DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人食管癌细胞株Eca109的影响

目的:探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对人食管癌细胞株Eca109增殖作用的影响。方法:应用不同浓度(10-7、10-6、10-5、10-4mol/L)的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR,于不同作用时间(24～168h)处理人食管鳞癌细胞株Eca109,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定5-aza-CdR作用下Eca109细胞株的生存率,倒置显微镜观察细胞的形态学变化。结果:不同药物浓度组在同一作用时间下,细胞株生存率差异有统计学意义(P<0.05);同一药物浓度不同作用时间组之间(24～96h)的细胞生存率差异也有统计学意义(P<0.05),且96h时对人食管鳞癌细胞株Eca109生长抑制作用最明显。形态学观察显示:癌细胞体积缩小,核固缩,染色质凝聚成块。结论:5-aza-CdR有抑制人食管癌细胞株Eca109生长的作用,抑制作用呈时间依赖性及浓度依赖性;并且干预后癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态改变。     

DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2''''-脱氧胞苷对人食管癌细胞株Eca109的影响

目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对人食管癌细胞株Eca109增殖作用的影响.方法应用不同浓度(10-7、10-6、10-5、10-4 mol/L)的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR,于不同作用时间(24～168 h) 处理人食管鳞癌细胞株Eca109,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定5-aza-CdR作用下Eca109细胞株的生存率,倒置显微镜观察细胞的形态学变化.结果不同药物浓度组在同一作用时间下,细胞株生存率差异有统计学意义(P＜0.05);同一药物浓度不同作用时间组之间(24～96 h)的细胞生存率差异也有统计学意义(P＜0.05),且96 h时对人食管鳞癌细胞株Eca109生长抑制作用最明显.形态学观察显示癌细胞体积缩小,核固缩,染色质凝聚成块.结论5-aza-CdR有抑制人食管癌细胞株Eca109生长的作用,抑制作用呈时间依赖性及浓度依赖性;并且干预后癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态改变.     

紫杉醇对人食管癌Eca109细胞株生长的影响

目的：观察不同浓度的紫杉醇对食管癌细胞Eca109的影响。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验,细胞形态学观察及流式细胞仪等方法对人食管癌细胞Eca109进行检测和观察。结果：MTT实验显示紫杉醇可抑制食管癌细胞增殖;光镜及电镜可发现药物作用组细胞核固缩、解聚以及凋亡小体,流式细胞仪检测显示G1峰前有明显的凋亡峰。细胞周期分析提示紫杉醇可将Eca细胞阻滞于G2－M期,且与浓度相关。结论：紫杉醇对人食管癌细胞系Eca109细胞的生长有明显的抑制作用,使细胞分裂阻滞于G2－M期,并诱导肿瘤细胞凋亡。     

体外培养的人体食管癌细胞与食管癌细胞形态学的比较研究

本文报道体外培养的人体食管癌Eca109细胞与食管癌病人癌细胞涂片所作细胞形态学比较研究结果。所用Eca109细胞系经300代以上传代,而食管癌细胞涂片采自50名病人。结果表明Eca109细胞与拉网法获得的鳞癌细胞相比,前者具备不少后者的细胞形态特征,诸如:细胞边界清楚,恶性核结构,胞核的中央位,胞浆匀实,位于核周围的胞浆退化性空泡,出现典型的鳞癌细胞,出现“封入细胞”等。结论是Eca109细胞仍保持食管鳞状上皮癌细胞形态特征,并根据细胞形态特征,认为Eca109细胞属中分化鳞癌细胞。Eca109细胞具较     

褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞株的增殖抑制作用研究

目的：观察褪黑素（Mel）联合顺铂（DDP）对人食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响.方法：以DDP 2.5 mg/L、不同浓度Mel及两药联合作用于食管癌Eca109细胞.通过MTT实验检测用药后对食管癌Eca109细胞增殖的影响,并计算抑制率;通过集落克隆形成实验观察用药后对细胞集落克隆形成的影响;通过流式细胞仪检测用药后细胞凋亡率的变化.结果：DDP 2.5 mg/L与不同浓度Mel联合用药组对食管癌Eca109细胞生长抑制率均明显高于单独使用DDP或Mel组（P＜0.01）;10-5 mol/L Mel诱导人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为7.8%,10-5 mol/L Mel与2.5 mg/L DDP联合刺激人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为32.0%,高于DDP本身诱导的24 h凋亡率9.7%（P＜0.01）.结论：Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并增强其诱导凋亡作用,为临床食管癌的治疗提供了一定的实验研究基础.     

