芹菜素、槲皮素10种主要成分。方法采用负离子多反应监测(MRM)模式,ESI离子源,Kinetex C18色谱柱(100 mm×3.0 mm,2.6μm)进行分离,流动相为乙腈-甲醇-0.5%甲酸水,梯度洗脱,分析时间为7 min。结果所测10种主要成分在测定浓度范围内线性关系良好,相关系数均大于0.996 6;精密度、重复性和稳定性良好;平均加样回收率为94.0%～104.5%,RSD≤3.21%。结论首次建立可同时测定木蝴蝶中10种主要成分的UPLC-MS/MS方法,该法操作简便,灵敏度高,专属性好,分析速度快,可用于中药材木蝴蝶的质量控制。     

HPLC同时测定肝尔舒微丸中3种有效成分的含量

目的:建立HPLC同时测定肝尔舒微丸中的槲皮素、山奈素和异鼠李素含量的方法。方法:色谱柱为HederaODS-2柱(4.6 mm×200 mm,5μm),流动相0.4%磷酸溶液(A)-甲醇(B)梯度洗脱,检测波长360 nm,流速1 mL.min-1,柱温30℃。结果槲皮素、山奈素和异鼠李素分别在0.042 8～0.428,0.003 49～0.034 9,0.041 8～0.418μg呈良好的线性关系,r分别为0.999 8,0.999 1,0.999 2;平均加样回收率槲皮素99.88%,RSD 0.77%(n=6);山奈素为99.44%,RSD 1.2%;异鼠李素为97.50%,RSD 1.5%(n=6)。结论:该法结果准确,重复性好,可用于肝尔舒微丸的质量控制。     

UPLC-MS-MS同时测定双黄连粉针中7种活性成分

目的： 建立快速灵敏的超高效液相色谱-串联质谱检测注射用双黄连粉针剂中7种活性成分（绿原酸、咖啡酸、芦丁、木犀草苷、连翘酯苷A、黄芩苷、连翘苷）含量的方法。 方法： 采用Agilent Zorbax C₁₈色谱柱（2.1 mm×50 mm,1.7 μm）,流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱,体积流量 0.40 mL·min^-1,柱温 30 ℃。质谱条件为电喷雾离子（ESI）源,负离子模式检测,多重反应监测（MRM）扫描,定量离子对为m/z 353.0~191.1（绿原酸）,m/z 179.1~135.1（咖啡酸）,m/z 609.2~300.2（芦丁）,m/z 447.1~285.1（木犀草苷）,m/z 623.1~161.1（连翘酯苷A）,m/z 444.8~268.8（黄芩苷）,m/z 578.8~370.8（连翘苷）。 结果： 7个成分在考察的线性范围内,进样浓度与峰面积之间线性关系良好（r>0.998 3）,精密度RSD<4.2%;重复性RSD<6.3%,平均加样回收率在92.2%~102.7%。 结论： 该方法准确、快速、重复性好,可为双黄连粉针剂的质量控制提供参考方法。     

谷红注射液对脑缺血再灌注损伤的临床疗效

目的:观察谷红注射液对脑缺血再灌注损伤的临床疗效,及对肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响。方法:随机选取2011年2月至2016年6月,于我院神经科住院部就诊的脑缺血再灌注损伤患者60例,以就诊先后顺序编号,单盲随机数字表法分为观察组和对照组,每组30例。观察组患者中女19例,男11例;年龄41~74岁,平均年龄(56.04±9.41)岁。对照组患者中女17例,男13例;年龄42~73岁,平均年龄(53.82±8.26)岁。2组性别、年龄差异无统计学意义(P0.05)。运动功能评定:治疗前后采用Fugl-Mayer评估量表(FMA)评估患者的偏瘫肢体运动功能;治疗前后采用改良Barthel指数(m BI)评估患者日常生活活动能力(ADL)包括独立生活的能力和技巧熟练程度。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果:2组治疗后FMA评分均高于治疗前(P0.05);与对照组相比,观察组治疗后FMA评分均较高(P0.05)。治疗后,观察组m BI量表评分明显提高,与治疗前和对照组治疗后比较,差异均有统计学意义(P0.01)治疗后,2组TNF-α表达水平明显下降,观察组治疗后与观察组治疗前、对照组治疗后比较,差异均有统计学意义(P0.01)。将脑缺血再灌注患者FMA、m BI和TNF-α进行相关性分析,结果显示,与FMA相比,r=-0.971,P=0.0000.05;与m BI相比,r=-0.969,P=0.0000.05,两者均呈负相关。结论:谷红注射液能有效改善脑缺血再灌注损伤患者的肢体运动功能障碍,同时下调TNF-α表达水平,其疗效机制可能与下调TNF-α表达水平有关。     

