一氧化氮对兔关节软骨细胞凋亡的影响

目的 :从细胞凋亡的角度探讨一氧化氮 (NO)对软骨细胞的影响。方法 :利用透射电镜技术、流式细胞术 ,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 (TUNEL) ,观察细胞凋亡现象。结果 :硝普钠 ( 3mmol L)诱导下 ,随着作用时间的延长 ,透射电镜可观察到细胞从核边集到核裂解等超微结构的变化过程 ;加药后 12h ,流式细胞术检测到凋亡率为 ( 12 71±3 2 6) % ,随作用时间延长 ,凋亡率逐渐增高 ,2 0h的凋亡率已达 ( 93 4 7± 4 12 ) % ;TUNEL染色法亦得到相应的结果 ;用6mmol L硝普钠诱导 ,透射电镜下可见细胞出现肿胀、破裂成碎片等坏死变化。结论 :高浓度的NO可诱导兔关节软骨细胞凋亡 ,2 0h的凋亡率达到高峰 ;过高浓度的NO可引起细胞坏死。提示细胞凋亡率异常增高是影响组织工程化软骨修复软骨缺损的原因之一     

组织工程化关节软骨细胞凋亡的研究

目的 观察离心管构建的组织工程骨细胞亡及细胞增殖情况。方法 对离心管构建3周的组织工程骨进行透射电镜，流式细胞仪检测和^3H-TdR掺入测定，与3周龄兔关节软骨对照。结果 透射电镜检查组织工程软骨在5％左右的细胞凋亡，正常关节软骨未见明显的细胞凋亡；流式细胞仪显示软骨细胞有8．5％左右的亚二倍体细胞，正常关节软骨在2．4％左右的亚二倍体细胞。^3H-TdR掺入测定显示细胞增殖能力较正常关节软骨明显增强。结论 培养3周的组织工程软骨细胞凋亡与细胞增殖均较正常软骨增强。     

低能量体外冲击波对膝骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡的影响

目的观察低能量体外冲击波(ESW)对膝骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡的影响。方法将30只裸大鼠按随机数字表法分为空白组(n=10)、模型组(n=10)、低能量ESW组(n=10);模型组与低能量ESW组均建立KOA模型,空白组不予以建模;建模6周后,拆除石膏,低能量ESW组予以低能量(0.1 m J/mm2)ESW治疗,冲击1000次。4周后,处死大鼠,行组织形态大体观察及染色观察,并采用TENUL方法对软骨细胞凋亡情况进行检测。结果干预4周末,空白组软骨外观显光亮蓝白色,无裂痕、缺损,软骨结构、潮线显示清楚;模型组膝关节呈现典型的KOA病理改变;而低能量ESW组软骨触摸有软化,少许脱落,潮线模糊。低能量ESW组Moran评分为(5.93±0.71)分,明显高于模型组的(4.32±0.76)分(P0.05);低能量ESW组Mankin评分、细胞凋亡率分别为(8.03±1.07)分、(12.12±1.59)%,均明显低于模型组的(9.78±1.76)分、(14.25±2.23)%,差异有统计学意义(P0.05)。结论低能量ESW可有效抑制KOA大鼠软骨细胞凋亡,对KOA治疗有重要参考价值。     

骨性关节炎关节软骨细胞凋亡的研究进展

随着社会人口的老龄化 ,骨性关节炎 (os teoarthritis,OA)发病率越来越高 ,危害越来越大。1 995年国际OA专题会议提出了OA的最新定义 :认为骨性关节炎是力学和生物学因素共同作用下导致软骨细胞、细胞外基质以及软骨下骨三者降解和合成正常偶联失衡的结果。既往对OA的研究 ,大多数着重于细胞外基质酶性降解和 /或合成新的基质受到抑制而导致软骨的破坏 ,很少注重软骨细胞生存或死亡在OA关节软骨降解中所起的作用。近年来 ,国内外许多学者对OA关节软骨组织学研究发现有软骨细胞减少 ,而软骨细胞凋亡在其中起到关键作用[1 ,2 ] 。1　OA…     

