胃癌腹腔微转移的检测及其预后意义

目的　评估用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR )方法检测胃癌腹腔微转移的临床病理意义。方法　采用RT PCR方法检测 5 0例胃癌腹腔冲洗液中角蛋白CK 2 0mRNA的表达情况 ,同时作涂片细胞学检查。结果　RT PCR方法检测腹腔冲洗液中CK 2 0mRNA阳性率 ( 5 4.0 % ,2 7/5 0 )明显高于涂片细胞学检查的阳性率 ( 3 2 .0 % ,16/5 0 )。CK 2 0mRNA阳性率与胃癌浸润深度及组织学类型有关 (P <0 .0 5 )。CK 2 0mRNA阳性、阴性胃癌患者 3年生存率分别是 2 5 .9%和 65 .2 % (P <0 .0 1)。结论　RT PCR方法是检测胃癌腹腔微转移灶的敏感方法 ,有助于指导术后治疗及预后判断     

肺癌患者外周血癌胚抗原 mRNA和细胞角蛋白19 mRNA的联合检测

目的　观察肺癌患者外周血循环细胞中癌胚抗原 (CEA)mRNA和细胞角蛋白 19(CK19)mRNA的表达情况 ,并探讨CEAmRNA和CK19mRNA联合检测的临床意义。方法　用RT PCR方法 ,分别检测 5 0例肺癌患者、2 5例肺部良性疾病患者和 37例健康志愿者外周血中CEAmRNA和CK19mRNA的表达 ,并对CEAmRNA和CK19mRNA联合检测与单项检测的阳性率进行比较 ,分析联合检测对肺癌诊断的灵敏度与特异性。结果　 5 0例肺癌患者中 ,CEAmRNA阳性表达率为 6 0 .0 % (30 / 5 0 ) ,CK19mRNA阳性表达率为 38.0 % (19/ 5 0 ) ,两者联合检测阳性率为 82 .0 % (41/ 5 0 )。联合检测与单项检测相比 ,能显著提高诊断灵敏度 ,且并不影响特异性。联合检测与单项检测相比 ,灵敏度差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,特异度差异无显著性 (P >0 .0 5 )。同时 ,肺癌患者的联合检测阳性率亦均显著高于肺部良性疾病组 (2 5例 ,阳性率 2 8.0 % )和健康对照组 (37例 ,阳性率 8.1% ;P <0 .0 0 1)。结论　外周血循环细胞中CEAmRNA和CK19mRNA的联合检测可提高肺癌细胞向外周血播散的检出率 ;随访并扩大样本含量有助于探讨其在检测微转移中的意义     

大肠癌患者外周血CEAmRNA和CK20mRNA的联合检测及临床意义

目的：探讨大肠癌患者外周血CEAmRNA和CK20mRNA表达情况及临床意义。方法：应用RT—PCR方法检测46例大肠癌患者、22例大肠良性肿瘤患者及30例正常人外周血CEAmRNA和CK20mRNA。结果：在良性肿瘤组及正常人组中，CEAmRNA及CK20mRNA均无表达，而在大肠癌患者中的阳性率分别是54％和61％，二者联合检测阳性（至少一项阳性）率为72％，较单项阳性率高（P〉0．05）。二者表达与患者性别、年龄及肿瘤分化程度无明显相关，而与临床分期及淋巴结转移明显相关。结论：联合检测有助于提高肿瘤微转移检出率，其表达与临床分期及淋巴结转移明显相关，可作预后参考指标。     

