小干扰RNA抑制雄激素受体基因表达对人膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察小干扰RNA技术(siRNA)抑制雄激素受体(AR)基因的表达对人膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响.方法 化学合成针对AR的siRNA,用脂质体转染T24细胞.采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测AR mRNA和蛋白的变化.转染细胞48 h后用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞体外增殖活性的变化,流式细胞术检测细胞的凋亡状况.结果 成功的转染T24细胞,实时荧光定量RT-PCR筛选出一条AR mRNA抑制效率最高的siRNA,行Western blot检测可抑制AR蛋白表达至70.3%.转染细胞48 h后,T24细胞增殖活性抑制率达到(25.9±5.4)%,细胞凋亡率达到21.61%.结论 应用siRNA干扰技术能有效的抑制AR基因的表达,同时可抑制人膀胱癌T24细胞的体外增殖活性及促进其凋亡的发生.     

嵌合分子靶向降解前列腺癌LNCaP细胞表达的雄激素受体

目的 观察嵌合分子双氢睾酮-蛋白靶向降解嵌合分子(DHT-PROTAC)通过泛素蛋白酶体途径易化降解前列腺癌LNCaP细胞表达的雄激素受体以及雄激素受体降解后该细胞增殖和活力的变化.方法 细胞爬片免疫组织化学和Western blot技术检测DHT-PROTAC处理后LN-CaP细胞中雄激素受体蛋白的改变.DHT-PROTAC分别处理前列腺癌LNCaP细胞、PC-3细胞、肾癌786-O细胞,嚷唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,细胞计数并绘制生长曲线观察细胞增殖能力.结果 随着DHT-PROTAC浓度升高,LNCaP细胞表达雄激素受体减少,并呈剂量依赖性,Westernblot检测结果 表现为信号减弱,细胞免疫组织化学见阳性细胞明显减少,随着处理浓度升高,细胞阳性率分别为93.22%、85.65%、61.94%、1.71%.DHT、ALAPYIP-(Arg)8肽段能拮抗DHT-PRO-TAC作用,蛋白酶体抑制剂抑制雄激素受体降解;噻唑蓝(MTT)细胞活力试验及细胞计数显示LNCaP细胞活力和增殖受抑制.结论 嵌合分子DHT-PROTAC能易化降解LNCaP细胞表达的雄激素受体,并抑制该细胞的生长和增殖.     

PEG-PLGA纳米粒子介导反基因寡核苷酸体外抗前列腺癌作用研究

目的 验证包载反雄激素受体基因三螺旋形成寡核苷酸(TFO)的聚乙二醇-聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PEG-PLGA)纳米粒子(TFO-NPs)对前列腺癌细胞的生长抑制作用.方法 采用改良自乳化溶剂挥发法制备TFO-NPs并进行体外物化表征.将TFO-NPs、脂质体包载的TFO(TFO-Lip)和裸TFO分别转染体外培养的LNCaP细胞,倒置荧光显微镜观察转染效率,MTT法检测细胞增殖活性,RT-PCR和Western blot方法检测AR基因表达.结果 TFO-NPs平均粒径128 nm,载药量为1.02%,包封率为72.28%,在体外具有缓释作用.LNCaP细胞对TFO-NPs和TFO-Lip的摄取率显著高于裸TFO.TFO-NPs和TFO-Lip对LNCaP细胞的抑制率分别为(54.5%±6.2%)和(50.6%±6.1%)显著高于裸TFO,(7.8%±0.8%)(均P＜0.05).TFO-NPs和TFO-Lip处理组LNCaP细胞的雄激素受体表达水平显著低于裸TFO处理组.TFO-NPs和TFO-Lip处理组的转染效率、细胞抑制率和雄激素受体表达水平差异均无显著性.结论 成功制备了TFO-NPs,为反基因治疗前列腺癌的研究提供了有效基因载体.     