云芝多糖-B对人食管癌细胞Eca109转移的影响

【目的】 应用新型云芝多糖-B(CVPs-B)作用食管鳞癌Eca109细胞,探讨其对Eca109细胞转移特性的作用?【方法】 Western blot检测CVPS-B作用后,食管鳞癌Eca109细胞CXCL12蛋白表达的变化,Transwell侵袭实验评估食管癌细胞侵袭能力的变化,MTT法观察食管癌细胞与Matrigel胶黏附能力的变化,划痕法检测食管癌细胞迁移能力的变化?【结果】 实验组Eca109细胞CXCL12蛋白表达水平较对照组显著降低(P < 0.05)?CVPs-B孵育后,食管癌Eca109细胞黏附?侵袭及迁移能力下降?【结论】CVPs-B降低食管癌细胞CXCL12蛋白表达,有效抑制食管癌Eca109细胞的转移潜能,提示CVPs-B可能可以通过CXCL12/CXCR4通路抑制食管鳞癌细胞转移特性?     

人食管鳞癌细胞株中RIZ1基因启动子区甲基化状态的研究

目的:探讨6种人食管鳞癌细胞株KYSE150,KYSE510,TE13,EC9706,CaEs17和EC109中RIZ1基因启动子区的甲基化状态;观察特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR对存在甲基化的细胞株RIZ1基因的转录调控作用及其对该细胞生长增殖的影响。方法:甲基化特异PCR(MSP)法检测6种人食管鳞癌细胞株中RIZ1基因启动子区的甲基化状态;实时定量PCR法检测5-Aza-CdR处理前后RIZ1基因启动子区CpG岛高度甲基化的人食管鳞癌细胞株TE13中RIZ1 mRNA表达量的变化;MTT法检测5-Aza-CdR对TE13细胞生长增殖的影响。结果:(1)6种人食管鳞癌细胞株中TE13,CaEs17,EC109三株细胞RIZ1基因启动子区存在甲基化;(2)5-Aza-CdR处理细胞株TE13后,RIZ1 mRNA表达量上调;(3)5-Aza-CdR能抑制TE13的生长增殖,并随时间的延长和浓度的增加抑制作用变明显。结论:启动子区CpG岛高度甲基化是人食管鳞癌细胞株TE13 RIZ1基因表达沉默的重要原因;5-Aza-CdR能使TE13 RIZ1 mRNA表达上调;并能抑制TE13细胞的生长增殖,并呈时间和浓度依赖性。     

过表达KLF7对食管鳞状癌细胞的增殖和迁移的影响

目的 探索Kruppel-like factor 7(KLF7)对食管鳞癌细胞Eca109细胞增殖、迁移和周期的影响。方法 利用生物信息学方法研究KLF7在食管鳞癌组织中的表达模式及其与患者预后、病理分级的关系。利用Real-time PCR、Western blot与细胞免疫荧光技术研究食管鳞癌细胞中KLF7的表达模式与亚细胞定位。利用KLF7过表达质粒(pcDNA-3.10-KLF7)细胞转染实现KLF7在Eca109食管鳞癌细胞中过表达。采用平板克隆计数和CCK-8检测研究细胞增殖能力,利用Transwell研究细胞迁移能力,利用流式细胞术检测细胞周期。结果 KLF7在食管癌组织和细胞中均有表达,其表达水平与患者病理分级显著相关(P<0.05),与患者生存率无显著相关性。食管癌细胞系(Eca109和EC9706)中KLF7的表达水平显著高于正常食管上皮细胞(Het-1A,P<0.05),并且Het-1A细胞中KLF7高表达于细胞质和细胞核,而2种食管癌细胞Eca109和EC9706中KLF7仅高表达于细胞核,在Eca109细胞中过表达KLF7后改变细胞周期、促进细胞的...     