胃癌患者外周血癌胚抗原mRNA表达及其临床意义分析

目的：探讨胃癌患者外周血癌胚抗原（CEA）mRNA表达及其与相关病理因素、近期疗效、预后的关系。方法：应用TaqMan定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测58例胃癌患者化疗前、后20例健康对照者外周血癌胚抗原CEAmRNA表达；同时采用化学发光法测定胃癌患者血清CEA水平。患者随访2年。结果：胃癌患者外周血CEAmRNA阳性率为56．89％（33／58），显著高于健康对照组，二者差异有统计学意义（P〈0．001）；胃癌患者外周血CEAmRNA表达与肿瘤浸润深度（P=0．035）、淋巴结转移（P=0．042）、远处转移（P=0．006）和血清CEA水平相关（P=0．001）；多因素Logistic回归分析表明：淋巴结转移和血清CEA水平是影响胃癌患者外周血CEAmRNA表达的独立因素；血清CEA阳性率31．03％（18／58），胃癌患者外周血CEAmRNA的阳性率显著高于CEA蛋白水平（Χ^2=7．873，P=0．005），TaqMan定量RT—PCR与化学发光法检测CEA的符合率为88．89％（化学发光法检测阳性的病例TaqMan定量RT—PCR检测阳性率）；化疗后CEAmRNA阳性率略有下降，但不显著。近期疗效无效的患者外周血CEAmRNA的阳性率显著高于近期疗效有效的患者（Χ^2=9．992，P=0．002）。平均随访2年后，CEAmRNA阳性患者与阴性患者的1年生存率分别是33．33％和77．27％，差异具有显著性（P=0．002）。结论：外周血CEAmRNA可作为检测胃癌患者肿瘤细胞微转移的分子标志；定期监测胃癌患者外周血CEAmRNA表达有助于评估化疗疗效和预测预后。肿瘤浸润深度和血清CEA蛋白水平与外周血肿瘤细胞微转移相关。CEAmRNA的检测优于蛋白水平的检测，有助于胃癌的早期诊断。     

检测CK19 mRNA、CEA mRNA诊断非小细胞肺癌外周血微转移

目的 探讨检测细胞角蛋白(cytokeratin 19，CK19)mRNA、癌胚抗原(cancer embryonic antigen，CEA)mRNA诊断非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者外周血微转移的临床意义。方法 应用RT-PCR法检测35例NSCLC患者外周血中的CK19mRNA、CEAmRNA，并以20例良性病变、20例健康人作对照。结果 35例NSCLC患者外周血CK19mRNA、CEAmRNA阳性表达率分别为40％和57％，两者均阳性者40％，两者均阴性者43％；肺良性疾病患者20例，CK19mRNA阳性2例(10％)，无CEAmRNA阳性者；20例健康对照2个指标检测结果均为阴性。随访发现CK-19mRNA阳性、CEAmRNA阳性和二者均阴性患者的远处转移率分别为50％、56％和27％。结论CEAmRNA和CK19mRNA是检测肺癌患者外周血微转移的良好标志物，检测外周血微转移有助于预测肺癌患者预后。     

胃癌患者外周血肿瘤细胞的检测

目的　探讨监测胃癌患者早期血行转移的敏感方法 ,以及检测外周血肿瘤细胞对预测胃癌患者的微小转移、评估预后、提供治疗参考的意义。方法　采用RT -PCR方法检测 3 0例胃癌患者、2 0例良性胃病患者、10例健康对照者外周血中CK 2 0mRNA。胃癌组按临床病理分为TNMⅠ～Ⅳ期 ,TNMⅠ期 3例 ,Ⅱ期 9例 ,Ⅲ期 12例 ,Ⅳ期 6例。按组织分化程度分为高、中、低分化 ,高分化 4例 ,中分化 8例 ,低分化 18例。结果　良性胃病患者及健康对照者CK 2 0mRNA均阴性。胃癌患者CK 2 0mRNA阳性率为 43 .3 % (13 /3 0 )。TNMⅠ～Ⅳ期CK 2 0mRNA阳性率分别为 0 (0 /3 )、11.1% (1/9)、5 0 .0 % (6/12 )、10 0 .0 % (6/6)。高分化胃癌CK 2 0mRNA阳性率为 0 (0 /4 ) ,中分化及低分化分别为 2 5 .0 % (2 /8)、61.1% (11/18)。CK 2 0mRNA阳性率与胃癌患者的临床病理分期、肿瘤的分化程度密切相关 (P <0 .0 5 )。结论　RT -PCR技术检测CK 2 0mRNA可作为监测胃癌早期血行转移的敏感方法 ,CK2 0mRNA可作为预测胃癌患者微小转移、评估预后、提供治疗参考的指标     

