线粒体DNA D-环区单核苷酸多态性与胃癌发病年龄的关系研究

背景 胃癌发病率和死亡率长期居高不下,防控形势严峻,且发病年龄逐渐年轻化,但目前关于胃癌发病年龄预测因素的研究报道较少。 目的 探讨线粒体DNA D-环区（D-Loop区）单核苷酸多态性（SNPs）与胃癌患者发病年龄之间的关系。 方法 选取2007年7月至2008年12月在河北医科大学第四医院消化内科经胃镜病理证实的胃癌患者150例为研究对象,提取胃癌患者外周血中的线粒体DNA,采用聚合酶链反应（PCR）扩增目的片段,并进行线粒体DNA D-Loop区测序。采用Kaplan-Meier法绘制胃癌患者发病年龄的生存曲线,比较采用Log-rank检验;采用多因素Cox比例风险回归分析探究胃癌患者发病年龄的影响因素。 结果 不同分化程度患者发病年龄比较,差异有统计学意义（P<0.05）。Log-rank检验结果显示,153G基因型患者的发病年龄〔（48.0±5.3）岁〕早于153A基因型患者〔（60.1±0.8）岁〕（χ2=7.757,P=0.005）。多因素Cox比例风险回归分析结果显示,线粒体DNA D-Loop区SNPs位点153A/G是预测胃癌患者发病年龄的影响因素〔HR=0.323,95%CI（0.140,0.745）,P=0.008〕。 结论 线粒体DNA D-Loop区SNPs位点153A/G或许可以作为胃癌发病年龄的新型预测指标,通过分析线粒体DNA D-Loop区的多态性,可以帮助识别早发的胃癌患者。     

线粒体D-Loop区单核苷酸多态性与喉癌发病风险关系的研究

目的 探讨线粒体D-环区(D-Loop区)单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)与喉癌发病风险的关系。方法 实验标本取自河北医科大学第四医院耳鼻咽喉-头颈外科行喉癌手术的患者71例及在该院体检中心行健康查体的人群159例。采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增目的片段,并进行线粒体D-Loop区测序。采用χ²检验分析不同SNPs与喉癌发病风险之间的关系,并分析与喉癌发病相关的SNPs与患者临床特征的关系。结果 线粒体DNA(mtDNA)D-Loop区的SNPs与喉癌的发病风险有关,73G、309C、315C及16319G基因型可能增加了喉癌的发病风险,而524C、556A、16288T、16291C及16311T基因型可能降低了喉癌的发病风险。结论 线粒体D-Loop区SNPs可作为预测因子,用于提高喉鳞状细胞癌患者的早诊率,指导喉鳞状细胞癌患者的临床治疗。     

飞行员线粒体DNA高变区Ⅰ单核苷酸多态性研究

目的了解飞行员线粒体DNA高变区Ⅰ单核苷酸多态性（SNP）分布特点,探讨耐力相关的基因标记。方法以86例飞行员和80例健康对照人群为研究对象,用PCR产物直接测序的方法检测线粒体高变区ⅠSNPs,并与剑桥序列比对,确定SNPs的位点、类型及频率。结果飞行员和健康对照人群线粒体DNA高变区ⅠSNPs分布频率高于10%的位点分别有11个和8个,高于20%的位点分别有7个和5个,其中飞行员C16257A和C16261T位点频率明显高于健康对照组。结论线粒体DNA高变区ⅠSNPs位点C16257A和C16261T有可能与飞行员飞行耐力相关。     

线粒体D-loop区单核苷酸多态性与食管鳞状细胞癌患者发病年龄关系的研究

目的 探讨线粒体D-loop区单核苷酸多态性与食管鳞状细胞癌患者发病年龄关系.方法 2003-2005年在河北医科大学第四医院完成食管鳞状细胞癌患者线粒体D-loop区测序55例,单核苷酸多态性与患者发病年龄的关系分析采用Kaplan-Meier法,组间比较使用Log-rank检验.结果 经Log-rank检验,单核苷酸多态位点16266C/T基因型与发病年龄有关,多态位点16266T基因型患者发病早于16266C基因型患者,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 线粒体DNA D-loop区基因多态性位点可作为食管鳞状细胞癌患者发病年龄的预测标记,同时线粒体D-loop区多态性位点有助于识别早发的食管鳞状细胞癌患者.     