关节软骨创伤早期关节腔内注射透明质酸对软骨细胞凋亡的影响

目的 研究关节软骨创伤（Articular cartilage injury,ACI）后早期行关节腔（Joint cavity,JC）内注射透明质酸（Hyaluronate acid,HA）对软骨细胞（Cartilage cells,CC）凋亡的影响.方法 将2010年3月～2013年3月被确诊为ACI的78例患者,以数字法随机分成观察组与对照组各39例,对照组仅以ACI常规抗感染以及手术等方案治疗,观察组在ACI早期缝合皮肤前行JC内注射HA.对比两组经流式细胞仪以及TUNEL法测定的CC凋亡情况,分析两组CC细胞周期情况.结果 观察组以流式细胞仪测定的CC凋亡率为（3.63±0.46）％,显著低于对照组的（6.87±0.85）％.差异有统计学意义（P＜0.05）.观察组以TUNEL法测定的CC凋亡率为2.98±0.23,显著低于对照组的6.54±0.17.差异有统计学意义（P＜0.05）.观察组G0/G1为82.21±2.02,显著低于对照组的91.32±3.65;S、G2/M、PI分别为8.74±2.65、9.08士1.65和17.81±1.65,均显著高于对照组的3.65±0.27、5.05±0.54和8.71±1.05,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 ACI后早期患者行JC内注射HA,可明显减少CC凋亡,促进患者康复,效果较为显著,值得临床推广应用.     

正常关节和骨关节炎软骨细胞凋亡和超微结构的研究

目的 探讨正常关节和骨关节炎（OA）软骨细胞凋亡和超微结构的变化,以及正常关节和OA关节软骨细胞体外培养的凋亡来分析骨关节炎可能的发病机制。方法 胡氏造模法制作新西兰大白兔OA模型,3周后切取关节软骨,末端原位标记染色法分析正常关节软骨,骨关节炎软骨的细胞凋亡。分离关节软骨细胞体外培养,然后通过钙黄绿素和双FITC-AI双染色,分析软骨细胞的活力和凋亡情况,同时切取关节软骨细胞行透射电镜分析软骨细胞中一些超微结构的变化。结果 发现OA组软骨中凋亡细胞（14.32±3.17）比正常组（4.54±1.17）明显增多,两组间比较差异有统计学意义（t''=15.85,P<0.05）;而体外培养的软骨细胞中,OA组分离的软骨细胞存在大量凋亡细胞（83.63±20.11）和正常组（91.45±4.70）比较,差异有统计学意义（t''=2.07,P<0.05）。OA组部分软骨细胞的活力明显增强,OA组为79.45±3.60,正常组为75.60±5.33（t=3.28,P<0.01）。在超微结构的研究中,发现大量软骨细胞内的超微结构,有明显的变化,特别是线粒体在正常组为7.3±2.3,而OA为3.4±1.7,明显减少,比较差异有统计学意义。OA组染色质边缘化,空泡化和分布异常也非常明显。结论 在OA模型中,存在软骨细胞大量凋亡现象,通过超微结构现象分析凋亡细胞增多同时存在染色质的减少和分布异常,以及一些细胞小体的减少,可能和软骨细胞能量过度代谢和线粒体的减少等有密切的关系。     

