肾上腺髓质素对血管紧张素Ⅱ促血管外膜成纤维细胞胶原生成作用的影响

目的探讨肾上腺髓质素（ADM）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管外膜成纤维细胞胶原生成的影响及机制。方法体外培养大鼠主动脉外膜成纤维细胞,通过放射免疫法测定培养上清中ADM含量,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）及Western印迹法检测转化生长因子β1（TGFβ1）和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）mRNA及蛋白的表达。结果AngII呈剂量依赖性地刺激血管外膜成纤维细胞分泌ADM,在AngⅡ（10^-6mol／L）刺激前30min加入氯沙坦或（和）PD123319,氯沙坦（10^-5mol／L）可明显降低AngⅡ刺激的ADM分泌,其抑制率为45％（P〈0．01）,而PD123319（10mmol／L）作用后抑制率仅为3％（P〉0．05）,氯沙坦＋PD123319组与单独氯沙坦组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;AngⅡ显著增加培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,ADM呈剂量依赖地抑制AngⅡ上述作用,其中ADM（10“mol／L）组中I、Ⅲ型胶原合成分别抑制了30％和31％（P〈0．01）,ADM（10^-7mol／L）组则分别抑制了43％和42％（P〈0．01）。ADM受体拈抗剂ADM22-52可增强AngII上述作用,Ⅰ、Ⅲ型胶原合成分别增加了38％和43％（P〈0．01）;ADM呈剂量依赖性抑制AngⅡ刺激的TGFβ1mRNA及蛋白表达,其中ADM（10^-8mol／L）组中TGFβ1mRNA及蛋白表达分别抑制了55％和45％（P〈0．01）,ADM（10^-7mol／L）组则分别抑制了70％和59％（P〈0．01）;AngⅡ明显下调细胞内MMP-2mRNA及蛋白表达,ADM呈剂量依赖性抑制上述作用,其中10^-8mol／LADM组细胞内MMP-2mRNA及蛋白表达分别增加了1．0和0．9倍。结论AngⅡ可刺激血管外膜成纤维细胞释放ADM,而自分泌旁分泌的ADM可能通过下调细胞内TGFN表达和上调MMP-2表达,抑制AngⅡ刺激的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白生成,从而发挥有效的抗血管重构作用。     

肾上腺髓质素对血管外膜成纤维细胞迁移及胶原生成的影响

目的:探讨肾上腺髓质素(ADM)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管外膜成纤维细胞(AF)迁移及胶原生成的影响及机制。方法:体外培养大鼠胸主动脉AF,运用Trans well技术测定不同浓度ADM对AF迁移的影响,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,用RT-PCR及Western blotting分析AngⅡ(10-6mol/L)及不同浓度ADM干预后大鼠胸主动脉AF内骨桥蛋白(OPN)、转化生长因子β1(TGFβ1)mRNA及蛋白的表达。结果:在AngⅡ(10-6mol/L)趋化作用下,AF迁移数目较对照组显著增多[(30.26±1.08)∶(4.35±1.26),P<0.01]。ADM可抑制AngⅡ刺激的细胞迁移,迁移细胞数目在一定范围内随着ADM浓度增加而减少;AngⅡ(10-6mol/L)诱导OPN呈高表达,ADM可下调这种表达,呈一定剂量依赖性;AngⅡ显著增加培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,ADM呈剂量依赖的抑制AngⅡ上述作用,其中10-8mol/LADM组中Ⅰ、Ⅲ型胶原合成分别抑制了30%和31%(P<0.01),10-7mol/LADM组则分别抑制了43%和4...     