多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶在前列腺癌LNCaP细胞株中的表达及意义

目的 探讨多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[Poly(ADP-ribose)polymease,PARP]对雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞株增殖和凋亡的影响. 方法 将LNCaP细胞株分组培养并应用PARP抑制剂5-氨基异喹啉酮(5-AIQ)处理,蛋白印迹法检测LNCaP细胞内PARP表达的变化,四甲基偶氮唑盐法检测PARP表达抑制后对LNCaP细胞增殖的影响及其时间效应和剂量效应的关系,流式细胞仪检测5-AIQ对LNCaP细胞凋亡的影响. 结果 与空白组相比,浓度为500及1000μmol/L的5-AIQ处理48 h后LNCaP细胞内PARP的表达分别降低至65.3％和22.4％,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).PARP表达抑制后,LNCaP细胞增殖也受到明显抑制.随着药物浓度依次增加,细胞增殖抑制率逐渐增加,处理24 h后细胞增殖抑制率从(2.85±2.03)％升至(41.23±5.42)％,处理48 h后细胞增殖抑制率从(19.80±4.34)％升至(55.67±1.47)％,处理72 h后细胞增殖抑制率从( 25.67±0.63)％升至(65.81 ±1.62)％,组间抑制率差异均有统计学意义(P＜0.05);同样,当药物浓度维持不变时,随着作用时间延长,细胞增殖抑制率也明显升高,细胞增殖的抑制作用与5 - AIQ剂量增加和作用时间延长呈正相关关系.浓度为500及1000 μmol/L的5-AIQ处理48 h所诱导的LNCaP细胞的早期、晚期和总凋亡率分别为23.6％、4.6％、28.2％和31.8％、6.3％、38.1％,与空白组相比差异均有统计学意义(P＜0.05),且随着剂量增加,诱导细胞凋亡的作用增强.结论 抑制PARP的表达可以明显抑制LNCaP细胞增殖,并诱导LNCaP细胞的凋亡.PARP有望成为前列腺癌治疗的一个新靶点.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228对前列腺癌LNCaP细胞抑制效应的细胞信号通路研究

目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228对前列腺癌LNCaP细胞抑制作用的细胞信号机制.方法 Western blot分析细胞蛋白乙酰化水平、细胞信号通路蛋白及细胞周期相关蛋白的表达.结果 FK228能够使细胞内蛋白乙酰化水平增高,乙酰化组蛋白H3积累,多种细胞信号通路的相关蛋白如雄激素受体、HER-2、Raf-1、Akt、CDK4等呈时间依赖性和剂量依赖性被清除.结论 FK228能够同时阻断对细胞生长具有重要作用的多条细胞信号通路,从而对前列腺癌LNCaP细胞发挥抑制作用.     

Vpr对人结肠癌细胞的抑制作用及其机制

目的 探讨人类免疫缺陷病毒1型( HIV-1)病毒蛋白r(Vpr)对人结肠癌细胞HCT-8的抑制作用及其机制.方法 将细胞分为空白对照组、空载体转染组和Vpr转染组.空白对照组:细胞不予干预;空载体转染组:对数生长期的细胞加入不同感染复数(MOI)的空载体腺病毒;Vpr转染组:加入不同MOI的含有HIV1-Vpr基因的重组腺病毒(Adv-Vpr).应用MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡及线粒体膜电位,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白的表达.多组间均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用q检验;或采用双因素方差分析,组内比较采用t检验.结果 Vpr显著抑制人结肠癌细胞HCT-8增殖,Adv-Vpr转染72 h后(MOI=200),Vpr转染组细胞MTT值为1.03±0.04,与空载体转染组(2.46 +0.15)及空白对照组(2.51±0.14)比较,差异有统计学意义(F=144.6,P＜0.05);Adv-Vpr转染48 h后(MOI=200),Vpr转染组处于G2/M期的细胞比例及线粒体膜电位下降的细胞比例增加,分别为37.31％±5.90％和32.07％±5.64％,与空载体转染组(18.30％±6.04％、3.32％±0.79％)及空白对照组916.66％±3.51％、2.76％±1.43％)比较,差异有统计学意义(F=10.08,64.45,P＜0.05).Adv-Vpr转染72 h后(MOI=200),Vpr转染组细胞凋亡率为37.62％±6.48％,与空载体转染组(3.44％±1.11％)及空白对照组(2.93％±1.07％)比较,差异有统计学意义(F=122.4,P＜0.05).Adv-Vpr处理48 h后(MOI=200),Westem blot检测发现Vpr导致了Caspase-9、Caspase-3剪切为活性片段,p-Chk1-S345磷酸化增加,而Fas、Fas-L、ERK1及ERK2表达未见上调.结论 Vpr在体外能够有效抑制结肠癌细胞株HCT-8增殖,并诱导其细胞周期G2期阻滞及凋亡,其机制分别与DNA损伤信号通路激活及线粒体凋亡通路启动有关.Vpr在结肠癌的治疗中具有潜在的应用前景.     

