牛磺酸对大鼠视网膜光损伤保护作用的实验研究

目的 探讨牛磺酸对大鼠视网膜光损伤和视细胞凋亡的保护作用及其作用机制。方法 所有大鼠被随机分为牛磺酸用药组、阳性对照组、正常对照组。通过持续光照射24h，形成视网膜光损伤模型。光照后3d，通过光镜观察视网膜组织病理学结构，流式细胞仪测定细胞凋亡的情况。结果 组织病理学结果显示，阳性对照组视网膜结构破坏严重，感光细胞内外节消失，外核层变薄，细胞核明显减少，而牛磺酸用药组无明显改变。牛磺酸治疗组视网膜细胞凋亡数明显低于阳性对照组(P＜0．05)。结论 牛磺酸对视网膜光损伤具有保护作用，其可能的机制是通过抑制视细胞的凋亡。     

牛膝多肽对NMDA诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的:观察牛膝多肽(ABPP)对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导的转基因视网膜神经节细胞RGC-5细胞株损伤的保护作用。方法:在体外培养的RGC-5中加入不同浓度的牛膝多肽(0.05、0.5、5.0μg/ml)预保护12小时,用NMDA(100μmol/L)诱导细胞损伤,同时设正常对照组、单纯损伤组和地卓西平(MK-801)对照组,倒置显微镜下观察细胞形态;MTT比色法测定细胞存活率;Hochest染色检测细胞凋亡。结果:NMDA可诱导RGC-5损伤,与单纯损伤组比较,0.5和5.0μg/ml ABPP可提高RGC-5存活率,减少细胞凋亡(P<0.05)。结论:ABPP可抑制NMDA诱导的视网膜神经节细胞凋亡,保护视网膜神经元。     

尼莫地平对大鼠急性心肌缺血的保护作用及其对心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨尼莫地平对大鼠急性心肌缺血的保护作用和机制,以及对心肌细胞凋亡的影响.方法:Wistar大鼠40只随机分为正常对照组、单纯缺血组及尼莫地平高、低剂量组,每组10只,采用BL-410生物信号采集系统测定左室内压上升/下降最大速率(±dp/dtmax);用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL法)检测各组心肌细胞凋亡情况.结果:(1)与正常对照组比较单纯缺血组±dp/dtmax显著降低(P＜0.01),尼莫地平低、高剂量组明显高于单纯缺血组(P＜0.01);(2)结扎左冠状动脉前降支后心肌缺血心电图ST段抬高明显,尼莫地平低、高剂量组ST段均降低,与单纯缺血组相比,差异均有统计学意义(P＜0.01);(3)与正常对照组比较,单纯缺血组细胞凋亡数明显增多.尼莫地平低、高剂量组凋亡细胞显著减少,随剂量增加呈递减趋势(P＜0.01).结论:尼莫地平能升高缺血引起的左室内压变化率,抑制缺血损伤引起的细胞凋亡,从而保护缺血对心肌的损伤.     

水飞蓟素对糖尿病视网膜病变视网膜的保护作用

目的通过测定糖尿病大鼠视网膜内核层(INL)、外核层(ONL)厚度,视网膜电图(ERG) a波、b波幅度,细胞凋亡率来探讨水飞蓟素对糖尿病视网膜病变(DR)的视网膜保护作用。方法 30只7周龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组、高糖组、高糖治疗组,每组10只。高糖组采用腹腔注射70mg/kg链脲佐菌素建立模型,高糖治疗组每日应用水飞蓟素150mg/kg灌胃。28周后予以ERG检测,测量a波、b波的幅度。处死大鼠后制作视网膜切片测定INL和ONL厚度,TUNEL法检测视网膜细胞凋亡率。结果 INL及ONL厚度高糖组低于正常对照组(P<0.05),高糖治疗组高于高糖组(P<0.05);正常对照组a波幅度高于高糖组及高糖治疗组(P<0.05),正常对照组及高糖治疗组b波幅度高于高糖组(P<0.05);高糖治疗组的细胞凋亡率均低于高糖组(P<0.05)。结论水飞蓟素对糖尿病大鼠的视网膜组织结构、功能具有改善作用,其作用机制可能与抑制视网膜细胞凋亡有关。     

