植物中药IHA-01抑制人肺癌GLC细胞增殖和诱导凋亡的实验研究

目的初步探讨植物中药IHA-01抑制人肺癌GLC细胞增殖及诱导其早期凋亡的作用。方法人肺癌GLC细胞经不同浓度(0.01、0.1、1、10、100μg/ml)IHA-01作用24、48、72h,以MTT法进行IHA-01有效作用浓度筛选并确定IHA-01工作浓度(1/2IC50);透射电镜观察IHA-01细胞超微结构;流式细胞术进行DNA倍体分析和TUNEL分析,检测IHA-01对肺癌GLC细胞周期及早期凋亡的影响。结果IHA-01工作浓度(1/2IC50)为0.7μg/ml,且不同浓度IHA-01作用不同时间对GLC细胞增殖的抑制作用呈时效和量效依赖关系;透射电镜发现IHA-01实验组部分细胞出现细胞连接消失,微绒毛消失,胞质密度增加,可见细胞早期凋亡改变,具有诱导细胞分化和早期凋亡的作用;流式细胞术显示肺癌GLC细胞出现明显的凋亡峰,细胞周期阻滞在G0/G1期,S期细胞减少;流式细胞术TUNEL法检测结果显示,细胞凋亡和坏死同时存在。结论IHA-01具有抑制肺癌GLC细胞增殖,诱导凋亡的作用,具有深入研究的价值。     

黄芪多糖抑制人乳腺癌MCF－7细胞增殖和诱导凋亡

目的探讨中药黄芪多糖的体外抗人乳腺癌MCF．7细胞活性。方法实验分为空白对照组、黄芪多糖组和阳性对照组,黄芪多糖组MCF．7细胞给予不同浓度（2．5、5、10、20mg／L）的黄芪多糖,阳性对照组给予10gmol／L顺铂,空白对照组给予等体积培养基。48h后应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测黄芪多糖对MCF-7细胞增殖抑制率,计算IC_50;吖啶橙（AO）,溴化乙啶（EB）荧光染色法测定黄芪多糖对MCF-7细胞诱导凋亡作用;应用流式细胞仪分析黄芪多糖对MCF-7细胞凋亡和细胞周期的影响。结果在给予2．5、5、10、20mg／L黄芪多糖48h后,黄芪多糖呈浓度依赖性抑制MCF．7细胞的增殖（r=0．985,P〈0．05）,抑制率分别为（4．14±2．96）％、（7．14±2．10）％、（20．13±2．33）％、（64．66±5．15）％,高于空白对照组0％,但4个不同浓度组的抑制率均低于阳性对照组（90．31±4．92）％。黄芪多糖48h的IC_50=16．83mg／L。随着黄芪多糖浓度的逐渐增高,MCF-7细胞中代表凋亡的玛瑙色逐渐增多,细胞核骤缩、核分裂,细胞形态呈现典型的凋亡特征。2．5、5、10、20mg／L黄芪多糖的凋亡率分别为（2．37±0．98）％、（6．76±1．31）％、（11．65±1．46）％、（20．75±2．68）％,高于空白对照组（1．14±1．25）％（均P〈0．05）,但均低于阳性对照组（35．09±2．88）％（均P〈0．05）。与空白对照组比较,黄芪多糖以浓度依赖性诱导MCF-7细胞凋亡（r=0．991,P〈0．05）,随浓度的增加,细胞凋亡率升高,但均低于阳性对照组。黄芪多糖随浓度的增加促使s期细胞比例逐渐升高,但低于空白和阳性对照组（均P〈0．05）,使处于G_0-G_1期细胞的比例逐渐减少,仍高于空白和阳性对照组（均P〈0．05）。结论黄芪多糖抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡,使MCF-7细胞生长增殖停滞在S期?     