miR-221通过作用DVL2影响前列腺癌细胞系的侵袭功能

目的 评价miR-221在前列腺癌细胞系中表达的变化对其神经内分泌样转化及其侵袭功能的影响.方法 以Northern blot检测LNCaP、LNCaP-AI两种前列腺癌细胞系中7种microRNA的表达变化;细胞转染法检测在雄激素剥夺环境中LNCaP和LNCaP-AI细胞系中miR-221的作用;CCK-8法检测细胞在不同阶段的生长增殖水平;Transwell法检测转染细胞的侵袭能力;qRT-PCR和Western blot检测转染的细胞中神经元特异性烯醇化酶(NSE)及dishevelled-2( DVL2)表达的变化.结果 与雄激素依赖性前列腺癌(ADPC)的细胞系LNCaP相比,miR-221在雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)的细胞系LNCaP-AI中明显高表达.通过转染使miR-221在LNCaP细胞系中高表达可促进细胞的NSE表达,加速其神经内分泌样分化.而在LNCaP-AI细胞系中下调miR-221水平则会升高靶基因DVL2的表达水平,并增强LNCaP-AI细胞的迁移和侵袭能力.结论 该实验证实在AIPC和ADPC细胞系中miR-221存在表达差异.miR-221可促进前列腺癌细胞的神经内分泌样转化,这可能是导致前列腺癌雄激素非依赖转化的重要原因.MiR-221可通过作用DVI2调节晚期前列腺癌细胞的转移和侵袭.     

地高辛对前列腺癌LNCaP和PC3细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨地高辛对雄激素依赖和去势抵抗性前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制.方法 设立地高辛的浓度和时间梯度,分别作用于正常前列腺细胞株、雄激素依赖性及去势抵抗性前列腺癌细胞株LNCaP和PC3,流式细胞仪检测凋亡指数,MTT法检测细胞增殖速率;应用Western Blot技术检测HIF-1 α和VEGF的蛋白水平.结果 地高辛对LN-CaP和PC3细胞均有良好的抑制增殖及促进凋亡的作用(P＜0.05);Western Blot法检测提示地高辛干预组HIF-1α和VEGF的蛋白水平较未干预组明显降低(P＜0.05).结论 地高辛可抑制雄激素依赖及去势抵抗性前列腺癌细胞增殖并促进其凋亡,作用机制可能是通过抑制HIF-1 α/VEGF这一信号通路来发挥作用.     

