吡唑啉酮衍生物镉(Ⅱ)配合物诱导食管癌细胞凋亡与Bax和Bcl-2的关系

目的 研究吡唑啉酮衍生物镉(Ⅱ)配合物(Ls-17)对人食管癌细胞(Eca-109)的凋亡诱导作用及对细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.方法 MTT法检测Ls-17对Eca-109细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡、周期分布变化及线粒体膜电位的改变,caspase活性法检测caspase-3和9的变化,Western blot法分析Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果 Ls-17对Eca-109细胞增殖抑制的IC50值为25.12 mg·L-1,使细胞周期阻滞在G2/M期而导致细胞凋亡;能降低线粒体膜电位水平并激活caspase-3和9,使Bax/Bcl-2的比值增大.结论 Ls-17能够抑制Eca-109细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2的表达,使Bax/Bcl-2的比值升高有关.     

姜黄素诱导人肝癌细胞株Bel-7402凋亡

目的 探讨姜黄素对人肝癌Bel-7402细胞的增殖抑制、诱导凋亡及其分子作用机制.方法 用姜黄素10 μmol/L体外处理Bel-7402细胞48 h.采用MTT比色法检测细胞生长的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Bcl-2和Bax mRNA表达.结果 10 μmol/L姜黄素处理细胞48 h后呈现时间和剂量依赖性细胞增殖抑制作用;细胞凋亡率随着姜黄素浓度的增加而逐步增高,Bax mRNA表达上调,而Bcl-2 mRNA表达降低.结论 姜黄素对Bel-7402细胞有显著的增殖抑制及诱导凋亡作用,其作用机制可能与上调Bax基因的表达及下调Bcl-2基因的表达有关.     

五没食子酰基葡萄糖对卵巢癌HO-8910细胞凋亡调控基因表达与胱天蛋白酶凋亡途径的影响

目的探讨五没食子酰基葡萄糖(PGG)诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡的作用及诱导胱天蛋白酶凋亡途径的机制。方法 PGG 10,20,40和80μmol·L-1处理HO-8910细胞48,72和96 h后,MTT法检测细胞存活率;Hoechst 33258染色观察HO-8910细胞核形态改变,AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;Western印迹法检测细胞内胱天蛋白酶酶原及活性形式;RT-PCR检测凋亡调控基因Bax、Bcl-2、Bcl-XL、凋亡抑制因子1(CIAP-1)、CIAP-2、存活蛋白、神经元凋亡抑制蛋白(NIAP)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和细胞周期蛋白D1 mRNA表达。结果 PGG 10～80μmol·L-1分别作用48,72和96 h,随浓度的增加,细胞存活率明显降低,r分别为0.93,0.95和0.86(P<0.05)。PGG 40μmol·L-1使HO-8910细胞的细胞核染色质固缩,出现凋亡形态学改变,早期凋亡率从正常对照组的(0.6±0.1)%分别增加到(3.4±1.1)%,(9.8±3.7)%和(19±4.5)%,对晚期凋亡率影响不明显。PGG 20～80μmol·L-1使HO-8910细胞内胱天蛋白酶3,胱天蛋白酶7和胱天蛋白酶9及其底物多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的剪切水平增加,PGG20～80μmol·L-1均抑制死亡受体FAS的蛋白表达水平并使胱天蛋白酶8总剪切水平降低。PGG 20～80μmol·L-1抑制HO-8910细胞中细胞周期蛋白D1,Bcl-2,Bcl-XL和NIAP mRNA的表达,上调CIAP-1 mRNA的表达,对基因Bax,CIAP-2和XIAP mRNA表达影响不明显;PGG 20μmol·L-1抑制存活蛋白基因mRNA的表达,但是增加处理浓度却上调存活蛋白基因mRNA的表达。结论 PGG可能通过抑制凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL的表达从而诱导HO-8910细胞内胱天蛋白酶9依赖的内源性凋亡途径,并诱导细胞凋亡。     

