经皮三叉神经电刺激预处理对戊四氮致痫大鼠海马谷氨酸脱羧酶表达的影响

目的 观察经皮三叉神经电刺激(TNS)预处理对戊四氮(PTZ)致痫大鼠癫痫行为及海马谷氨酸脱羧酶65、67(GAD65、GAD67)表达的影响.方法 将大鼠分为对照组和TNS组,分别给予连续1、7、14、28 d的假刺激和经皮TNS预处理后腹腔注射PTZ,观察给药后2 h内大鼠癫痫发作行为学表现,并应用免疫组化方法观察...     

orexin-B细胞及其神经纤维在癫痫模型大鼠癫痫发作不同时间点的变化及其意义

目的：观察癫痫模型大鼠orexin-B细胞及其神经纤维在致痫后不同时间点的变化，阐明其在癫痫发作中的作用。方法：用海人酸（KA）腹腔注射诱发大鼠癫痫发作，并分别于癫痫终止后8 h、1 d、3 d、7 d和慢性复发时间点采用免疫组化方法检测orexin-B免疫反应阳性细胞数及其神经纤维的变化。结果：orexin-B免疫阳性细胞主要分布在大鼠下丘脑和穹窿周围核，但是在海马有可疑的阳性，而其免疫阳性神经纤维分布广泛；orexin-B免疫阳性细脃数呈现为先稍微减少后恢复、之后减少再恢复的趋势；7 d组细胞数减少，与其他组比较差异有统计学意义（P<0.05），而其免疫反应神经纤维平均光密度值呈现出与其细胞数相反的变化。结论：orexin-B细胞数及其神经纤维在大鼠癫痫发生过程中有变化，其可能参与了癫痫的神经元放电和传播的调节，增加其浓度有助于对癫痫的控制。     

Antisense GAD67 ODN对戊四氮所致慢性癫痫大鼠作用的研究

目的　探讨谷氨酸脱羧酶(GAD)的抗癫痫作用。方法　采用戊四氮制备大鼠慢性癫痫模型，利用反义寡脱氧核苷酸技术，通过选择性地抑制海马GAD基因的表达来观察其对慢性癫痫大鼠行为、发作阈值及脑电图的影响；同时，采用高效液相色谱法检测其对海马组织内γ-氨基丁酸（GABA）含量的影响。结果　给予Antisense GAD67 ODN处理后，GAD67 mRNA表达下降、GABA浓度下降、痫性发作潜伏期缩短、发作程度加重及脑电图痫波频率增加。结论　从反面进一步说明GAD基因可能是抗痫基因，为GAD基因治疗癫痫提供实验依据。     

马桑内酯致痫大鼠的GAD、GABA-T活性及氨基酸类神经递质含量的研究

将18只Wistar大鼠随机分为对照组、致痫组和MK-801组。致痫组是将马桑内酯直接注入大鼠侧脑室点燃癫痫发作，注入马桑内酯2h后经第四脑室抽取脑脊液，随后断头取出双侧海马；MK801组先经腹腔注入MK-8011h后，与致痫组同样处理；用HPLC荧光法分别测定各组的脑脊液和海马组织中Glu、Asp、Gly和GABA的含量，同时测定海马组织中GAD和GABA-T活性。结果发现：致病组的脑脊液中Glu含量较对照组有显著差异（P＜0．05）。     

AntisenseGAD67ODN对戊四氮所致慢性癫痫大鼠作用的研究

目的：探讨谷氨酸脱羧酶（GAD）的抗癫痫作用。方法：采用戊四氮制备大鼠慢性癫痫模型，利用反义寡脱氧核苷酸技术，通过选择性地抑制海马GAD基因的表达来观察其对慢性癫阐述 大鼠行为、发作阈值及脑电图的影响；同时，采用高效液相色谱法检测其对海马组织内γ-氨基丁酸（GABA）含量的影响。结果：给予AntisenseGAD67ODN处理后，GAD67mRNA表达下降、GABA浓度下降、痫性发作潜伏期缩短、发作程度加重及脑电图痫波频率增加。结论：从反面进一步说明GAD基因可能是抗痫基因，为GAD基因治疗癫痫提供实验依据。     

