病毒调控细胞凋亡基因表达的分子生物学研究

细胞凋亡(ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)又称为细胞程序性死亡,是细胞自主死亡的过程,在组织发生、免疫系统克隆选择、机体内环境稳定等诸多方面有着广泛的生物学意义[1]。在某些疾病,如肿瘤、艾滋病等发病机制中也具有重要意义。参与细胞凋亡基因很多,主要有ｂｃ1-2、ｍｙｃ、ｐ53、ｃｅｄ-3、Ｆａｓ/Ａｐｏ-1等。1　细胞凋亡主要调控基因细胞凋亡因子Ｆａｓ/Ａｐｏ-1:Ｆａｓ抗原是介导细胞凋亡的细胞表面蛋白,由319个氨基酸组成,分子量41ＫＤ,Ａｐｏ-1经纯化和ｃＤＮＡ克隆证实与Ｆａｓ为同一物质。Ｆａｓ结构表明,它属于肿瘤坏死因子α受体(ＴＮＦ…     

再生障碍性贫血患者Fas、bc1-2表达和凋亡的临床意义

再生障碍性贫血(AA)为造血干细胞功能衰竭,骨髓增生低下,外周血全血细胞减少,临床表现为贫血、出血和发热的疾病。已证实AA有造血干/祖细胞的过度凋亡[1～3]。但AA过度凋亡机制研究不多[3～6],多涉及Fas[2～5]。bcl-2家族中包括多种抑制凋亡基因(以bcl-2为代表)和促进凋亡基因(以bax为代表)已为周知。为此,为进一步研究AA细胞过度凋亡的机制,本文分析30例AA患者骨髓单个核细胞的Fas、bcl-2表达,凋亡率,并探讨其临床意义。     

Bcl-2、Bax和Fas、FasL与急性白血病的关系

随着研究工作的不断深入 ,越来越多的资料显示与细胞恶性增殖和分化受阻一样 ,细胞凋亡异常在大多数恶性肿瘤的发病学上有重要地位。在恶性肿瘤的发病过程中 ,细胞凋亡异常的发生机制几乎涉及到细胞凋亡信号途径的所有方面 ,其中研究最深入、广泛的是凋亡抑制基因和凋亡活化基因的异常 ,下面就介绍一下凋亡抑制基因Ｂｃｌ- 2和凋亡活化基因Ｂａｘ以及Ｆａｓ、ＦａｓＬ与急性白血病 (ＡＬ)的关系。1　Ｂｃｌ 2Ｔｓｕｊｉｍｏｔｏ和Ｃｒｏｓｅ[1] 在绝大多数非霍奇金滤泡状Ｂ细胞淋巴瘤中发现存在染色体易位ｔ(14;18) ,该异位导致定位于 18号…     

凋亡相关基因bcl—2,bax,Fas及FasL在乙型肝炎病毒相关性？…

目的 探讨原发性肝癌中乙型肝炎病毒感染与凋亡基因ｂｃｌ－２、ｂａｘ、Ｆａｓ及ＦａｓＬ表达的关系。方法 采用免疫组化技术分析４０例原发肝细胞癌组织中乙肝病毒表现抗原（ＨＢｓＡｇ）阳性组和ＨＢｓＡｇ阴性组ｂｃｌ－２、ｂａｘ、Ｆａｓ及ＦａｓＬ的表达。结果 癌组织中ＨＢｓＡｇ阳性率为３０％（１２／４０）,癌旁组织中ＨＢｓＡｇ阳性率为６２．５％（２５／４０）,１２例ＨＢｓＡｇ阳性的癌组织中ｂｃｌ－２的ｂａｘ     

维医成熟、清除剂诱导人Hela细胞凋亡时p53与bcl-2基因的表达

近年来,发现细胞凋亡对造血、免疫和肿瘤发生机制具有重要的作用,肿瘤抑制基因是当前肿瘤遗传学及分子生物学的研究热点。而其中ｐ５３基因与肿瘤关系最为密切,６０％以上的人类肿瘤细胞中存在ｐ５３基因的突变失活。野生型ｐ５３能抑制肿瘤发生,是抗癌基因．而突变型则反而促进肿瘤发生,成为癌基因。Ｐ５３与ｂｃｌ－２基因都是细胞凋亡的关键基因。ｐ５３基因可促进细胞凋亡,ｂｃｌ－２基因则可抑制凋亡。 ｂｃｌ－２基因下凋是细胞凋亡的重要环节,因而探讨其下调机制极为重要。ＦＡＳ和ｂｃｌ－２蛋白是确认的２个与淋巴Ｔ细胞凋…     