马钱子碱对乳腺癌细胞MDA-MB-231作用的实验研究

目的本研究旨在观察马钱子碱（Brucine）对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制和诱导凋亡作用,并分析Brucine在诱导细胞凋亡过程中对Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的调控作用。方法人乳腺癌细胞株MDA-MB-231（雌激素受体阴性）细胞以L-15培养基体外培养,用MTT法测定Brucine对细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态;以碘化丙啶（PI）单染流式细胞仪检测细胞凋亡;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测Brucine对MDA-MB-231的诱导凋亡作用;Western蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase3的表达。结果Brucine对MDA-MB-231细胞有明显的增殖抑制作用;观察到典型的细胞凋亡形态学特征性改变;流式细胞术PI染色结果显示随着Brucine浓度的增加细胞凋亡率逐渐增高并呈明显的浓度依赖,与对照组相比差异有显著性（P〈0.05）;早期凋亡率和晚期凋亡率先增加后降低,但死亡细胞逐渐增加;且随着Brucine浓度的增加抗凋亡基因Bcl-2表达水平明显降低,而促凋亡基因Bax和Caspase-3表达明显增高。结论Brucine能够诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,其分子机制可能与激活Bax、Caspase-3和抑制Bcl-2等凋亡调控基因有关。     

雷公藤甲素诱导人肝细胞凋亡的机制

目的 探讨雷公藤甲素诱导人肝细胞L-02凋亡的机制.方法 将L-02细胞分为对照组和雷公藤甲素50 nM实验组,处理48 h后,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率、活性氧(ROS)的荧光强度,试剂盒检测细胞色素C的浓度以及半胱天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)和Caspase-3的活性,Western blot检测细胞中B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax)的表达.结果 与对照组相比,实验组细胞存活率下降,细胞凋亡率上升,Bcl-2表达下调,Bax表达、细胞色素C浓度、ROS荧光强度、Caspase-9和Caspase-3活性均明显上调(P＜0.05或P＜0.01).结论 雷公藤甲素可以抑制L-02细胞的存活,通过激活线粒体凋亡途径促进L-02细胞凋亡,下调Bcl-2与Bax比率,促进细胞色素C释放,诱导ROS生成,进一步破坏线粒体膜,增加细胞色素C的释放,激活Caspase-9和Caspase-3介导的细胞凋亡通路,最终诱导细胞凋亡.     

苦参碱对PC12细胞的毒性及线粒体损伤机制

目的研究苦参碱(MT)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)的毒性作用及其机制。方法用MT 2,4和8 mmol·L-1分别作用PC12细胞8,16,24和48 h,MTT法测定细胞存活率。PC12细胞经上述浓度的MT作用24 h后,采用Hoechst33342荧光染色法观察细胞形态变化,采用羟胺法和硫代巴比妥酸(TBA)法分别检测PC12细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)水平,JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位(MMP)的改变,Western蛋白印迹法检测胱天蛋白酶原3、胱天蛋白酶原9、活化的胱天蛋白酶3、Bax和Bcl-2蛋白水平。结果随着作用时间及浓度的增加,MT对PC12细胞的抑制作用逐渐增强。MT作用24 h后,与正常对照组相比,MT 2,4和8 mmol·L-1组的细胞数减少,出现染色质凝集和部分破裂的现象,且给药组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01);细胞内ROS和MDA含量显著增加(P<0.05,P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),且MMP降低;细胞内胱天蛋白酶原9、胱天蛋白酶原3和Bcl-2蛋白水平显著下降(P<0.01,P<0.05),活化的胱天蛋白酶3和Bax蛋白水平显著上升(P<0.05,P<0.01);且Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.01)。结论 MT对PC12细胞具有一定毒性作用,其机制可能与细胞内活性氧堆积而引起线粒体途径诱导细胞凋亡有关。     