中国保安族线粒体DNA D-环区遗传多态性的研究

目的：以遗传群体为对象，观察线粒体DNA的群体遗传特点，为研究西北少数民族的起源提供科学依据，并为法医学鉴定提供线粒体DNA序列多态性的基础数据。方法：应用PCR扩增产物直接测序法，对98例保安族无关个体线粒体DNA D-环区HVSⅠ进行测序分析。结果：在mtDNA高变区Ⅰ(HVSⅠ)16091～16418之间与Anderson序列比较共发现有66处碱基突变，62个单倍型，碱基突变的主要形式为碱基替代，其中转换87％，颠换11％，碱基插入1％，碱基缺失0．5％．保安族线粒体DNA HVS Ⅰ区基因差异度为0．9862，偶合概率为0.0237。结论：保安族与其他群体比较有其独特的线粒体DNA序列遗传特点，与亚洲其他人种及高加索人种有明显差异。保安族线粒体DNA序列多态性不仅有别于西方人种，也与其他东亚人种不同，线粒体DNA控制区HVS Ⅰ序列多态性可用于法医学个体识别及亲权鉴定。     

线粒体DNAD-loop基因多态性与肾透明细胞癌患者发病年龄的关系研究

目的探讨线粒体DNA D-loop(mt DNA D-loop)基因多态性与肾透明细胞癌患者(CCRCC)发病年龄的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)对59例CCRCC患者的mt DNA D-loop区进行扩增并测序。将mt DNA D-loop区的测序结果与线粒体文库中的剑桥序列(r CRS)比对进行单核苷酸多态性(SNP)分析。单核苷酸多态性与患者发病年龄关系的分析采用Kaplan-Meier方法,组间比较采用Log-rank检验,多因素分析采用Cox比例风险回归模型。结果单因素分析显示,高TNM分期组患者的发病年龄低于低TNM分期组;肿瘤直径≥5 cm的患者发病年龄低于肿瘤直径<5 cm的患者(均P<0.05),单核苷酸多态位点16293A/G基因型与发病年龄有关,多态位点16293G基因型患者的发病年龄明显早于16293A基因型患者(P<0.05)。多因素分析显示,TNM分期高低、肿瘤直径大小、16293位点的多态性是影响肾透明细胞癌患者发病年龄的独立危险因素。结论线粒体DNA D-loop区基因多态性可作为肾透明细胞癌患者发病年龄的预测因素,同时线粒体DNA D-loop区基因多态性有助于识别早发的肾透明细胞癌。     

喉鳞状细胞癌组织线粒体基因D-310区碱基的多态性

目的 探讨喉鳞状细胞癌组织中线粒体基因D310区碱基序列多态性及其临床意义。方珐提取11例喉鳞状细胞癌组织总DNA,利用聚合酶链反应（PCR）对线粒体基因包含D310区的D-LOOP区部分序列进行扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳并直接测序,观察该区碱基序列的改变。结果D310区多态性表现为多聚C保守片段胞嘧啶碱基数量的改变,发生率为8／11（72．73％）。5/8（62．50％）的标本突变是同质性的,3／8（37．50％）标本为异质性突变。共检测到6种不同的序列改变,以单个胞嘧啶的插入最常见,约占全部序列改变的50％。结论在喉鳞状细胞癌组织。D310区具有明显多态性,是突变的多发区域之一。     

线粒体DNA单核苷酸多态性研究进展

线粒体不仅是能量生成的场所,还参与脂肪酸的合成及某些蛋白质的合成。线粒体基因组(mtDNA)是约1650 bp的环状分子,含有37个基因,其中24个是合成蛋白质时所需的RNA编码基因,其余的13个基因参与编码呼吸链关键性复合酶的亚单位。所以mtDNA在调节机体氧化磷酸化中起关键作用。由于线粒体中的氧化呼吸链,mtDNA的突变率高于核中DNA,并且缺乏自我修复能力,mtDNA的任何突变都会累及到基因组中的功能区域,其突变和编码线粒体蛋白的基因组DNA的突变可导致线粒体功能的异常,对机体代谢、组织功能都有影响。笔者对线粒体单核苷酸多态性的生理、病理的新进展做一综述。     

GSTM1基因多态性与食管癌遗传易感性的关系

目的：探讨ＧＳＴＭ１基因多态性与食管癌遗传易感性的可能关系。方法：采用ＰＣＲ法对正常人和食管癌患者基因组ＤＮＡ进行ＧＳＴＭ１基因分型：结果１０８例食管癌患者中６８例为ＧＳＴＭ１型;１１２例正常对照组标本中５５例为ＧＳＴＭ１型的。２组人群ＧＳＴＭ１基因缺失率有显著性差异。结论：ＧＳＴＭ１基因多态性与食管癌易感性相关,ＧＳＴＭ１基因型个体食管癌易感性增高。     