CK20、CK19、CEA在肺癌患者外周血中的表达及其意义

背景与目的 恶性肿瘤在其早期阶段即可能发生微转移,由于进入血液循环中的肿瘤细胞数目极少,常规的检测手段不易发现,现代分子生物学技术进展使微转移检测成为可能.本研究联合检测肺癌患者的外周血CK20、CK19、CEA mRNA表达,并分析其临床意义.方法 应用巢式RT-PCR法分析83例肺癌患者外周血单个核细胞CK20、CK19、CEA mRNA表达情况;另取15例食管癌组织为阳性对照,15例非肿瘤患者外周血为阴性对照.结果 83例肺癌患者外周血中,CK20阳性表达率为34/83(41.0%),CK19阳性表达率为30/83(36.1%),CEA阳性表达率为40/83(48.2%);三者至少一项阳性的表达率为61/83(73.5%).15例食管癌组织中CK20、CK19、CEA阳性表达率100%,15例阴性对照组外周血CK19、CEA阳性表达率均为2/15(13.3%);CK20阳性表达率为1/15(6.6796).CK20、CK19、CEAmRNA阳性表达与肿瘤有无转移有关(P<0.05),与肿瘤患者的年龄、性别无关.结论 CK20、CK19、CEAmRNA可作为检测肺癌患者外周血微转移的靶基因,联合检测CK20、CK19、CEA可增加外周血循环癌细胞的检出率,CK20、CK19、CEAmRNA同时表达可增加实验结果特异性.     

大肠癌患者外周血CEAmRNA和CK20mRNA的联合检测及临床意义

目的:探讨大肠癌患者外周血CEAmRNA和CK20mRNA表达情况及临床意义.方法:应用RT-PCR方法检测46例大肠癌患者、22例大肠良性肿瘤患者及30例正常人外周血CEAmRNA和CK20mRNA.结果:在良性肿瘤组及正常人组中,CEAmRNA及CK20mRNA均无表达,而在大肠癌患者中的阳性率分别是54%和61%,二者联合检测阳性(至少一项阳性)率为72%,较单项阳性率高(P＞0.05).二者表达与患者性别、年龄及肿瘤分化程度无明显相关,而与临床分期及淋巴结转移明显相关.结论:联合检测有助于提高肿瘤微转移检出率,其表达与临床分期及淋巴结转移明显相关,可作预后参考指标.     

胃癌患者外周血及骨髓微转移检测的临床意义

目的:探讨检测胃癌患者外周血和骨髓CK20 mRNA表达的敏感性、特异性及临床意义.方法:采用RTPCR技术,同时对照检测49例胃癌患者、5例胃良性病变患者及5例健康志愿者骨髓与外周血中的CK20 mRNA表达.结果:49例胃癌患者中,骨髓和外周血CK20阳性表达率分别为49.0%(24/49),32.7%(16/49),二者差异有统计学意义(P＜0.05).其中2例外周血CK20表达阳性,骨髓表达阴性.健康志愿者及良性病变患者外周血及骨髓中未检测到CK20表达.本实验中CK20 mRNA RT-PCR技术的灵敏度为10～-5.胃癌的微转移状况与组织分化程度和肿瘤TNM分期有关.结论:应用RT-PCR法以CK20为标志物检测胃癌微转移细胞特异性高.骨髓检测胃癌微转移较单次采血更敏感,但外周血检测仍能提供一些有价值的资料.     