促红细胞生成素抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心脏成纤维细胞中转化生长因子β1和胶原的表达

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心脏成纤维细胞(CF)中转化生长因子(TGF)-β1蛋白表达和胶原生成的影响,以及磷脂酰肌醇-3-激酶(PD-K)/Akt信号途径和一氧化氮合酶(NOS)在其中的作用.方法 应用胰酶和胶原酶双酶法分离培养新生大鼠CF细胞,应用EPO、Ang Ⅱ、PI3-K抑制剂LY294002、NOS抑制剂L-NAME等不同因素干预.ELISA法检测CF中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的浓度.化学酶法检测CF培养液中的NO浓度以及NOS总的活性及其亚型的活性.Western blot检测Akt、p-Akt、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、iNOS和TGF-β1蛋白的表达.结果 EPO剂量依赖性的抑制Ang Ⅱ诱导的CF培养液中Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达以及提高NO的浓度.10 U/ml的EPO对Ⅰ型和Ⅲ型胶原浓度的抑制分别达到了28%和46%,同时NO浓度则提高了154%.EPO也显著抑制了Ang Ⅱ促CF中TGF-β1蛋白的表达,同时Akt的磷酸化水平显著提高,并促进eNOS蛋白的表达.应用LY294002使eNOS蛋白表达水平明显下降,培养液中的NO浓度也随之下降.L-NAME不能降低eNOS蛋白表达,但抑制了NO的生成.EPO抑制Ang Ⅱ诱导的CF中TGF-β1蛋白的表达以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原合成作用均能被二者阻断.结论 EPO可抑制Ang Ⅱ诱导的新生大鼠CF中TGF-β1的表达以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达,可能是通过激活PI3-K/Akt信号途径促使CF中eNOS表达,从而促进NO的表达来实现.     

替米沙坦联合氨氯地平对乳鼠转化生长因子-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的探讨替米沙坦联合氨氯地平对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖及细胞中转化生长因子(TGF)-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响。方法对Wistar乳鼠心肌成纤维细胞行体外原代及传代培养,将培养好的细胞分为5组:对照组(加入15%小牛血清DEME培养液)、AngⅡ组(15%小牛血清DEME培养液+1×10~(-6)mol/L AngⅡ),替米沙坦组(TE组,在AngⅡ组基础上加入10μmol/L替米沙坦),氨氯地平组(AM组,AngⅡ组基础上加入1μmol/L氨氯地平)及替米沙坦+氨氯地平组(TE+AM组),在AngⅡ组基础上加入10μmol/L替米沙坦+1μmol/L氨氯地平),每组3份。观察各组细胞不同时期增殖情况及TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、p27蛋白表达情况。结果与对照组相比,AngⅡ组心肌成纤维细胞在S期时增殖率较高,而在G_0/G_1期、G_2/M期时增殖率下降(P0.05),TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、p27蛋白表达水平显著升高(P0.05)。与AngⅡ组相比,TE组、AM组及TE+AM组心肌成纤维细胞在S期时增殖率显著下降,而在G_0/G_1期、G_2/M期时增殖率升高(P0.05),TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、p27蛋白表达水平下降(P0.05),其中TE+AM组心肌成纤维细胞在G_0/G_1期、G_2/M期增殖较TE组、AM组显著,而TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、p27蛋白表达水平低于TE组、AM组。结论替米沙坦联合氨氯地平能有效抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,其可能机制与抑制TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及p27蛋白过度表达有关。     

重组人松弛素体外调节血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌纤维化

目的:观察在重组人松弛素(rhRLX)及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下对心脏成纤维细胞功能(CFs)的影响。方法:原代培养Sprague-Dawley大鼠心脏成纤维细胞,经AngⅡ(10-6mmol/L)单独作用及AngⅡ加rhRLX(100μg/L)共同作用后,用MTT比色法测定CFs的增殖;用ELISA法检测Ⅰ型前胶原羧基末端肽(PⅠCP)和Ⅲ型前胶原氨基末端肽(PⅢNP)的水平。结果:rhRLX可显著抑制AngⅡ促进CFs增殖,并拮抗AngⅡ促进CFs分泌PⅠCP的作用。结论:rhRLX能够改善AngⅡ诱导的心肌纤维化。     