bFGF对人关节软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外单层培养的人负重关节软骨细胞的增殖和凋亡的影响。方法：对8例来自人负重关节软骨细胞系进行体外单层传代培养，从第2代起试验组培养液中加入bFGF，观察细胞的倍增时间(DT)、流式细胞分析细胞增殖周期和凋亡指数，并与无bFGF组相比较。结果：与未加bFGF相比较，加用10μg／ml bFGF后，DT缩短，S期细胞数升高，细胞凋亡无变化。结论：bFGF能促进培养的人关节软骨细胞生长，不引起细胞凋亡。     

胶质瘤细胞增殖与凋亡的研究

对未经其他治疗的手术摘除的胶质瘤标本,采用免疫组化和原位标记方法研究了胶质瘤及其瘤旁组织中细胞增殖以及凋亡的状况。结果表明,增殖细胞核抗原在世界卫生组织（ＷＨＯ）制定的不同级别的胶质瘤中其阳性率具有显著性差异（Ｐ＝ ０．０００５）,而在胶质瘤与其瘤旁组织之间则无显著性差异。恶性程度不同的胶质瘤中细胞发生凋亡的比率具有显著性的差异（Ｐ＝ ０．０１７０）,而在胶质瘤与其瘤旁组织间无显著性差异。增殖细胞核抗原是划分胶质瘤恶性程度的一个较好的指标,与Ｗ ＨＯ 胶质瘤恶性程度分级具有较好的相关性（ｒ＝ ０．４０８９）。Ｗ ＨＯ Ⅱ级星形胶质瘤细胞凋亡明显增多,可能是保留了恶性程度较高的胶质瘤细胞而清除了恶性程度相对较低的胶质瘤细胞,从而可能促进了胶质瘤的恶性进展。胶质瘤邻近的瘤旁组织可能已具有了胶质瘤的某些特性,胶质瘤呈浸润性生长可能与此有密切的关系。     

超抗原诱导T细胞凋亡或增殖的体外研究

研究抗原递呈细胞在超抗原诱导人外周血特异性Ｔ细胞反应中的作用。方法金黄色葡萄球菌Ａ肠毒素刺激短期人外周血ＳＥＡ反应Ｔ细胞系的作用中,通过去除或加入Ａｐｃ观察细胞形态,ＦＣＭ检测细胞亚ＧＯ／Ｇ１峰大小及１．８％ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳观察凋亡特征条带。     

吗啡对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨吗啡对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖与凋亡的影响及可能的机制.方法 以含0.1、1、10、100、1000mg/L吗啡的培养液作用于体外培养的鼻咽癌CNE-2细胞,等体积培养基作为对照组.MTT法检测吗啡作用24、48和72 h的细胞增殖抑制率,并在不同浓度吗啡作用细胞48 h后,用Hoechst33258荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡,Western免疫印迹检测Bc1-2、Bax和caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达.结果 相同作用时间点0.1～100 mg/L吗啡并不影响CNE-2细胞的增殖.而在1000 mg/L吗啡作用下细胞增殖受到明显的抑制,在24、48、72 h CNE-2细胞增殖抑制率随作用时间延长而增加,分别达到(15.0±4.4)%、(30.7±4.9)%和(50.0±4.4)%.48 h后,荧光显微镜下对照组CNE-2细胞未见明显凋亡,0.1～100mg/L吗啡组仅见少量凋亡,而在1000mg/L吗啡组,可见到大量细胞出现典型的凋亡形态学改变.流式细胞仪检测结果显示0.1～100 mg/L吗啡组细胞凋亡率与对照组差异并无统计学意义(P>0.05),而1000mg/L吗啡组细胞凋亡率则明显增加[(39.33±6.03)%比(9.36±1.57)%,P<0.05].Western免疫印迹检测显示在1000 mg/L吗啡作用CNE-2细胞48 h后,Bcl-2蛋白的表达量较对照组明显下降,Bax表达增多,caspase-3活性升高,cleaved-caspase-3表达增多.而其他浓度作用下CNE-2细胞Bcl-2、Bax和caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达未见明显变化.结论 大剂量吗啡可诱导鼻咽癌CNE-2细胞的凋亡,其机制可能与吗啡上调CNE-2细胞Bax蛋白表达,下调其Bcl-2蛋白表达,引起caspase-3活化有关.     