银杏叶提取物注射液对NMDA诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的探讨银杏叶提取物注射液对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导的转基因的视网膜神经节细胞系RGC-5损伤的保护作用。方法体外培养RGC-5,以终浓度分别为0.025、0.25、2.5%的银杏叶提取物注射液预保护12h后,用NMDA(100μmol/L)诱导损伤,并设正常对照组,单纯损伤组和地卓西平(MK-801)对照组。倒置显微镜下观察细胞形态;MTT比色法测定细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡,半定量RT-PCR测定Bcl-2和Bax mRNA的变化。结果 NMDA可诱导RGC-5细胞损伤,与单纯损伤组比较,0.25、2.5%银杏叶提取物注射液可提高RGC-5细胞存活率,减少细胞凋亡(P0.05),另外0.25%银杏叶提取物注射液预保护后Bcl-2mRNA表达水平增加,Bax mRNA的表达水平降低(P0.05)。结论银杏叶可抑制NMDA诱导的视网膜神经节细胞凋亡,保护视网膜神经元,其机制可能与上调Bcl-2mRNA的表达,下调Bax mRNA的表达有关。     

电刺激大鼠小脑顶核对缺血-再灌注视网膜的保护作用实验研究

目的探讨电刺激大鼠小脑顶核（cerebellar fastigial nucleus,CFN）对视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用及其机制.方法大鼠随机均分为三组,缺血-再灌注损伤组、缺血-再灌注治疗组和假手术组.用TUNEL试剂盒检测视网膜神经节细胞凋亡率;用免疫组织化学染色法检测视网膜细胞Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达.结果缺血-再灌注损伤可使视网膜神经节细胞发生凋亡（P〈0.05）,同时视网膜细胞Bcl-2蛋白表达逐渐减弱（P〈0.05）,Bax蛋白表达逐渐增强（P〈0.05）;而使用电刺激小脑顶核的治疗组上述改变较轻（P〈0.05）.结论电刺激大鼠小脑顶核对视网膜缺血-再灌注损伤具有保护作用,其机制可能通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达来减少视网膜细胞的凋亡.     

橙皮苷对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护作用

目的研究橙皮苷对糖尿病大鼠是否具有抗视网膜视神经细胞凋亡的作用,从而延缓糖尿病视网膜病变的进展速度。方法清洁级雄性SD大鼠36只分成3组,即正常对照组(C组)12只,糖尿病损伤组(D组)12只、橙皮苷给药组(D+H组)12只。D组和D+H组注射链脲佐菌素建造大鼠的糖尿病模型。确定大鼠的糖尿病模型建造达标且血糖稳定后,每天对D+H组给予橙皮苷(50mg·kg-1)喂养,C组和D组:每日给予等体积生理盐水喂养,共持续8周,每天观察大鼠的一般状况,每周测量并记录空腹血糖1次,8周后,处死所有动物,迅速取右眼,制备石蜡切片,通过HE染色法观察视网膜视神经细胞情况,TUNEL法观测细胞凋亡情况,并算出神经细胞凋亡指数计数(apoptosis index,AI)。结果三组大鼠视网膜组织均可见凋亡的视神经细胞,其中D+H组视神经细胞凋亡最多,D组凋亡数较D+H组减少,C组最少。D组、D+H组AI值均高于C组(均为P0.01),D组AI值又高于D+H组(P0.05),三组视网膜神经节细胞亡指数计数(AI)相比,差异有意义(P0.05),大鼠血糖表达水平C组正常,D组和D+H组均高于正常组,D+H组血糖较D组降低。结论橙皮苷对糖尿病大鼠具有抗视网膜神经细胞凋亡的作用从而能够延缓DR进展速度。     

