氯硝柳胺抑制小胶质细胞炎症作用研究

目的:探讨氯硝柳胺对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞炎症作用的影响。方法:建立脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞系BV2炎症反应模型;采用Griess法检测细胞上清中NO释放量,MTT法检测细胞活性;实时定量PCR(qPCR)检测促炎症因子iNOS、COX-2、TNF-α和IL-6的表达量。分析氯硝柳胺对小胶质细胞炎症的影响。结果:氯硝柳胺能够显著抑制LPS激活的BV2细胞中NO释放量;qPCR结果显示,与正常细胞组相比,LPS组BV2中促炎因子的表达水平明显升高;氯硝柳胺显著降低LPS诱导的BV2细胞中促炎因子表达。结论:氯硝柳胺对LPS诱导的小胶质细胞炎症反应有明显抑制作用。     

肉豆蔻提取物对小鼠小胶质BV2细胞环氧合酶2表达的影响

目的探讨肉豆蔻提取物对小鼠小胶质BV2细胞的作用机制。方法运用WST-8法检测肉豆蔻提取物对小鼠小胶质BV2细胞生存率的影响,倒置显微镜观察其形态学改变,Western Blot检测脂多糖(LPS)所诱导的小鼠小胶质细胞环氧合酶2(COX-2)的表达。结果肉豆蔻提取物对小鼠小胶质BV2细胞无明显毒性;可抑制谷氨酸对小鼠小胶质BV2细胞的形态学损害;抑制LPS所诱导的小鼠小胶质BV2细胞COX-2的表达。结论肉豆蔻提取物对小鼠小胶质BV2小胶质细胞具有保护作用。     

紫铆因抑制脂多糖诱导小胶质细胞炎性反应的作用机制研究

目的 探讨紫铆因抑制脂多糖(LPS)诱导BV2小胶质细胞炎性反应的作用机制.方法 以LPS诱导BV2小胶质细胞活化建立体外神经炎症细胞模型.MTT法检测紫铆因对BV2细胞存活率的影响;qPCR法检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达水平;Western blot法检测各组细胞内核因子-κB(NF-κB) p65和ERK信号通路相关蛋白的表达变化;免疫荧光染色观察各组细胞内NF-κcB p65的核转录活性变化.结果 紫铆因干预BV2细胞24 h后,对细胞活力无明显影响;紫铆因能显著下调LPS诱导BV2细胞活化后炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平;紫铆因能明显降低LPS诱导BV2细胞活化后,ERK信号通路相关蛋白的磷酸化水平,并且能有效抑制NF-κB p65的核转录活性,阻止其向核内转移.结论 紫铆因可以抑制LPS诱导的小胶质细胞活化,降低BV2小胶质细胞的炎性反应.     

金银花提取物含药血清对正常的及LPS刺激的大鼠原代小胶质细胞释放NO的影响

目的运用血清药理学方法考察金银花提取物(louicera japonica thumb,LTE)含药血清对正常及细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的大鼠原代小胶质细胞释放一氧化氮(nitric oxide,NO)的影响。方法采用Griess比色法和四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethyl-2thiahiazoy1)-3,5-di-phenyl-tetrazolium bromide,MTT]法检测LTE含药血清对正常及LPS(1 mg/L)刺激48 h大鼠原代小胶质细胞释放NO的影响。结果LTE含药血清在不影响细胞存活率的情况下,可以明显降低正常及LPS刺激大鼠原代小胶质细胞NO的释放量。结论LTE含药血清具有抗炎及免疫抑制作用。     

黄芩苷对小鼠巨噬细胞CD36表达及肿瘤坏死因子-α分泌的影响

[目的]观察黄芩苷对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠巨噬细胞CD36表达及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌的影响.[方法]分别用LPS(终浓度0.1μg/mL)或LPS加黄芩苷(终浓度分别为50、100 μmol/L)处理生长良好的小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用实时荧光定量PCR法和流式细胞术检测黄芩苷对巨噬细胞CD36分子表达的影响,然后采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中TNF-α含量变化.[结果]LPS刺激可以诱导巨噬细胞CD36表达升高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);不同浓度黄芩苷预处理组可显著抑制LPS诱导的CD36基因转录和蛋白表达,与LPS组比较差异有统计学意义(P＜0.01);黄芩苷还可显著减少巨噬细胞炎症因子TNF-α的分泌(P＜0.05).[结论]黄芩苷可通过抑制CD36表达,下调LPS诱导的巨噬细胞炎症因子TNF-α的生成从而发挥抗炎作用.     