小鼠胚胎食管和肠上皮细胞增殖与凋亡

目的：研究小鼠胚胎食管和肠上皮细胞的增殖与凋亡。方法：体视学方法观测E11-17d ICR胎鼠食管、十二指肠和结肠上皮的增殖与凋亡,免疫组化法显示Bcl-2、P153、Bax在三段消化管上皮中的表达。结果：三段消化管的上皮细胞密度与凋亡小体密度和分裂细胞密度间未见一致的相关性。凋亡小体分布食管上皮各层,而肠上皮中主要在游离面。Bcl-2和p53在食管、小肠、结肠上皮细胞中表达峰值分别在E11d—13d和E11d～14d,Bax的表达峰值分别为E11d、E14d、E15d。结论：上皮细胞密度对上皮细胞分裂和凋亡的影响不明显。食管和肠上皮中凋亡小体分布的不同可能与形态发生方式不同有关。Bax和Bcl-2可能分别具有促进和抑制肠上皮细胞凋亡的作用;p53与上皮细胞凋亡的关系不密切。     

胡桃醌抑制宫颈鳞癌SiHa细胞增殖并诱导其凋亡

目的探讨胡桃醌对宫颈鳞癌Si Ha细胞增殖及凋亡的影响。方法选取对数生长期的Si Ha细胞将其分为空白对照组和(10、20、50、80、100)μmol/L胡桃醌组。采用MTT法观察胡桃醌对Si Ha细胞增殖的抑制作用,并计算出半数抑制浓度(IC50),依据IC50确定胡桃醌的有效浓度;annexin V-FITC/PI双染色结合流式细胞术测定20μmol/L胡桃醌对Si Ha细胞凋亡的影响,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达。结果 MTT试验显示,与对照组比较,各胡桃醌浓度对细胞增殖均有明显抑制作用,IC50为20.4μmol/L;流式细胞术检测表明,正常生长的Si Ha细胞早期凋亡率为(2.46±0.37)%,经20μmol/L的胡桃醌处理细胞12 h,早期凋亡率增加至(18.47±2.26)%;与正常对照组相比,Western blot法检测显示20μmol/L胡桃醌使细胞中Bcl-2表达明显降低而Bax表达明显增加。结论胡桃醌可以抑制Si Ha细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

3-溴丙酮酸对人卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察3-溴丙酮酸对人卵巢癌SK-OV-3细胞株增殖和凋亡的影响,探讨3-溴丙酮酸对人卵巢癌细胞的体外抗肿瘤效应.方法 MTT比色法和集落形成试验检测3-溴丙酮酸对SK-OV-3细胞的增殖抑制作用;采用投射电镜观察3-溴丙酮酸作用后的SK-OV-3细胞形态学改变;流式细胞术检测3-溴丙酮酸作用后SK-OV-3细胞的凋亡,并对细胞周期的变化进行分析.结果 3-溴丙酮酸对SK-OV-3细胞的增殖有明显的抑制作用,具有时间（一段时间内）和剂量依赖性（P＜0.05）.3-溴丙酮酸主要将细胞阻滞于G0/G1,S期细胞明显减少.结论 3-溴丙酮酸对SK-OV-3细胞增殖的抑制效应具有时间依赖性（一段时间内）和剂量依赖性,并可诱导其凋亡.     