Smo小干扰RNA对人食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响

目的 通过Smoothened (Smo)基因位点阻断Hh信号通路抑制食管癌细胞增殖,并诱导其凋亡.方法 运用Smo小干扰RNA(siRNA)转染食管癌EC9706细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测各组细胞Smo和Glil mRNA及蛋白表达,并以噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术检测SmosiRNA对细胞增殖及凋亡的影响.结果 (1)Smo siRNA转染细胞24、48和72 h后,Smo mRNA相对表达量分别为4.20±1.10、2.80±1.10和1.00±0.71;GlilmRNA相对表达量分别为4.60±1.34、3.00±0.71和1.20 ±1.10,与各对照组比较均明显降低(P＜0.05);(2) Smo siRNA转染细胞72 h后,Smo和Glil蛋白相对表达水平分别为0.330±0.016和0.324±0.021,与各对照组比较均明显下降(P＜0.05);(3)SmosiRNA转染细胞72 h后,细胞生长抑制率为(88.06±7.56)％,明显高于各对照组,并随转染时间延长抑制率升高(P＜0.05);(4)SmosiRNA转染细胞72h后,早期凋亡细胞所占的比例均明显增高.结论 Smo基因具有调控食管癌细胞增殖和凋亡的作用.     

δ阿片受体激活通过蛋白激酶C途径抑制人肝细胞凋亡

目的 研究δ阿片受体激活对人肝细胞凋亡的抑制作用并探讨其与蛋白激酶C(PKC)途径的关系.方法 体外培养人肝细胞,用MTT法检测细胞存活率;Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR检测PKC的mRNA表达;Western blot分析PKC、Caspase 3蛋白的表达.结果 体外培养的人肝细胞经血清剥夺48 h后可发生明显的凋亡.激活δ阿片受体可显著抑制这一现象,细胞凋亡率降低(8.37±0.47)、Caspase-3蛋白表达减少(0.147±0.042)、PKC蛋白表达增加(0.698±0.130).给予PKC拮抗剂GF109203X后,δ阿片受体抑制细胞凋亡的作用显著下降(20.66±0.60).结论 激活肝细胞膜上的δ阿片受体对血清剥夺导致的人肝细胞凋亡具有抑制作用,其作用机制与PKC通路相关.     

米非司酮诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡过程中PKB/Akt激酶的调控作用

目的 观察米非司酮在体外诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的作用机制以及Akt激酶在前列腺癌生长过程中的作用.方法 采用Western blot方法检测不同前列腺癌细胞株癌细胞以及米非司酮作用后PC-3细胞中Akt蛋白磷酸化后蛋白含量,以及相关蛋白的表达量.结果 前列腺癌PC-3细胞中Akt磷酸化后蛋白即[p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)]的含量明显高于激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞中的蛋白表达量,其表达量分别为0.27±0.05和0.22±0.07;0.46±0.09和0.37±0.10(P＜0.05).10 μmol/L米非司酮作用于PC-3细胞后p-Akt(Th308邶)和p-Akt(Ser473)磷酸化蛋白的含量均明显下降,但其中p-Akt(Thr308)蛋白表达量变化尤为显著,4～24h4个时间组蛋白含量分别为0.24±0.08、0.11±0.03、0.05±0.01和0.01±0.00;其蛋白表达量下降速度较p-Akt(Ser473)快且显著,p-Akt(Ser473)磷酸化蛋白4～24 h 4个时间组蛋白含量分别为0.56±0.17、0.42±0.11、0.28±0.09和0.12 ±0.05.米非司酮作用于PC-3细胞后使Caspase-9、Caspase-3被激活裂解出有活性的激活片段.结论 Akt激酶在前列腺癌生长、发展以及激素依赖性向激素非依赖性的转变过程中起着重要作用.p-Akt(Thr308)蛋白磷酸化水平在Akt磷酸化激活过程中占主导地位,是Akt激活的必要过程.米非司酮抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其可能是通过抑制Akt信号转导通路,从而激活Caspase.     