新型孕激素衍生物3α-羟基-3β-甲氧基甲基-16,17-亚甲基-孕甾-20-酮对硝普钠损伤PC12细胞的保护作用

目的探讨新型孕激素衍生物3α-羟基-3β-甲氧基甲基-16,17-亚甲基-孕甾-20-酮(CPU)对硝普钠(SNP)诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用及其机制。方法用终浓度为0.01,0.10,1.00μmol·L-1的CPU预处理30 min,然后加入SNP共同作用24 h。采用MTT法检测细胞存活率,分光光度计法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化;流式细胞仪检测活性氧(ROS)、线粒体膜电位和细胞凋亡率;Western蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax和活化的胱天蛋白酶3蛋白表达水平。结果与细胞对照组比较,SNP模型组PC12细胞的存活率显著降低,LDH的释放明显增加(P<0.01),MDA生成增多,SOD活性降低,ROS水平升高,线粒体膜电位水平降低,细胞凋亡率由细胞对照组(1.20±0.14)%增加至(55.52±3.56)%(P<0.01);Bcl-2蛋白表达降低,而Bax表达升高,Bax/Bcl-2比值升高,同时胱天蛋白酶3被激活(P<0.01)。与模型组比较,CPU 0.01,0.10和1.00μmol·L-1作用24 h后,细胞存活率显著升高,LDH的释放减少(P<0.01),MDA的生成量减少,SOD活性增加,ROS累积减少,线粒体膜电位水平升高(P<0.01);凋亡细胞分别降至(37.79±4.85)%,(22.31±4.25)%和(10.39±2.65)%;Bcl-2蛋白表达增加,Bax和活化的胱天蛋白酶3表达降低。结论 CPU对SNP所致损伤的PC12细胞有一定的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化和抗凋亡作用有关。     

羟基红花黄素A拮抗IL-1β诱导软骨终板细胞凋亡的作用机制

目的探讨羟基红花黄素A(hydroxy safflower yellowA,HSYA)对IL-1β诱导小鼠软骨终板细胞凋亡的拮抗作用。方法用10μg.L-1的IL-1β诱导正常软骨终板细胞退变,分别制备不同浓度的HSYA培养基作为干预措施,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测凋亡相关基因的表达水平。采用Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2蛋白表达量,细胞免疫荧光分析各组Bax、Bcl-2细胞内定位。结果不同浓度的HSYA培养基均能拮抗IL-1β诱导的软骨细胞凋亡。流式细胞分析结果显示各浓度HSYA可以降低IL-1β诱导的小鼠椎间盘软骨终板细胞的凋亡比例;RT-PCR结果显示各浓度HSYA可拮抗IL-1β诱导细胞上调Bax基因表达,下调Bcl-2基因表达作用;细胞免疫荧光结果显示HSYA 10-5 mol.L-1给药组可下调Bax表达,上调Bcl-2表达;Western blot结果显示HSYA 10-5 mol.L-1和HSYA10-6 mol.L-1均可以拮抗IL-1β诱导细胞上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达作用。结论羟基红花黄素A具有拮抗IL-1β诱导小鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡的作用。     

姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的 研究姜黄素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖抑制和诱导凋亡作用.方法 MTT法检测姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;流式细胞术(FCM)PI单染检测细胞周期;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 姜黄素对MCF-7细胞生长有明显抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;姜黄素能使MCF-7细胞阻滞在G1/S期,可以诱导细胞凋亡,Bax蛋白表达上调,而Bcl-2的表达减少.结论 姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有显著的抑制作用并可诱导细胞凋亡.其分子作用机制可能与其上调Bax基因表达水平的同时下调Bcl-2基因表达水平,从而诱导细胞凋亡有关.     

两种藤梨根制剂促凋亡作用的实验研究

目的研究两种藤梨根制剂促进人食管癌Eca-109细胞凋亡的机制及差异。方法采用MTT比色法检测藤梨根正丁醇药液及乙酸乙酯药液在不同浓度(1μg/mL、10μg/mL、100μg/mL等)及不同时间(24h、48h、72h等)对Eca-109细胞生长的抑制作用;采用TUNEL法检测其对癌细胞生长的诱导凋亡效应;采用免疫组化SP法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及caspase的表达。结果藤梨根正丁醇药液对人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用,随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强,其生长抑制率可达87.2%。两种藤梨根制剂对瘤细胞有明显的凋亡效应,而在对照组未见有明显凋亡现象。瘤细胞作用24h、48h、72h后分别与对照组比较,用药组Bax蛋白表达明显增强(P<0.01);同时伴有Bcl-2表达减弱,72h后最明显,差异有显著意义(P<0.01)。藤梨根正丁醇药液促进caspase-3、caspase-9表达明显增强,而对caspase-8表达影响较小。藤梨根乙酸乙酯药液作用于肿瘤细胞时也可观察到类似的效应,且正丁醇药液对肿瘤细胞生长的抑制率高于乙酸乙酯药液。结论藤梨根可通过下调Bcl-2表达,激活caspase-9、caspase-3诱导Eca-109细胞凋亡。     