替米沙坦抑制U937细胞增殖及诱导凋亡

目的:探讨替米沙坦对U937细胞株的生长抑制及凋亡诱导作用。方法:分别以不同浓度的替米沙坦处理人类急性髓系白血病细胞U937;以CCK-8法检测不同浓度替米沙坦对U937细胞的生长抑制作用;以集落形成实验观察不同浓度替米沙坦对U937细胞集落形成能力的影响;以Annexin V-PI双染法及Hoechst 33342染色法检测不同浓度替米沙坦作用前后U937细胞凋亡程度的变化;以流式细胞术检测U937细胞表面抗原CD11b的阳性表达率,瑞氏染色后倒置显微镜进行细胞形态学观察,了解U937细胞的分化情况;以Western blot法检测不同浓度替米沙坦作用U937细胞后凋亡相关蛋白表达量的改变。结果:CCK-8实验结果证实替米沙坦呈时间和剂量依赖性抑制U937细胞的生长;集落形成实验显示低剂量替米沙坦可以完全抑制U937细胞的集落形成能力;Annexin V-PI双染法及Hoechst 33342法结果证实替米沙坦可以诱导U937细胞凋亡;细胞表面抗原流式检测术及瑞氏染色结果证实替米沙坦可以促进部分U937细胞分化;Western blot实验结果证实替米沙坦作用于U937细胞72 h后,促凋亡相关蛋白cleaved PARP及cleaved caspase-3蛋白的水平明显增高。结论:替米沙坦可以抑制细胞增殖以及诱导U937细胞部分分化,并通过caspase依赖的凋亡途径触发U937细胞凋亡。     

PARP-1抑制剂对人肝癌细胞HepG2增殖和迁移的抑制作用

目的 研究证实聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(poly ADP ribose polymerase,PARP-1)抑制剂对肿瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭有影响,但对肝癌细胞生物学特性的影响尚不清楚,此研究的目的是观察3种不同的PARP-1抑制剂对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡及迁移的影响及可能机制.方法 MTT检测体外不同浓度的PARP-1抑制剂AG014699,BSI-201,AZD-2281处理后HepG2细胞的增殖;随后选择抑制效果明显的抑制剂AG014699和BSI-201处理HepG2;Western印迹法检测HepG2细胞Casepase3、Casepase8、Bax、Bcl-2、PTEN、Timp3、MMP3蛋白的表达水平.Transwell实验检测AG014699和BSI-201对HepG2细胞迁移的影响.结果 AG014699,BSI-201,AZD-2281均具有抑制HepG2细胞增殖的作用,具有时间和浓度依赖性,作用HepG2细胞48 h后的Caspase3、Caspase8、Bax、PTEN、Timp3蛋白的表达水平随药物浓度的增加而增高,而Bcl-2和MMP3蛋白水平随药物浓度的增加而降低且与对照组相比有显著性差异(P<0.01).结论 在体外PARP-1抑制剂AG014699、BSI-201、AZD-2281明显抑制HepG2细胞的增殖,但AG014699和BSI-201展示较好的敏感性,同时二者诱导肝癌细胞凋亡和抑制肝癌细胞的迁移,这其中的机制可能与影响凋亡信号的通路以及迁移相关蛋白的表达有关.     

