丹酚酸A对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的研究丹酚酸A对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(H2O2)诱导的HUVECs氧化损伤模型,观察丹酚酸A(10,20和40μg·mL-1)对血管内皮细胞损伤的保护作用,MTT法检测细胞存活率,试剂盒检测细胞上清液中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO),比色法测定Caspase-3的活性。结果丹酚酸A可抑制H2O2诱导的血管内皮细胞的凋亡,同时增加SOD的活性,降低MDA的水平,减少LDH的漏出量,增加NO的释放,降低Caspase-3的活性。且丹酚酸A的上述作用均呈质量浓度依赖性。结论丹酚酸A可以有效保护内皮细胞免受氧化损伤。     

金樱子提取液对H2O2诱导HaCaT细胞氧化损伤保护作用研究

目的探讨金樱子提取液对H2O2诱导后人角质形成细胞(HaCaT cell)氧化损伤的保护作用。方法体外培养人角质形成细胞,用不同浓度的H2O2诱导细胞构建氧化应激损伤模型。CCK-8法检测不同浓度金樱子提取液对细胞增殖作用的影响;Hochest染色法检测不同浓度金樱子提取液对细胞凋亡作用的影响。结果100μmol·L-1 H2O2为构建氧化应激损伤模型的最适浓度。CCK-8法检测结果表明金樱子提取液能显著提高细胞的增殖,且随浓度的升高而增大。Hochest染色结果表明金樱子提取液能有效抑制由H2O2氧化损伤引起的细胞凋亡。结论金樱子提取液对H2O2诱导后的人角质形成细胞具有一定的氧化损伤保护作用。     

阿托伐他汀对缺氧致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的观察阿托伐他汀对缺氧导致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法体外培养HUVECs,建立缺氧模型,采用MTT法测定细胞增殖,透射电子显微镜技术观察细胞的微观结构;检测细胞培养液中LDH、NO、ET-1、Ang-Ⅱ及6-keto-PGF1α水平。结果阿托伐他汀能够促进缺氧HUVECs的增殖,稳定细胞的微观结构,显著降低细胞内LDH的释放及ET-1的分泌(P<0.01),提高NO、PGI2的分泌(P<0.01)。结论阿托伐他汀对缺氧导致HUVECs损伤具有明显的保护作用。     

血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究

目的观察血管紧张素-(1-7) [Ang-(1-7)]对血管紧张素II(Ang II)致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用.方法体外培养的HUVECs随机分为4组对照组,AngII组,Ang-(1-7)组,AngII+Ang-(1-7)组.采用分光光度计测定培养的HUVECs乳酸脱氢酶(LDH)漏出;流式细胞仪检测细胞凋亡;硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定HUVECs上清液中一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)的含量.结果与对照组比较,Ang II(0.1 μmol·L-1)显著增加HUVECs LDH漏出(P＜0.01)、ET-1分泌(P＜0.01)和HUVECs凋亡率(P＜0.01),显著减少NO的含量(P<0.05);Ang-(1-7)呈剂量依赖性抑制了Ang II的促LDH漏出、ET-1分泌、增加细胞凋亡等作用,同时明显促进HUVECs的 NO释放;单用Ang-(1-7)对HUVECs无明显影响.结论 Ang-(1-7)可抑制Ang II所致的体外培养HUVECs损伤,对内皮细胞具有保护作用.     

六味地黄方含药血清对H_2O_2致HUVECs损伤的保护作用

目的研究六味地黄方(LWDHF)含药血清对过氧化氢(H2O2)损伤的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的保护作用,并阐明其可能的机制。方法采用400μmol·L-1H2O2复制HUVECs损伤模型,LWDHF含药血清分为3个剂量干预组(体积分数为5%、10%、20%);MTT法测定细胞活力,Hoechst染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态,Annexin VFITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡情况,RT-PCR法检测Bax、Caspase-3等基因mRNA表达,Western blot法检测Caspase-3、Bax等蛋白表达。结果 LWDHF含药血清能明显促进H2O2损伤后的HUVECs增殖;Hoechst染色和Annexin V-FITC/PI双染法结果均显示LWDHF含药血清抑制血管内皮细胞凋亡;RT-PCR和Western blot结果提示LWDHF抑制H2O2所致的血管内皮细胞凋亡可能是通过降低Caspase-3、Bax mRNA和蛋白的表达,升高Bcl-2 mRNA和蛋白表达实现的。结论 LWDHF含药血清可以抑制H2O2诱导的细胞凋亡,对血管内皮细胞具有一定的保护作用。     