HPLC法同时测定骨折挫伤胶囊中7种成分的含量

目的建立HPLC法同时测定骨折挫伤胶囊中羟基红花黄色素A、血竭素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量。方法采用ZORBAX Eclipse Plus-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速:1.0 mL·min^-1,柱温:35℃,检测波长:403、440、254 nm。结果羟基红花黄色素A、血竭素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚质量浓度分别在2.111~21.11μg·mL^-1(r=0.999 1)、1.483~14.83μg·mL^-1(r=0.999 3)、1.180~11.80μg·mL^-1(r=0.999 7)、0.8182~8.182μg·mL^-1(r=0.999 7)、1.011~10.11μg·mL^-1(r=0.999 7)、1.075~10.75μg·mL^-1(r=0.999 6)和1.045~10.45μg·mL^-1(r=0.999 7)范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为100.30%(RSD=2.24%)、97.42%(RSD=1.63%)、96.21%(RSD=0.92%)、101.17%(RSD=2.74%)、95.84%(RSD=1.31%)、97.71%(RSD=2.49%)和95.50%(RSD=1.15%)。结论该方法准确度高、重复性好,可为骨折挫伤胶囊的质量控制提供参考。     

谷红注射液在脑缺血再灌注大鼠体内药动学与抗氧化作用关联性研究

目的研究谷红注射液中羟基红花黄色素A(HSYA)在脑缺血再灌注大鼠体内的药动学及其与抗氧化作用的关联性。方法采用平衡透析法测定HSYA及谷红注射液中HSYA的血浆蛋白结合率;SD大鼠制备大脑右侧中动脉局灶性栓塞(MCAO)模型,分为HSYA组(4 mg/kg)及谷红注射液组(10 m L/kg),尾iv给药,采用高效液相(HPLC)法测定不同时间点HSYA的血药浓度,绘制药时曲线;同时采用试剂盒法测定不同时间点血浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,绘制效时曲线;进一步进行药动-药效联动分析。结果 HSYA和谷红注射液中HSYA在质量浓度为2.5、10.0、25.0 mg/L时血浆蛋白结合率分别是77.96%、73.54%、76.13%和68.21%、58.22%、63.17%;HSYA的血浆药物质量浓度在0.01~50 mg/L线性关系良好,低、中、高血浆药物浓度平均回收率分别为(99.94±2.82)%、(104.16±1.41)%、(99.74±1.06)%;谷红注射液组与HSYA组比较,曲线下面积(AUC)显著增加,平均驻留时间(MRT0-t)显著减少,表观容积(Vz)显著增加;血浆中GSH-Px活性升高,与血药浓度呈正相关,LDH活性降低,与血药浓度呈负相关。结论 HSYA均具有中等强度的血浆蛋白结合率,且谷红注射液中HSYA血浆蛋白结合率有所降低;谷红注射液在MCAO大鼠中可以增加HSYA的生物利用度,提高药物的效果,增加药物在体内的分布;谷红注射液组与HSYA组比较具有更好的抗氧化作用,对大鼠脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用。     

基于转录组测序的谷红注射液抗脑缺血分析

目的:在确定谷红注射液保护脑缺血的基础上,采用RNA-Seq转录组测序与生物信息分析的方法探究谷红注射液抗脑缺血的分子机制。方法:采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,设置假手术组,模型组,谷红注射液低、中剂量组(0.625,2.5 m L·kg~(-1)·d~(-1)),阳性药组(金纳多注射液,8 m L·kg~(-1)·d~(-1)),通过Ludmila Belayev 12分评分法进行药效学评价,并采用RNA-Seq技术检测药物干预前后的差异基因,使用DAVID,String及The Human Phenotype Ontology等数据库,进行富集分析、聚类分析、以及与脑缺血疾病靶标的关联分析,通过Cytoscape3.4.0构建相关的调控网络。结果:与假手术组相比,模型组大鼠可见明显神经功能缺损(P0.01);与模型组比较,谷红注射液高剂量组减轻了大鼠神经功能损伤(P0.05)。转录组数据分析表明谷红注射液主要是通过调控细胞凋亡,炎症反应,氧化应激,Toll样受体信号通路及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路等生物学过程干预脑缺血。此外,谷红液射液干预脑缺血的差异基因关联到20个脑缺血疾病相关的靶标,且关联到64个MAPK信号通路相关的基因,其中23个基因参与凋亡与炎症等过程。结论:谷红注射液通过多条途径发挥抗脑缺血作用,其中MAPK信号通路是其发挥抗凋亡及炎症作用的重要途径。     