舒芬太尼诱导宫颈癌细胞自噬和凋亡并抑制癌细胞恶性增殖

目的 探讨舒芬太尼对宫颈癌细胞 SiHa 自噬、 凋亡及细胞增殖的影响。 方法 采用 CCK8 法检 测舒芬太尼梯度浓度 (3. 125、 6. 25、 12. 5、 25、 50、 100、 200、 400、 800 nmol / L) 作用下宫颈癌细胞 SiHa 细胞活力, 选取 4 个舒芬太尼作用浓度 (0、 25、 50、 100 nmol / L) 处理 SiHa 细胞 24 h, 采用流式细胞法、 克隆形成实验检测 SiHa 细胞凋亡及增殖情况, 免疫荧光法检测各组细胞 LC3 水平, 采用 Western 印迹检测 自噬相关蛋白 LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ、 Beclin1、 ATG7 与增殖、 凋亡相关蛋白 P21、 Survivin 水平, 采用 RT-PCR 检测 细胞增殖相关基因 Ki67、 PCNA 表达水平。 结果 随着舒芬太尼处理浓度的增加, SiHa 细胞活力逐渐降低。 50、 100 nmol / L 舒芬太尼处理下 SiHa 细胞的 LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ、 Beclin1、 ATG7 水平显著高于 0 nmol / L 舒芬太 尼处理, 免疫荧光检测结果显示 50、 100 nmol / L 舒芬太尼处理下 LC3 荧光信号高于 0 nmol / L 舒芬太尼处 理, 流式细胞仪检测结果显示 50、 100 nmol / L 舒芬太尼处理下 SiHa 细胞凋亡高于 0 nmol / L 舒芬太尼处理。 克隆形成实验结果显示 50、 100 nmol / L 舒芬太尼处理下 SiHa 细胞克隆形成率降低, Survivin 水平与 Ki67、 PCNA 表达水平降低, 而 P21 水平升高。 结论 舒芬太尼对宫颈癌细胞自噬、 凋亡有促进作用, 对细胞增 殖有抑制作用, 可能与调节细胞自噬、 凋亡、 增殖相关蛋白或基因水平有关。     

Human 4-1BB regulates CD28 co-stimulation to promote Th1 cell responses

Our present study provides evidence that the 4-1BB signal is critical to CD28 co-stimulation in maintaining T cell activation when CD28 has been down-regulated because of repeated stimulation. The 4-1BB signal synergized with CD28 co-stimulation by lowering the threshold of anti-CD28 required to sustain proliferation and IL-2 production. The 4-1BB signal also modulated CD28-mediated cytokine profiles by markedly enhancing Th1 but suppressing Th2-type cytokine production. The 4-1BB signal generated Th1-type cells, as identified by intracellular IFN-γ production. IFN-γ induction was detected preferentially in 4-1BB-expressing cells, but not in those expressing CD30. 4-1BB and CD30 were induced in both CD4⁺ and CD8⁺ cells, but the location of the two molecules was mutually exclusive in each T cell subset. Our study suggests that the 4-1BB signal regulates CD28 co-stimulation in the targeted subset cells to favor Th1 development and maintain long-term cell growth.     

A Novel Human Monoclonal Antibody Rapidly Induces Homotypic Cell Aggregation and Promotes Antibody-Secreting Activity by Human B Lymphoblastoid Cell Line IM-9

A human monoclonal antibody (mAb), designated mNKES, was generated by fusing B cells isolated from an enlarged cervical lymph node of a patient with a carotid body tumor (CBT), with human myeloma cell line KR-12 (6TG). The reactivity of mNKES was tested by the indirect immunofluorescence method. The antigen defined by mNKES was expressed on Burkitt's lymphoma cell lines Raji, Daudi, and Ramos and on B lymphoblastoid cell line IM-9. In addition, mNKES reacted with T cells stimulated with recombinant interleukin-2 (rIL-2) obtained from normal healthy donors. However, mNKES did not react with normal resting human T, B, or adherent cells (monocytes/macrophages). When the reactivity of mNKES and mouse mAbs recognizing the human adhesion-associated antigen (CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD14, CD16, CD18, CD23, CD28, CD29, CD31, CD43, CD44, CD45RA, CD50, CD54, CD58, CD80, CD102, CD106, and HLA class I, and HLA class II antigen) with various cell lines was compared, mNKES reactivity was found to be unique, not resembling that of any of these mouse mAbs. Interestingly, mNKES specifically and rapidly (within 2 hr) induced homotypic cell aggregation of IM-9 cells. This mNKES-induced cell aggregation was completely blocked by the addition of EDTA and when incubated at 4°C. The mAbs reactive with CD11a/CD18 (leukocyte function-associated antigen-1; LFA-1) and CD54 (intercellular adhesion molecule-1; ICAM-1) completely blocked the IM-9 cell aggregation induced by mNKES, and induction of IM-9 cell aggregation by mNKES was significantly blocked in the presence of the protein kinase C inhibitors sphingosine and H-7 and completely blocked by cytochalasin B and cytochalasin D, which inhibit microfilament formation. Regarding biological function, IM-9 cells bearing surface IgG (sIgG) effectively promoted IgG-secreting activity underlying the homotypic cell aggregation induced by mNKES. The surface antigen recognized by mNKES has a molecular size of about 55 kDa, as determined by immunoblotting analysis. These findings indicate that mNKES recognizes a novel adhesion-associated antigen distinct from any previously reported adhesion-associated antigens in terms of pattern of cellular distribution and biological function and that mNKES is the first human mAb found that rapidly induces homotypic cell aggregation and effectively promotes the IgG-secreting activity of human B lymphoblastoid cell line IM-9.     