红车轴草总黄酮对H_2O_2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的观察红车轴草总黄酮对H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法利用体外培养的人脐静脉血管内皮细胞ECV-304,采用H2O2诱导细胞损伤模型,观察红车轴草总黄酮对H2O2所致的血管内皮细胞损伤的保护作用。MTT法检测细胞存活率、试剂盒测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及细胞中丙二醛(MDA)的含量、乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量;荧光法检测Caspase-3的活性;Hoechst33342及PI荧光染色法观察红车轴草总黄酮对H2O2诱导血管内皮细胞凋亡的影响;JC-1染色法检测红车轴草总黄酮对H2O2损伤血管内皮细胞线粒体膜电位的影响,检测各组细胞内ROS的表达水平。结果与空白对照组相比,H2O2损伤组细胞存活率降低、细胞内LDH,漏出量增加(P<0.001);抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活性降低、MDA含量升高(P<0.01);Caspase-3活性升高(P<0.001)、ROS含量升高、线粒体膜电位降低;与模型组相比,红车轴草总黄酮各剂量组(12.5、25、50mg.L-1)及槲皮素组(30 mg.L-1)细胞存活率明显增加(P<0.01,P<0.05),红车轴草总黄酮各剂量组(12.5、25、50 mg.L-1)及槲皮素组(30 mg.L-1)均能明显降低LDH漏出量(P<0.01,P<0.05)、明显增强SOD、CAT及GSH-Px活力(P<0.01,P<0.05)、降低MDA、ROS含量及Caspase-3活性(P<0.05,P<0.01)、升高线粒体膜电位(P<0.01)。结论红车轴草总黄酮对H2O2诱导的内皮细胞损伤有明显的保护作用,其初步作用机制可能与抗自由基,减轻脂质过氧化、降低Caspase-3活性及稳定线粒体膜电位有关。     

羊栖菜多糖对氧化应激人成纤维细胞的保护作用

目的研究羊栖菜多糖对氧化应激的人皮肤成纤维细胞的保护作用及机制。方法以0.8 mmol/L H2O2诱导人皮肤成纤维细胞建立氧化应激模型,MTT法测定不同浓度羊栖菜多糖(15、30、60mg/L)对过氧化氢(H2O2)损伤人皮肤成纤维细胞增殖的影响,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡,流式细胞仪测定细胞周期分布。测定细胞丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、还原性谷胱甘肽(GSH)水平和活性氧(ROS)水平。结果羊栖菜多糖可抑制H2O2对人皮肤成纤维细胞增殖活性的下降和凋亡率的上升,维持细胞正常形态。流式细胞仪检测表明,羊栖菜多糖能显著降低H2O2损伤的细胞G0/G1期阻滞现象;升高SOD和GSH-Px活力,降低MDA和ROS水平,升高GSH水平,差异有统计学意义且具有剂量依赖性(P<0.05,P<0.01)。结论羊栖菜多糖能减轻H2O2对人皮肤成纤维细胞的氧化损伤,具有较好的抗氧化保护作用,与其增强抗氧化酶活性,降低脂质过氧化有关。     

阿托伐他汀对缺氧致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的观察阿托伐他汀对缺氧导致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法体外培养HUVECs,建立缺氧模型,采用MTT法测定细胞增殖,透射电子显微镜技术观察细胞的微观结构;检测细胞培养液中LDH、NO、ET-1、Ang-Ⅱ及6-keto-PGF_1α水平。结果阿托伐他汀能够促进缺氧HUVECs的增殖,稳定细胞的微观结构,显著降低细胞内LDH的释放及ET-1的分泌(P<0.01),提高NO、PGI₂的分泌(P<0.01)。结论阿托伐他汀对缺氧导致HUVECs损伤具有明显的保护作用。     

白刺总黄酮及单体化合物对过氧化氢损伤内皮细胞的修复作用研究

目的:研究白刺总黄酮及单体化合物对过氧化氢(H2O2)损伤内皮细胞的修复作用及机制。方法:用H2O2诱导血管内皮细胞损伤,以酶标仪检测细胞内一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)以测定氧化的程度,评价黄酮单体化合物槲皮素、山柰酚、异鼠李素的药理作用。结果:不同浓度的黄酮单体化合物槲皮素、山柰酚、异鼠李素可促进受损的内皮细胞修复,同时提高SOD、NOS、GSH-PX活力和NO水平。结论:白刺总黄酮及单体化合物具有保护血管内皮细胞损伤的作用,其中山柰酚的修复作用最强,其机制与其抗氧化作用有关。     