Cdx2对胃癌细胞生物学性状的影响

目的 观察Cdx2对人胃癌细胞MGC-803生物学性状的影响.方法 利用脂质体将pCMV-Cdx2-HA和pCMV-HA质粒分别转染MGC-803细胞,应用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测MGC-803细胞中Cdx2基因的表达;应用体外实验及流式细胞仪分别检测Cdx2对MGC-803的侵袭力、黏附力、增殖力、迁移力和凋亡率的影响.结果 转染pCMV-Cdx2-HA质粒的MGC-803细胞中可以检测到高Cdx2的表达,其侵袭能力[穿膜细胞数:(64.33±11.94)个/视野下降到(23.93±8.95)个/视野]、黏附能力[(1.172±0.042)]、增殖力[(26.13±1.60)%]和迁移能力[(42.87±2.19)%]较对照组明显降低(P＜0.05),而且凋亡率升高,48 h和72 h的凋亡率分别为(11.40±0.36)%、(9.72±0.50)%(P＜0.05).结论 Cdx2高表达对MGC-803具有抑制其侵袭转移的作用,并促进肿瘤细胞的凋亡.     

APOBEC3G基因对HepG2.2.15细胞生物学行为的影响

目的 观察HepG2.2.15细胞在高表达APOBEC3G后,APOBEC3G对细胞生长迁移能力、细胞周期和凋亡现象等生物学行为的影响.方法 将真核表达载体pcDNA3.1-APOBEC3G转染入HepG2.2.15细胞中,应用有限稀释法筛选高表达APOBEC3G的HepG2.2.15细胞,并通过Western blot鉴定.应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞株生长能力;应用划痕法观察细胞迁徙运动能力.结果 HepG2.2.15-APOBEC3G细胞(pcDNA3.1-APOBEC3G转染)和HepG2.2.15-pcDNA3.1细胞(空载体转染),与HepG2.2.15细胞(空白对照)比较,细胞周期无明显变化[各期细胞所占比例分别为:G0/G1:(64.27±1.26)%比(64.18±1.24)%比(64.09±1.30)%,P＞0.05;S:(23.16±1.38)%比(22.67±1.41)%比(23.27±1.43)%,P＞0.05;G2/M:(11.36±1.26)%比(11.84±1.31)%比(11.37±1.22)%,P＞0.05],未见细胞凋亡现象,细胞的生长增殖无明显变化(P＞0.05),细胞迁徙运动能力无明显变化[24h及48 h细胞迁移抑制率分别为:(7.5±3.7)%比(10.2±5.5)%,P＞0.05;(13.4±6.5)%比(17.8±9.2)%,P＞0.05].结论 高表达APOBEC3G对HepG2.2.15细胞生物学行为无明显影响.     

毛蕊异黄酮对PI3K/Akt信号通路与PC-3细胞凋亡的作用

目的 探究毛蕊异黄酮促进前列腺癌细胞PC-3凋亡的机制.方法 选取0、25、50、100、200μmol/L的毛蕊异黄酮(Calycosin)处理PC-3细胞,并设置溶剂对照(DMSO,二甲基亚砜)组,采用MTT法检测48h后细胞增殖情况;流式细胞术检测0、25、50、100、200 μmol/L48h后细胞凋亡率;Western Blot法检测0μmoL/L组、200μmol/L毛蕊异黄酮组、200μmol/L毛蕊异黄酮+ PI3K特异性抑制剂(Wortmannin)共处理组细胞的Akt、磷酸化的Akt(p-Akt)、Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达水平.结果 MTT实验显示毛蕊异黄酮能够抑制PC-3细胞的增殖,且呈现剂量依赖性(P＜0.05);流式细胞实验显示,0、25、50、100、200μmol/L浓度水平的毛蕊异黄酮处理PC-3细胞48h后的凋亡率分别为(0.1±0.04)％、(6.8±0.6)％、(9.2±0.2)％、(11.5±0.27)％、(59.2±0.36)％(P ＜0.05);Western blot法显示,与0μmol/L组相比,200μmol/L毛蕊异黄酮组p-Akt、Bcl-2表达水平下降(P＜0.05),加入Wortmannin后,二者水平再次下降;与0μmol/L组相比,200μmol/L毛蕊异黄酮组Bax、Caspsse-3表达水平增加(P＜0.05),加入Wortmannin后,二者水平再次增加.结论 毛蕊异黄酮可抑制PC-3细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制是下调PI3K/Akt信号通路,启动线粒体诱导的凋亡途径.     