大蒜素对人食管癌细胞株Eca-109生长的抑制作用

目的研究大蒜素对人食管癌细胞株Eca-109增殖抑制作用。方法传代培养人食管癌细胞,MTT法及流式细胞仪检测测定Eca-109细胞增殖抑制率。结果大蒜素对细胞的生长均有明显的抑制作用,且呈浓度、时间依赖性。结论一定浓度的大蒜素能抑制食管癌细胞的生长。     

羟基喜树碱脂质体对人食管癌Eca109细胞株作用的研究

目的 研究羟基喜树碱脂质体对人食管癌Eca109细胞增殖、凋亡以及相关蛋白表达的影响.方法 将人食管癌细胞株Eca109常规培养于RPMI-1640培养基中,实验分空白对照组和浓度分别为0.1、1、10、50 mmol/L的羟基喜树碱脂质体组,应用MTT法检测羟基喜树碱脂质体对食管癌细胞增殖的影响,Western blot检测细胞膜P糖蛋白水平的改变,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的改变.结果 各剂量组羟基喜树碱脂质体均对人食管癌Eca109细胞的增殖具有抑制作用,并伴随着对细胞凋亡的诱导,以及对和多药耐药性(MDR)相关的P糖蛋白的抑制.结论 羟基喜树碱脂质体能够抑制人食管癌细胞的增殖,诱导其凋亡并能够抑制P糖蛋白的表达,减少细胞耐药,且在0.1～50 mmol/L浓度范围内,随着浓度增加,上述抑制作用增强,存在浓度依赖性.     

过表达Beclin 1对食管癌Eca109细胞生物学行为的影响

目的：探讨自噬基因Beclin 1对食管癌细胞Eca109生物学行为的影响。方法：运用Beclin 1过表达质粒pIRES2-Zs－Green1-h Beclin 1转染食管癌 Eca109细胞株,RT-PCR和Western blot检测Beclin 1的mRNA和蛋白的表达;电子显微镜观察转染后自噬体的形成情况;MTT法检测转染前后各组细胞生长曲线的变化;血管形成实验检测其对Eca109细胞株血管形成能力的影响;Transwell小室实验检测其对Eca109细胞株迁移和侵袭能力影响;流式细胞技术检测目的基因组和对照组细胞周期的变化。结果：pIRES2-ZsGreen-hBeclin1质粒成功转染食管癌Eca109细胞株。目的基因组Eca109细胞较空载体组和未转染组生长明显抑制（P=0.000,P=0.000）;目的基因组Eca109细胞迁移、侵袭及血管形成能力明显低于对照组（P值均<0.05）;Beclin 1稳定表达后,S期细胞明显减少,细胞增殖受到抑制。结论：Beclin 1基因可以作为食管癌生长及转移的一种抑制基因。     

过表达miR-218增强食管鳞状细胞癌对顺铂敏感性

目的 研究miR-218 在食管鳞癌细胞中对顺铂药物敏感性的影响.方法 采用递增药物浓度、间歇冲击作用的方法构建耐药细胞株;实时荧光定量PCR检测miR-218 在食管鳞癌细胞株Eca109 与顺铂耐药株Eca109-CisR差异性表达;进一步在顺铂耐药株Eca109-CisR中过表达miR-218:① CCK8实验检测细胞增殖;② 流式细胞仪检测细胞凋亡率;③ Western blot方法检测凋亡抑制蛋白Survivin、Mcl-1及Bcl-2的相对表达量.结果 miR-218在顺铂耐药株Eca109-CisR细胞中呈低表达;过表达 miR-218 增加顺铂耐药株Eca109-CisR对顺铂的药物敏感性;Western blot结果证实凋亡相关蛋白Survivin、Mcl-1 及 Bcl-2相对表达减少.结论 miR-218表达有助于增加食管鳞癌细胞对顺铂的敏感性,且给对顺铂耐药的食管鳞癌患者提供潜在的基因治疗靶点.     