栀子苷对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用

目的研究栀子苷对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(Hy-drogen peroxide,H2O2)建立体外培养的HUVEC细胞氧化应激损伤模型。将细胞分为正常对照组、H2O2氧化损伤组、H2O2加栀子苷低、中、高剂量组,其中后3组给予栀子苷预培养24h后加入400μmol.L-1H2O2,然后继续培养12h。MTT法检测细胞存活率;检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)水平和培养液中一氧化氮(NO)水平;检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期改变。结果栀子苷能明显提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率,提高细胞内SOD、GSH-Px、NOS活性,使培养液中NO含量增加,降低细胞内ROS水平,减少H2O2诱导的细胞凋亡率,恢复血管内皮细胞增殖。结论栀子苷具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,可减轻血管内皮细胞的氧化损伤。     

新生儿心力衰竭时血浆内皮素、降钙素基因相关肽和心钠素的变化及其临床意义

目的：了解血浆内皮素（ＥＴ－１）、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）和心钠素（ＡＮＦ）在新生儿心力衰竭的作用和地位。方法放射性同位素免疫分析法直接测定２８例心力衰竭新生儿不同病程时血浆中ＥＴ－１、ＣＧＲＰ和ＡＮＦ含量,并与２０例正常新生儿对比。结果心衰发生时ＥＴ－１、ＣＧＲＰ、ＥＴ－１ＣＧＲＰ、ＥＴ－１／ＡＮＦ均明显高于对照组（Ｐ〈０．０１、Ｐ〈０．０５、Ｐ〈０．０１、Ｐ〈０．０１）,ＡＮＦ水平两组间无     

多奈哌齐对人脐静脉内皮细胞损伤的防护作用研究

目的 探讨多奈哌齐对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的防护作用,并研究其作用机制.方法 将实验细胞平均分为对照组、模型组、多奈哌齐组,通过过氧化氢建立细胞损伤模型,采用细胞计数试剂盒( CCK-8)法检测细胞存活率,通过光镜观察细胞形态,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡的形态学变化,蛋白质印迹测定细胞中锰超氧化物歧化酶(MnSOD)蛋白表达.结果 多奈哌齐组与模型组比较,细胞存活率明显增加,且差异有统计学意义[(60.8±12.2)％比(44.7±9.3)％,P＜0.05];多奈哌齐组皱缩细胞数量介于模型组和对照组处理组之间;而多奈哌齐组细胞凋亡数量和程度均较模型组降低,差异有统计学意义[(30.8±10.4)％比(45.1±14.1)％,P＜0.05];此外,蛋白质印迹试验结果表明,多奈哌齐组细胞MnSOD蛋白表达强于对照组.结论 多奈哌齐可以明显减少过氧化氢诱导的HUVEC损伤,提高细胞存活率.多奈哌齐对于过氧化氢诱导的内皮细胞损伤的防护作用可能通过上调MnSOD的表达来实现.     

植物雌激素α-ZAL对oxLDL诱导人内皮细胞中ET-1基因表达的抑制作用及其抗氧化机制

目的通过氧应激信号转导通路探讨植物雌激素αZAL对oxLDL诱导人脐静脉内皮细胞中ET1基因表达的抑制作用。方法用荧光探针DCF检测内皮细胞活性氧的含量;采用RTPCR方法对ET1mRNA的表达进行分析,运用WesternBlot法测定了ERK、pERK和cjun/AP1蛋白的表达;同时测定了内皮细胞上清液中ET1的分泌的变化,利用瞬时转染技术观察了内皮细胞的AP1报告基因的活性。结果实验结果表明αZAL对oxLDL诱导的ET1的分泌有抑制作用(P<0.05),它可能通过抗氧化作用阻断oxLDL诱导的内皮细胞氧应激的产生;并能抑制oxLDL诱导的内皮细胞AP1的激活(P<0.05)。结论研究发现αZAL可能是通过氧应激激活细胞外信号调节激酶,进一步通过调节ET1基因上的核转录因子AP1结合位点来抑制oxLDL诱导内皮细胞的ET1基因表达。     

