多药耐药相关蛋白在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 研究人肝细胞癌组织中多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）的表达情况并探讨其临床意义。方法 采用免疫组织化学方法检测了１１０例随访资料完整的肝细胞癌石蜡切片组织中ＭＲＰ表达情况，并与临床病理指标联系，进行统计学分析。结果 本组肝细胞癌１１０例，表达阳性５７例，其阳性率为５２％。术前行经肝动脉栓塞化疗（ＴＡＣＥ）及未行ＴＡＣＥ治疗者的ＭＲＰ阳性率分别为５１％（１９／３７）和５２％（３８／７３）。ＭＲＰ与癌     

葡萄糖调节蛋白94在人肝癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨葡萄糖调节蛋白94(Crp94)mRNA及蛋白在肝癌组织和癌旁组织中的表达情况及其与肝癌发生的关系.方法 肝癌患者手术切除标本10例,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测肝癌组织和癌旁组织细胞Grp94 mRNA基因的相对表达量,并通过免疫组织化学SP法检测10例肝癌组织和癌旁组织标本Crp94蛋白的表达情况.结果 (1)半定量RT-PCR显示:Grp94 mRNA在肝癌组织中均呈高表达,相对表达量为0.7490±0.7508,而在对应的癌旁组织中呈低表达或无表达,相对表达量为0.446 62±0.50000两组之间差异有统计学意义(P《0.05).(2)免疫组织化学及图像分析结果显示:在肝癌组织和癌旁组织中Grp94蛋白平均灰度扫描值分别为158.0800±20.5952、122.2800±24.4148两组之间差异有统计学意义(P《0.01).结论 Grp94在肝癌中的表达明显增高,可能在肝癌的发生、发展过程中发挥重要作用.     

多药耐药相关蛋白基因在原发性肝细胞癌组织中的表达及意义

目的　研究原发性肝细胞癌及其癌周肝组织中多药耐药相关蛋白 (MRP)基因的表达及意义。方法　用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 2 5例新鲜原发性肝细胞癌及其癌周肝组织中MRPmRNA的表达 ,用免疫组织化学技术LSAB法检测 60例肝细胞癌组织中MRP蛋白的表达 ,并结合流式细胞仪对体外化疗药物敏感性的检测结果进行统计学分析。结果　原发性肝细胞癌组织中MRPmRNA与MRP蛋白表达阳性率分别为 44 .0 0 % (11/2 5 )和 45 .0 0 % (2 7/60 ) ,均以中、低表达为主 ,明显高于癌周肝组织中MRPmRNA和MRP蛋白的表达阳性率〔2 8.0 0 % (7/2 5 )、2 6.67% (16/60 )〕 ,P<0 .0 5 ;5例复发性肝癌的MRP蛋白表达阳性率和表达强度呈增高的趋势。在RT PCR检测的 2 5例患者中 ,该两项指标具有良好的一致性 (P<0 .0 5 )。肝细胞癌在体外对化疗药物 5 FU、DDP、ADM、MMC及CTX的敏感性分别为 (15 .80± 7.63 ) %、(18.45± 9.5 9) %、(17.95± 7.99) %、(16.60± 8.69) %和 (17.40± 10 .14 ) %。MRP蛋白表达阳性者对 5 FU、ADM的敏感性低于阴性者 (P<0 .0 5 )。结论　MRP基因在原发性肝细胞癌组织中的表达可能在肝癌内在性和获得性耐药中起重要作用 ,检测MRP基因表达有助于预测化疗反应和选择合理的化疗方案。     

Survivin在肝细胞性肝癌中的表达及其临床意义

为研究survivin 与肝细胞肝癌（HCC）临床特征的关系，探讨其对HCC的早期诊断及治疗的意义。笔者应用免疫组织化学(SABC)法,检测survivin在39例HCC组织、4例正常肝组织和8例肝硬化组织中的表达，并分析HCC及不同病理学特征与survivin蛋白表达的关系。结果示， HCC组织、正常肝组织、肝硬化组织中survivin基因的阳性表达率依次为61.3%，0%和0%;HCC组织与后2组间差异有显著性(P<0.05);随HCC分化程度的降低, survivin的阳性表达率明显上升(P<0.05)。提示survivin的表达水平在HCC的发生、发展中具有重要意义,有望成为一新的肿瘤标志物而应用于临床。     