线粒体DNA D-loop区多态性与肝癌预后的研究

目的通过对线粒体DNA D-loop区的碱基测序,了解其多态性及突变情况,并探讨其与肝癌发病机率及预后的关系。方法提取49个乙型肝炎后肝癌病人的肝癌组织,癌旁组织和血液中的线粒体DNA,用测序法测定线粒体DNA D-loop区的碱基序列,了解其单核苷酸多态性和变异情况,并分析其与肝癌发病率及2年生存率的关系。结果通过观察发现,肝癌病mt DNA突变情况与肝癌预后无明确相关,而1个SNP位点(核苷酸150C/T)与肝癌的生存期之间存在统计学上的显著差异。经COX回归分析,发现150位点为肝癌预后的独立危险因素;150C的患者生存期显著短于150T的生存期(相对危险度,0.246;95%CI,0.070-0.861;P=0.028)。结论通过分析在线粒体DNAD-loop区的多态性,可以帮助筛别预后不良的肝癌患者。     

食管鳞癌中survivin和Ki-67表达的相关性

目的探讨凋亡抑制因子survivin和Ki-67在食管鳞癌中的表达及其与临床病理因素之间的关系。方法用免疫组织化学染色S-P法检测42例食管鳞癌组织中survivin和Ki-67的表达。结果食管鳞癌中survivin的表达与其临床病理特征如年龄、性别、癌肿大小、分化程度等无关(p>0.05),与淋巴结是否转移、肿瘤分期相关(p<0.05)。Ki-67和survivin的表达有相关性(p<0.05)。结论survivin具有促进肿瘤细胞增殖的作用。     

胰岛素样生长因子-1受体在食管鳞状细胞癌的表达及意义

目的 探讨胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达及意义. 方法 免疫组织化学方法检测118例ESCC手术切除标本及20例癌旁正常组织中IGF-1R、Ki-67及Bcl-2的表达情况. 结果 ESCC中IGF-1R、Ki-67及Bcl-2呈高表达,阳性率分别为80.51%、81.36%和59.32%;IGF-1R及Ki-67表达程度与肿瘤组织分化程度负相关;Bcl-2表达程度与肿瘤组织分化程度正相关;IGF-1R表达与是否伴淋巴结转移有关;且IGF-1R表达与Ki-67及Bcl-2表达呈正相关. 结论 调控细胞增殖及凋亡可能是IGF-1R参与ESCC发生发展的主要机制,并可用于评价ESCC是否伴有淋巴结转移.     

食管鳞癌P^16与Rb蛋白的表达及相关性

目的：探讨Ｐ＾１６与Ｒｂ蛋白与原发性食管鳞癌发生发展的关系，分析Ｐ＾１６与Ｒｂ蛋白的表达及其相关性。方法：应用免疫组化ＳＰ法检测１０２例原发性食管鳞癌中Ｐ＾１６与Ｒｂ蛋白的表达情况。结果：高分化鳞癌中Ｐ＾１６与Ｒｂ均为阳性表达，低分化鳞癌中阳性表达分别为４８．１％和５７．４％。在３１例Ｒｂ蛋白阳性标本中，２４例显示Ｐ＾１６蛋白表达缺失或低表达，在２３例Ｒｂ蛋白阴性标本中有１９例显示Ｐ＾１５蛋白阳性     

NDRG1蛋白表达与食管鳞癌临床病理特征及预后的关系

目的:探讨NDRG1在食管鳞癌发生、发展过程中的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法检测20例正常食管黏膜组织和78例食管鳞癌组织中NDRG1蛋白的表达情况。结果:在正常食管黏膜组织、食管鳞癌组织中NDRG1蛋白阳性表达率分别为100%(20/20)、55.1%(43/78),差异均具有显著统计学意义(P<0.01)。在食管鳞癌组织中NDRG1蛋白的表达与淋巴结转移情况呈负相关(R=-0.237,P=0.036)。而与食管鳞癌患者的年龄、性别、肿瘤的分化程度、TNM分期及5年生存率无相关性。结论:NDRG1在食管鳞癌组织中下调表达可能与食管鳞癌的发生、发展有关,NDRG1可能作为一个潜在的肿瘤转移抑制基因在食管鳞癌的发生、发展及转移过程中发挥着抑制作用。     