右美沙芬对视网膜缺血保护作用的实验研究

目的 :观察美沙芬对视网膜缺血性损伤的保护作用。方法 :采用血管结扎方法建立家兔视网膜缺血模型 ,正常兔作为对照组 ,观察缺血组和美沙芬治疗组缺血 30min、6 0min和 75min视网膜中谷氨酸(Glu)含量及形态学不同时间的动态变化。结果 :发生缺血性损伤时缺血组和美沙芬组Glu的含量与正常组没有显著差异 (P >0 0 1) ,组间比较有显著性差异 (P <0 0 1)。随着缺血时间延长 ,视网膜内Glu含量逐渐减少 ,缺血组视网膜神经细胞特别是内颗粒层和神经节细胞持续丢失 ,而美沙芬治疗组视网膜细胞缺失现象明显减少。结论 :右美沙芬不抑制视网膜缺血后谷氨酸的释放 ,对缺血的视网膜神经细胞有明显的保护作用。     

针刺对慢性高眼压后兔模型视网膜细胞凋亡及ERK1和MAPK9的影响

目的:探讨针刺治疗对慢性高眼压后兔模型视网膜神经节细胞的保护作用及可能的作用机制。方法:选择新西兰兔,采用随机数字表法设为正常组、模型组、针刺组,其中模型组与针刺组以复方卡波姆诱导建立慢性高眼压后兔模型。造模2周后,针刺组给予毫针合谷(LI 4)、睛明(BL 1)、球后(Ex-HN 07)穴治疗,隔天1次,每周3次,共治疗4周;正常组和模型组不予处理。干预结束后,取各组兔眼球内视网膜组织,采用流式细胞仪测视网膜细胞凋亡情况,并以免疫组化法检测神经生长因子(NGF)信号通路下游通路的细胞外调节蛋白激酶-1(ERK1)、丝裂原活化蛋白激酶-9(MAPK9)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组左上象限晚期凋亡细胞占总细胞的百分比明显增高(P0.05);与模型组比较,针刺组晚期凋亡细胞占总细胞的百分比明显降低(P0.05)。与正常组比较,模型组与针刺组ERK1积分光密度水平均明显下降(P0.01);模型组MAPK9积分光密度水平有所上升,而针刺组明显下降(P0.05)。结论:针刺作用于慢性高眼压后兔模型,可在一定程度上降低视网膜细胞的凋亡率,且对MAPK下游信号分子MAPK9的表达有减弱作用。     

金纳多对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡的保护作用

目的 探讨金纳多对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡的保护作用及其可能机制.方法 将实验大鼠随机分为正常组、糖尿病未治疗组、糖尿病金纳多治疗组,四氧嘧啶制作糖尿病大鼠模型.10周后处死大鼠,并用原位末端标记法(TUNEL)标记大鼠视网膜凋亡细胞,光镜观察,取血测红细胞醛糖还原酶(AR)活性.结果 与正常组相比,糖尿病未治疗组红细胞AR活性及视网膜神经细胞凋亡数量均显著升高(P＜0.01);金纳多干预组与糖尿病未治疗组相比这些改变明显减轻(P＜0.01).结论 金纳多对大鼠早期糖尿病视网膜病变具有防治作用.     