阿伐他汀对内皮素-1诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的观察阿伐他汀对内皮素-1(endothelin-1 ET-1)诱导的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblast,CFs)增殖和胶原合成的影响及可能机制.方法经差速贴壁法培养新生大鼠CFs,随机分为4组空白对照组,ET-1(10-6 mol/L)组,阿伐他汀(1.0×10-4 mol/L)组,ET-1 阿伐他汀(10-7～10-4 mol/L)组.采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞数目,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期,液体闪烁计数仪测定[3H]-脯氨酸掺入率,硝酸还原酶法测定上清液中NO含量.结果与空白对照组比较,ET-1(10-6 mol/L) 孵育细胞 48 h 后可显著增加MTT比色法测定的CFs吸光度A490值和[3H]-Pro掺入率,降低CFs生成NO的量(P＜0.01);随着阿伐他汀浓度的增高,CFs的A490值和[3H]-Pro掺入率呈明显的递减趋势(P＜0.01),促进CFs NO的生成(P＜0.01);细胞周期分析表明,与空白对照组比较ET-1能显著提高S期细胞百分率(P＜0.01),1.0×10-4 mol/L 阿伐他汀抑制ET-1诱导S期细胞百分率上升(P＜0.01).结论阿伐他汀呈浓度依赖性抑制ET-1诱导的CFs增殖和胶原合成,该作用可能与NO生成有关.     

Omapatrilat对AngⅡ致人血管内皮细胞损伤的保护作用研究

目的观察Omapatrilat对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法体外培养HUVECs,随机分为4组:空白对照组,AngⅡ组,Omapatrilat组和AngⅡ+Omapatrilat组。分光光度计测定培养的HUVECs乳酸脱氢酶(LDH)的漏出,流式细胞仪技术检测细胞周期,硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定HUVECs上清液中一氧化氮(NO)和内皮素(ET1)含量。结果10-7mol·L-1AngⅡ可增加HUVECsLDH漏出和ET1释放,Omapatrilat(10-6mol·L-1)对此具有明显抑制作用,同时它可促进HUVECs增殖和NO释放。结论Omapatrilat可减弱AngⅡ导致的体外培养HUVECs损伤,对内皮细胞具有保护作用。     

Cytoprotective effects of CSTMP, a novel stilbene derivative, against H2O2-induced oxidative stress in human endothelial cells

A novel stilbene derivative, (E)-2-(2-chlorostyryl)-3,5,6-trimethylpyrazine (CSTMP), was designed and synthesized based on the pharmacophores of tetramethylpyrazine (TMP) and resveratrol (RES). In the present study, we investigated the protective effects of CSTMP on vascular endothelial cells under oxidative stress and elucidated its molecular mechanisms. The radical scavenging activity of CSTMP was assessed by the DPPH test. Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVECs) were exposed to 150 μM hydrogen peroxide (H(2)O(2)) for 12 h, resulting in a decrease of cell viability assessed by the MTT assay and an increase of apoptotic cells assessed by the nuclear staining assay and flow cytometry. The activities of lactate dehydrogenase (LDH), superoxide dismutase (SOD) and nitric oxide synthase (NOS) and the contents of malondialdehyde (MDA), reduced glutathione (GSH) and nitric oxide (NO) in cells were determined by commercial kits. The expression levels of pro-apoptotic factor caspase-3 and anti-apoptotic signal ERK1/2 were detected by western blot. The results showed that CSTMP had a moderate anti-oxidative effect against the DPPH test, which was less than RES. Co-incubation with CSTMP increased the cell viability, markedly reduced the LDH leakage from the cells and decreased the lipid peroxidation. These effects of CSTMP were accompanied by increasing activity of the endogenous antioxidant enzyme SOD, the level of GSH, the production of NO and cNOS activity. Moreover, CSTMP showed stronger effects on the inhibition of apoptosis, caspase-3 expression, and the activation of phosphorylated ERK1/2 compared to RES. Furthermore, CSTMP could inhibit the expression of phospho-JNK and phospho-p38 induced by H(2)O(2). These results suggest that CSTMP prevents H(2)O(2)-induced cell injury through anti-oxidation and anti-apoptosis via the MAPK and caspase-3 pathways.     

