围生期双酚A暴露对断乳期雄性子代脑芳香化酶表达的影响

目的：研究围生期双酚A暴露对断乳期雄性子代大鼠脑中芳香化酶P450（P450arom）表达的影响，探索双酚A影响脑发育的机制。方法：对母鼠从妊娠第11d直至产后断乳期（即出生后第21d，postnatal day 21，PND21）给予双酚A（Bisphenot A，BPA）2，20，100mg／kg。各组在断乳期PND21取雄性子代大鼠断头处死，迅速取脑组织进行免疫组织化学染色检测P450arom表达。结果：免疫组织化学染色结果显示，P450arom在大鼠海马和大脑皮层都有表达；对结果进行灰度值分析显示，高剂量组和中剂量组雄性子代大鼠断乳期P450arom在海马CA3区表达的灰度值分别为143．43和130．76，与对照组179．4612比较，有统计学意义；高剂量组雄性子代大脑皮层P450arom的灰度值为185．21，与对照组196．88比较，有统计学意义。结论：围生期暴露于BPA可使断乳期雄性子代脑中P450arom蛋白表达增加，这可能是影响发育机制的途径之一。     

PPAR-γ配体在激素不敏感型前列腺癌中的作用

目的：研究过氧物酶体增殖因子活化受体（PPAR-γ）配体对人前列腺癌细胞系生长的影响。方法：用Northernblot、MTT法和流式细胞仪（AnnexinV和PI双染色）分别分析检测PPAR-γ配体15脱氧-△^12,14-前列腺素J2（15-d-PGJ2）和曲列格酮（TGZ）对激素不敏感型的人前列腺癌细胞系PC-3细胞生长的影响。结果：PPAR-7在前列腺癌细胞系PC-3高表达，其配体15-d-PGJ2和TGZ均以剂量依赖方式抑制细胞生长，使细胞生存率下降；用流式细胞仪（Annexin V和PI双染色）分析结果为Annexin V-FITC阳性和PI阴性，提示15-d-PGJ2和TGZ能够促进前列腺癌细胞的早期凋亡。结论：PPAR-γ的配体可以通过激素不敏感型前列腺癌细胞上的受体，促进前列腺癌细胞的早期凋亡，使得细胞生存率降低，提示PPAR-γ可能成为治疗激素不敏感型前列腺癌的靶点。     

芳香化酶P450与环氧化酶-2在子宫内膜异位症和子宫腺肌病中的表达及意义

目的研究细胞色素芳香化酶P450（P450arom）和环氧化酶-2（COX-2）在子宫内膜异位症（EMs）和子宫腺肌病（AM）在位和异位内膜中的表达及相关性。方法应用免疫组化Envision法和半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测正常子宫内膜、EMs及AM的在位和异位内膜中P450arom及COX-2的蛋白与mRNA的表达,并进行相关性分析。结果P450arom和COX-2在正常子宫内膜中无表达或弱表达,二者在EMs和AM在位和异位内膜中的表达均高于正常子宫内膜,差异均有显著性意义（P〈0.05）。P450arom与COX-2在EMs和AM异位内膜中的表达均高于在位内膜,差异均有显著性意义（P〈0.05）。P450arom在EMs和AM增殖期和分泌期表达无差异（P〉0.05）。COX-2在正常子宫内膜、EMs分泌期表达高于增殖期,差异均有显著性意义（P〈0.05）,在AM表达不随月经周期变化。P450arom mRNA与COX-2mRNA在EMs中的表达水平呈正相关（r=0.964,P〈0.01）;在AM中的表达水平亦呈正相关（r=0.813,P〈0.01）。结论P450arom和COX-2在EMs和AM中呈过表达,与EMs和AM的发病相关,二者协同作用促进EMs和AM的发生发展。     