银杏叶提取物对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞纤维化的干预作用

目的研究银杏叶提取物对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞纤维化的干预作用。方法体外培养心肌成纤维细胞,加入10-7mol AngⅡ模拟大鼠心肌纤维化体外模型。ELISA检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β(TGF-β)含量。结果银杏叶提取物可明显降低AngⅡ引起的心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原分泌增加,并能降低CTGF、TGF-β表达。结论银杏叶提取物可改善AngⅡ引起的心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原分泌增加,其机制可能与CTGF、TGF-β有关。     

敲低Tribbles同源蛋白3抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖

目的研究敲低Tribbles同源蛋白(TRIB)3对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖的影响。方法用AngⅡ处理心肌成纤维细胞,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹法检测细胞中TRIB3表达情况。心肌成纤维细胞转染TRIB3 siRNA慢病毒载体,经AngⅡ处理后,qRT-PCR和Western印迹检测干扰效率。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,羟脯氨酸法检测胶原合成,Western印迹法检测细胞中Ⅰ型胶原(COLL)Ⅰ、COLLⅡ和基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达,硝酸还原法检测培养液中一氧化氮(NO)含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养液中诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)活性。结果 AngⅡ处理后的心肌成纤维细胞中的TRIB3表达水平升高(P0.01)。TRIB3 siRNA慢病毒载体可明显下调AngⅡ条件下心肌成纤维细胞中TRIB3的表达水平(P0.05)。AngⅡ处理后的心肌成纤维细胞增殖能力升高(P0.05),细胞胶原合成增多(P0.05),细胞中COLLⅠ、COLLⅡ蛋白水平升高(P0.05),MMP-2水平降低(P0.05),培养液中NO含量降低(P0.05),iNOS活性降低(P0.05)。下调TRIB3能够降低AngⅡ条件下心肌成纤维细胞增殖能力(P0.05),减少细胞胶原合成(P0.05),降低细胞中COLLⅠ、COLLⅡ蛋白表达(P0.05),促进细胞中MMP-2蛋白表达(P0.05),促进细胞分泌NO(P0.05),提高细胞iNOS活性(P0.05)。结论敲低TRIB3能够抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,减少胶原合成,促进细胞分泌NO。     

血管紧张素Ⅱ通过抑制人心房成纤维细胞BKCa通道诱导心房纤维化

目的 探讨在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心房纤维化的过程中,大电导钙激活钾通道(BKCa通道)的作用机制。方法 通过组织块贴壁法获取原代人心房成纤维细胞,使用免疫荧光染色进行鉴定。用浓度为500 nmol/L的AngⅡ处理人心房成纤维细胞24 h,实时荧光定量PCR与蛋白质印迹法用于检测处理前后纤维化标志基因α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)和胶原蛋白Ⅲ(collagenⅢ),以及BKCa通道的α与β亚基的mRNA和蛋白表达水平,全细胞膜片钳技术检测AngⅡ处理前后的BKCa通道的电流变化。结果 (1)人心房成纤维细胞经AngⅡ处理后,α-SMA、collagenⅠ和collagenⅢ的mRNA和蛋白表达水平升高;(2)经过AngⅡ处理后,BKCa通道α及β亚基mRNA和蛋白表达水平降低;(3)人心房成纤维细胞存在功能正常的BKCa通道,具有电压依赖性;(4)人心房成纤维细胞BKCa通道的宏观电流幅度在经AngⅡ处理后降低;(5)在人心房成纤维细胞上过表达BKCa通道α亚基后,纤维化标志物α-SMA、collagenⅠ和collagenⅢ的表达受到了明显...     