4-1BB信号拮抗肿瘤细胞培养上清诱导的树突状细胞凋亡

为研究4-1BB信号拮抗肿瘤细胞培养上清诱导的树突状细胞(DC)凋亡的作用,采用rmGM-CSF联合rmIL-4诱导小鼠骨髓细胞分化为未成熟树突状细胞(imDC),分别经rmTNF-α、4-1BB激发型单克隆抗体(2A)或TNF-α联合2A激发DC成熟。未成熟或成熟DC分别与不同浓度的肿瘤培养上清混合培养。流式细胞仪测定DC表面CD80、CD86的表达,3H-TdR掺入法测定DC激发T细胞活化增殖能力;JAM法测定未成熟或成熟DC与肿瘤上清混合培养后DNA片断形成率。结果显示:经2A或TNF-α刺激后,DC激发T细胞活化的能力显著提高;5%、10%、20%、50%小鼠肿瘤细胞株A20或B16培养上清与未成熟DC共育24h后,DNA片断形成率分别为16%、29%、41%、51%和20%、27%、37%、58%,且该效应具有时间依赖性;DC经2A或TNF-α激发48h后,不同浓度肿瘤培养上清诱导DNA片断形成率显著降低。因此,肿瘤细胞可以通过分泌可溶性因子诱导未成熟DC凋亡;4-1BBmAb能促进DC的发育成熟,并能有效地抑制肿瘤细胞培养上清诱导的DC凋亡。     

Role of CD28 co-stimulation in generation and maintenance of virus-specific T cells

Efficient induction of T cell responses is normally assumed to require both TCR-mediated signaling and engagement of co-stimulatory molecules, in particular CD28. However, the importance of CD28 co-stimulation in induction and maintenance of antiviral T cell responses is not clearly established. For this reason antiviral CD4(+) and CD8(+) T cell responses in CD28-deficient mice were studied using two different viruses [vesicular stomatitis virus and lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV)]. Intracellular cytokine staining and/or MHC-peptide tetramers were used to enumerate antigen-specific T cells. In addition, we used DNA constructs encoding viral epitopes to probe the importance of the epitope itself. Our results reveal that while the context of antigen presentation (live virus versus DNA construct) is a critical factor in determining the requirement for CD28 co-stimulation, epitope and virus dose play little if any role. Direct visualization of antigen-specific cells also confirms the notion that CD28 is more critical for the generation of antiviral T(h)1 cells than for T(c)1 cells generated in response to the same virus (LCMV). Most importantly, the present study reveals that CD28 generally is essential for the host to respond optimally over a broad set of conditions, and our results may imply that the relatively CD28 independent activation of LCMV-specific CD8(+) T cells may represent an extreme situation related to the non-cytolytic nature of this virus allowing the delivery of a uniquely strong and prolonged signal 1.     