复制缺陷性腺病毒联合氮烯咪胺对黑素瘤细胞凋亡的调控作用

目的 观察荷载黑素瘤分化相关基因-7(mda-7)的复制缺陷性腺病毒Ad-mda-7联合氮烯咪胺(DTIC)对黑素瘤M14细胞的诱导凋亡作用.方法 将M14细胞分为4组进行干预,分别为PBS组、DTIC组、Ad-mda-7组、Ad-mda-7联合DTIC组.应用CCK-8法检测细胞抑制率;应用结晶紫法检测细胞毒性;应用Annexin Ⅴ法检测细胞凋亡率;应用Western blot法检测mda-7蛋白及bax、bcl-xL、Mcl-1、Caspase-9、Caspase-3凋亡相关蛋白表达.结果 CCK-8法显示10 MOI+10 mg/L的Ad-mda-7联合DTIC干预M14细胞48 h后抑制率为(73.56±2.58)%,与对应剂量的Ad-mda-7(32.30±2.38)%、DTIC(15.75±3.21)%比较,差异有统计学意义(P＜0.05);结晶紫法结果表明Ad-mda-7联合DTIC较Ad-mda-7、DTIC对M14细胞有显著的细胞毒性效应;Annexin Ⅴ法显示10MOI+10 mg/L的Ad-mda-7联合DTIC干预M14细胞48 h后凋亡率为(71.47±3.57)%,与对应剂量的Ad-mda-7(40.11±3.61)%、DTIC(22.27±2.30)%比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot结果表明Ad-mda-7联合DTIC作用的M14细胞能高效表达mda-7,同时bax的表达增加,Mcl-1、bcl-xL的表达降低,Caspase-9、Caspase-3被裂解活化.结论 荷载mda-7基因的复制缺陷性腺病毒Ad-mda-7联合化疗药物DTIC有明显的协同诱导黑素瘤细胞凋亡的作用.     

姜黄素通过caspase依赖的凋亡途径抑制LNCaP细胞生长

目的探讨姜黄素诱导雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞凋亡过程中caspase途径的作用。方法应用CCK8法检测不同浓度（10、20、30、40、50、60μmol/L）姜黄素作用LNCaP细胞12、24、48h后的细胞生长抑制情况。应用Annexin V/PI双染法检测不同浓度（10、20、40μmol/L）姜黄素作用LNCaP细胞24h后的细胞凋亡情况。应用Western blot检测姜黄素作用LNCaP细胞24h后Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3、Cytochrome C凋亡相关蛋白的变化。结果姜黄素对LNCaP细胞的生长有明显的抑制作用,且呈时间-剂量依赖性;流式细胞术结果显示姜黄素能诱导LNCaP细胞凋亡,10、20、40μmol/L姜黄素作用LNCaP细胞24、48h后细胞凋亡率分别为（6.01±0.95）%、（15.46±1.13）%、（26.13±1.56）%和（11.19±1.74）%、（25.80±2.47）%、（38.72±2.89）%,且呈时间-剂量依赖性（P〈0.05）;同时姜黄素能够降低LNCaP细胞中Bcl-2的表达,上调Bax、Cytochrome C、Cleavedcaspase-3的表达。结论姜黄素能抑制LNCaP细胞的生长,其作用可能是通过线粒体途径诱导其凋亡。     