硒、锌对人食管癌细胞株Eca109生长增殖的影响

目的 观察硒、锌单独和联合作用对人食管癌细胞株Eca109生长增殖的影响.方法 用不同浓度硒、锌培养液培养人食管癌细胞株Eca109,以人正常肝上皮细胞株HL7702为正常细胞对照,采用MTT、3H-TDR掺入实验及流式细胞术研究不同浓度硒、锌对两株细胞生长增殖的影响.结果 高浓度硒(0.3μg/ml)、锌(3.5 μg/ml)抑制Eca109细胞增殖,且二者联合作用比单独作用强(P<0.05);高浓度硒、锌单独促进HL7702细胞生长,联合则抑制其生长.生理浓度硒、锌(分别为0.1、1.0μg/ml)对该癌细胞株和正常细胞株生长增殖作用与对照相近(19>0.05).0.3 μg/ml硒引起癌细胞S期阻滞,作用不明显(P>0.05),而3.5 μg/ml锌引起G1期癌细胞显著增加(P<0.05),二者联合使其出现G1期阻滞,并都促进细胞凋亡,联合作用强于单独作用(P<0.05).结论 高浓度硒、锌抑制人食管癌细胞株Eca109生长增殖,且二者联合作用比单独作用强;该联合作用对人正常肝上皮细胞株可能有一定毒性作用.细胞生长周期改变、促进细胞凋亡可能是硒、锌抑制食管癌细胞生长增殖的机制之一.     

HOXA1基因反义寡核苷酸对食管癌细胞生长的影响

  目的  探讨同源异形盒A1(HOXA1)基因反义寡核苷酸（ASODN）对食管癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。  方法  采用蛋白免疫印迹（Western blot）检测正常食管上皮细胞Het-1A和人食管鳞癌TE-1、EC9706和Eca109细胞HOXA1蛋白的表达,筛选高表达的食管鳞癌细胞进行后续实验;设计合成HOXA1 ASODN链、正义寡核苷酸(SODN)链及无义寡核苷酸（N-ODN）链;将筛选出的高表达的食管鳞癌细胞分为HOXA1 ASODN组（5、10、15 μmol/L的HOXA1 ASODN转染Eca109细胞）、对照组（细胞常规培养,不进行细胞转染）、SODN组（细胞转染15 μmol/L的SODN）和N-ODN组（细胞转染15 μmol/L的N-ODN）。采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术、Transwell小室分别检测细胞活力、凋亡率及侵袭迁移能力;Western blot检测HOXA1、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶（p-AKT）、细胞增殖核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、B细胞淋巴瘤-2蛋白（B-cell lymphoma 2,Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。  结果  与正常食管上皮细胞Het-1A比较,人食管鳞癌TE-1、EC9706和Eca109细胞HOXA1蛋白表达均升高,差异有统计学意义（P<0.05）。HOXA1蛋白在Eca109细胞表达最高,因此选用Eca109细胞进行后续实验。转染HOXA1 ASODN的Eca109细胞HOXA1蛋白表达降低（P<0.05）。随着Eca109细胞转染HOXA1 ASODN浓度及时间增加,Eca109细胞活力降低,与对照、SODN、N-ODN组比较差异有统计学意义（P<0.05）。15 μmol/L的HOXA1 ASODN转染Eca109细胞后,与对照组比较,细胞侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高,p-AKT、PCNA和MMP-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高（P<0.05）。  结论  HOXA1基因反义寡核苷酸可抑制食管癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,并诱导凋亡,机制与抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/AKT信号通路可能有关。     

大黄素抑制食管癌EC-109细胞增殖的机制探讨

目的：探讨大黄素对人食管癌细胞株EC-109增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法：不同浓度（0．0,2．5、5．0、10．0、20．0μg/mL）大黄索作用食管癌细胞EC-109,应用噻唑蓝比色法检测大黄素对食管癌细胞增殖的影响;用Annexin V-FTTC碘化丙啶双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞内活性氧变化情况。结果：不同浓度大黄素可明显抑制EC．109细胞增殖,并且呈浓度-时间依赖性;在作用EC-109细胞2h后,细胞内活性氧明显增加;12h后可见细胞凋亡率分别为8．1％、15．6％、24．0％、36．5％。结论：大黄素能明显抑制EC-109细胞的增殖,通过诱导细胞内活性氧的产生引起食管癌细胞EC-109凋亡。     

LIGHT-Fc基因转染上调食管癌细胞ICAM-1的表达

目的探讨LIGHT对人食管癌细胞的体外抑制效应的可能机制.方法以DOTAP脂质体介导LIGHT-Fc基因转染人食管癌细胞株Eca109,通过免疫组织化学及流式细胞仪检测来观察LIGHT-Fc转染对Eca109细胞上ICAM-1表达水平的影响.结果 Eca109细胞表达LIGHT-Fc基因上调了细胞表面ICAM-1的表达水平.结论 LIGHT-Fc基因转染上调人食管癌细胞株上ICAM-1的表达可能是其体外抑瘤效应的一种机制,但全面评价有待进一步的研究.     