食管鳞癌患者上消化道肿瘤家族史与其临床病理特征及预后的关系

目的探讨食管鳞癌(ESCC)患者上消化道肿瘤(UGIC)家族史与其临床病理特征及预后的关系。方法回顾性分析郑州大学第一附属医院2008—2015年行根治性食管鳞癌切除术的923例ESCC患者的临床病例资料,其中一级亲属UGIC家族史阴性741例,UGIC家族史阳性182例。采用双侧χ~2检验分析ESCC患者UGIC家族史与其临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier法进行生存分析,并行Log-rank检验。采用Cox比例风险回归模型分析UGIC家族史对ESCC患者预后的影响。结果家族史阳性患者的肿瘤为T_1期、中低分化高于家族史阴性患者,大体类型为溃疡型和髓质型者的比例低于家族史阴性患者,差异有统计学意义(均P<0.05)。家族史阳性患者的总生存时间(OS)与家族史阴性患者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。但是,家族史阳性患者中,一级亲属仅为同胞的患者的OS低于其他家族史阳性患者(P<0.05)。Cox比例风险模型显示,影响UGIC家族史阳性患者OS的独立预后因素为T分期和亲属类型(均P<0.05),影响UGIC家族史阴性患者OS的独立预后因素为T分期和淋巴结转移率(均P<0.05)。结论有、无UGIC家族史的ESCC患者之间临床病理特征存在差异,且UGIC家族史与ESCC患者预后存在相关性,但其不是影响ESCC患者预后的独立因素。UGIC家族史阳性患者中,一级亲属仅为同胞的患者的OS低于其他家族史阳性患者。     

ERCC基因多态性与骨肉瘤的生存相关性

目的探讨骨肉瘤患者及正常人群 (excision repair cross-complementing, ERCC) 基因ERCC1Asn118Asn (rs11615) 和ERCC1 Gln504Lys (rs3212986) , ERCC2Asp312Asn (rs1799793) 和ERCC2Lys751Gln (rs13181) 单核苷酸多态性与骨肉瘤患者对顺铂的反应和生存状况的关系.方法 2011年1月至2015年12月住院收治的骨肉瘤患者161例及正常人群163例, 静脉血2 m L, 用实时逆转录聚合酶链式反应方法 (real time quantitative polymerase chain reaction, RT-PCR) 比较骨肉瘤患者及正常人群ERCC1Asn118Asn (rs11615) 和ERCC1 Gln504Lys (rs3212986) , ERCC2Asp312Asn (rs1799793) 和ERCC2 Lys751Gln (rs13181) 基因型及等位基因分布频率.对骨肉瘤患者按不同的临床因素 (年龄、性别、病理类型、肿瘤部位、Enneking外科分期、肿瘤转移及治疗方法) 进行分组, 比较各组基因型频率及等位基因频率, 分析基因多态性与各临床因素的关系.结果 (1) ERCC1Asn118Asn (rs11615) 和ERCC1 Gln504Lys (rs3212986) , ERCC2Asp312Asn (rs1799793) 和ERCC2Lys751Gln (rs13181) 基因型有CC、CT、TT型, 骨肉瘤患者及正常人群基因型频率 (CC、CT、TT) 及等位基因频率 (C、T) 比较差异均无统计学意义 (P=0.590, P=0.544) ; (2) 对于ERCC1 Asn118Asn, 与野生型C/C相比, 突变型T/T与较高的无病生存率显著相关, 校正OR值 (95%CI) 0.37 (0.150.85) .ERCC2 751 A/A基因型表现为骨肉瘤患者生存率增加 (HR=0.45, 95%CI 0.110.88) .没有证明ERCC1 Gln504Lys与ERCC2Asp312Asn的多态性和骨肉瘤预后相关.结论 ERCC基因ERCC1 Asn118Asn118T/T和ERCC2 Lys751Gln A/A多态性与骨肉瘤无病生存率 (SFS) 相关, 可以用作顺铂治疗的骨肉瘤患者临床预后的标志物.而ERCC1 Gln504Lys (rs3212986) 、ERCC2 Asp312Asn与骨肉瘤无病生存率 (SFS) 无相关性.     

食管鳞癌组织中上皮间质转化相关蛋白表达与临床病理学及预后的关系

目的：检测食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）组织中上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白的表达,研究其与临床病理因素及预后的相关性。方法：选取ESCC手术标本50例,免疫组化方法检测ESCC中EMT相关蛋白Twist1、E-cadherin、N-cadherin及Vimentin的表达,分析其与临床病理因素、增殖指标（Ki67）及预后之间的关系。结果：（1）ESCC中Twist1表达与癌增殖、浸润深度、淋巴结转移呈显著正相关（均P<0.01）;但Twist1表达与性别、年龄、肿瘤分化无相关性（均P>0.05）。（2）ESCC中Vimentin表达与癌增殖、分化、肿瘤浸润深度、淋巴结转移呈显著正相关（均P<0.05）,而与性别、年龄无相关性（均P>0.05）。（3）E-cadherin、N-cadherin与临床病理因素无显著相关性（均P>0.05）。（4）ESCC中Twist1、N-cadherin及Vimentin高表达患者的预后显著差于相应低表达组（均P<0.05）;E-cadherin表达缺失的患者预后显著差于E-cadherin表达组（P<0.05）。结论：EMT在ESCC恶性演进（加深浸润、增加转移等）过程中发挥重要作用,是导致ESCC患者预后较差的重要原因之一。     