过度运动对大鼠膝关节软骨细胞凋亡的影响

目的探讨过度运动对大鼠膝关节软骨细胞凋亡的影响。方法 Sprague-Dawley大鼠40只,随机分为8组。1～7组为运动组,第8组为对照组。分别于运动1～6w以及实验第8w,每周取5只鼠的股骨内髁关节软骨。所取标本常规HE染色(苏木精伊红染色),并使用免疫组化TUNEL法和Caspase-3活性的检测法检测软骨细胞凋亡指数。结果 (1)HE染色法显示运动组随着运动时间的延长逐渐出现出现软骨细胞增生,中间层细胞数目增多,肥大细胞层细胞数目明显增多,基质淡染,表层细胞没有明显改变。恢复2w后(实验第8w)标本切片HE染色结果与运动6w后相比,中间层细胞及肥大细胞层细胞数目较前减少,表层细胞没有明显改变,但数目未恢复对照组水平。(2)TUNEL法检测与Caspase-3活性检测方法结果显示运动组4w以后出现细胞数目增多,凋亡细胞数增多,基质染色不均,淡染。统计结果与1～3w比较,差异有统计学意义。恢复2w后(实验第8w)检测结果细胞数目及凋亡细胞均有所减少,但仍大于对照组水平。结论过度运动可引起大鼠关节软骨的组织学改变;过度运动4w后可引起大鼠膝关节软骨细胞的凋亡。     

早期关节腔内注射透明质酸对老年关节创伤患者软骨细胞凋亡的影响

目的分析早期关节腔内注射透明质酸对老年关节创伤后患者软骨细胞凋亡的影响。方法选取2014年11月至2016年5月内乡县人民医院收治的86例老年关节创伤患者,根据关节腔是否注射透明质酸分为两组,各43例。对照组行常规手术及抗感染治疗,观察组在此基础上给予关节腔内注射透明质酸治疗。对比观察两组软骨细胞凋亡率、细胞周期细胞比例及增殖指数。结果观察组细胞凋亡率、细胞周期细胞比例、细胞增殖指数均显著优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对创伤性关节炎患者早期进行关节腔内注射透明质酸,可有效降低患者关节软骨细胞凋亡率,增加细胞增殖指数,临床疗效显著,值得推广应用。     

高碘大鼠甲状腺超微结构的变化及硒对其的干预

目的探讨高碘摄入的大鼠甲状腺超微结构的变化及硒对其的干预作用。方法 Wistar大鼠随机分为对照组、高碘组和高碘加硒组,高碘加硒组灌胃给予亚硒酸钠,观察实验结束时各组大鼠电镜下甲状腺的超微结构。结果高碘组大鼠甲状腺滤泡上皮细胞破坏、凋亡,线粒体、高尔基体肿胀,与高碘组相比,高碘加硒组大鼠甲状腺细胞学破坏减轻。结论高碘摄入可造成大鼠甲状腺滤泡破坏、凋亡,提示功能受损,而硒对此有保护作用。     

缺锌对增殖期大鼠生长板软骨细胞凋亡的影响

目的 探讨锌缺乏对增殖期大鼠肋生长板软骨细胞(RGC)凋亡的影响,为阐明锌对骨骼生长发育影响的机制提供科学依据.方法 体外培养Wistar大鼠RGC,用0,5,10及20μmol/L的锌螯合剂N-N-N′-N′-4(2-吡啶甲基)乙二胺(TPEN)分别处理细胞12 h.采用流式双染试剂盒研究早期凋亡和晚期凋亡细胞百分比.以5μmol/L TPEN作用6,12,24 h,利用免疫组化技术检测细胞中凋亡诱导因子(AIF)的定位表达,并利用Western blot和实时定量PCR(real-time PCR)检测其表达水平的变化.结果 随着TPEN浓度的增高,RGC细胞凋亡率也逐渐增加,各组早期凋亡和晚期凋亡细胞百分比增大,AIF的表达水平也逐渐升高.免疫组化染色结果显示在TPEN作用6 h后,AIF已从线粒体迁出,12 h及24 h后,大部分AIF已从线粒体迁至细胞核.结论 锌缺乏可以诱导RGC细胞凋亡,在凋亡的过程中AIF发挥着关键作用.     