手术操作对大肠癌患者肿瘤细胞血行扩散的影响

目的　探讨手术对大肠癌血行扩散的影响。方法　对 2 3例行根治手术切除的大肠癌患者 ,分别于肿瘤切除前后采取外周静脉血 ,采用巢式RT PCR方法检测血中CEAmRNA表达情况。同时取该患者的肿瘤组织作阳性对照 ,以 2 0例正常人外周血作阴性对照。结果　手术前后外周血中CEAmRNA阳性表达率分别为 3 4.8%和 69.6% (P =0 .0 4)。 91.3 % ( 2 1/ 2 3 )的病例肿瘤组织CEAmRNA表达呈阳性。 2 0例正常人外周血中CEAmRNA均为阴性。结论　手术操作可促进大肠癌肿瘤细胞的血行扩散     

大肠癌患者外周血中细胞角蛋白19和癌胚抗原的表达及临床意义

目的:应用巢式逆转录聚合酶链反应（nested RT-PCR）技术检测大肠癌患者外周血中CK19 mRNA、CEA mRNA的表达及临床意义,探讨其作为大肠癌微转移检测分子标记物的可能性。方法:应用巢式RT-PCR技术检测20例健康人、20例大肠腺瘤疾病患者和90例大肠癌患者外周血CK19 mRNA和CEA mRNA的表达。结果:大肠癌组CK19 mRNA和CEA mRNA表达的阳性率为58.89%（53/90）和53.33%（48/90）;20例健康人外周血中无CK19 mRNA和CEA mRNA的表达; 20例大肠腺瘤疾病患者有1例CK19 mRNA的表达,阳性率为5.00%（1/20）,无CEA mRNA的表达。大肠癌患者中CK19 mRNA、CEA mRNA的阳性率与肿瘤分期及肿瘤转移有显著相关性（P＜0.05)。结论:CK19 mRNA和CEA mRNA作为检测大肠癌患者外周血微转移的分子标记物具有良好的敏感度和特异性,同时可作为判断大肠癌患者的预后指标。     

胃肠道癌外周血CK20 mRNA的表达及临床意义

背景与目的:检测上皮组织特异性标志物,如CK19、CK20、多形上皮粘蛋白的核心蛋白(MUC1)及CEA等,在外周血、淋巴结及骨髓中的表达,是诊断早期胃肠道癌微转移的重要手段之一。本研究通过检测手术前、后胃肠道癌患者外周血细胞角蛋白20信使核糖核酸(CK20mRNA)的表达,了解胃肠道癌血行播散转移情况及在围手术期综合治疗中的意义。方法:采用巢式逆转录-聚合酶链式反应(Nest-RT-PCR)检测62例胃肠道癌患者手术前后外周血CK20mRNA的表达状况。结果:62例样本中,34例(54.3%)术前CK20mRNA检测为阳性,31例(50.0%)术后CK20mRNA检测为阳性,对照组10例正常人及12例良性胃肠病患者CK20mRNA测定均为阴性。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者外周血CK20mRNA阳性率依次为37.5%、36.3%、66.7%、100.0%。Ⅰ、Ⅱ期患者与Ⅲ、Ⅳ期患者比较,两者间CK20mRNA的阳性率(分别为36.9%和83.3%)有显著性差异(P<0.05)。胃肠道癌的分化程度及癌栓的形成与外周血CK20mRNA的表达无关。有局部淋巴结转移患者与无淋巴结转移患者的阳性表达率有显著性差异(P<0.01)。手术前后外周血CK20mRNA阳性率差异无显著性(P>0.05)。结论:外周血CK20mRNA检测可作为胃肠道癌微转移的判断指标之一,对临床正确分期及治疗起指导作用。     

CK20m RNA在大肠癌病人外周血中的表达及其临床意义

目的：以CK20mRNA作为靶产物,检测大肠癌病人外周血中的癌细胞即微转移。并探讨其存在的临床意义。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）。检测20例健康志愿者和47例大肠癌患者外周血中CK20mRNA的表达。同时检测20例大肠癌新鲜组织标本中CK20mRNA的表达。结果：20例大肠癌组织标本均扩增出370bp的条带。结肠腺癌HT-29细胞系作为阳性对照亦扩增出370bp的条带,20例正常人外周血中CK20mRNA表达均阴性。全组47例大肠癌病人,19例外周血中表达CK20mRNA,总阳性率为40.4%(19/47),CK20mRNA的表达与肿瘤Dukes分期,最大直径,肝转移有关,结论：CK20mRNA可作为检测大肠癌病人外周血中微转移的良好指标;外周血中CK20mRNA的检测有助于识别出具有复发或远处转移倾向的高危大肠癌病人。     