微RNA-24对过氧化氢诱导的人脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响及作用机制

目的探讨微RNA-24(miR-24)对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)存活、迁移和凋亡的影响及作用机制。方法通过转染miR-24高表达、miR-24抑制物(anti-miR-24)及其阴性对照慢病毒质粒(miR-24 NC)构建稳转细胞,3种细胞用H2O2500μmol·L^-1处理12 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,划痕实验检测细胞迁移率,Hoechst33258染色及流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-24,Bax,Bcl-2和胱天蛋白酶3 mRNA表达水平,Western印迹法和免疫细胞化学法检测Bax、Bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白表达水平。结果与miR-24 NC组比,miR-24高表达组miR-24表达升高(P<0.05),而anti-miR-24组降低(P<0.05)。与正常对照组比,H2O2组细胞凋亡率增加(P<0.05)、细胞存活和迁移率降低(P<0.05),表明氧化损伤模型构建成功。与H2O2+miR-24 NC组比,H2O2+miR-24高表达组上述指标较H2O2+miR-24 NC组升高(P<0.05),促凋亡蛋白Bax和胱天蛋白酶3 mRNA与蛋白表达量增加,抑凋亡蛋白Bcl-2 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),而H2O2+anti-miR-24组可降低细胞凋亡率、增加细胞存活和迁移率,降低Bax和胱天蛋白酶3 mRNA与蛋白表达水平,增加Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论氧化应激状态下,miR-24可通过上调Bax、胱天蛋白3表达和下调Bcl-2蛋白表达,促进HUVEC凋亡和抑制其存活和迁移能力。     

尼美舒利对人食管癌细胞Eca-109 COX-2表达及生长的抑制作用

目的研究环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞株COX-2表达和细胞增殖及凋亡的影响。方法MTT法测定尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞增殖的抑制率;RT-PCR法检测Eca-109细胞COX-2mRNA表达变化;流式细胞仪检测COX-2蛋白表达、细胞周期时相分布及凋亡率的变化;光镜和琼脂糖电泳法进一步观察细胞凋亡。结果尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞有较强的抑制作用,有明显的时间和浓度依赖性;呈浓度依赖性下调Eca-109细胞COX-2 mRNA及蛋白表达;可使Eca-109细胞G0/G1期比例增高,S期细胞减少,增殖指数降低,凋亡细胞增多。结论尼美舒利可能通过对COX-2表达的下调而诱导凋亡和细胞周期阻滞,从而抑制人食管癌Eca-109细胞生长。     

姜黄素对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的研究姜黄素对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究。方法选取肝癌细胞系SMMC-7721(50株),根据处理方式的不同分为对照组、姜黄素组。细胞计数试剂盒(CCK-8)方法检测两组细胞的增殖,流式细胞仪检测两组细胞的凋亡。比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白(caspase)-3酶的活性,用Western印迹方法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果姜黄素组的细胞增殖率低于对照组(P<0.05)。姜黄素组的细胞凋亡率高于对照组(P<0.05)。姜黄素组的caspase-3酶的活性高于对照组(P<0.05)。姜黄素组的Bax表达高于对照组,Bcl-2的表达低于对照组(P<0.05)。结论姜黄素能诱导SMMC-7721细胞凋亡,其机制可能与caspase活性升高、Bax表达增加、Bcl-2表达减少有关。     

姜黄素抑制淋巴瘤细胞周期蛋白水平的研究

目的:探讨姜黄素对淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖和细胞周期的影响。方法:6.25~100μmol.L-1的姜黄素分别处理Raji细胞12~60h后,MTT法检测Raji细胞的生长活性;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡;蛋白印迹法(W estern B lot)分析姜黄素作用前后,肿瘤细胞中周期蛋白E以及相应视网膜母细胞瘤基因Rb的表达。结果:姜黄素可呈时间及剂量依赖性抑制Raji细胞的增殖,抑制率为59.83%~91.46%。流式细胞仪检测Raji细胞,凋亡率为14.38%~61.18%。姜黄素刺激Raji细胞24h内周期蛋白E和视网膜母细胞瘤基因Rb蛋白表达显著增强(P<0.05),但随着姜黄素浓度增高而表达下调,呈剂量依赖性下调。结论:姜黄素能干扰细胞周期进程,其作用机制为诱导Raji细胞的凋亡,下调周期蛋白E的表达,从而抑制其相应视网膜母细胞瘤基因Rb的表达,可能是其作用机制之一。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷诱导Hela细胞凋亡及其机制的研究