细胞S期激酶相关蛋白2、p16蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的 观察细胞s期激酶相关蛋白2(SKP2)、p16蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达,探讨它们之间的关系及其临床意义.方法 利用组织芯片和免疫组织化学技术检测SKP2、p16蛋白在89例非小细胞肺癌,10例肺良性病变组织中的表达.结果 NSCLC组织中SKP2、p16蛋白表达阳性率分别为(23.52±13.57)%、(44.72±15.97)%,均与肺良性病变组织差异有统计学意义(2.91±1.27)%、(91.13±6.57)%(P＜0.01).SKP2蛋白在NSCLC组织中的表达水平与细胞分化程度,病理类型,TNM分期密切相关(P＜0.01),而与淋巴结转移差异无统计学意义(P＞0.05).p16蛋白在NSCLC组织中的表达水平与细胞分化程度,病理类型,TNM分期,淋巴结转移密切相关(P＜0.01).NSCLC组织中SKP2、p16蛋白表达呈负相关(r=-0.309,P＜0.01).NSCLC组织中SKP2蛋白表达率与患者生存时间呈负相关(r=-0.241,P＜0.01),p16蛋白表达率与患者生存时间呈负正相关(r=0.144,P＜0.01).结论 SKP2蛋白表达增高与p16蛋白表达降低共同在NSCLC的发生发展中起促进作用,且它们对NSCLC患者的预后也有相反的影响.     

p16基因蛋白在肝癌中的表达及其意义

目的研究ｐ１６基因在肝细胞癌中的表达,探讨ｐ１６基因与肝细胞癌的关系。方法采用免疫组织化学方法,检测２５例肝细胞癌及癌旁组织中ｐ１６基因蛋白的表达。结果①ｐ１６蛋白在肝癌组织与癌周肝组织中的表达差异有显著意义（Ｐ＜０．０１）。②ｐ１６蛋白的表达与ＨＣＣ分化程度关系密切（Ｐ＜０．０５）,而与肿瘤大小、ＡＦＰ值无密切关系（Ｐ＞０．０５）。结论ｐ１６基因蛋白的表达与肝癌的恶性程度有非常密切的关系。ｐ１６基因在肝细胞癌变过程中起一定作用。     

Survivin在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨Survivin在原发性肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其在肝癌发病机制中的作用和临床意义.方法 利用免疫组织化学S-P法检测50例原发性肝癌组织、20例正常肝组织中Survivin蛋白表达情况.结果 Survivin蛋白在肝癌中的阳性表达率为66.0%(33/50),显著高于正常肝组织组(均为阴性表达;P<0.001),阳性表达与肝癌的肝内转移和肝癌的多发性有关(P=0.019,P=0.030);Survivin的过表达与病人术后<3年生存期相关(P=0.018).结论 Survivin在肝细胞癌的发生及发展过程中起着不同程度的作用,检测Survivin对判定原发性肝细胞癌预后可提供一定的依据.     

p73蛋白在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的　探讨p73蛋白在肝细胞性肝癌中的表达及其临床病理意义。方法　采用免疫组 织化学SABC法检测p73蛋白在肝癌和癌旁组织中的表达水平,并分析其与肝癌临床病理特征的关 系。结果　38例肝癌组织中有22例p73蛋白呈阳性表达,阳性表达率为57.9%,而癌旁组织无1例 呈阳性表达,低分化、有转移的肝癌组织中p73蛋白水平明显高于高分化、无转移的肝癌组织。结论 p73蛋白在肝癌组织中表达上调,可能在肝癌的发生、发展过程中起着重要的作用。     