血管紧张素Ⅱ在缺氧诱导的人肺成纤维细胞表型转化及胶原合成中的作用

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)在缺氧诱导的人肺成纤维细胞(human lung fibroblast,HLF)表型转化及胶原合成中的作用。方法:在缺氧条件下培养HLF-1细胞株,将细胞分为AngⅡ组、AngⅡ+替米沙坦(TST)组和对照组。采用免疫荧光法检测HLF-1细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平;采用Western blot法检测HLF-1细胞Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,Col-Ⅰ)蛋白的表达水平。结果:AngⅡ组HLF-1细胞α-SMA和Col-Ⅰ蛋白的表达水平较对照组明显上调,AngⅡ+TST组α-SMA和Col-Ⅰ蛋白的表达水平较AngⅡ组明显下降。结论:AngⅡ/血管紧张素Ⅱ1型受体信号通路可诱导缺氧性HLF表型转化以及胶原合成。     

槲皮素对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞的影响

目的研究槲皮素(Que)对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFB)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法采用酶消化法和差速贴壁法获得纯化的CFB,应用MTT法测定CFB增殖,羟脯氨酸法测定胶原蛋白含量,化学比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活力含量,实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测CFB的Ⅰ型胶原(ColⅠ)、转化生长因子(TGF)-β1基因的mRNA表达。结果槲皮素在10⁴0μmol/L浓度范围内可明显抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原蛋白合成增加,同时可升高SOD含量、降低MDA活力,可以降低ColⅠ、TGF-β1蛋白的mRNA表达。结论槲皮素可抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原蛋白合成的作用,从而延缓心肌纤维化的发展。     

多聚二磷酸腺苷核糖合成酶抑制剂对血管紧张素Ⅱ诱导心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶表达的影响

目的:观察多聚二磷酸腺苷核糖合成酶(PARP)抑制剂对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激的乳鼠心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)基因转录的影响.方法:新生SD大鼠心脏成纤维细胞原代培养,传代.用PARP抑制剂--3-氨基苯甲酰胺(3-AB)预处理细胞,观察3-AB对AngⅡ诱导心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9及TIMP-1基因表达的影响.结果:AngⅡ刺激心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9及TIMP-1基因表达明显增加,成纤维细胞内PARP活性及PARP1的表达显著增强.使用3-AB抑制PARP1的活性及表达,可以明显降低AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9及TIMP-1基因表达的增加.结论:PARP在AngⅡ诱导的心脏重构过程中发挥了重要的调控作用.     

磷酸二酯酶1A参与调节转化生长因子β1诱导的血管外膜成纤维细胞胶原表达

目的 探讨环核苷酸依赖的磷酸二酯酶1A(PDE1A)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的血管外膜成纤维细胞(AF)Ⅰ型胶原表达中的作用.方法 采用组织块贴壁法培养SD大鼠胸主动脉AF.Bradford方法测定蛋白浓度,免疫印迹技术观察Ⅰ型胶原和PDE1A蛋白表达,Leica Qwin软件进行图像灰度分析.结果 1)TGF-β1上调Ⅰ型胶原蛋白表达呈时间和剂量依赖性,以TGF-β1 (10 ng/mL)诱导AF 24 h上调Ⅰ型胶原蛋白表达最强,较诱导前上调(147.5±38.7)%(P<0.05).2)TGF-β1上调PDE1A蛋白的表达呈时间和剂量依赖性,TGF-β1(20 ng/mL)诱导AF 24 h PDE1A蛋白表达量达(302.7±86.3)%,较诱导前显著上调(P<0.01);3)非特异性PDE抑制剂IBMX和特异性PDE1A抑制剂IC86340均显著抑制TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原的表达,抑制率分别达24.6%和15.8%,(P<0.05,P<0.05).结论 PDE1A参与TGFβ-1诱导的血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的调节.     