肝癌与癌旁组织中细胞凋亡,增殖及凋亡相关蛋白表达

目前 ,ｂｃｌ 2 ,ｐ53、Ｆａｓ与ｃ ｍｙｃ是最引入关注的凋亡相关基因蛋白 ,系统研究它们在肝细胞癌中的表达及作用的报道极少 ,收集我院 1990～ 1997年间原发性肝癌新鲜手术标本 4 9例 ,均带有癌旁组织 ,研究应用原位未端标记技术和兔疫组化ＬＳＡＢ法 ,检测肝细胞癌与癌旁组织中的细胞凋亡、增殖与凋亡相关蛋白的表达与分布 ,以期揭示它们在肝细胞癌发生、发展中的作用和意义。发于细胞核 ,呈棕黄色颗粒状或网状 ,范围与核等大并与染色质分布一致。在癌组织中ＰＣＮＡ阳性细胞在Ｆａｓ和ｃ ｍｙｃ是与细胞凋亡有关系较密切的基因蛋白。ｂ…     

蟾皮提取液对肾癌细胞凋亡及Fas,FasL和bcl—2表达的影响

目的：探讨蟾皮对肾癌细胞ＧＲＣ－１凋亡的诱导作用及Ｆａｓ、Ｆａｓ配体（Ｆａｓ Ｌｉｎａｎｄ,ＦａｓＬ）和ｂｃｌ－２表达的影响,了解其抑制肿瘤的分子生物学机制。方法：用末端脱氧核苷酰转移酶法（ＴｄＴ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄＵＴＰｎｉｃｋ ｅｎｄ ｌａｂｅｌｉｎｇ,ＴＵＮＥＬ）流式细胞技术检测细胞凋亡,免疫细胞化学检测Ｆａｓ、ＦａｓＬ和ｂｃｌ－２的表达。结果：当蟾皮提取液浓度分别为０μｇ／ｍｌ,０．０１     

FasL配体基因治疗血管损伤后再狭窄的研究进展

血管损伤反应是参与动脉粥样硬化和血管再狭窄形成的共同机制 ,在动物血管再狭窄模型中 ,经历了 4个相互交错的阶段[1] ,即炎性细胞浸润 ,血栓形成 ,血管平滑肌细胞增生 ,最后是基质形成。ＰＴＣＡ术后再狭窄率高达 30 %～ 50 % [2 ,3] ,血管平滑肌细胞 (ＶａｓｌｕｌａｒＳｍｏｏｔｈＭｕｓｃｌｅＣｅｌｌＶＳＭＣ)增生是主要的病理变化[4 ] ,而细胞凋亡与细胞增生存在密切关系 ,且参与了再狭窄的形成过程[5] 。促细胞凋亡基因Ｆａｓ配体 (ＦａｓｌｉｇａｎｄＦａｓＬ)导入ＶＳＭＣ ,能诱导ＶＳＭＣ细胞凋亡 ,抑制ＶＳＭＣ增生 ,在动物模型…     

细胞凋亡的研究

本文介绍了细胞凋亡的概念及生物学特征，讨论了ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ、Ｐ５３、Ｆａｓ等相关基因在细胞凋亡中的作用，细胞凋亡在医学生物学中的意义，及细胞凋亡的研究方法。     

胃粘膜上皮细胞系GES—1细胞凋亡密度依赖性的研究

目的：探讨细胞密度对ＧＥＳ－１细胞凋亡的影响及其机制。方法：细胞凋亡的存在以Ｇｉｅｍｓａ染色证实，ｂｃｌ－基因的表达采用细胞原位杂交技术。结果：正常培养情况下ＧＥＳ－１细胞凋亡呈细胞密度依赖性，８ｍｇ／Ｌ的五肽胃泌素能增强ｂｃｌ－２基因的表达但不能抑制密度依赖的细胞凋亡。结论：ｂｃｌ－２基因表达可能与ＧＥＳ－１细胞凋亡的密度依赖性无关。     

肝细胞癌患者癌和癌旁组织中Fas抗原和bcl-2表达的研究

目的：探讨人体肝细胞癌患者癌及癌旁组织中Ｆａｓ抗原的原位表达、分布，并与抗凋亡基因产物ｂｃｌ－２蛋白比较，探讨Ｆａｓ抗原在肝细胞癌形成过程中的生物学意义。方法：用免疫组织化学方法检测２０例患者的肝细胞癌及癌旁组织中Ｆａｓ抗原和ｂｃｌ－２蛋白的原位表达。结果：１８例癌组织中有Ｆａｓ表达，大多数表现为胞质阳性，所有癌旁组织均见Ｆａｓ表达，阳性可见于胞质及胞膜，炎细胞浸润明显之汇管区及纤维间隔附近的肝细胞阳性表达有所增强。ｂｃｌ－２在１９例ＨＣＣ和所有癌旁组织均有表达；胞质着色，癌组织较癌旁表达为弱。结论：人体肝癌组织有Ｆａｓ表达，以胞质阳性为主，癌旁组织胞质及胞膜均有表达，与淋巴细胞浸润关系密切，ｂｃｌ－２的表达并不减弱细胞Ｆａｓ的表达，二者在ＨＣＣ的发生过程中可能有着独立的作用机制并起了一定的作用。     