凋亡抑制蛋白FLIP在肝癌组织中的表达和意义

目的检测凋亡抑制蛋白FLIP在人肝癌不同分化组织中的表达并揭示其在肝癌发生发展中的意义。方法采用免疫组织化学技术，分析86例肝癌标本（采用经典的Edmondson四级分级法，Ⅰ级18例，Ⅱ级25例，Ⅲ级21例，Ⅳ级22例），肝癌Hepg2细胞系1株细胞爬片的10样本中FLIP蛋白的表达并进行统计学分析比较。结果凋亡抑制蛋白FLIP在86例肝癌标本中有72例阳性表达（83．72％），Ⅰ级13／18（72．22％），Ⅱ级20／25（80．00％），Ⅲ级18／21（85．71％），Ⅳ级21／22（95．45％）（P〈0．05）；在肝癌Hepg2细胞系细胞爬片10个样本中全部阳性表达（100％），（P〈0．01）。结论凋亡抑制蛋白FLIP在肝癌组织中呈阳性表达；不同分化的肝癌组织其表达阳性率不同，分化越差其阳性表达率越高；这可能为揭示肝脏恶性肿瘤的发生、发展提供新的理论依据，并为肝癌的有效治疗提供新的思路。     

乳腺癌耐药蛋白在肝癌多药耐药中的作用及其机制探讨

目的研究乳腺癌耐药蛋白(breastcancer resistance protein,BCRP)在肝癌中的表达及其意义。方法通过培养液中ADM浓度递增诱导法筛选培养,建立HepG2/ADM肝癌多药耐药细胞株;采用荧光定量PCR及免疫组织化学技术,分别在mRNA和蛋白质水平检测BCRP在正常肝细胞系L02、肝癌细胞系HepG2及HepG2/ADM与未经化疗的癌组织、多次化疗后的癌组织、癌旁组织的表达差异。结果HepG2/ADM的BCRPmRNA表达是HepG2的9倍(P<0.01);L02和HepG2中BCRPmRNA的表达无差异(P>0.05);化疗后病人癌组织BCRPmRNA平均表达是未化疗病人癌组织的4.2倍(P<0.01);化疗病人癌组织BCRPmRNA平均表达是癌旁组织的3.4倍(P<0.01);未化疗病人癌和癌旁组织间的表达无差异(P>0.05);免疫组织化学显示BCRP在胞膜表达;BCRPmRNA和蛋白表达具有一致性。结论HepG2/ADM多药耐药细胞株是一个较好的研究肝癌多药耐药的模型。BCRP基因在正常肝细胞中表达,而在多次化疗后的病人和HepG2/ADM中表达上调,提示化疗药物诱导BCRP的表达,BCRP的高表达与肝癌多药耐药有关。     

小干扰RNA沉默多药耐药相关蛋白基因2对人肝癌细胞HepG2多药耐药的逆转作用

目的 检测小干扰RNA(siRNA)对肝癌耐药细胞株HepG2/阿霉素(ADM)多药耐药相关蛋白基因2(MRP2)及其蛋白产物的抑制作用,观察对多药耐药性的影响.方法 使用浓度梯度法制作HepG2耐ADM细胞株(HepG2/ADM),ADM浓度从0.1～2.0 m/L:设计合成针对MRP2的siRNA小片段,转染HepG2/ADM耐药细胞,24 h后通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测siRNA对MRP2基因mRNA和蛋白的抑制效果;噻唑蓝(MTT)比色法观察抑制MRP2基因表达后,HepG2/ADM细胞对化疗药物的敏感性变化,并计算各药物的半数抑制浓度(IC50).结果 HepG2/ADM对ADM、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱和奥沙利铂的IC50值分别为0.3204、3.8002、0.2014和0.1221;siRNA明显抑制了HepG2/ADM细胞MRP2基因mRNA和蛋白的表达(P＜0.05);转染MRP2-siRNA后,HepG2/ADM细胞对ADM、5-Fu、长春新碱和奥沙利铂的IC50值明显减小,分别为0.1023、1.4417、0.0452和0.0268.结论 用siRNA沉默MRP2基因能够逆转HepG2/ADM细胞对化疗药物的耐药性,MRP2基因与HepG2/ADM肝癌细胞的多药耐药性相关,可通过沉默MRP2基因提高耐药细胞对化疗药物的敏感性.     