双波长HPLC同时测定金刚藤软胶囊中5个活性成分的含量

目的:建立双波长HPLC同时测定金刚藤软胶囊中绿原酸、白藜芦醇、芦丁、槲皮素和山柰酚含量的方法。方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,柱温25℃,检测波长306 nm(绿原酸、白藜芦醇)和365 nm(芦丁、槲皮素、山柰酚)。结果:绿原酸、白藜芦醇、芦丁、槲皮素、山柰酚分别在0.058 5~2.34μg(r=0.999 8),0.025 3~1.01μg(r=0.999 9),0.042 2~0.844μg(r=0.999 6),0.018 1~0.722μg(r=0.999 9),0.0165~0.660μg(r=0.999 9)呈现良好的线性关系,平均回收率分别为98.0%,100.6%,96.0%,102.7%,98.5%,RSD分别为1.2%,2.2%,1.8%,2.9%,1.3%。结论:该方法操作简便、重复性好,可作为金刚藤软胶囊中5个活性成分的含量测定方法。     

消癌平注射液HPLC指纹图谱及7种甾体有效成分的含量测定

目的:建立消癌平注射液HPLC指纹图谱,并准确测定消癌平注射液中tenacissoside H(TSH)等7种甾体有效成分的含量。方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱,流动相乙腈-水,梯度洗脱,柱温30℃,流速0.8 m L·min-1,平衡时间10min,进样20μL,蒸发光散射检测器漂移管温度60℃,载气压力0.4 MPa,检测17β-tenacigenin B(17β-TB),tenacigenin B(TB),tenacigenin A(TA),tenacigenoside A(TSA),marsdenoside I(MSI)和tenacissoside F(TSF)的含量;并运用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件建立消癌平注射液的对照指纹图谱,计算其相似度。结果:11批消癌平注射液的HPLC指纹图谱有13个共有峰,相似度均在0.94以上。TSH等7种甾体在标准曲线范围内均呈现良好的线性(r0.999),精密度、重复性和准确度均符合要求。结论:所建立的HPLC-ELSD方法操作简便、结果可靠,具有良好的精密度、稳定性和重复性,结合指纹图谱研究为消癌平注射液中多成分含量测定和质量控制提供了依据。     

HPLC双波长法同时测定净固片中5种活性成分的含量

目的:建立HPLC双波长法同时测定净固片中芦丁、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、槲皮素的方法。方法:依利特Kromasil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相0.2%冰醋酸(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~10 min,12%~15%B;10~15 min,15%~17%B;15~25 min,17%B;25~35 min,17%~20%B;35~45 min,20%~22%B;45~60 min,22%~40%B),柱温30℃,进样量10μL,流速1.0 mL·min-1,芦丁和槲皮素检测波长为254 nm,柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷检测波长为283 nm。结果:芦丁在0.012 5~0.500 4 g·L-1(r=1.000 0),柚皮苷在0.010 0~0.400 8 g·L-1(r=0.999 9),橙皮苷在0.003 3~0.032 7 g·L-1(r=0.999 2),新橙皮苷在0.011 3~0.225 6 g·L-1(r=0.999 9),槲皮素在0.004 1~0.081 3 g·L-1(r=0.999 8)与峰面积具有良好的线性关系,平均回收率均在98%~102%。结论:该方法准确可靠,可行性及重复性良好,可作为净固片的质量控制方法。     

多波长HPLC同时测定痛安注射液中4种有效成分

目的:建立同时测定痛安注射液中木兰花碱、原阿片碱、黄连碱、白屈菜碱含量的HPLC方法。方法:采用Gemini C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈(A)-0.02 mol·L-1磷酸二氢钾(B)梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,检测波长230 nm(木兰花碱),290 nm(原阿片碱、白屈菜碱),360 nm(黄连碱),柱温30℃。结果:木兰花碱、原阿片碱、黄连碱、白屈菜碱分别在10.856~108.560(r=0.999 8),24.712~247.120(r=0.999 6),3.464~34.640(r=0.999 6),39.296~392.960 mg·L-1(r=0.999 9)线性关系良好,回收率在97.5%~101.8%。结论:建立的方法准确可靠,可以用于测定痛安注射液中木兰花碱、原阿片碱、黄连碱、白屈菜碱的含量。