长期低硒、低碘对子代发育期大鼠甲状腺形态结构及PCNA表达的影响

目的:研究长期低硒、低碘饲料喂养对子代发育期大鼠甲状腺组织形态结构以及PCNA表达的影响。方法:选取人工低硒、低碘饲料喂养繁殖的SD大鼠模型的仔3代胎鼠(F3E)、4日龄(F3P4)、21日龄(F3P21)、成年(F3A)4个时间点的甲状腺石蜡标本,常规切片,苏木精-伊红染色,免疫组化染色,镜下观察,滤泡计数。动物模型分为对照组,低硒(Se-)组,低碘(I-)组和低硒、低碘(Se-I-)组,各组分别喂以不同硒、碘水平的人工配制饲料,繁衍至仔4代。取甲状腺,制做石蜡切片。结果:各发育期时间点I-组与Se-I-组甲状腺体积增大,重量增加,滤泡增生,排列紧密。这种增生现象从胎鼠期间即有出现。在成年大鼠Se-组甲状腺滤泡有坏死和纤维化。PCNA在Se-I-组与I-组均强阳性表达,强阳性表达百分比依次为成年Se-I-组50%,I-组28.6%。21 d Se-I-组21.4%,I-组16.7%。结论:低碘和低硒、低碘均可致仔代发育期大鼠甲状腺滤泡明显增生。这种增生现象在胚胎期即表现。低硒能引起部分仔代大鼠甲状腺滤泡的坏死与纤维化。     

参麦注射液对脓毒症模型大鼠肾脏细胞凋亡和Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的:观察参麦注射液对脓毒症模型大鼠肾脏细胞凋亡及其Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:45只SD大鼠随机分为假手术组、脓毒症模型组和参麦组,每组15只。采用盲肠结扎穿刺法(CLP)造模。脓毒症模型组术前1h腹腔内注射生理盐水10mL/kg,假手术组除不结扎和穿刺盲肠外,其余操作同脓毒症模型组。参麦组术前1h腹腔内注射参麦注射液10mL/kg。术后24h取大鼠肾脏组织,采用TUNEL法检测并计算肾脏细胞凋亡指数(AI),免疫组化检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:三组大鼠体质量差异无统计学意义(P>0.05),三组大鼠均可见肾脏细胞凋亡,细胞凋亡多发生于肾小球细胞。脓毒症组和参麦组肾脏细胞AI均高于假手术组(P<0.01),参麦组肾脏细胞AI虽低于脓毒症组,但差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,脓毒症组和参麦组肾脏细胞Bcl-2表达下降(P<0.01,P<0.05),Bax表达上调(P<0.01),Bcl-2/Bax比值减小(P<0.01)。与脓毒症组比较,参麦组Bcl-2明显上调(P<0.01),Bax表达下调(P<0.05),Bcl-2/Bax比值增大(P<0.01)。结论:参麦注射液能上调脓毒症模型大鼠肾脏细胞Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少脓毒症大鼠肾脏细胞凋亡。     

参附芎泽注射液对压力超负荷大鼠血流动力学和细胞凋亡的影响

目的:探讨参附芎泽注射液对压力超负荷大鼠血流动力学和细胞凋亡的影响.方法:参照Ohkusa等介绍的方法复制腹主动脉缩窄大鼠模型.左心室插管术测定血流动力学指标;S-P免疫组化方法和图像分析技术检测心肌细胞凋亡相关基因Bc1-2和Bax的表达.结果:与假手术组相比,模型组左室内压力峰值(LVSP)、左心室内压最大下降速率(LVdp/dtmax)及左心室内压最大上升速率( LVdp/dtmax)下降;收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、左室舒张末期压(LVEDP)升高;Bcl-2蛋白表达光密度值(OD值)减少、Bax蛋白表达OD值增多.参附芎泽注射液组与模型组相比,LVSP、±Lvdp/dtmax升高,LVEDP、SBP、DBP降低;Bcl-2表达明显增多而Bax的表达减少,均有显著性差异(P<0.05或P<0.01).与依那普利组相比无显著性差异.结论:参附芎泽注射液对压力超负荷大鼠血流动力学有明显的改善作用,抑制左心室心肌细胞凋亡,提高心功能.     