丙泊酚干预对大鼠视神经损伤的影响及机制研究

目的探讨大鼠视神经损伤后丙泊酚干预对损伤视神经及视网膜神经节的影响及机制。方法 SD大鼠67只,随机取20只为正常组,不予任何处理。余行视神经钳夹法造模,造模成功42只纳入实验。随机分为:模型对照组和丙泊酚组,各21只/组。造模后4 d,以TUNEL法检测大鼠视网膜和视神经细胞凋亡,造模后7 d,RT-PCR、Western-blot检测视网膜和视神经节细胞组织Caspase-3、BCL-2基因和蛋白表达。造模后14 d,行闪光视觉诱发电位检测,处死大鼠取眼球,观察各组大鼠视网膜和视神经的病理形态,行视网膜神经节细胞计数。结果造模后4 d,丙泊酚组视网膜神经节细胞凋亡数量明显低于模型对照组(P0.05),造模后7 d与模型对照组相比,丙泊酚组Caspase-3的表达显著降低(P0.05);BCL-2的表达显著升高(P0.05)。造模后14 d,荧光金阳性RGC数:模型对照组最少,丙泊酚组较多,正常组最多,且各组之间差异有统计学意义(P0.05)。丙泊酚组大鼠闪光视觉诱发电位伏期较模型对照组大鼠短(P0.05)、波幅明显高于模型对照组(P0.05)。结论丙泊酚干预通过减少大鼠视神经钳夹后RGCs的凋亡,降低视网膜Caspase-3的表达,升高BCL-2的表达,对视神经损伤起到保护作用。     

雌激素对兔视网膜缺血再灌注损伤中视网膜神经节细胞凋亡及bcl-2表达的影响

目的:探讨兔视网膜缺血再灌注中视网膜神经节细胞凋亡及bcl-2表达的变化及苯甲酸雌二醇对其的影响.方法:将实验兔随机分为正常假手术组、缺血组、雌激素治疗组.缺血组和治疗组分为再灌注后3、6、12、24、72 h5个时间段.制作兔视网膜缺血再灌注损伤模型,通过用缺口末端标记法检测视网膜组织神经节细胞凋亡的变化;免疫组织化学过氧化酶法检测不同时段视网膜组织中的bcl-2的表达变化.结果:雌激素治疗组视网膜神经节细胞凋亡阳性细胞数在再灌注后12、24和72 h均低于缺血组(P＜0.05 ～P ＜0.01).治疗组bcl-2阳性细胞数在再灌注12、24和72 h均较缺血组显著增加(P＜0.01).结论:苯甲酸雌二醇可以增加视网膜缺血再灌注损伤时抗凋亡基因bcl-2在视网膜的表达,进而抑制细胞凋亡来实现其对视网膜缺血再灌注损伤的治疗作用.     

参麦注射液对培养鼠大脑皮层神经细胞缺氧损伤的保护作用

目的探讨参麦注射液对培养鼠大脑皮层神经细胞缺氧损伤的保护作用。方法将培养8d后生长良好的神经细胞随机分为正常组、模型组、参麦组和尼莫地平组;每组设3个培养瓶,正常组不作任何处理,其余3组均分别在缺氧后30min、1h、3h、6h和12h5个时间点造成神经细胞缺氧损伤模型。参麦注射液(1∶50)和尼莫地平(20μg/mL),分别在缺氧前24h及缺氧后加入,相差显微镜下观察神经细胞形态学的变化,测定DNA裂解率。结果参麦组和尼莫地平组的神经细胞在缺氧损伤后的形态学改变明显比模型组轻,DNA裂解率与模型组相比亦有显著性差异(P<0.05)。结论参麦注射液可能通过抑制细胞凋亡而对缺氧损伤的鼠大脑皮层神经细胞具有保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后尼莫地平对神经细胞凋亡影响的研究

目的研究大鼠脑缺血再灌注后尼莫地平对神经细胞凋亡的影响。方法雄性Wistar大鼠120只,随机分为空白对照组、假手术组、脑缺血组和尼莫地平组,后两组按时间分成再灌注1、3、6、12、24、36、48、72h和7d组。制作MACO动物模型致大鼠形成局灶性脑缺血,记录大鼠的神经功能缺损情况,应用TUNEL法检测脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的情况。结果大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡缺血组各时间点同正常对照组、假手术组相比均明显增高,且差异有统计学意义(P0.05);尼莫地平干预后可以显著减少大鼠脑缺血再灌注损伤后凋亡细胞数量(P0.05)。结论尼莫地平可以减少神经细胞凋亡,从而保护大鼠脑缺血再灌注后脑细胞的损害。     