青蒿琥酯对脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞激活的抑制作用

目的 观察青蒿琥酯对脂多糖（LPS）诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的抑制作用.方法 LPS诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,观察青蒿琥酯（0.5、1.5、3.5 μmol/L）对细胞的作用.MTT检测细胞活性;Griess试剂法检测一氧化氮（NO）的释放;Western Blot检测核转录因子κB（NF-κB）的蛋白表达.结果 青蒿琥酯减少了活化的BV-2小胶质细胞NO的释放,降低了核内NF-κB的蛋白表达.结论 青蒿琥酯可能通过抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞NF-κB的激活从而抑制NO的产生,发挥抗炎作用。     

依达拉奉干预LPS介导原代小胶质细胞的激活实验

目的 探索依达拉奉 (edaravone, EDA) 对脂多糖 (lipopolysaccharide, LPS) 介导原代小胶质细胞 (Microglia) 激活后的一氧化氮 (nitric oxide, NO) 调控作用.方法 麻醉SD大鼠新生鼠断头取脑, 消化离心等实验方法完成混合胶质细胞的原代培养, 通过生物摇床方法分离、纯化小胶质细胞.利用Griess法检测一氧化氮释放量.结果 通过荧光方法鉴定小胶质细胞的纯化可达到95%以上, 与对照组 (Control) 相比, LPS介导小胶质细胞后激活可见NO浓度显著上升 (P<0.05) , 建模成功;用EDA预处理原代小胶质细胞24 h后, LPS介导的NO下调, 与LPS单独组比较, 差异有统计学意义 (P<0.05) .同时, EDA先预处理24 h, MAPK inhibitor (丝裂原活化蛋白激酶抑制剂) 预处理30 min, 10 ng/m L LPS介导小胶质细胞16 h, NO释放量显著降低, 差异有统计学意义 (P<0.05) .结论 EDA单独应用可抑制LPS介导原代小胶质细胞激活后NO的释放量;EDA同时加用MAPK信号传递通路抑制剂, 加强了EDA减轻LPS介导小胶质细胞激活NO产生.EDA可能与p38MAPK、JNK、ERK信号传导通路抑制剂协同抑制LPS介导的原代小胶质细胞激活有关.     

肉豆蔻提取物对BV2小胶质细胞激活的调控作用

[目的]探讨内豆蔻提取物对脂多糖所诱导的BV2小胶质细胞激活的影响．[方法]采用MTT法检测肉豆蔻提取物对BV2小胶质细胞的细胞毒性作用;运用Griess法检测细胞所释放的一氧化氮含量;运用HE染色法观察脂多糖和内豆蔻提取物对BV2细胞形态变化的影响．[结果]各质量浓度组肉豆蔻提取物作用于BV2小胶质细胞24h后,细胞生存率与对照组比较差异无统计学意义,但抑制脂多糖所诱导的一氧化氨的释放,并将多角形的活化形状恢复至静息态的圆形细胞．[结论]肉豆蔻提取物具有抑制BV2小胶盾细脯澌活的作用．     

黄芪苷对脂多糖诱导巨噬细胞一氧化氮和一氧化氮合酶表达的影响

[摘要] 目的：研究黄芪苷对小鼠巨噬细胞一氧化氮（NO）生成和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,取生长良好的细胞分别加入LPS（终浓度1μg/ml）和不同浓度黄芪苷（终浓度10,50,100μM）进行干预,并设空白对照组。取培养24h细胞上清,用Griess法检测NO生成量;取培养8h和24h细胞,分别提取细胞总RNA和蛋白,用RT-PCR法和Western Blot法检测iNOS基因和蛋白水平表达情况。结果：与空白对照组相比,LPS明显促进了RAW264.7细胞iNOS表达和NO的生成;加入黄芪苷可抑制 LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS mRNA和蛋白表达,减少NO的生成,与LPS组有显著性差别。结论：黄芪苷可明显降低LPS诱导的巨噬细胞iNOS表达和NO生成,这可能是其抗动脉粥样硬化斑块形成的作用机制之一。     