MS-275阻断STAT3信号通路诱导U251细胞凋亡

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对脑胶质瘤细胞株U251细胞增殖的影响及促凋亡机制.方法 以不同药物浓度梯度和U251细胞分别共培养24、48、72 h后,应用CCK-8法检测肿瘤细胞增殖,瑞氏-姬姆萨染色法观察细胞形态变化,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI法经流式检测细胞凋亡率,免疫印迹检测STAT3蛋白和PARP蛋白表达.结果 MS-275能显著抑制U251细胞的增殖,药物浓度40 nmol/ml,培养72 h,抑制率为(79.0±1.7)%;经药物作用后,细胞呈现凋亡形态,胞质和胞核浓缩或碎裂;G0/G1期细胞由(66.320±0.456)%降至(38.288±1.242)%(P＜0.01),G2/M期细胞由(19.940±0.580)%升高至(35.650±0.507)%,而后降至(22.343±1.224)%(P＜0.01),亚G0凋亡峰由(0.230±0.035)%增高至(18.393±1.449)%(P＜0.01);总凋亡率由(2.133±0.416)%增高至(29.000±2.307)%(P＜0.01);免疫印迹检测提示磷酸化STAT3表达水平降低,PARP被剪切.结论 MS-275对胶质瘤细胞的增殖抑制作用具有浓度和时间依赖性,它通过阻断STAT3磷酸化,诱导激活Caspase-3凋亡途径.

Abstract：

Objective To investigate the effect of MS-275 on the proliferation of brain glioma cells. Methods U251 cells were respectively cultured for 24, 48, 72 h, with different concentrations of MS-275. CCK-8 assay was used to assess the proliferation of U251 cells. The morphological changes of U251 cells were observed by Wright-Giemsa staining. The cell cycle was analyzed by PI dyeing. The apoptosis rate was assayed by flow cytometry using annexin V-FITC/PI. The protein expression of STAT3 and PARP was detected by Western blotting. Results MS-275 could significantly inhibited proliferation of U251 cells. After treatment with MS-275, apoptosis of U251 cells was seen; The ratio of G0/G1 was decreased from ( 66.320 ± 0.456 ) % to ( 38. 288 ± 1. 242 ) % ( P ＜ 0. 01 ), the percentage of G2/M cells was increased from ( 19. 940 ± 0. 580 ) % to ( 35.650 ± 0. 507 ) %, then decreased to ( 22. 343 ± 1. 224 ) %(P＜0.01), and ratio of sub-G0 was increased from (0.230 ±0.035)% to (18.393 ±1.449)% (P＜0. 01 ); Total apoptosis rate was increased from ( 2. 133 ± 0.416 ) % to ( 29. 000 ± 2. 307 ) % ( P ＜ 0. 01 );The expression level of phosphorylated STAT3 was significantly downregulated, and the cleavage of PARP was detected by Western blotting. Conclusion MS-275 inhibites proliferation of brain glioma cells in a time- and dose-dependent manner, which is achieved by inducing apoptosis.     

Aurora激酶抑制剂对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察Aurora激酶抑制剂VX-680对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度的VX-680处理MDA-MB-231细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化,用噻唑监(MTT)比色法和克隆形成实验检测乳腺癌细胞增殖,碘化丙锭(PI)单染法检测细胞周期,免疫荧光观察核和纺锤体形态变化,免疫印迹法检测AuroraA/B蛋白、组蛋白和凋亡相关蛋白表达,Yo-Pro-1荧光染色观察细胞凋亡形态学变化.结果 VX-680显著抑制MDA-MB-231增殖,24、48 h半数抑制浓度( IC50)分别为(2.362±0.599)、(0.102±0.556) μmol/L;经药物作用24h后,贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落;克隆形成率南( 93.00 ±0.03)％降至(0.01±0.01)％,G0/G1期细胞由(51.27±0.75)％降至(5.87±0.49)％,G2/M期细胞由(17.67±1.25)％升高至(91.93±1.96)％,荧光染料法显示凋亡细胞数由(4.33±0.03)％增高至(44.00±0.04)％,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);细胞核与纺锤体结构紊乱;免疫印迹检测提示磷酸化AuroraA/B、磷酸化Histone H3表达水平降低,Caspase-3和PARP被剪切.结论 VX-680抑制乳腺癌细胞MDA-MB231增殖、诱导凋亡呈剂量依赖性.