原发性肝癌多药耐药基因的表达及其意义

目的 探讨５种多药耐药（ＭＤＲ）基因肝癌组织中的表达,建立ＭＤＲ的基因诊断标准。方法 用逆转录－聚合酶链（ＲＴ－ＰＣＲ）方法,流式细胞术检测肝癌组织中５种ＭＤＲ基因ｍＲＮＡ和蛋白质的表达,用四氮唑蓝快速比色（ＭＴＴ）法检测抗癌药物对肝癌原代细胞的ＩＣ５０值。结果 肝癌耐药涉及ｍｄｒ１,ＭＲＰ,ＬＲＰ,ＧＳＴｐ１和ＴｏｐｏⅡα基因,ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ≥０．５、ＭＲＰｍＲＮＡ≥０．６、ＬＲＰ ｍｒｎＡ     

乙肝病毒X蛋白对肝癌细胞多药耐药的影响

目的观察乙肝病毒（HBV）X蛋白对肝癌多耐药性产生的影响，探讨肝癌多药耐药的形成与乙肝病毒感染的关系。方法应用脂质体介导技术稳定转染peDNA3／HBX质粒至HepG2人肝癌细胞株，噻唑蓝（MTr）法检测阿霉素及丝裂霉素作用下转染前后细胞的存活率，An—nexin／PI法流式细胞分析术检测转染前后细胞在受到5-氟尿嘧啶（5-Fu）作用后的凋亡指数（AJ），逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术分别检测转染前后HepG2内多药耐药相关基因在mRNA和蛋白水平的表达。结果MTr法显示阿霉素和丝裂霉素作用下，转染了peDNA3／HBX质粒的HepG2细胞的IC50明显高于对照组（P〈0．05）。5-Fu作用后转染组和对照组的AJ分别是（9．83±1．50）％VS（17．79±1．70）％，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。整合了HBX基因的HepG2细胞内多药耐药相关基因在mRNA和蛋白水平的表达也均高于未转染细胞，转染前后比较在mRNA水平mdrl、MRPl、LRP基因的表达分别提高了190％、68％、95％；而在蛋白水平p—gp、MRPl、LRP的表达分别提高了64．3％、87．5％和90．8％。结论乙肝病毒X蛋白可上调HepG2细胞内多药耐药相关基因的表达，从而促进肝癌多药耐药性的产生。     

耐药相关蛋白在肾癌中的表达

为探讨耐药相关蛋白（ＭＲＰ）在肾癌中表达的意义，应用免疫组化ＬＳＡＢ法检测２０例肾癌组织中ＭＲＰ表达。结果：ＭＲＰ阳性表达率为６０％，在胞浆和胞膜上均见表达，但以胞浆中（粗颗粒状）更显著。晚期肾癌（Ⅲ、Ⅳ期）阳性表达率为８９％，明显高于早期肾癌（Ⅰ、Ⅱ期）的３６％，Ｐ＜００５。结果认为ＭＲＰ与肾癌浸润转移相关，并可能是其内源性耐药的重要机制之一     