薯蓣皂苷元对脂多糖诱导的BV2小胶质细胞极化状态的影响

目的探讨薯蓣皂苷元(diosgenin)对脂多糖(LPS)诱导下BV2小胶质细胞极化状态的影响。方法将BV2细胞根据不同的处理方法分为对照组,LPS组,LPS+薯蓣皂苷元组。使用MTT法检测BV2细胞的增殖能力,使用ELISA法检测BV2细胞表达肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素10(IL-10)水平,使用实时荧光定量(RT-PCR)法检测BV2细胞IL-10,诱导型一氧化氮合酶(i NOS)以及精氨酸酶(Arg-1)mRNA水平。结果使用不同浓度的薯蓣皂苷元处理BV2细胞后,各浓度的薯蓣皂苷元对BV2细胞的增殖影响无统计学意义(P0.05),而加入LPS刺激后,发现25μg/ml薯蓣皂苷元为最适浓度,且其最佳作用时间点为24 h(P0.05);薯蓣皂苷元可以抑制在LPS诱导下BV2细胞TNF-α水平以及i NOS表达,同时提高IL-10水平以及Arg-1表达(P0.05)。结论薯蓣皂苷元可以通过抑制M1型小胶质细胞极化以及促进M2型小胶质细胞极化进而发挥抗炎的作用。     

汉黄芩素对脂多糖诱导的BV2细胞诱导型一氧化氮合酶表达的影响

[目的]探讨汉黄芩素对脂多糖(LPS)诱导的BV2细胞激活时所分泌的一氧化氮的产生以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.[方法]用10,100,500,1 000μg/L的LPS刺激小胶质细胞株BV2,并向LPS(100μg/L)中加入10,20,30μmol/L的汉黄芩素后再培养24h,采用Greiss法测定细胞外液所分泌的一氧化氮含量;应用Western-Blot及RT-PCR法分别检测iNOS蛋白和mRNA的表达.[结果]LPS高度激活BV2细胞,并且能使一氧化氮分泌增加,汉黄芩素呈剂量依赖性抑制一氧化氮的含量,同时抑制iNOS蛋白和mRNA的表达.[结论]汉黄芩素可有效抑制LPS激活的BV2细胞iNOS蛋白和mRNA的表达及一氧化氮的产生.     

汉黄芩素对小胶质细胞活化和迁移的影响

[目的]观察汉黄芩素对小胶质细胞活化和迁移的影响.[方法]建立小胶质细胞体外培养模型,给予脂多糖(LPS,100μg/L)及不同浓度的汉黄芩素(10,20,30μmol/L)后再培养12 h,采用ELISA法测定分泌到细胞外液中的单核细胞趋化因子(MCP-1)和激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)的含量.采用Transwell细胞培养室检测小胶质细胞的迁移,观察汉黄芩素对MCP-1诱导的小胶质细胞迁移的影响.[结果]LPS高度激活小胶质细胞并使MCP-1和RANTES分泌增加,汉黄芩素明显抑制MCP-1和RANTES的分泌(P<0.05).MCP-1诱导小胶质细胞增加迁移率,而汉黄芩素显著抑制MCP-1诱导的小胶质细胞迁移(P<0.01).[结论]汉黄芩素可抑制小胶质细胞的迁移率,其机制可能与抑制趋化因子MCP-1和RANTES的分泌有关.     