细胞凋亡及凋亡相关基因在下肢静脉曲张中的表达及意义

目的：探讨细胞凋亡和凋亡相关基因在下肢静脉曲张中的表达及意义。方法：采用凋亡细胞原位检测、原位杂交、免疫组化研究８３例曲张静脉和１０例对照组内皮细胞和平滑肌细胞凋亡及相关基因表达。结果：①曲张静脉囊性扩张型Ｅｃｓ及ＳＭＣ凋亡指数显著增高（Ｐ＜０．０１）；②曲张静脉囊性扩张型Ｂｃｌ－２　ｍＲＮＡ阳性细胞表达率均显著低于非囊性扩张型（Ｐ＜０．０５）；③非囊性扩张型其Ｂｃｌ－２基因蛋白阳性细胞表达率均显著高于囊性扩张型和对照组（Ｐ均＜０．０５）；④囊性扩张型其Ｂａｘ　和Ｆａｓ基因蛋白阳性细胞表达率均显著高于非囊性扩张型和对照组（Ｐ均＜０．０５）；⑤Ｂｃｌ－２　ｍＲＮＡ表达阳性细胞数和表达率（０．２５±０．２３）与Ｂｃｌ－２基因蛋白（０．３０±０．２７）呈显著正相关，相关系数ｒ分别为０．７９５３８１（Ｐ＝０．００１９８１）和０．６８８２１６（Ｐ　＝０．０００８４４）。结论：①细胞过度凋亡导致静脉血管重塑，可能是静脉曲张发病机制之一；②曲张静脉囊性扩张型其ＥＣｓ和ＳＭＣ过度凋亡可能与Ｂｃｌ－２　ｍＲＮＡ、Ｂｃｌ－２蛋白低水平表达及Ｂａｘ、Ｆａｓ高水平表达相关。     

大鼠臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩时肌细胞凋亡的研究

目的 研究大鼠臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩与细胞凋亡的关系以及肌细胞凋亡的基因调控机制。方法 应用臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩的大鼠模型,采用流式细胞仪ＰＩ法、ＰＩ和ＡｎｎｅｘｉｎＶ双标记法、原位末端标记、ＤＮＡ凝胶电泳和电镜等多种方法有骼肌萎缩与细胞凋亡的关系。并用免疫组织化学和Ｎｏｒｇｔｈｅｒｍ－Ｂｌｏｔ方法检测凋亡相关基因Ｆａｓ、ＦＡＤＤ、Ｃａｓｐａｓｅ－８、Ｂｃｌ－２、Ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ的表达。结     

凋亡基因Bax,Bcl-2,Fasl在成年猫脊髓中的表达

采用免疫组织化ＡＢＣ法，观察凋亡基因Ｂａｘ，Ｂｃｌ－２，Ｆａｓｌ在成年猫脊髓的分布。结果：在脊髓腹角、中间带及后角深部均见Ｂａｘ，Ｂｃｌ－２，Ｆａｓｌ阳性神经元。反应物定位于细胞浆，相对之，后角浅层除Ｂｃｌ－２阳性神经元尚多多，Ｂａｘ，Ｆａｓｌ阳性神经元较少。     

Fas及其配体与胃癌的关系研究进展

Ｆａｓ系统是近年来受到普遍重视的介导细胞凋亡的信号传导系统 ,主要由Ｆａｓ及其配体 (Ｆａｓｌ)构成 ,Ｆａｓ与Ｆａｓｌ结合 ,可向细胞传递死亡信号 ,引发细胞凋亡。肿瘤细胞通过Ｆａｓ/Ｆａｓｌ介导体内抗肿瘤Ｔ细胞凋亡来反击体内免疫系统 ,并且通过抵抗Ｆａｓ/Ｆａｓｌ介导的凋亡成为免疫逃逸部位而逃避免疫系统攻击。近年来 ,为了阐明胃癌发生过程中细胞凋亡异常的分子机制 ,对Ｆａｓ/Ｆａｓｌ系统在胃癌及癌前病变中的表达和作用进行了深入研究 ,现将有关研究进展综述如下。1 .Ｆａｓ/Ｆａｓｌ的基因定位及分子结构　　 1 989年 ,日…     