巨噬细胞对血管紧张素Ⅱ作用下三维共培养体系中心脏成纤维细胞转分化的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensionⅡ,AngⅡ)作用下,细胞三维共培养体系中巨噬细胞对心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)表型转化的影响。为观察细胞之间的相互作用,探讨高血压导致心脏纤维化的分子机制及防治策略提供了新思路。方法:分离、培养原代小鼠骨髓巨噬细胞及乳鼠CFs,建立巨噬细胞和CFs多肽纳米凝胶三维共培养体系。实验分为CFs组,巨噬细胞与CFs共培养组,CFs+AngⅡ处理组,巨噬细胞与CFs共培养+AngⅡ处理组。通过免疫荧光染色鉴定培养的巨噬细胞(巨噬细胞标志物F4/80)及成纤维细胞(波形蛋白Vimentin);采用倒置相差显微镜观察三维培养细胞形态;免疫荧光染色检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;实时定量PCR检测α-SMA、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)及促纤维化因子[转化生长因子β(TGF-β)、结缔组织生长因子(CTGF)]的表达。结果:在无AngⅡ作用下,巨噬细胞与CFs共培养组与单独培养的CFs组比较,α-SMA mRNA和蛋白表达,并且CollagenⅠ、TGF-β和CTGF mRNA的水平差异无统计学意义。巨噬细胞与CFs共培养组经AngⅡ处理后,可明显诱导α-SMA mRNA和蛋白高表达,并且上调CollagenⅠ、TGF-β和CTGF mRNA的水平。结论:在AngⅡ作用下,三维培养体系中巨噬细胞可促进CFs向肌成纤维细胞表型转化,提示巨噬细胞在AngⅡ导致心脏纤维化的病理过程中发挥关键作用。     

磷酸二酯酶1A参与调节转化生长因子β_1诱导的血管外膜成纤维细胞胶原表达

目的探讨环核苷酸依赖的磷酸二酯酶1A(PDE1A)在转化生长因子β_1(TGF-β_1)诱导的血管外膜成纤维细胞(AF)Ⅰ型胶原表达中的作用。方法采用组织块贴壁法培养 SD 大鼠胸主动脉 AF。Bradford 方法测定蛋白浓度,免疫印迹技术观察Ⅰ型胶原和 PDE1A 蛋白表达,Leica Qwin 软件进行图像灰度分析。结果 1)TGF-β_1上调Ⅰ型胶原蛋白表达呈时间和剂量依赖性,以 TGF-β_1(10 ng/mL)诱导 AF 24 h 上调Ⅰ型胶原蛋白表达最强,较诱导前上调(147.5±38.7)%(P<0.05)。2)TGF-β_1上调 PDE1A 蛋白的表达呈时间和剂量依赖性,TGF-β_1(20ng/mL)诱导 AF 24 h PDE1A 蛋白表达量达(302.7±86.3)%,较诱导前显著上调(P<0.01);3)非特异性 PDE 抑制剂 IBMX 和特异性 PDE1A 抑制剂 IC86340均显著抑制 TGF-β_1诱导的Ⅰ型胶原的表达,抑制率分别达24.6%和15.8%,(P<0.05,P<0.05)。结论 PDE1A 参与 TGFβ-1诱导的血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的调节。     

转染血管紧张素Ⅱ1型受体反义核苷酸对血管外膜成纤维细胞增殖的影响

为了评价转染血管紧张素Ⅱ1型受体反义核苷酸对血管外膜成纤维细胞血管紧张素Ⅱ受体亚型mRNA表达,及细胞内核酸蛋白质的合成水平的作用。采用逆转录－聚合酶链反应克隆血管紧张素Ⅱ1型受体cDNA序列（476bp),将克隆cDNA反向插入PLXSN,构建一完整的含血管紧张素Ⅱ1型受体的质粒,并转染入培养的血管外膜成纤维细胞,逆转录－聚合酶链反应和免疫印迹鉴定其转染后血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA和蛋白表达。比较血管紧张素Ⅱ10^-7mol/L刺激24h后的转染及非转染的血管外膜成纤维细胞血管素Ⅱ受体各亚型mRNA表达、细胞内核酸蛋白质的合成水平。转染组血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA和蛋白表达量显著减少,对照组相比差异显著（P＜0．01）。血管紧张素Ⅱ10^-7mol/L刺激24h后,与对照组血管外膜成纤维细胞相比,转染组血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达明显减少,血管紧张素Ⅱ受体Ⅱ型mRNA表达明显增加（P＜0．01）,但两组间核酸和蛋白合成均无显著差异（P＞0．05）。提示反义核苷酸封闭后,血管外膜成纤维细胞血管紧张素Ⅱ1型受体mRAN表达显著抑制,同时血管紧张素Ⅱ受体Ⅱ型mRNA上调。单纯封闭血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA并不能有效阻断血管紧张素Ⅱ介导的血管外膜成纤维细胞生长。     