胃肠恶性肿瘤外周血微转移的检测及其临床意义

目的研究胃癌、大肠癌患者外周血CK20 mRNA的表达,并探讨其临床意义。方法采用RT-PCR方法检测47例胃癌患者、58例大肠癌患者和6例非恶性病手术志愿者骨髓、门静脉和外周血CK20 mRNA的表达,并随访1年。结果6例健康志愿者无CK20 mRNA阳性表达;47例胃癌患者骨髓、门静脉血CK20 mRNA阳性表达率分别为87.2％(41/47)和85.1％(40/47);58例大肠癌患者骨髓、门静脉血阳性表达率分别为77.6％(45/58)和74.1％(43/58)。单次外周血采样CK20 mRNA阳性表达率胃癌患者为42.6％(20/47),大肠癌患者为44.8％(26/58);两次采样总阳性率胃癌患者为74.5％(35/47),大肠癌患者为69.0％(40/58)。外周血总阳性率略低于骨髓和门静脉血(P>0.05),外周血重复采样阳性率高于单次采样(P<0.05)。Duke C期患者CK20 mRNA阳性表达率高于DukeA、B期(P<0.05)。1年局部或远处复发率CK20 mRNA外周血阳性表达患者高于阴性者(P<0.05)。结论胃肠癌患者外周血CK20 mRNA RT-PCR检测有与骨髓、门静脉血相似的敏感性和特异性,可以作为检测胃肠癌微转移的指标并指导其治疗和预后。     

荧光定量聚合酶链反应检测大肠癌患者外周血癌细胞角蛋白20 mRNA

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测大肠癌患者外周血癌细胞角蛋白20 mRNA(CK20 mRNA)的表达水平及临床价值。方法采用FQ-PCR法测定136例结直肠癌及其肝脏转移患者外周血癌细胞CK20 mRNA的表达水平,系统研究了FQ-PCR法测定CK20 mRNA的重复性、定量范围和扩增效率,分析比较其与传统RT-PCR、免疫组化法检测结果的一致性。结果FQ- PCR法测定CK20 mRNA的批内CV为3.6%,批间CV为5.3%,定量范围为10~3～10~8 copies/ml,扩增效率为87.4%。与传统RT-PCR和免疫组化法相比较,Kappa值分别为0.87和0.83。结直肠癌患者外周血癌细胞CK20 mRNA的表达水平为(3.52×10~4±1.47×10~4)copies/ml,表达阳性率为48.5%;75例对照者均无CK20 mRNA表达。Dukes A、B、C、D期大肠癌患者外周血癌细胞CK20 mRNA的阳性率分别为9.5%、25.0%、48.8%和87.5%,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。肝脏转移者CK20 mRNA阳性率为87.5%,显著高于肝脏无转移者(32.3%,P<0.05)。35例结直肠癌患者术后1、3、5周内CK20 mRNA表达水平呈下降趋势,但术后1、3周与术前比较,差异无统计学意义(P>0.05),术后5周显著低于术前(P<0.05)。结论FQ-PCR是较灵敏的快速定量检测CK20 mRNA的方法。大肠癌患者外周血癌细胞CK20 mRNA的表达与肿瘤的复发和转移有关,CK20 mRNA检测将有助于大肠癌血源性播散的监测。     

胃肠癌患者外周血组织特异性mRNA的检测及其临床意义

目的 研究77例胃肠癌患者外周血中组织特异性mRNA（CK20、CK19及CEA）的表达,并探讨其意义.方法 RT-PCR技术检测77例胃肠癌患者术前外周血中CK20、CK19、CEA mRNA的表达.结果 77例胃肠癌患者外周血中,CK20、CK19及CEA的阳性表达率分别为44.2%、35.1%及54.5%;三基因同时检测时,至少一个基因检测结果为阳性的表达率为74.0%,与肿瘤的组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及复发具有相关性.结论 分子生物学技术联合检测多种标志物检测肿瘤细胞的外周血微转移,可提高检测的敏感性及准确性,有助于指导临床治疗及预后判断.