肾损伤分子-1在肾小管上皮细胞缺氧损伤中的保护作用

目的 观察肾损伤分子-1(KIM-1)对肾小管上皮细胞缺氧损伤时增殖及凋亡的影响,证实KIM-1对肾缺氧损伤的保护作用.方法 以人近端肾小管上皮细胞HK-2为研究对象,用pcDNA-hKIM-1质粒转染HK-2细胞,获得稳定表达KIM-1的pcDNA-hKIM-1-HK2细胞株.观察pcDNA-hKIM-1-HK2细胞(A组)和KIM-1抗体预处理pcDNA-hKIM-1-HK2细胞(C组)在缺氧损伤后细胞活力、凋亡指标及凋亡相关信号分子表达,以未转染缺氧HK-2细胞(B组)作为对照.结果 A组细胞活力指数高于B组(0.427±0.046 vs.0.210±0.036,P＜0.05),细胞凋亡数量及流式细胞仪检测的缺氧早、晚期凋亡指数明显低于B组(P＜0.05).A组细胞缺氧时磷酸化ERK、磷酸化Akt表达较C组明显升高(P＜0.05).结论 KIM-1对肾小管上皮细胞缺氧损伤具有保护作用,其机制与激活PI3K-Akt/PKB和ERK信号通路抑制凋亡有关.     

尼莫地平对脑缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡及细胞色素C表达的影响

目的：：探讨尼莫地平对缺血再灌注大鼠脑组织细胞凋亡和细胞色素 C 蛋白(cytochrome C, Cytc)表达的影响。方法：将大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组,每组27只。采用线栓法栓塞大脑中动脉3 h 制作大鼠脑缺血再灌注模型;分别于6 h、12 h、24 h 用 TUNEL 法检测大脑皮层细胞凋亡、Western blot 检测大脑皮层 Cytc 蛋白的表达。结果：TUNEL 法和 Western blot 结果显示：(1)尼莫地平组各时间点神经细胞凋亡较模型组明显减少(P <0.01);(2)模型组 Cytc 蛋白各时间点表达较假手术组有显著性差异(P <0.01、P <0.05);(3)尼莫地平组各时间点较模型组有显著性差异(P <0.01)。结论：尼莫地平对脑缺血再灌注损伤保护机制与抑制 Cytc 蛋白表达有关。     

利鲁唑对急性高眼压致大鼠视网膜损伤的保护作用

目的 探讨腹腔内注射利鲁唑对急性高眼压所致的大鼠视网膜损伤的保护作用.方法 将120只大鼠分为正常对照组、高眼压对照组及利鲁唑干预组,每组40只.采用前房灌注的方式建立急性高眼压模型,免疫组化及末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP 缺口末端标记法(TUNEL) 分别测定3组大鼠再灌注后12、24、48、72 h的Caspase-3蛋白表达情况及大鼠视网膜各层细胞的凋亡水平,HE染色观察各组大鼠视网膜结构改变.结果 与高眼压对照组相比,利鲁唑干预组视网膜增厚及结构紊乱情况明显减轻,不同时间点Caspase-3的表达水平及凋亡细胞数明显降低(P< 0.05).结论 利鲁唑可减少大鼠急性高眼压损伤后视网膜神经节细胞凋亡,对视网膜具有一定的保护作用.     