马桑内酯癫痫大鼠脑内ETmRNA表达的改变

目的：本文从分子水平观察马桑内酯所致的癫痫大鼠脑内ETmRNA表达以及硝苯吡啶对其表达的影响,进而分析ET在马桑内酯癫痫中的可能作用。方法：将24只SD大鼠分三组（生理盐水对照组、癫痫组和抗痫组）,采用自行标记的地高辛－ET RNA探针作大鼠脑片原位杂交。结果：在癫痫大鼠脑切片的广泛区域可见阳性杂交信号,尤以下丘脑和海马为明显;抗痫组（硝苯吡啶＋马桑内酯）大鼠脑内均未见到明显的杂交信号,与生理盐水对照组相似。表明马桑内酯致痫时,大鼠脑内ETmRNA表达增强,该作用可被L－型Ca^2 通道阻断剂硝苯吡啶阻断。结论：ET在马桑内酯致痫时,可能作为一种神经肽,通过激活L－型Ca^2 通道使细胞内Ca^2 浓度增加而产生致痫作用。     

激活的星形胶质细胞分泌TNF-α对大鼠GABA表达的影响

目的 为进一步探讨星形胶质细胞在癫痫发病中的作用。方法 选用肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactot-α，TNF-α)刺激及TNF-α反义寡核苷酸阻断后马桑内酯(coriaria lactone，CL)刺激纯化培养的海马星形胶质细胞，将上述两种条件培养基提取液(astrocytic conditioned medium，ACM)10μl分别注入正常Sprague-Dawley(SD)大鼠侧脑室，观察动物行为与脑电图的变化；用免疫细胞化学方法检测大脑皮质与海马中γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyricacid，GABA)表达水平的改变，并做显微图像分析。结果 ①侧脑室注射TNF-α刺激后的条件培养基提取液可引起大鼠Ⅲ级癫痫样发作及典型的尖波、棘波、棘-慢波癫痫样脑电图表现，大鼠大脑前梨状皮质和海马齿状回GABA免疫反应阳性神经元数和平均吸光度值均明显低于对照组；②侧脑室注射TNF-α反义寡核苷酸阻断后由马桑内酯刺激的条件培养基提取液，大鼠无癫痫样行为发生，大鼠大脑前梨状皮质和海马齿状回GABA免疫反应阳性神经元数和平均吸光度值与对照组无显著性差异。结论 ①激活的星形胶质细胞分泌的TNF-α可诱导大鼠癫痫发作。②GABA表达的变化可能与癫痫发作有关。     

戊四唑致痫小鼠海马结构内一氧化氮合酶阳性神经元的时程变化

目的观察海马内一氧化氮合酶(NOS)在戊四唑(PTZ)致痫后的时程变化.方法用NADPH-黄递酶(NADPH-d)组织化学方法的方法,分别观察正常及致痫后15min、30min、1h、2h、4h、6h、12h海马内NOS阳性神经元变化.结果致痫后15min～1h,NOS阳性神经元数量明显减少,1～2h增加至最高峰,2～12h逐渐降低,12h阳性细胞数目最少,2h最高.结论一氧化氮的含量,随癫痫发作状态的不同而增、减.     

马桑内酯激活的星形胶质细胞条件培养液对正常大鼠脑内IL-1β的影响

目的揭示星形胶质细胞对大鼠脑内IL-1β的影响及其在癫痫发病中的作用。方法将马桑内酯（coriaria lactone，CL）激活的星形胶质细胞条件培养液（astrocytic conditioned medium，ACM）注射入正常SD大鼠侧脑室，观察大鼠的行为变化，运用免疫组织化学及放射免疫分析的方法，观察大脑皮质、海马区域内白细胞介素1β（IL-1β）免疫反应的变化及脑组织匀浆、脑脊液内IL-1β含量的变化。结果ACM组大鼠在注射ACM后30min出现癫痫行为，2h恢复正常；免疫组织化学显示：ACM作用后2h，IL-1β免疫反应阳性神经元数和平均吸光度值明显增加（均P〈O．05），12h恢复正常水平；放射免疫分析显示：ACM作用后2h大脑皮质、海马IL-1β含量均开始增加，4h达高峰（P〈0．05），脑脊液中IL-1β含量则在ACM作用后2h即达到高峰。结论马桑内酯激活的星形胶质细胞条件培养液可增强大鼠脑内IL-1β的表达，并导致痫性发作。     