科素亚治疗心力衰竭对大鼠心肌细胞凋亡及Bax，Bcl-2蛋白表达的影响

目的 应用氯沙坦甲片(科素亚)治疗慢性压力负荷性心力衰竭大鼠,探讨其对心肌细胞凋亡的改变及凋亡蛋白Bax,Bel-2蛋白表达水平的影响.方法 采用鼠的腹主动脉缩窄术,复制心力衰竭模型,30只大鼠随机分为心衰组,治疗组和对照组,各10只.手术后6周,充血性心力衰竭模型形成.治疗组给予科素亚30mg/(kg·d)灌胃.心衰组和对照组分别给予等量0.9%生理盐水灌胃.在3个月后测量血流动力学指标,用原位脱氧核糖核酸酶末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;免疫组织化学染色法测心肌Bax,Bel-2蛋白表达.结果 心衰组与对照组相比,心功能明显减退(P<0,01),心肌细胞凋亡指数明显增加(P<0.01),在心肌细胞中Bcl-2蛋白表达减少、Bax蛋白表达增加,Bel-2/Bax的比率降低.科素亚治疗组与心衰组相比,心室重构改善(P<0.05),心肌细胞凋亡减少(P<0.01);增加Bel-2、减少Bax在心肌细胞中的蛋白表达(P<0.05).结论 心力衰竭大鼠的心肌细胞凋亡指数的增加与Bel-2蛋白表达降低、Bax蛋白表达增加有关.减少Bax蛋白表达,同时增加Bel-2蛋白表达,从而抑制心肌细胞凋亡改善心功能,是科素亚治疗心力衰竭的重要机制之一.     

异丙酚对缺氧复氧大鼠海马胶质细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:观察异丙酚对缺氧复氧大鼠海马胶质细胞凋亡及Bc l-2和Bax蛋白表达的影响。方法:取新生2~3 dW istar大鼠海马星形胶质细胞,原代纯化培养3周。将细胞分为正常对照组,乳剂对照组,缺氧4 h后复氧12h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h组,加异丙酚250μmol/L缺氧4 h后复氧12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h组。分别于各时间点检测每组细胞凋亡及Bc l-2和Bax蛋白表达变化。结果:与正常对照组比较,缺氧复氧组细胞随着时间延长凋亡不断增加,Bc l-2蛋白24 h时间点表达最高,随后逐渐降低,Bax蛋白24 h表达低,随着时间延长不断增加,72 h时间点最高,Bc l-2/Bax蛋白比值于24 h、48 h和72 h时间点分别为1.4、0.8和0.6。与缺氧复氧组比较,异丙酚处理组凋亡明显减少,Bax蛋白表达降低,Bc l-2蛋白24 h内表达升高达峰值,此后有所降低但仍维持较高水平,且Bc l-2蛋白表达持续高于Bax蛋白,Bc l-2/Bax蛋白比值保持在1.6~1.8之间。结论:异丙酚可抑制缺氧复氧后海马反应性星形胶质细胞表达Bc l-2和Bax蛋白的动态变化,使Bc l-2/Bax蛋白比值持续保持较高水平而发挥良好的保护作用。     