缺血再灌注损伤后大鼠视网膜细胞凋亡与低氧诱导因子1α表达的关系

目的研究缺血再灌注损伤后大鼠视网膜细胞凋亡与低氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达变化并探讨两者的相关性。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组和缺血再灌注损伤1 d、3 d和5 d组（n=6）。眼前房灌注生理盐水调节大鼠眼压至110 mmHg并持续50 min,制作实验性视网膜缺血再灌注损伤模型。制备视网膜切片,测量内网层（IPL）、内核层（INL）厚度及节细胞层（GCL）细胞数;采用DNA原位末端标记（TUNEL）法检测视网膜凋亡细胞;免疫组织化学染色观察损伤后不同时间HIF-1α在视网膜细胞中的表达;采用RT-PCR检测HIF-1αmRNA的表达。结果缺血再灌注损伤1 d、3 d和5 d组大鼠的IPL和INL厚度显著小于正常对照组（P〈0.01）,GCL细胞少于正常对照组（P〈0.05）。视网膜细胞凋亡位于GCL;缺血再灌注损伤1 d、3 d和5d组的细胞凋亡率均明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。缺血再灌注损伤1 d、3 d、5 d组视网膜GCL的HIF-1α蛋白表达阳性细胞比例分别为（47.88±14.71）%、（50.28±13.11）%、（43.09±10.04）%,与视网膜细胞凋亡率呈正相关（r=0.953）。缺血再灌注损伤3 d组视网膜细胞HIF-1αmRNA表达明显高于正常对照组（P〈0.05）。结论缺血再灌注后大鼠视网膜细胞凋亡与HIF-1α的表达均增加,两者呈正相关;HIF-1α的表达可能参与视网膜细胞凋亡。     

逍遥散对肝郁气滞证视神经炎大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的:观察逍遥散对肝郁气滞证视神经炎大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的影响,为临床应用逍遥散治疗视神经炎提供实验室依据。方法:将60只大鼠按RAND函数随机分为正常组、肝郁气滞证视神经炎组(病证结合组)、逍遥散加肝郁气滞证视神经炎组(给药组),应用慢性应激方法建立肝郁气滞证动物模型,并采用EAE动物模型方法建立视神经炎动物模型,记录大鼠神经功能评分,光镜下观察视网膜形态学变化,利用上述指标评价造模成功。第14天、第28天时采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL法)光镜下观察并记录3组大鼠视网膜神经节细胞(RCGs)凋亡数量,计算各组凋亡指数并比较。结果:在免疫后第14天,除正常组外其余两组视网膜均出现不同程度的病理改变,在免疫后28 d,病证结合组视网膜的病变的程度和范围较治疗后14 d时重;TUNEL法检测,14 d时,正常组大鼠视网膜未见凋亡,病症结合组及给药组可见一定数量的凋亡,两组与正常组比较均有统计学意义(P0.05),28 d时,病证结合组及给药组大鼠仍可见一定数量的凋亡,但病证结合组大鼠RCGs较14 d增多,给药组大鼠较病证结合组大鼠凋亡数量减少,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:逍遥散对肝郁气滞证视神经炎有干预作用,一定程度上可以降低视网膜病变程度和降低视网膜神经节细胞的凋亡,其作用机制有待进一步探讨。     

心肾同治法对糖尿病大鼠视网膜神经营养因子的作用

目的探讨心肾同治法指导下所创密蒙花复方对糖尿病大鼠视网膜病变神经功能损伤的保护机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、密蒙花复方组。通过链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型。连续灌胃给药90 d,分别于第30、60、90天检测各组大鼠视网膜电生理指标,第90天时HE染色观察视网膜形态改变、TUNEL法检测视网膜神经节细胞凋亡及PCR、Western blot检测脑源性神经营养因子(BDNF)、视网膜睫状神经营养因子(CNTF)mRNA和蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠视网膜电图振荡电位(OPs)波幅及b波波幅降低,视神经功能下降,差异具有统计学意义(P0.01)。模型组视网膜神经节细胞肿胀,排列紊乱,数目减少,BDNF和CNTF mRNA及蛋白表达下降。密蒙花复方组与模型组比较,OPs、b波波幅升高(P0.01),视网膜神经节细胞凋亡数目减少,视网膜BDNF和CNTF mRNA及蛋白表达升高。结论密蒙花复方可通过调节视网膜神经营养因子BDNF和CNTF表达水平对糖尿病大鼠视网膜病变神经功能损伤起到保护作用。