血管紧张素Ⅱ对人肝细胞白蛋白和胶原合成的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人正常肝细胞白蛋白表达及Ⅰ型胶原合成的影响.方法 常规培养人正常肝细胞系HL-7702细胞并分为对照组、AngⅡ刺激组、AngⅡ十依贝沙坦组(共刺激组).采用免疫荧光法和Western印迹法检测各组肝细胞中白蛋白及胶原改变;免疫荧光法观察各组肝细胞中是否有胶原合成;实时定量PCR法定量检测各组肝细胞中Ⅰ型胶原mR-NA表达水平的变化.结果 与对照组相比,经AngⅡ(10-7mol/L)处理72 h后,AngⅡ刺激组肝细胞中白蛋白表达减少(1.41±0.23比0.85±0.11,P=0.000),Ⅰ型胶原mRNA的表达明显升高(1.00±0.08比3.72±0.19,P=0.000),Ⅰ型胶原蛋白合成增加,而经依贝沙坦预处理后,共刺激组肝细胞白蛋白表达较AngⅡ刺激组明显增多(0.85±0.11比1.38±0.32,P=0.000),肝细胞Ⅰ型胶原mRNA表达较AngⅡ刺激组显著下降(3.72±0.19比2.86±0.13,P=0.000),Ⅰ型胶原蛋白合成减少.结论 AngⅡ经Ⅰ型受体诱导人肝细胞表达白蛋白减少,胶原合成增加.     

血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对血管外膜成纤维细胞亚群增殖和胶原合成的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其受体拮抗剂氯沙坦(Los)和PD123319对大鼠胸主动脉血管外膜成纤维细胞亚群增殖和胶原生成的影响。方法通过克隆环法获得血管外膜成纤维细胞单克隆,根据细胞表型克隆了两种细胞亚型并分别进行培养,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光染色方法鉴定细胞的纯度;流式细胞术对两细胞亚群的形状和大小进行比较;四甲基偶氮唑盐(MTT)法和Western印迹法检测AngⅡ及其受体拮抗剂Los、PD123319对细胞亚群的增殖活性和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)合成的影响。结果克隆环法获得血管外膜成纤维细胞两个亚群,经显微镜和流式细胞仪观察根据细胞表型分别命名为:圆形细胞亚群(RC)和纺锤形细胞亚群(SC)。经RT-PCR和免疫荧光染色对第Ⅷ因子(vWF)、CD8、MHC、Desmin进行检测,结果显示无内皮细胞、平滑肌细胞细胞标志物的表达,分别为两种纯系细胞。实验发现AngⅡ对RC亚群的增殖活性及CollagenⅠ的合成能力均有显著影响,既促进RC的增殖又提高Ⅰ型胶原的合成,但经Los预处理后,AngⅡ的促增殖及胶原合成能力被显著性抑制(P<0.05),而SC亚群的增殖活性和胶原合成情况无显著性改变。经PD123319预处理后,对RC亚群和SC亚群增殖和胶原的合成均无明显影响。结论 AngⅡ在促进两细胞亚群的增殖和胶原合成的能力方面有差异,说明血管外膜成纤维细胞两种亚群在表型、功能和作用机制上具有显著性的差异,提示两种细胞亚群在病理生理机制及其血管重构和修复过程中扮演着不同的角色。     

结合转录因子激活蛋白1的诱杀性寡聚脱氧核苷酸能抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞胶原表达