目的研究花色素苷与矢车菊素-3-葡萄糖苷对人宫颈癌细胞株Hela细胞体外增殖作用并从细胞学和分子生物学水平探讨其作用机制。方法从黑米中提取出花色素苷,再分离出矢车菊素-3-葡萄糖苷单体;用不同浓度的花色素苷和矢车菊素-3-葡萄糖苷分别处理Hela细胞后,CCK-8法测细胞生长抑制率;Hoechst 33258染色,激光共聚焦镜下观察细胞形态;流式细胞仪检测凋亡率;SABC染色检测Bax/Bcl-2的蛋白表达。结果25~400 mg/L花色素苷和12.5~200μmol/L矢车菊素可抑制Hela细胞生长,抑制率呈时间剂量依赖性;激光共聚焦镜下可见到明显的凋亡细胞;流式细胞仪检测药物处理后出现明显凋亡率;药物可使Bax表达上调,Bcl-2表达下降。结论花色素苷与矢车菊素-3-葡萄糖苷都可抑制Hela细胞生长,诱导其凋亡,其诱导凋亡的作用的机制与凋亡相关基因促凋亡基因Bax表达上调,抗凋亡基因Bcl-2表达下调有关。     

腺苷诱导人食管癌EC109细胞凋亡及其内质网分子机制

目的探讨内质网应激途径在腺苷诱导食管癌EC109细胞凋亡中的作用。方法腺苷2 mmol.L-1作用于EC109细胞24～72 h或腺苷0.5～4 mmol.L-1作用于EC109细胞36 h,MTT法观察腺苷对EC109细胞存活率的时效和量效关系;免疫荧光法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78),胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3,转录因子CHOP和核因子κB(NF-κB)的表达及亚细胞定位;原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡;Western蛋白印迹法检测内质网应激相关蛋白表达。结果腺苷对EC109细胞生长具有明显的抑制作用。腺苷2 mmol.L-1与EC109细胞作用24,36,48和72 h,细胞存活率分别为(57.7±15.0)%,(56.5±11.1)%,(43.8±5.7)%和(28.8±4.1)%,呈时间依赖性下降(r=0.9192,P<0.01);腺苷0.5,1,2和4 mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,随药物浓度增加,细胞存活率依次为(83.1±11.2)%,(67.9±6.7)%,(55.3±5.0)%和(45.4±5.4)%,呈浓度依赖性降低(r=0.8252,P<0.01)。腺苷0.5～4mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,细胞凋亡率分别为(15.5±1.1)%,(28.2±0.8)%,(40.1±2.2)%和(50.6±1.3)%,与对照组(2.1±0.3)%相比均明显增加(P<0.05)。腺苷2 mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,与正常对照组相比,GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3和CHOP表达明显增强(P<0.05,P<0.01),胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3和CHOP发生核易位。GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3、CHOP和NF-κB表达呈浓度依赖性增加(rGRP78=0.9471,r胱天蛋白酶4=0.8977,r胱天蛋白酶3=0.968,rCHOP=0.9762,rNF-κB=0.9471,P<0.05)。结论腺苷可诱导人食管癌EC109细胞凋亡,其分子机制可能与内质网应激凋亡途径的启动有关。     