戊四唑致痫小鼠海马结构内一氧化氮合酶阳性神经元的时程变化

目的：观察海马内一氧化氮合酶（NOS）在戊四唑（PTZ）致痫后的时程变化。方法：用NADPH-黄递酶（NADPH-d)组织化学方法的方法,分别观察正常及致痫后15min,30min,1h、2h、4h、6h、12h海马内NOS阳性神经元变化。结果：致痫后15min-1h,NOS阳性神经元数量明显减少,1-2h增加至最高峰,2-12h逐渐降低,12h阳性细胞数目最少,2h最高,结论：一氧化氮的含量,随癫痫发作状态的不同而增、减。     

Effects of antisense glutamic aciddecarboxylase oligodeoxynucl eotide on epileptic rats induced by pentylenetetrazol

ＧＡＢＡｉｓｔｈｅｐｒｉｎｃｉｐａｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｉｎｔｈｅｂｒａｉｎ ＩｔｈａｓｂｅｅｎｐｒｏｖｅｄｔｈｒｏｕｇｈｌａｒｇｅａｍｏｕｎｔｓｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｔｈａｔｔｈｅｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｏｆＧＡＢＡ ｅｒｇｉｃｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｅｓｓｅｉｚｕｒｅｓ,ｗｈｅｒｅａｓｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｒｅｓｕｌｔｓａｒｅｇｏｔｔｅｎｉｎａｎａｎｔｉｃｏｎｖｕｌｓａｎｔｅｆｆｅｃｔ Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｍａｎｙａｎｔｉ ｅｐｉｌｅｐｓｙｄｒｕｇｓｏ…     

雌二醇与姜黄素单用或联用对海人酸杏仁核点燃大鼠海马GAD67表达的影响

 目的 观察腹腔注射雌二醇（estradiol,E）或/和姜黄素（curcumin,C）后海人酸（kainic acid,KA）杏仁核点燃大鼠海马谷氨酸脱羧酶（glutamate decarboxylase,GAD）的亚型GAD67表达的变化,探讨 在姜黄素干预下雌二醇对GAD67表达的影响。方法 将32只去势术后的雌性SD大鼠分为E+KA组、C+KA组、EC+KA组和KA组,分别给予腹腔注射雌二醇或/和姜黄素,5天后均制备成KA杏仁核点燃的癫大鼠模型,采用免疫组化方法检测大鼠海马中GAD67表达的变化。结果 统计KA注射对侧（左侧）大鼠海马中GAD67免疫阳性细胞的表达数。在CA1区,C+KA组GAD67的表达与KA组（P<0.01）、E+KA组（P<0.05）相比均明显增多,它在EC+KA组的表达较KA组（P<0.01）也明显增多,差异有统计学意义。在CA3和DG区,C+KA组GAD67的表达与KA组（P<0.01）、E+KA组（CA3区：P<0.01,DG区：P<0.05）、EC+KA组（P<0.05）相比均明显增多。而且在DG区,它在E+KA组的表达较KA组（P<0.05）也有明显增多。结论 雌二醇或姜黄素单用时均可以上调KA杏仁核点燃大鼠海马中GAD67的表达,以姜黄素的上调作用更为明显。姜黄素干预后,雌二醇对GAD67的表达无明显影响,但两者联用时仍可使CA1区GAD67的表达明显增多。     

癫痫大鼠海马白细胞介素6免疫反应性的变化

目的　探求白细胞介素 6 (IL 6 )与癫痫发病之间的关系。方法　将 6 1只Wistar大鼠分成 3组 ,实验组侧脑室注入马桑内酯 (CL) ,2 μl(0 0 5mg/kg体重 ) ,生理盐水对照组注入等量的生理盐水 ,空白对照组不做任何处理。实验中对大鼠的行为及脑电图 (EEG)进行观察和记录 ;同时运用免疫组织化学方法 ,对大鼠海马IL 6的免疫反应性进行分析。结果　实验组大鼠侧脑室注射CL过程中即诱发癫痫 ,且测到痫性脑电图 ,生理盐水对照组、空白对照组无癫痫症状及癫痫样脑电图出现 ;实验组大鼠海马CA1、CA2 区IL 6免疫反应性较生理盐水对照组及空白对照组显著增强 (P <0 0 1) ,表现为海马CA1、CA2 区阳性反应细胞数目增多 ,着色明显加深 ;生理盐水组和空白对照组之间差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。结论　癫痫的发病过程中海马神经元内的IL 6含量有显著的变化 ,二者之间可能存在着密切的联系。     