目的 探讨结合转录因子激活蛋白1的诱杀性寡聚脱氧核苷酸(AP-1 decoy ODNs)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型及Ⅲ型胶原的影响,为高血压心肌纤维化的防治提供理论依据.方法 采用羟脯氨酸比色法测定SD大鼠心肌成纤维细胞(CFs)上清胶原合成,分别观察不同浓度的AP-1 decoy ODNs对AngⅡ诱导的CFs胶原的合成、Ⅰ型及Ⅲ型mRNA的影响.结果 ①10-7mol/L Ang Ⅱ刺激24 h后能够显著增加CFs胶原合成,decoy ODNs在10～200 nmol/L范围内量-效相关地抑制CFs胶原合成,但突变的decoy ODNs对CFs的增殖、胶原合成没有明显的影响.②10-7mol/L Ang Ⅱ作用24 h后能够显著使CFs Ⅲ型(1.04±0.07比1.63±0.07,n=3,P<0.05)和Ⅰ型(1.09±0.09比0.20±0.10,n=3,P<0.05)基因表达上调,而100 nmol/L(Ⅰ型0.45±0.05和Ⅲ型0.84±0.04)、200 nmol/L(Ⅰ型0.22±0.06和Ⅲ型0.61±0.07)的AP-1 decoy ODNs(P<0.05)能够抑制这种作用.突变的AP-1 decoy ODNs没有此作用.结论 AP-1 decoy ODNs通过抑制Ang Ⅱ诱导的CFs Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达,从而抑制胶原的合成.     

肾上腺髓质素对大鼠血管外膜成纤维细胞迁移的影响

目的研究肾上腺髓质素（ADM）对血管紧张素II（Ang II）诱导的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞迁移的影响。方法采用体外培养的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞,运用Transwell技术测定不同浓度ADM对外膜成纤维细胞迁移的影响,用RT-PCR及Western blotting分析Ang II（1×10-6mol/L）及不同浓度ADM干预后大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞内骨桥蛋白的表达。结果在Ang II（1×10-6mol/L）趋化作用下,外膜成纤维细胞迁移活性较对照组显著增强,ADM可抑制Ang II刺激的细胞迁移,迁移细胞数目在一定范围内随着ADM浓度增加而减少;Ang II（1×10-6mol/L）诱导骨桥蛋白呈高表达,ADM可下调这种表达,呈一定剂量依赖性。结论ADM明显抑制Ang II刺激的外膜成纤维细胞迁移,并且ADM可以抑制Ang II刺激的骨桥蛋白表达。     

血管紧张素(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的探讨血管紧张素(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法分离培养SD仔鼠心脏成纤维细胞,四氮唑盐比色法检测细胞增殖,流式细胞分析技术测定细胞周期,逆转录—聚合酶链式反应测定心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达。结果①1.0μmol/L血管紧张素Ⅱ作用24h,心脏成纤维细胞的四氮唑蓝比色分析法吸光度值(0.24±0.01)较无血清对照组(0.14±0.01)明显增加(P<0.01);0.001~1.0μmol/L血管紧张素(1-7)和1.0μmol/L血管紧张素Ⅱ共同干预后吸光度值逐渐降低,分别为0.20±0.01、0.19±0.01、0.13±0.01、0.16±0.03,均显著低于血管紧张素Ⅱ组(P<0.01)。②血管紧张素Ⅱ组心脏成纤维细胞的S期百分率(14.0%±0.9%)和增殖指数(23.4±1.8)较对照组(5.4%±0.7%和10.8±2.4)明显增高(P<0.01);0.1μmol/L血管紧张素(1-7)干预后S期百分率(8.5%±0.7%)和增殖指数(16.2±2.0)较血管紧张素Ⅱ组降低(P<0.01)。③血管紧张素Ⅱ刺激后心脏成纤维细胞的Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平分别为较对照组明显增高(P<0.01);给予0.001~1.0μmol/L血管紧张素(1-7)和1.0μmol/L血管紧张素Ⅱ共同干预后,胶原表达水平浓度依赖性的下降,均显著低于血管紧张素Ⅱ组(P<0.05)。结论血管紧张素(1-7)具有抑制血管紧张素Ⅱ浓度增加引起的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的作用。