己酮可可碱联合骨髓间充质干细胞对高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡及氧化应激的影响

目的探讨己酮可可碱(PTX)联合骨髓间充质干细胞(MSC)对高糖诱导下小鼠肾小球系膜细胞凋亡和氧化应激的影响。方法葡萄糖30 mmol·L~(-1)刺激培养12 h的小鼠肾小球系膜细胞,肾小球系膜细胞分为细胞对照组、高糖组、高糖+MSC组(高糖系膜细胞与MSC按1∶10共培养)、高糖+MSC+PTX 0.1,0.3和1.0 mmol·L~(-1)组,孵育48 h。酶联免疫法检测系膜细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量;流式细胞术检测系膜细胞凋亡;Western印迹法检测系膜细胞中Bcl-2,Bax,胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9蛋白表达水平。结果与细胞对照组相比,高糖组系膜细胞的SOD活性显著降低,MDA和ROS含量显著升高(P<0.01)。与高糖组相比,高糖+MSC组、高糖+MSC+PTX 0.1,0.3和1.0 mmol·L~(-1)组SOD活性显著升高,MDA和ROS含量显著降低(P<0.01)。与细胞对照组相比,高糖组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);Bax、胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9蛋白表达水平显著升高(P<0.01),但Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与高糖组相比,高糖+MSC组、高糖+MSC+PTX 0.1,0.3和1.0 mmol·L~(-1)组细胞凋亡率显著降低(P<0.01);Bax、胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论 PTX联合MSC可通过减少肾小球系膜细胞凋亡以及抑制其氧化应激来改善糖尿病肾病。     

栀子苷抗H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的实验研究

目的探讨栀子苷对氧化应激诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的抑制作用及可能机制。方法体外培养的HUVEC细胞用不同浓度的栀子苷药物预处理24h后,加入终浓度为500μmol·L-1H2O2氧化损伤12h。荧光染色法观察细胞内DNA损伤情况,流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化,Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,酶免法测定caspase-3蛋白酶的活性,Real-time PCR检测超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的mRNA表达。结果与模型组相比,不同浓度栀子苷(12.5、25、50mg·L-1)可以明显改善H2O2对细胞内的DNA氧化损伤,降低细胞凋亡率,下调Bax蛋白表达,逐步恢复Bcl-2/Bax表达比例和线粒体膜电位的改变,降低caspase-3蛋白酶活性,上调细胞内Mn-SOD和GPx的表达,但对Bcl-2的表达无影响。结论栀子苷可以抑制H2O2诱导的HUVEC细胞凋亡,其机制可能与调节线粒体应激途径和发挥抗氧化损伤功能有关。     

姜黄素通过改变FAK表达和激活caspase诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡

目的研究姜黄素诱导U251细胞凋亡机制。方法20~100μmol·L-1姜黄素分别处理U251细胞24h后,MTT法测定姜黄素对U251细胞的细胞抑制作用及各种caspase抑制剂对姜黄素作用的影响;通过流式细胞仪检测细胞凋亡;透射电镜观察细胞形态学变化;用免疫细胞化学分析姜黄素对FAK(focal adhesion kinase,粘着斑激酶)蛋白质表达的影响;荧光分光光度法检测caspase-3活性的改变。结果姜黄素明显抑制U251细胞的增殖;诱导U251细胞凋亡;FAK蛋白表达减少;caspase-3活性增强,各种caspase抑制剂可抑制姜黄素诱导的U251细胞凋亡。结论姜黄素通过抑制FAK蛋白的表达和激活caspase途径可诱导U251细胞凋亡。     

小檗胺对大鼠骨肉瘤UMR-106细胞凋亡的影响

目的:探讨小檗胺体外对大鼠骨肉瘤UMR-106细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法:用不同浓度的小檗胺(0,2,4,8,16,32mg.L-1)分别处理UMR-106细胞,作用时间分别为24,48,72h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测小檗胺对UMR-106细胞增殖的抑制作用。用不同浓度的小檗胺(0,4,8,16mg.L-1)分别处理UMR-106细胞24h后,采用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率(Annexin/PI染色),采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞内Bcl-2、Bax水平,采用分光光度法检测caspase-3的活性。结果:小檗胺对UMR-106细胞的作用呈时间-剂量依赖性,孵育72h、32mg.L-1的小檗胺对UMR-106细胞的作用最强,抑制率接近90%;24,48,72h的IC50分别为24.69、8.03和3.54mg.L-1。空白对照组和小檗胺处理组细胞凋亡率分别为(1.64±0.29)%,(3.58±0.31)%,(6.3±0.5)%和(11.3±1.1)%。同时,小檗胺可以诱导细胞坏死;此外,小檗胺剂量依赖性地降低Bcl-2,增高Bax,降低Bcl-2/Bax比值,并增强caspase-3的活性。结论:小檗胺体外能抑制UMR-106细胞增殖并诱导细胞凋亡或坏死,其诱导凋亡的机制可能与降低Bcl-2/Bax比值,增强caspase-3的活性有关。