CD28单抗对CD3AK细胞增殖及表型的影响

CD3AK细胞是用小剂量CD3单抗交联CD3分子而活化的T细胞 ,它具有较强的细胞增殖和细胞毒效能。CD2 8分子则是T细胞激活过程中所需的协同刺激分子 ,可提供T细胞活化所需的第二信号。本文利用CD2 8单抗作为CD2 8分子的配体 ,观察了CD2 8信号途径的激活对CD3AK细胞的影响。结果显示CD2 8单抗可增强CD3AK细胞的增殖活性和趋化团聚形成集落的能力 ,并优先引起CD4+T细胞的增殖。     

RNA干扰EP—CAM基因表达对胆囊癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：利用RNA干扰技术抑制人胆囊癌GBC-SD细胞中上皮细胞黏附分子（EP-CAM）基因的表达,探讨抑制EP-CAM基因后对GBC-SD细胞增殖、凋亡的影响.方法：构建靶向EP-CAM基因的miRNA重组质粒,转染GBC-SD细胞,用RT-PCR和Western Blot分别检测EP-CAM基因的mRNA及蛋白的表达情况,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.结果：靶向EP-CAM的miRNA重组质粒pcDNA^TM6.2-GW/EmGFPmiR-EPCAM-1构建成功,重组质粒能显著抑制靶基因EP-CAM的mRNA及蛋白表达.与对照组比较,干扰后的细胞凋亡率无明显变化（P＞0.05）,但细胞增殖活性受到明显抑制（P＜0.05）.结论：靶向EP-CAM基因的miRNA重组质粒能有效抑制EP-CAM基因的表达,抑制GBC-SD细胞的增殖.     

Hydrogen Peroxide Induces G2 Cell Cycle Arrest and Inhibits Cell Proliferation in Osteoblasts

Reactive oxygen species (ROSs) are involved in osteoporosis by inhibiting osteoblastic differentiation and stimulating osteoclastgenesis. Little is known about the role and how ROS controls proliferation of osteoblasts. Mammalian target of rapamycin, mTOR, is a central regulator of cell growth and proliferation. Here, we report for the first time that 5–200 μM hydrogen peroxide (H₂O₂) dose‐ and time‐dependently suppressed cell proliferation without affecting cell viability in mouse osteoblast cell line, MC3T3‐E1, and in human osteoblast‐like cell line, MG63. Further study revealed that protein level of cyclin B1 decreased markedly and the percentage of the cells in G₂/M phase increased about 2‐4 fold by 200 μM H₂O₂ treatment for 24–72 hr. A total of 0.5–5 mM of H₂O₂ but not lower concentrations (5–200 μM) of H₂O₂ inhibited mTOR signaling, as manifested by dephosphorylation of S6K (T389), 4E‐BP1 (T37/46), and S6(S235/236) in MC3T3‐E1 and MG63 cells. Rapamycin, which could inhibit mTOR signaling and cell proliferation, however, did not reduce the protein level of cyclin B1. In a summary, H₂O₂ prevents cell proliferation of osteoblasts by down‐regulating cyclin B1 and inducing G₂ cell cycle arrest. Inhibition of mTOR signaling by H₂O₂ may not be involved in this process. Anat Rec, 292:1107–1113, 2009. © 2009 Wiley‐Liss, Inc.     

激发型CD28单抗诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的作用研究

为了探讨激发型CD2 8单抗诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的作用及其机制 ,在表达CD2 8分子的多发性骨髓瘤细胞U2 6 6和XG 1的培养体系中加入终浓度为 10 μg/ml的激发型CD2 8单抗 ,逐日观察和分析细胞的生长与增殖状况。结果显示 ,在加入激发型CD2 8单抗后 2 4h即可见细胞聚集且逐渐加剧 ,细胞的立体感和折光性逐渐减弱 ,细胞的生长与增殖抑制 ,台盼蓝着色阳性率增加 ;凝胶电泳的结果表明 ,多发性骨髓瘤细胞出现降解的DNA条带 ;透射电镜分析的结果显示 ,加入激发型CD2 8单抗培养 2 4～ 4 8h ,30 %以上的细胞出现核质边聚的凋亡早期的病理性改变 ,培养 72h后 ,5 0 %以上的细胞出现空泡及凋亡小体。提示激发型CD2 8单抗具有诱导表达CD2 8分子的多发性骨髓瘤细胞凋亡的作用。