人近端肾小管上皮细胞诱导表达吲哚胺2,3-加双氧酶的实验研究

目的 了解培养的人近端肾小管上皮HK2细胞株吲哚胺2,3-加双氧酶(IDO)的诱导表达情况及其影响因素.方法 实验分为不同浓度(0、500、1 000、2 000U/ml)γ-干扰素(IFN-γ)刺激培养组和IFN-γ2 000U/ml刺激12、24、48、72h不同时点培养组,以10%胎牛血清DMEM培养基作为正常对照组.RT-PCR检测不同培养条件下HK2细胞IDO mRNA的表达,免疫细胞化学染色检测24h后HK2细胞IDO的表达,高效液相色谱法检测培养基中犬尿氨酸、色氨酸浓度.结果 正常HK2细胞不表达IDO mRNA和IDO蛋白.不同浓度IFN-γ刺激后,HK2细胞IDO mRNA 的表达呈剂量依赖性升高,与正常对照组相比差异显著(P＜0.05),同时IDO mRNA表达还呈时间依赖性地增高,以48h为最佳刺激时间.免疫组化染色显示,经IFN-γ刺激24h后,HK2细胞IDO蛋白表达增强,高效液相色谱检测显示刺激组培养基上清中犬尿氨酸特异性代谢率升高,表明表达的IDO具有生物活性,并且其活性呈IFN-γ剂量依赖性地升高.结论 IFN-γ刺激培养的HK2细胞IDO表达升高并具有活性,推测病理状态下人肾小管上皮细胞诱导表达的IDO有可能参与了肾小管-间质的病理损害过程.     

大豆异黄酮对围绝经期大鼠卵巢VEGF和NOS亚型mRNA表达的影响

目的 观察大豆异黄酮(SI)对围绝经期大鼠卵巢血管内皮生长因子(VEGF)及一氧化氮合酶亚型eNOS、iNOS mRNA表达的影响.方法 12月龄雌性Wistar大鼠42只,随机分为模型组,低(50mg/kg)、中(158 mg/kg)、高(500mg/kg)剂量SI组及尼尔雌醇(NI)组,另取3月龄大鼠10只作为青年组,灌胃给药8周.RT-PCR检测卵巢VEGF和NOS mRNA的表达;比色法检测血清和卵巢总NOS的活性.结果 围绝经期大鼠卵巢VEGF表达明显高于青年组(P＜0.01),eNOS、iNOS表达及血清、卵巢总NOS活性均较低(P＜0.01).经SI处理后,VEGF表达均明显下降,NOS表达及活性明显升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 大豆异黄酮下调衰老卵巢VEGF mRNA表达,提高eNOS、iNOS表达及活性,可能是其改善围绝经期卵巢功能的机制之一.     

解除附件扭转对兔卵巢组织MDA、GSH-Px和CAT的影响

目的 观察附件扭转(AT)后再灌注对兔卵巢丙二醛(MDA)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的影响.方法 雌性成年日本大耳白兔40只,随机分为实验组(n=32)和对照组(n=8).实验组兔将左侧附件按顺时针方向扭转3周后固定于左侧腹壁,24h后解除扭转,再分成4组,每组8只,分别于24、48、72、96h后取双侧卵巢.对照组行假手术,96h后取双侧卵巢.取左侧卵巢检测GSH-Px、CAT活性及MDA含量,以切除的右侧卵巢作为内对照.结果 附件扭转解除后,GSH-Px活力于再灌注24h至72h明显下降(P＜0.01),96h后与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);CAT活力在附件扭转解除后24h及48h明显下降(P＜0.01),72h后开始升高,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),而96h后明显高于对照组(P＜0.05);附件扭转解除后24h及48h,实验组左侧卵巢MDA含量明显上升(P＜0.01),72h后开始下降,但仍明显高于对照组(P＜0.01),至96h时与对照组比较差异无统计学意义(p＞0.05).结论 附件扭转后解除扭转,GSH-Px、CAT和MDA发生变化,影响家兔卵巢的氧化应激性损伤程度,随着解除扭转时间的延长,卵巢损伤逐渐减轻,这与卵巢局部产生的GSH-Px、CAT逐渐恢复或升高,同时MDA逐渐清除有关.     

淫羊藿甙对辐照小鼠的抗凋亡作用与半胱天冬酶活性的相关性研究

目的：观察淫羊藿甙抗辐射损伤作用，并探讨其抗辐射损伤机制。方法：KM种小鼠于60Coγ射线照射前48，24h及照后即刻灌胃淫羊藿甙，剂量分别为1，10，100mg/kg，照射剂量8．0Gy，观察受照射小鼠30d存活率和死亡动物平均存活时间。另外观察淫羊藿甙对l锄种小鼠受5．5Gy 60Coγ射线照射后小鼠胸腺、脾脏和骨髓细胞凋亡率、半胱天冬酶-3(caspase-3)和半胱天冬酶-8(caspase-8))活性的影响。结果：中剂量淫羊藿甙组30d存活率较照射对照组提高50％，死亡动物平均存活时间延长2．5d。照射对照组胸腺、脾脏和骨髓细胞在照射后6，12和24h均有凋亡。胸腺和脾脏于照射后12h凋亡率最高，骨髓于照后6h凋亡率最高。照射24h后，3种组织的凋亡串均明显降低。中剂量淫羊藿甙可降低照射后6，12h胸腺、脾脏、骨髓细胞凋亡率和照射后24h脾脏、骨髓细胞凋亡率，抑制照射后6hcaspase-3活性，对半胱天冬酶-8活性无影响。结论：淫羊藿甙具有抗辐射损伤作用，其机制之一可能是通过抑制caspase-3活性降低细胞凋亡率。     