海人酸颞叶癫痫大鼠海马GAD65表达的动态变化

目的探讨GAD65在颞叶癫痫大鼠海马的表达变化及其意义。方法112只雄性SD大鼠随机分为实验组(n=70)与对照组(n=42),实验组大鼠选用海人酸腹腔注射法建立颞叶癫痫模型,对照组大鼠腹腔注射无菌生理盐水。选取腹腔注射后3h、6h、12h、24h、48h、7d和30d为研究的时间点,颞叶海马的CA1区、CA3区、齿状回为研究部位。腹腔给药后每天观察大鼠的行为学变化,大鼠处死前进行EEG描记。用原位杂交方法检测不同时间点海马不同区域GAD65mRNA的表达,免疫组织化学法检测GAD65蛋白的表达。结果实验组大鼠海马GAD65mRNA及其蛋白的表达随时间呈逐渐增高趋势,致痫后48h￣30d,GAD65mRNA及其蛋白表达较对照组增高(48h,P<0.05;7￣30d,P<0.01)。结论颞叶癫痫慢性期海马GAD65表达的增高是癫痫发生后机体的一种内源性抗痫机制。     

戊四氮致痫大鼠海马c-FOS蛋白表达及钙拮抗剂的影响

目的：探讨戊四氮（PTZ）致痫后大鼠的海马锥体细胞、齿状回颗粒细胞c-FOS蛋白表达情况，和钙拮抗剂尼莫地平对c-FOS蛋白表达的影响。方法：大鼠腹腔注射PTZ 60mg/kg建立急性癫痫动物模型，测定痫性发作潜伏期、发作强度，用免疫组化LSAB法检测2h和4h后c-FOS的表达。结果：对照组大鼠无癫痫发作，干预组痫性发作潜伏期较致痫组明显延长（P＜0．01），且发作强度明显减弱（P＜0．01）；对照组海马各区c-FOS仅低水平表达，致痫后表达明显增高（P＜0．01），干预组2h比致痫组2h的c-FOS阳性率明显降低（P＜0．01），4h干预组与致痫组无显著性差异（P＞0．05）。结论：大剂量PTZ可诱发大鼠全面阵挛发作，诱导海马锥体细胞、齿状回颗粒细胞c-FOS表达增高，海马结构涉及PTZ致痫引起阵挛发作的发展或传播的病理生理机制，尼莫地平可延缓癫痫的发生，减轻发作强度，降低c-FOS的表达。     

马桑内酯腹腔点燃性癫痫大鼠脑的酶组织化学和超微结构的观察

Kindling model of epilepsy induced by intraperitoneal injection of Coriaria lactone (CL) was used in the experiment. The dose of CL was 1.25 mg/kg. Thirty rats in various periods of kindling were killed and the materials of cerebral cortex, hippocampus and cerebellum were drawn. The enzyme activities of AchE, NADHD, CCO, LDH, SDH, AcP, ANAE and AkP of these areas were observed with enzyme histochemical techniques. In another three kindled rats, two blank control rats and two NS control rats, the ultrastructure of neurons in hippocampus were observed. The results of experiments showed an increased activity of enzymes related to saccharometabolism and energy metabolism, indicating that the metabolism of brain in rats was increased by repeated kindling seizures. The mechanism of kindling seizure induced by CL may be related to inhibitory effect of CL on AchE activity of brain. The degeneration damage of brain neurons in kindled rats may result from using CL for a long time.     