LIGHT-Fc基因转染对食管癌细胞株Eca109抑制作用的初步研究

目的探讨LIGHT对人食管癌细胞的体外抑制效应.方法以DOTAP脂质体介导LIGHT-Fc基因转染人食管癌细胞株Eca109,通过绘制细胞生长曲线及MTF比色法观察LIGHT-Fc转染对Eca109细胞生长的影响,用RT-PCR法检测LIGHT受体在Eca109细胞上的表达.结果LIGHT-Fc基因的表达可以抑制Eca109细胞的生长.在低血清培养时,Eca109/LIGHT细胞的生长曲线较对照组明显降低;MTT比色显示Eca109/LIGHT的细胞活力与对照组相比有显著性差异(P＜0.05).结论LIGHT-Fc基因转染对人食管癌Eca109细胞具有体外抑制作用,但全面评价有待进一步的研究.     

S1P5对食管癌细胞Eca109黏附能力的影响

目的研究S1P5对食管鳞癌Eca109细胞黏附能力的影响。方法从人正常食管黏膜上皮克隆S1P5基因,构建表达载体S1P5-EGFP,转染Eca109细胞,经G418筛选,获得S1P5-EGFP/Eca109稳定细胞株。以对照载体Control-EGFP转染的Eca109细胞作为对照,荧光显微镜下观察细胞的形态,用黏附试验评价其黏附能力。结果成功构建S1P5-EGFP和Control-EGFP载体并转染Eca109细胞获得稳定细胞株。S1P5表达于细胞膜并使细胞略呈梭形改变。S1P5过表达致Eca109细胞黏附能力明显低于对照（P〈0.05）,并且不受其配体1-磷酸鞘氨醇（S1P）的影响。结论 S1P5组成性抑制Eca109细胞的黏附能力,食管癌细胞可能通过下调S1P5的表达增强其黏附。     

阿霉素诱导食管癌耐药细胞中ABCG2的表达及其意义

 目的研究阿霉素(ADM)药物诱导食管癌细胞(Eca109)产生耐药细胞株(Eca109/ADM)中ATP结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的表达及其意义。方法通过逐步增加培养液中阿霉素的浓度,长期筛选培养,建立食管癌耐药细胞株Eca109/ADM。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测耐药细胞中ABCG2mRNA的表达量,流式细胞术(FCM)和蛋白印迹(Westernblot)方法检测耐药细胞中ABCG2蛋白的表达量及细胞定位。FCM方法检测Eca109/ADM细胞药物外排作用,MTT方法检测Eca109/ADM细胞对阿霉素的耐药系数。结果Eca109/ADM细胞与Eca109细胞相比,ABCG2表达显著性增高(P<0.05)。Eca109/ADM细胞药物外排作用较Eca109细胞增加,Eca109/ADM细胞对阿霉素的耐药系数为3.29。结论成功建立耐药细胞株Eca109/ADM。Eca109/ADM细胞是一个理想的耐药细胞模型。Eca109/ADM细胞中ABCG2的表达量增高,提示ABCG2参与食管癌细胞耐药的形成。     

一种用于鉴定食管癌相关抗原特异抗血清的制备(简报)

用封闭食管癌正常抗原成分的食管癌细胞Eca109龟疫动物产生的抗血清,可与食管癌细胞株(Eca190及Ecal7)以及食管癌组织切片产生反应。流式荧光细胞技术证明,正常食管粘膜细胞不能除去其活性,经食管癌细胞吸收则活性全部消失,说明该血清活性是针对食管癌相关抗原的。再次证明食管癌相关抗原是存在的。此血清与肝癌细胞株7402、胃癌细胞株7901和鼻咽癌细胞株均有明显的交叉反应,与肉瘤细胞