造血细胞生长因子在再生障碍性贫血中的作用

再生障碍性贫血 (再障 ,ａｐｌａｓｔｉｃａｎｅｍｉａ)的病因多种多样 ,其发病机制十分复杂。随着对正常造血调控的认识 ,越来越多的学者提出 ,再障的机制是由外周血及骨髓Ｔ细胞克隆性增生式淋巴细胞亚群功能异常 ;多种与造血有关的正负调控因子分泌异常 ;Ｆａｓ/ＦａｓＬ介导的细胞凋亡以及由激活诱导的细胞凋亡在再障的发生、发展及临床转归中起着重要作用。本文仅以与造血有关的因子在再障中的作用作一概述。1　与造血有关的正负调控因子的来源及功能1.1　影响造血调节的细胞生长因子　它们在机体的免疫及造血调节中发挥重要作用 ,但不…     

caspase3蛋白在胃癌及非典型增生中的表达及其与细胞凋亡的关系

转化生长因子 β(ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ β ,ＴＧＦ β)是一个具有多种生物学活性的细胞因子 ,可抑制正常上皮细胞和部分肿瘤细胞的生长 ,但肿瘤细胞常常逃避ＴＧＦ β的生长控制而无限增殖而促进肿瘤的发展 ;ＴＧＦ - β还可以诱导肿瘤细胞发生凋亡。目前 ,具体的凋亡诱导机制尚不清楚。Ｃａｓｐａｓｅ 3是介导细胞凋亡的一类蛋白水解酶 ,即ｃａｓｐａｓｅ中的关键效应酶。研究发现 ,ＴＧＦ β诱导部分肿瘤细胞调亡时常伴有ｃａｓｐａｓｅ3的激活[1 ,2 ] ,ＴＧＦ - β通过诱导胃癌细胞的ＴＳＣ 2 2基因表达并产生细胞凋亡也与ｃａｓｐａｓｅ3的激活密切相关[3] 。     

人Fas抗原死亡表位分析

目的：分析确定人Ｆａｓ（Ｈ－Ｆａｓ）抗原具有死亡效应的表位区域。方法：采用可及性方案、可塑性方案,结合抗原性方案,二级结构方案预测Ｈ－Ｆａｓ抗原Ｂ细胞表位,Ｆｍｏｃ固相合成法合成部分预测表位肽段并鉴定后,经固相ＥＬＩＳＡ确定是与具有导细胞凋亡（ＰＣＤ）的抗人ＦａｓｍＡｂ２Ａｌ、ＤＸ２、ＣＨ－１１反应,结果：Ｈ－Ｆａｓ捩的胞外区的Ｂ细胞表位可能位于Ｎ－末端氨基酸（ＡＡ）残基５１－７８．１０２－１１０     

皮肤鳞状细胞p53,bcl-2蛋白和增殖细胞核抗原的表达

近年来 ,随着细胞调亡 (Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)概念的确立 ,人们对肿瘤的发生和发展产生了新的认识。据报道肿瘤发生不仅与细胞过度增殖有关 ,也与细胞凋亡减少有关[1] 。细胞分裂和细胞死亡的相对比例可以决定癌生长的速度[2 ] 。本研究通过对 2 6例皮肤鳞状细胞癌 (Ｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ ,ＳＣＣ)中ｐ5 3蛋白 ,ｂｃｌ 2蛋白及增殖细胞核抗原 (Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｌｎｕ ｃｌｅａｒａｎｔｉｅｎ ,ＰＣＮＡ)的表达进行免疫组化检测 ,旨在探讨三者间相互关系以及ＳＣＣ发生中作用和意义。1　材料与方法1 1　一般资料　标本为湘雅医院及附二院皮肤科 1989～1     

柔红霉素体外对HL-60细胞的凋亡作用

目的：了解柔红霉素（ＤＮＲ）体外作用于ＨＬ－６０　细胞时产生凋亡的规律及一些相关蛋白表达的变化。方法：应用光镜、ＤＮＡ电泳及ＦＣＭ检测ＨＬ－６０细胞发生的凋亡模式；用ＩＣ、ＦＣＭ观察相关蛋白的变化。结果：当ＤＮＲ浓度为０．２μＭ～２μＭ时，ＨＬ－６０细胞发生的凋亡率随浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的ＤＮＡ梯度条带。１μＭ　ＤＮＲ作用２ｈ时，ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ的荧光强度指数（ＦＩ）降低，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３　的　ＦＩ　升高；而作用５ｈ时，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３的ＦＩ值反而降低。结论：一定浓度的ＤＮＲ在体外可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，它可抑制ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达，而激活ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白的表达。