甘氨双唑钠对食管鳞癌放射增敏作用的疗效分析

目的：探讨研究甘氨双唑钠对食管鳞癌放射治疗增敏作用的临床疗效。方法方便选取2013年12月—2015年12月平阴县中医医院肿瘤科确诊食管癌鳞患者60例。随机分成观察组和对照组,每组患者30例,对照组采取单纯放疗治疗,放疗总剂量60 Gy/7周,观察组在常规放疗同时使用甘氨双唑钠,每2 d使用1次,用药3次/周,用药到放射治疗过程结束。放疗中检测患者血常规并观察处理各种不良反应。结果观察组完全缓解9例,部分缓解18例,稳定2例,病情恶化1例,总有效率90.00%。对照组患者完全缓解6例,部分缓解14例,稳定8例,病情恶化2例,总有效率66.66%;两组比较,观察组的治疗效果优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),两组患者均未发现明显不良反应。结论甘氨双唑对食管鳞癌放疗增敏作用确切,且治疗安全性好,不良反应小。     

食管鳞状细胞癌及癌旁组织蛋白表达谱的差异分析

目的：应用蛋白质组学方法筛选食管鳞状细胞癌组织与癌旁正常食管组织中的差异表达蛋白质。方法：收集10例食管鳞状细胞癌组织及其配对的正常食管组织，提取组织蛋白质，进行二维电泳，经图像分析识别差异表达蛋白，应用基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱分析鉴定差异表达蛋白质；应用免疫组化检测HSP27、ANX1在40例食管鳞状细胞癌组织标本及其配对的食管正常上皮组织中的表达。结果：通过肽指纹图谱分析鉴定了6个差异表达蛋白质，SCCA1、KRT4和ANX1在食管鳞状细胞癌组织中表达下调，TIM1、MnSOD和HSP27在食管鳞状细胞癌组织中表达上调。免疫组化检测显示HSP27在食管鳞状细胞癌组织中高表达，ANX1在食管鳞状细胞癌组织中低表达，与蛋白质组学的分析结果一致。结论：食管鳞状细胞癌与癌旁正常组织之间存在蛋白质表达差异。寻找食管鳞状细胞癌组织与正常食管组织之间表达差异蛋白质，为探讨食管鳞状细胞癌发病分子机制提供了有用依据。     

上皮间质转化在食管鳞状细胞癌转移中的作用

目的：观察上皮间质转化相关标记物E-钙黏蛋白（E-cadherin）和Vimentin基因及其蛋白在食管鳞状细胞癌淋巴结转移组和非转移组中的表达,并分析E-cadherin和Vimentin表达的相关性。方法采用免疫组织化学SP法和实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测47例有淋巴结转移、30例无淋巴结转移的食管癌和20例正常食管组织中E-cadherin和Vimentin基因及其蛋白的表达情况。结果对照组、非转移组与转移组 E-cadherin蛋白表达分别为20/20（100％）、29/30（96．67％）和44/47（93．62％）,组间比较差别有统计学意义（ P＜0．05）。转移组的高表达率22/47（46．8％）低于非转移组18/30（60％）,但差别无统计学意义（ P＞0．05）。Vimentin蛋白在对照组、非转移组、转移组阳性表达率逐渐增高,分别为0/20（0）、11/30（36．67％）、37/47（78．72％）,组间比较差别有统计学意义（ P＜0．05）,转移组与非转移组间比较差别有统计学意义（ P＜0．05）。Vimentin和E-cadherin表达呈显著负相关,相关系数（ r＝-0．377）。qRT-PCR检测显示非转移组和转移组中E-cadherin和Vimentin mRNA表达量与对照组比较差别有统计学意义（P＜0．05）。E-cadherin基因的表达在转移组（0．43±0．23）与非转移组（0．51±0．54）间的差别无统计学意义（ P＞0．05）,而转移组 Vimentin表达（4．05±1．88）明显高于非转移组（2．70±1．73）,差别有统计学意义（ P＜0．05）。结论上皮间质转化相关基因E-cad-herin和Vimentin与食管鳞癌的转移密切相关,可作为预测食管癌转移复发及评估临床预后的有效标记物。