多药耐药相关蛋白在肝癌多药耐药细胞系HePG2/ADM中的作用

目的研究4种耐药蛋白：多药耐药蛋白（multi—drug resistance protein 1，MDR1），多药耐药相关蛋白1（multi—drug resistance related protein 1，MRP1），肺耐药蛋白（lung resistance protein，LRP），乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）在肝癌多药耐药中的作用。方法通过培养液中阿霉素（adriamycin，ADM）浓度递增诱导法筛选培养，建立HePG2／ADM肝癌多药耐药细胞株；采用real time荧光定量PCR检测四种耐药蛋白mRNA在正常肝细胞系L02、肝癌细胞系HePG2及HePG2／ADM中的表达差异；Western blot检测3种细胞系中4种耐药蛋白的表达。结果（1）建立HePG2／ADM细胞系。MTT法检测阿霉素对HePG2／ADM细胞IC50为亲本细胞的282倍（P〈0．05）。（2）HePG2／ADM中MDR1和BCRP mRNA表达分别是HePG2的400倍（F=87．49，P〈0．05）和9倍（F=1006，P〈0．05）。MRP1和LRP mRNA表达差异无统计学意义（FMRPI=3．43，FLRP=2．44，Pall〉0．05）。（3）L02和HePG2中4种耐药蛋白mRNA的表达均无差异（FMDRI=1006，FBCRP=87．49，FMRPI=3．43，FLRP，=2．44，Pall〉0．05）。（4）Western blot检测发现HePG2／ADM细胞中MDR1，BCRP，LRP蛋白表达显著高于HePG2和L02细胞（FMDHI=28．68，FBCRP=18．60，FLRP=6．28，Pall〈0．05），MRP1蛋白表达不增高（FMRPI=0．70，P〉0．05）。（5）4种耐药蛋白表达在HePG2和L02细胞差异均无统计学意义（FMDRI=28．68，FBCRP=18．60，FMRPI=0．70，FLRP=6．28，Pall〉0．05）。结论MDR1和BCRP在HePG2／ADM多药耐药中起重要作用，HePG2／ADM多药耐药与MRP1和LRP可能无关。     

原发性肝癌多药耐药基因的表达及意义

目的 探讨５种多药耐药（ＭＤＲ）基因在肝癌组织中的表达,建立ＭＤＲ的基因诊断标准。方法 用逆转录ＰＣＲ、流式细胞术检测肝癌组织中５种ＭＤＲ基因ｍＲＮＡ和蛋白质的表达,用ＭＴＴ法检测抗癌药物对肝癌原代细胞的ＩＣ５０值。结果 肝癌耐药涉及ｍｄｒ１、ＭＲＰ、ＬＲＰ、ＧＳＴＰ１和ＴｏｐｏⅡα基因。ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ≥０．５、ＭＲＰ ｍＲＮＡ≥０．６、ＬＲＰ ｍＲＮＡ≥０．８、ＧＳＴＰ１ ｍＲＮＡ≥０．７Ｔ ＴｏｐｏⅡαｍＲＮＡ≤０．４为耐药联合诊断标准,符合率为９８．００％。结论 多重ＭＤＲ是肝癌耐药的主要形式。用逆转录ＰＣＲ方法联合检测５种ＭＤＲ基因ｍＲＮＡ表达在肝癌化疗敏感性预测中具有必要性和可行性。     

Ku80基因在人原发性肝癌组织中的表达及其生物学意义

目的 探讨Ku80基因在人原发性肝癌的表达及其表达水平与肝癌的生物学特征的关系.方法 采用免疫组织、细胞化学技术及Westem blot技术,检测40例在同济医院肝脏外科中心行手术切除的原发性肝细胞癌患者的肝癌组织及癌旁组织、肝癌细胞系HepG2细胞及正常肝细胞系L02细胞中Ku80的表达,分析Ku80表达水平与肝癌、肝癌的分化程度及转移特性的关系.结果 Ku80在肝癌组织中的表达明显低于在癌旁肝组织中的表达,分别为14.95%和43.78%,差异有统计学意义(P<0.01);Ku80在低分化肝和中、高分化肝癌组织中的表达率分别为16.05%和13.85%,差异无统计学意义(P>0.05);伴有门静脉癌栓和不伴有门静脉癌栓的肝癌组织中Ku80的表达率分别为14.81%和16.31%,差异无统计学意义(P>0.05).结论 Ku80基因在人原发性肝细胞癌组织中表达显著下调,表明Ku80表达下调与原发性肝细胞癌的发生密切相关,但与肝癌的分化程度、转移特征无明显相关.     