大黄酚对LPS诱导小胶质细胞炎性因子分泌的影响

[目的]抑制小胶质细胞的过度活化,对中风、神经退行性病变等疾病的治疗有重要意义。考察大黄酚对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞炎性因子分泌的影响。[方法]培养小胶质细胞细胞株,检测大黄酚对小胶质细胞活力及LPS诱导的小胶质细胞一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)产生的影响。[结果]与LPS相比,大黄酚可以抑制NO、TNF-α的分泌。[结论]大黄酚可以抑制LPS诱导小胶质细胞炎性因子的分泌。     

芒果苷对脂多糖诱导小鼠成骨细胞凋亡的影响及机制研究

目的 探究芒果苷对脂多糖诱导小鼠成骨细胞凋亡的影响及可能机制.方法 将小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞分为对照组、LPS组和LPS+芒果苷组,分别加入PBS缓冲液、脂多糖(LPS)、LPS+芒果苷.采用MTT法检测不同处理因素下各组成骨细胞的细胞存活率;qRT-PCR法检测各组细胞炎症因子TNF-α及细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2和Caspase-3基因mRNA的表达.结果 与对照组相比,LPS组MC3T3-E1细胞存活率明显降低,TNF-α、Bax和Caspase-3的mRNA表达明显升高,Bcl-2 mRNA表达明显下降;而与LPS组相比,LPS+芒果苷组MC3T3-E1细胞存活率明显提高,TNF-α、Bax、Caspase-3 mRNA表达明显下降,Bcl-2 mRNA基因表达明显升高,各组间差异均有统计学意义(P<0.05).结论 芒果苷可改善LPS导致的成骨细胞凋亡,其作用机制可能与芒果苷抑制LPS诱导的TNF-α形成及调节细胞内Bax、Bcl-2、Caspase-3产生有关.     

hADMSCs影响TLR4-TRIF信号通路诱导小鼠小胶质细胞表型极化的实验研究

目的研究人脂肪间充质干细胞（human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADMSCs）对小胶质细胞表型极化的影响及机制。方法取 C57/BL6小鼠BV-2小胶质细胞,以 hADMSCs+脂多糖（LPS）间接共培养,或以单纯LPS 培养。倒置显微镜下观察细胞形态。CCK-8法检测小胶质细胞增殖能力,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测小胶质细胞M1/M2表型标记物的影响,Western blot检测小胶质细胞Toll样受体4(TLR4)-β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)信号通路相关蛋白的表达。结果与单纯LPS培养相比,hADMSCs 加入后,小胶质细胞镜下形态相似,细胞增殖活性被抑制(P<0.05),M1表型标记物的基因表达减少(P<0.05),M2表型标记物的基因表达增加(P<0.05),TRIF、TLR4、干扰素调节因子3 (IRF3)和磷酸化IRF3 (P-IRF3)蛋白的表达水平降低(P<0.05)。结论hADMSCs可抑制脂多糖（LPS）诱导的BV2小胶质细胞M1促炎表型的极化,从而诱导其向保护型M2表型极化,此作用可能与其对TLR4-TRIF信号通路活化的抑制有关。     

敲减NLRP3抑制LPS诱导BV2小胶质细胞的炎症反应

目的 评价NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞活化的影响及意义。方法 设计shRNA质粒转染BV2小胶质细胞敲减NLRP3表达,应用qRT-PCR和蛋白质免疫印迹实验挑选转染效率最高序列。运用蛋白免疫印迹法检测细胞系中NLRP3表达情况;光镜下观察NLRP3-shRNA(shNLRP3)转染对细胞系形态学的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液炎症因子IL-18、IL-1β、TNF-α水平,免疫荧光染色观察小胶质细胞活化标志蛋白iNOS、Arg-1、Iba1表达。结果 NLRP3在LPS诱导的BV2细胞中高表达。NLRP3-mus-727组mRNA表达最低,沉默效果最好,蛋白免疫印迹结果显示细胞转染成功。光镜观察显示转染shNLRP3的BV2细胞系在LPS刺激后呈圆形、短梭形,与空白对照组静息态细胞相似。ELISA检测到转染shNLRP3的BV2细胞系在LPS刺激后促炎性介质IL-18、IL-1β、TNF-α和NO含量较阴性对照组(转染NC shRNA后给予LPS刺激)下降(均P<0.05);免疫荧光染色观察到转染...     