ERK1/2介导H_2O_2预处理对抗氧化应激损伤的保护作用

目的探讨H2O2预处理能否激活ERK1/2及ERK1/2在H2O2预处理引起的适应性细胞保护中的作用。方法在PC12细胞,建立H2O2预处理对抗高浓度H2O2诱导细胞损伤的实验模型。应用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印迹法(Western blot)测定ERK1/2蛋白的表达及procaspase-3的表达。结果100μmol.L-1H2O2预处理PC12细胞90min能明显地保护PC12细胞对抗300μmol.L-1H2O2引起的损伤,使细胞存活率增加,细胞凋亡率降低及procaspase-3增多。H2O2预处理对ERK1/2具有明显的激活作用:诱导胞质ERK1/2磷酸化及促进其核转移。在H2O2预处理前30min应用ERK1/2抑制剂UO126(10μmol.L-1)可明显地阻断H2O2预处理的抗细胞毒性及抗细胞凋亡作用。结论H2O2预处理能激活ERK1/2,ERK1/2介导H2O2预处理的适应性细胞保护作用。     

替米沙坦对体外培养的人脐动脉平滑肌细胞表达ICAM-1和ET-1影响

目的：考察替米沙坦对体外培养的人脐带动脉血管平滑肌细胞（HUASMCs）表达细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和内皮素-1（ET-1）影响,为临床应用替米沙坦治疗高血压等疾病提供参考。方法：采用组织块贴壁法培养HUASMCs。取传3代的细胞进行α-actin肌动蛋白免疫组化染色法鉴定。取传3代细胞,分别加入1,10,100 μg·mL^-1 3种质量浓度替米沙坦细胞培养液,于加药后48 h进行试验。分别采用RT-PCR法和ELISA法,检测替米沙坦对HUASMCs表达ICAM-1和ET-1 mRNA和蛋白的影响。结果：组织块贴壁法成功培养出HUASMCs,传第3代细胞呈现明显的HUASMCs特性。低、中、高3种作用浓度的替米沙坦均可抑制HUASMCs表达ICAM-1和ET-1 mRNA（P<0.05）,也均可抑制HUASMCs表达ICAM-1和ET-1蛋白（P<0.05）,且抑制作用均呈浓度依赖性（P<0.05）。结论：替米沙坦可使体外培养的HUASMCs表达ICAM-1和ET-1下调。     

Involvement of endothelial cell-derived CGRP in heat stress-induced protection of endothelial function

Previous studies have shown that heat stress possesses cardioprotection, which is related to the synthesis and release of calcitonin gene-related peptide (CGRP) via activation of capsaicin receptor (vanilloid receptor subtype 1, VR1) on the capsaicin-sensitive sensory neurons. The VR1 exists in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Endothelial cells can synthesize CGRP and CGRP could protect against endothelial dysfunction induced by lysophosphatidylcholine (LPC) or oxidized low-density lipoprotein. In the present study, we explored whether the endothelial cell-derived CGRP is involved in the effect of heat stress on endothelial function in vivo and in vitro. Our results indicated that heat stress significantly increased the plasma concentration of CGRP, which was abolished by pretreatment with capsazepine, a VR1 antagonist. Immunohistochemistry and in situ hybridization showed that the endothelium of mesenteric artery and aorta expressed CGRP. And heat stress increased the expression of CGRP, which was also abolished by capsazepine. LPC attenuated the endothelium-dependent relaxation responses of aorta rings, which were improved by pretreatment with heat stress. In cultured HUVECs, the CGRP secretion was increased after heat stress. LPC increased the lactate dehydrogenase (LDH) activity in the cultured medium and decreased the cell viability, suggesting that LPC injured the HUVECs. However, pretreatment with heat stress attenuated the injurious effects of LPC on HUVECs. And this beneficial effect of heat stress on HUVECs was inhibited by capsazepine or CGRP(8-37), the CGRP receptor antagonist. The present results suggest that the endothelial cell-derived CGRP contributes to the protective effects of heat stress on endothelial function. Our study provides a potential mechanism to explain the protective effect of heat stress on cardiovascular system.     

降糖复方含药血清对氧化损伤内皮细胞的保护作用

目的：研究降糖复方含药血清对H2O2诱导的血管内皮细胞氧化损伤的保护作用。方法：采用H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞（ECV304）氧化损伤模型,观察细胞形态学变化并测定细胞活力、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量,NO含量以及内皮素（ET-1）含量。结果：降糖复方含药血清可明显改善氧化损伤的ECV304细胞形态学变化,提高细胞存活率,降低MDA含量、提高SOD活力、增加NO释放、减少ET-1释放。结论：降糖复方含药血清能对抗H2O2对血管内皮细胞的氧化损伤,起到保护血管内皮细胞的作用。