PTZ诱导的癫痫急性发作大鼠大脑神经元中F-actin、Calponin3和ROCK2的表达及其意义

目的:探讨戊四氮(PTZ) 诱发的大鼠癫痫急性发作对大脑神经元中F-actin、Calponin3和ROCK2蛋白表达水平的影响,阐明癫痫急性发作时阻断F-actin异常解聚、触发F-actin重构的可能机制。方法:3周龄Wistar 幼鼠56只分为对照组(n=6)和癫痫组(n=50)。对照组大鼠给予腹腔注射生理盐水;癫痫组大鼠经腹腔注射60 mg·kg^-1 PTZ建立癫痫急性发作模型,造模成功的24只大鼠分别在癫痫急性发作后的相应时间点(1、2、3和7 d时)随机处死6只用于取材。采用Alex-488标记的phalloidine进行荧光染色观察大鼠大脑海马组织中分子层的F-actin荧光强度;采用免疫荧光染色法观察大鼠大脑皮层和海马神经元中Calponin3和ROCK2的分布;采用Western blotting法检测大鼠海马组织中Calponin3、ROCK2和磷酸化ROCK2蛋白的相对表达水平。结果:与对照组比较,癫痫急性发作1 d后,癫痫组大鼠大脑树突棘密集的海马中分子层的F-actin荧光强度降低(P<0.05),点状聚集结构消失。免疫荧光染色,对照组大鼠Calponin3在神经元胞质中弥漫性分布,而癫痫急性发作7 d后,癫痫组大鼠神经元中Calponin3则聚集在细胞皮质;对照组大鼠ROCK2仅在少量神经元突起中分布,而癫痫急性发作7 d后,癫痫组大鼠大量神经元胞体和突起中均可见ROCK2分布。Western blotting检测,与对照组比较,癫痫组大鼠各时间点海马组织中Calponin3相对表达水平显著降低(P<0.05),但是随着时间延长,1周内逐渐升高并趋向正常水平。与对照组比较,癫痫组大鼠海马组织中ROCK2蛋白相对表达水平从癫痫急性发作后3 d开始显著增加并持续至造模后7 d(P<0.05);磷酸化ROCK2蛋白相对表达水平则从癫痫急性发作后1 d就开始显著增加并持续到7 d(P<0.05),且随着时间延长逐渐降低。结论:PTZ诱导幼鼠癫痫急性发作导致F-actin异常解聚,同时激活RhoA/ROCK2信号途径,上调ROCK2和Calponin3蛋白表达水平。     

GABAA受体激动剂和拮抗剂对大鼠梨形皮质、海马Fos表达的影响及其与癫痫发病的关系

为探讨γ－氨基丁酸受体（ＧＡＢＡＡ）与癫痫发病机制之间的关系,应用免疫组化技术结合脑电图就ＧＡＢＡＡ受体激动剂蝇蕈醇对马桑内酯致痫大鼠大脑皮质、海马Ｆｏｓ表达的影响进行研究,并与ＧＡＢＡＡ受体拮抗剂荷包牡丹碱致痫大鼠的Ｆｏｓ表达进行比较。结果显示：侧脑室注射马桑内酯诱发癫痫发作后１ｈ,双侧齿状回颗粒细胞层、海马锥体细胞层及注射侧梨形皮质有大量Ｆｏｓ阳性细胞,对侧梨形皮质未检测到Ｆｏｓ表达;侧脑室注射蝇蕈醇可明显抑制齿状回、海马Ｆｏｓ的表达,但梨状皮质Ｆｏｓ表达未受影响。一侧侧脑室注射荷包牡丹碱诱发癫痫发作后１ｈ,双侧梨状皮质有较强的Ｆｏｓ表达,但齿状回、海马未见表达。脑电图也证实马桑内酯及荷包牡丹碱均能诱发棘慢波、尖慢波,蝇蕈醇则能明显抑制这种痫样放电。结果提示,ＧＡＢＡＡ受体在癫痫发病过程中起重要作用     

迷走神经刺激对戊四氮癫痫大鼠海马区γ-GABA、Glu和脑电变化

目的 观察VNS对正常大鼠和戊四氮(PTZ)致癫痫大鼠的脑电图的影响,以及测定海马区GABA,GLU的变化.进一步探讨迷走神经刺激(VNS)的抗癫痫机制.方法 随机分为对照组、刺激A组、刺激B1组、刺激B2组、刺激B3组、刺激C组,各10只.分别观察脑电图和测定海马GABA、GLU的变化.结果 VNS可明显延长致病大鼠癫痫发作和痫波释放的潜伏期(P<0.05),减轻癫痫发作的严重程度,并能抑制皮层及海马癫痫波的释放,VNS对正常人鼠脑电图无影响.刺激各组海马GABA升高,GLU下降,组与组之间有明显差异P<0.05.结论 VNS可明显抑制PTZ诱导的大鼠癫痫.