CD200 R1缺失促进脂多糖诱导的小胶质细胞内吞

目的 研究CD200R1对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小胶质细胞内吞功能的影响.方法 应用LPS激活小胶质细胞并通过荧光微球内吞实验观察小胶质细胞内吞水平的变化以及通过RT-qPCR检测CD200R1mRNA水平的表达,并在BV2-SH-SY5Y共培养模型中同样通过荧光微球内吞实验观...     

心脑舒通及其单体成分对内毒素激活的小胶质细胞的影响

[目的]研究心脑舒通及其单体成分对小胶质细胞(BV-2)的影响及其作用机制。[方法]实验分为对照组、脂多糖刺激组、加药组,检测心脑舒通(不同稀释倍数的心脑舒通及其单体成分)对小胶质细胞活力及脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞一氧化氮(NO)产生的影响。[结果]心脑舒通对LPS诱导的小胶质细胞NO的产生无明显抑制作用,在心脑舒通13种单体成分中,伪原薯蓣皂苷、支脱皂苷元、薯蓣皂苷元可以在不影响细胞活力的情况下抑制NO产生。[结论]心脑舒通部分单体成分抑制激活小胶质细胞NO的产生可能是心脑舒通发挥神经保护作用机制之一。     

白藜芦醇对脂多糖诱导的星型胶质细胞炎症损伤的保护作用

目的研究白藜芦醇(RES)对脂多糖诱导的星型胶质细胞炎症因子释放的抑制作用,探索其对中枢神经系统保护作用的可能机制。方法 GFAP免疫组化法鉴定星型胶质细胞的纯度。采用不同浓度的RES与星型胶质细胞共同培养12 h,然后进行LPS损伤24 h,检测不同实验组乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,cck-8法检测细胞存活率,Griess法检测NO释放量,Elisa法检测α-肿瘤坏死因子(TNF-α)表达量及Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达水平。结果离体培养的星形胶质细胞的阳性率为(95.49±1.86)%。LPS处理组细胞LDH漏出量升高,存活率降低,同时NO、TNF-α的释放量明显增加及iNOS蛋白的表达水平上调。测试浓度范围(5～50μmol/L)的RES能有效提高细胞存活率及降低LDH漏出量并呈现一定程度的剂量-反应关系。而在抑制NO、TNF-α释放及iNOS表达方面,只有25、50μmol/L的RES处理组有明显抑制作用,5μmol/L RES处理组与LPS处理组相比并无明显变化。结论较高浓度RES能明显抑制LPS诱导的星型胶质细胞炎症介质的释放,改善星型胶质细胞的炎症损伤,这种作用可能与抑制iNOS/NO的表达通路有关。     

根皮素抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞氧化应激反应

目的 探讨根皮素(phloretin, PHL)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)导致的BV2小胶质细胞的氧化应激损伤的抑制作用及可能的分子机制。方法 利用LPS建立BV2小胶质细胞的氧化应激损伤模型,对该模型予以不同浓度的PHL 预处理。利用MTS方法检测细胞活力。ELISA法检测氧化应激相关产物一氧化氮(nitric oxide,NO)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性。双荧光素酶活性检验方法检测抗氧化响应元件荧光素酶报告基因质粒(antioxidant reaction element luciferase reporter plasmid,ARE-LUC)报告基因转录活性。Western blotting法检测磷酸化核因子-E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)和血红蛋白加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达。结果 与对照组相比,LPS处理后的BV2小胶质细胞活力显著降低,氧化应激产物NO和MDA水平明显升高,GSH含量和SOD活性明显下降,但Nrf2磷酸化水平、ARE-LUC报告基因转录活性和HO-1蛋白表达略有增高。与模型组比较,高剂量PHL(20 μmol/L)预处理明显改善了LPS导致的BV2小胶质细胞活力下降,降低NO和MDA的含量,增高GSH的含量和SOD的活性,且进一步增加了Nrf2的磷酸化水平,上调ARE-LUC的转录活性和HO-1蛋白的表达。结论 PHL可以显著抑制LPS导致的BV2小胶质细胞的氧化应激损伤,Nrf2/ARE通路可能是根皮素发挥抑制BV2小胶质细胞氧化应激损伤作用的途径之一。