microRNA-616在肝癌中的表达及临床意义

目的:探讨micro RNA-616(mi R-616)在肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义。方法:应用实时定量PCR检测80例HCC患者的肿瘤组织与癌旁组织标本,以及正常肝细胞与不同分化程度的HCC细胞mi R-616表达;分析mi R-616表达与HCC患者临床病理因素及预后的关系;观察HCC细胞过表达或抑制mi R-616表达后侵袭及转移能力的变化。结果:与癌旁组织比较,HCC组织中mi R-616的表达明显升高,且复发患者明显高于非复发患者,有转移患者明显高于无转移患者(均P0.05);所有HCC细胞株的mi R-616表达均明显高于正常肝细胞,且在高侵袭性HCC细胞株中的表达明显高于低侵袭性HCC细胞株(均P0.05);mi R-616表达与HCC患者是否存在门静脉癌栓、Edmondson-Steiner分级、TNM分期有关(均P0.05);mi R-616表达是影响HCC患者生存的独立危险因素(P0.05),mi R-616高表达患者的总生存率和无病生存率均明显低于mi R-616低表达患者(均P0.05)。HCC细胞过表达mi R-616后侵袭迁移能力明显增强,mi R-616表达抑制后侵袭迁移能力明显减弱(均P0.05)。结论:mi R-616在HCC中表达升高,且mi R-616高表达与HCC不良预后密切相关。     

CT9和CT10基因在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的检测肿瘤睾丸抗原CT9和CT10基因mRNA在肝细胞癌（HCC）中的表达情况。方法用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法对HCC病人的癌组织和相应癌旁组织及对照（肝硬化和正常肝组织）中CT9和CT10mRNA的表达进行了检测,随机选取每一种抗原RT-PCR呈阳性的产物4例进行DNA序列测定,结合AFP、抗HCV、HgsAg、肿瘤直径、分化程度等临床指标进行分析。结果56例HCC病人中,CY9、CT10基因mRNA阳性率分别是51．8％（29／56）和44．6％（25／56）,至少表达一种CTA者达66．1％（37／56）,表达两种者为30．4％（17／56）;电泳显示PCR产物与阳性对照大小一致;而癌旁组织中仅有CT9基因nRNA表达为阳性,阳性率为7．1％（4／56）,但表达强度明显弱于在癌组织中的表达,进一步的病理检查未发现CY9表达呈阳性的癌旁组织中有癌细胞。所测10例肝硬化和10例正常肝组织均未检测到CT9和CT10的表达。DNA测序结果表明RT-PCR产物确为CT9和CT10cDNA。CT9和CT10的表达与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、AFP水平、HBV和HCV感染无显著相关性（P〉O．05）。而在部分AFP正常（〈25ng／L）HCC病人中存在CT9和CT10基因的表达。结论CT9和CT10基因在HCC中呈高比例、高特异表达,为HCC免疫治疗提供了新的理想靶位;CT9和CT10同时在HCC中表达,为应用以这些肿瘤抗原为基础的多价瘤苗治疗HCC提供了实验依据。     

裸鼠人肝癌原位移植多药耐药模型的建立及其耐药机制的探讨

目的　在体内建立人肝癌裸小鼠原位移植多药耐药模型,并研究其耐药机理。方法采用人肝癌（BEL-7402）裸小鼠（4～6周龄）原位移植,给予阿霉素(1.5mg/kg体重,每周1次)腹腔注射诱导耐药（共8周）,经四唑蓝(MTT)快速比色法检测原代培养的耐药细胞对抗癌药的敏感性,以流式细胞仪检测癌细胞表面mdr1基因产物P-糖蛋白（P-gp）的表达,并用罗丹明试验观察该蛋白功能。结果　移植瘤组织形态及生物学方面符合人肝癌特征,实验组肝癌细胞表面P-gp表达为(75.45±5.67)%,而对照组表达仅(4.25±1.28)%,差异有非常显著性（P＜0.01）,对阿霉素的耐药倍数提高了16.67倍,对羟基喜树碱具有交叉耐受性（13.67倍）。耐药细胞表面P-gp有较强的药物外排功能。结论　阿霉素较易诱导原位移植于裸小鼠的人肝癌多药耐药性的产生,其耐药倍数与临床肝细胞癌相似。该模型的建立对研究肝癌多药耐药的产生机制以及逆转其多药耐药性具有重要价值。