丁胱亚磺酰亚胺排空组织谷胱甘肽对大鼠心肌谷胱甘肽系统的影响

目的:观察采用谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂--丁胱亚磺酰亚胺(BSO)排空大鼠心肌谷胱甘肽(GSH)是否影响大鼠心肌组织GSH的稳态,以及是否对GSH代谢相关酶活性及mRNA表达产生影响.方法:采用长时间力竭运动、注射BSO排空GSH两种实验模型,比较对照组与注射BSO组SD大鼠心肌在静息状态和长时间力竭运动后GSH状态及其代谢变化.结果:注射BSO 8天后,大鼠心脏GSH含量分别为对照组?%,且GSH的下降伴随着氧化型谷胱甘肽(GSSG)的下降,GSH/GSSG的比值无显著变化.GSH排空导致GSH代谢酶活性发生适应性变化,注射BSO后心肌中谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性与对照组相比显著下降(P < 0.001).注射BSO组与对照组相比,心肌谷氨酰转肽酶(GGT)活性显著增加(P < 0.05).注射BSO力竭组与注射BSO组相比,心肌GGT活性显著增加(P < 0.001),心肌注射BSO抑制γ-谷氨酰半胱酸合成酶(GCS)活性,注射BSO力竭组大鼠心肌GCS mRNA表达量高于注射BSO组,表明极度排空谷胱甘肽后,GCS mRNA表达量的增加可能是机体产生的应激反应.     

携带Bcl-2基因的慢病毒对原代培养的人卵巢颗粒细胞的影响

目的探讨携带Bcl-2基因的慢病毒对体外培养的原代人卵巢颗粒细胞感染效率及对细胞凋亡的影响。方法构建携带Bcl-2基因的慢病毒载体,包装成高滴度慢病毒,将重组慢病毒在体外分别以不同感染复数(MOI)值(10、50、100、200、400)感染人卵巢原代颗粒细胞,观察感染24、48、72、96h后的感染效率及细胞增殖情况;将人卵巢颗粒培养24h后,分为3组。实验组:加MOI值为100的重组慢病毒GC-FU-Bcl-2;空白对照组:不加病毒;空载体对照组:加空载病毒GC-FU-EGFP。转染后第3、7天,采用Western blotting及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测目的基因Bcl-2在人卵巢原代颗粒细胞中的蛋白及mRNA的表达水平。同时转染后第3天采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果原代培养的人卵巢颗粒细胞24h即贴壁,集落样生长,呈多角形或梭形;当MOI为100时,细胞的形态和生长不受影响,且感染效率较高,感染后72h达高峰,感染率达60%。携带Bcl-2基因的慢病毒感染靶细胞后,实验组中检测到Bcl-2基因及蛋白的表达,且卵巢颗粒细胞的凋亡率明显低于空载体对照组。结论携带Bcl-2基因的慢病毒感染原代培养的人卵巢颗粒细胞后可过度分泌Bcl-2蛋白,抑制细胞凋亡。     

来曲唑对体外培养子宫内膜异位细胞增殖的影响

目的探讨来曲唑对体外培养的子宫内膜异位症患者在位内膜细胞的增殖影响。方法MTT比色法检测来曲唑对位内膜细胞（Eutopic Endometrium,EE）/正常内膜（normal endometriumNE）抑制情况,并采用蛋白印迹法与RT-PCR方法检测芳香化酶及其转录调节因子SF-1的蛋白与mRNA表达情况。结果NE细胞用药组与对照组比较无显著性差异（P〉0.05）;EE细胞在来曲唑作用下呈现较强的抑制增殖效应,抑制作用随浓度增加而加强,细胞增殖活力明显降低,有显著性差异（P〈0.01）,不同浓度的来曲唑均可明显抑制细胞内芳香化酶及其转录调节因子SF-1的蛋白与mRNA表达,且呈剂量依赖性,有显著性差异（P〈0.01）。结论芳香化酶抑制剂-来曲唑对内异症在位内膜细胞具有抑制其增殖作用,明显抑制EE细胞内芳香化酶及其转录调节因子SF-1的蛋白与mRNA表达。