槲皮素对脑出血大鼠神经细胞凋亡与Bcl-2、Bax蛋白表达的作用研究

目的通过观察大鼠脑出血后神经细胞凋亡与Bcl-2、Bax蛋白表达的动态变化及槲皮素的干预作用,探讨槲皮素可能的神经保护作用及机制。方法以雄性健康SD大鼠通过自体血注入法制备大鼠脑出血模型,并随机分为假手术组、脑出血模型组、槲皮素低剂量组、槲皮素高剂量组,共4组,每组30只;槲皮素低剂量组和槲皮素高剂量组分别给予槲皮素10、50 mg/(kg·d)腹腔内注射,假手术组和脑出血模型组给予同等体积生理盐水腹腔内注射,每日1次,连续7 d;各组大鼠分别在术后第6小时、1天、2天、3天、7天通过前肢放置试验评分法评估神经功能缺损,采用TUNEL法检测血肿周围神经细胞凋亡,采用Western blot法检测血肿周围Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果与模型组比较,槲皮素低剂量组在脑出血后第3天、7天及槲皮素高剂量组在第2天、3天、7天的前肢放置试验评分和Bcl-2蛋白表达均明显增加(P<0.01);与模型组比较,槲皮素低剂量组在第3天、7天及槲皮素高剂量组在第1天、2天、3天、7天的神经细胞凋亡率和Bax蛋白表达均明显降低(P<0.01)。结论槲皮素能减轻脑出血后神经功能损伤,其机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,从而减少神经细胞凋亡有关。     

TCDD诱导软骨细胞细胞凋亡的研究

目的:探讨不同浓度的TCDD对体外培养软骨细胞程序性死亡过程的影响。方法:胰酶消化法体外培养兔的软骨细胞;软骨细胞株暴露于二英(TCDD)24 h(浓度为1×10-10~1×10-8mol/L);光镜和透射电镜观察软骨细胞株细胞形态变化;流式细胞仪检测软骨细胞株细胞凋亡率。结果:1×10-10~1×10-8mol/L的TCDD诱导软骨细胞出现核固缩、碎裂和凋亡小体,并随TCDD浓度的增加而更明显;TCDD诱导的软骨细胞凋亡呈剂量依赖效应,1×10-10~1×10-8mol/L浓度的TCDD作用24 h后,软骨细胞株凋亡率分别为11.75%±2.41%,19.5%±2.75%,27.5%±3.45%,对照组为5.21%±2.46%,差异有显著性(P<0.05)。结论:TCDD可以诱导体外培养的软骨细胞发生细胞凋亡。     

麝鼠香调控Bcl-2/BaX蛋白表达抑制缺血性大鼠心肌细胞凋亡

目的 研究麝鼠香(Muskrat musk,Mrm)对大鼠心肌缺血(myocardial ischemia,MI)模型心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响.方法 通过结扎大鼠左冠状动脉前降支复制大鼠MI模型.实验动物随机分为6组:假手术组、模型组、阳性对照组、麝鼠香高、中、低(600、300、150mg·kg-1·d-1剂量组).采用原位末端标记(TUNEL)法进行细胞凋亡指数检测;免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 与模型组比较,麝鼠香高、中剂量组心肌细胞凋亡指数明显降低,Bcl-2蛋白表达水平显著升高,Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2/Bax比值升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 麝鼠香通过调控Bcl-2/Bax蛋白表达,能有效抑制心肌细胞凋亡的发生,对缺血心肌提供保护作用.     

福辛普利对心肌缺血再灌注损伤心肌细胞的作用和对Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨福辛普利对大鼠心肌缺血再灌注模型心肌细胞凋亡及相关调控基因Bcl-2、Bax表达的影响及相关机制。方法24只动物随机分成假手术组（n=8），缺血再灌注损伤组（n=8）和福辛普利预处理组（n=8），再灌注24h后处死动物。用透射电镜观察大鼠心肌超微结构的变化，TUNEL法检测心肌细胞凋亡，RT-PCR检测Bcl-2及Bax基因表达。结果电镜结果显示福辛普利的应用促使缺血再灌注大鼠心肌组织肌原纤维排列趋于恢复正常、线粒体肿大好转、细胞核和核仁显示良好，无细胞核变形，无胞核空洞样变及核固缩等现象。TUNEL显示福辛普利组细胞凋亡明显减少。缺血再灌注损伤24h后心肌组织Bcl-2基因表达较假手术组显著降低，而Bax基因表达则显著增高，福辛普利则可以逆转这种趋势。结论应用福辛普利能抑制心肌缺血再灌注损伤导致的心肌细胞凋亡，发挥心肌保护作用，从而缓解缺血再灌注损伤的发生发展。