雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞周期及P21wap1/cip1和P27kip1表达的影响

目的观察雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226增殖和周期的影响,探讨细胞周期调控蛋白P21wap1/cip1和P27kip1在其中的作用和意义。方法采用MTT比色法和流式细胞术检测雷公藤内酯醇对RPMI 8226细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,半定量RT-PCR和Western blotting法检测RPMI 8226细胞中P21wap1/cip1、P27kip1 mRNA和蛋白表达。结果 雷公藤内酯醇能明显抑制RPMI 8226细胞增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,雷公藤内酯醇作用48 h的IC50值为(71.18±2.01)nmol/L。雷公藤内酯醇还可以诱导RP-MI 8226细胞周期阻滞于G0/G1期,随着雷公藤内酯醇浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,S期细胞逐渐减少。经雷公藤内酯醇干预后周期调节蛋白P21wap1/cip1和P27kip1的mRNA和蛋白表达水平明显上调。结论雷公藤内酯醇可以抑制RPMI 8226细胞增殖,该抑制作用是通过调控P21wap1/cip1和P27kip1的表达,从而阻止细胞周期G0/G1期过渡实现的。     

雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞周期及P21wapl/cipl和P27kipl表达的影响

目的 观察雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226增殖和周期的影响,探讨细胞周期调控蛋白P21wapl/cipl和P27kipl在其中的作用和意义.方法 采用MTT比色法和流式细胞术检测雷公藤内酯醇对RPMI 8226细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,半定量RT-PCR和Western blotting法检测RPMI 8226细胞中P21wapl/cipl、P27kipl mRNA和蛋白表达.结果 雷公藤内酯醇能明显抑制RPMI 8226细胞增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,雷公藤内酯醇作用48 h的IC50值为(71.18士2.01)nmol/L.雷公藤内酯醇还可以诱导RP-MI 8226细胞周期阻滞于G0/G1期,随着雷公藤内酯醇浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,S期细胞逐渐减少.经雷公藤内酯醇干预后周期调节蛋白P21wapl/cipl和P27kipl的mRNA和蛋白表达水平明显上调.结论 雷公藤内酯醇可以抑制RPMI 8226细胞增殖,该抑制作用是通过调控P21wapl/cipl和P27kipl的表达,从而阻止细胞周期G0/G1期过渡实现的.     

雷公藤内酯醇对K562细胞增殖周期的影响及对比研究

目的探讨雷公藤内酯醇抑制 K562细胞增殖的机理。方法选用 K562细胞株,运用细胞培养、MTT 法及流式细胞仪研究不同浓度雷公藤内酯醇、足叶乙甙(VP-16)对 K562细胞增殖及细胞周期的影响。结果雷公藤内酯醇能抑制 K562细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,且具有上调 K562细胞 G_1/S 检测点的能力。而 VP-16作用点是 G_2/M 期。结论雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,能干扰 K562细胞 G_1/S 检测点的转换,与 VP-16作用点不同。     

雷公藤醇提物对骨髓细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察雷公藤醇提物对大鼠骨髓细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法:体外培养大鼠股骨骨髓细胞,经不同浓度的雷公藤醇提物作用后,采用MTT比色法检测对骨髓细胞增殖的影响;采用流式细胞仪PI单标法检测对骨髓细胞周期的影响;采用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双标法检测对骨髓细胞凋亡的影响。结果:雷公藤醇提物可明显抑制正常骨髓细胞增殖,并且此抑制作用呈明显的时间和剂量依赖性。细胞周期进程的结果显示,与正常对照组相比,雷公藤组G0/G1期细胞比例显著增多,S期和G2/M期细胞比例显著减少,细胞增殖指数显著降低,早期凋亡率显著升高。结论:雷公藤醇提物可明显抑制骨髓细胞增殖,使骨髓细胞阻滞于G0/G1期,并能诱导细胞凋亡。     

山楂红曲荷叶汤对动脉粥样硬化模型大鼠血管平滑肌细胞的影响

目的:探究山楂红曲荷叶汤对动脉粥样硬化模型大鼠血管平滑肌细胞的影响。方法:本研究完整剪取动脉粥样硬化大鼠胸主动脉,采用贴块法培养动脉血管平滑肌细胞(VSMC),通过VSMC的形态学观察和鉴定确定研究模型,以细胞增殖以及繁殖周期为指标分析山楂红曲荷叶汤对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。结果:山楂红曲荷叶汤对20%FBS刺激的VSMC增殖而发生的细胞周期改变有显著的抑制作用,使G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,说明山楂红曲荷叶汤可使VSMC增殖周期停滞于G0/G1期,从而抑制VSMC增殖。结论:山楂红曲荷叶汤可以在一定程度上抑制动脉粥样硬化模型大鼠血管平滑肌细胞的增殖。     

雷公藤内酯醇对AngⅡ介导的大鼠GMC增殖的影响

目的:观察不同剂量雷公藤内酯醇对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导的肾小球系膜细胞增殖的影响,探讨其可能机制。方法:分离培养大鼠GMC,用10-6mol/LAngⅡ刺激GMC,将培养的大鼠GMC随机分为5组:正常培养对照组、AngⅡ刺激组、AngⅡ和3种不同浓度(15、10、5μg/L)的雷公藤内酯醇共孵育组。分别采用MIT法及流式细胞术检测大鼠GMC增殖及细胞周期的变化。结果:雷公藤内酯醇能抑制AngⅡ介导的大鼠GMC增殖,降低S G2/M期细胞比例,其中以高浓度雷公藤内酯醇作用最强(P<0.01)。结论:雷公藤内酯醇可能通过减少DNA合成期(S期)细胞数量,抑制大鼠GMC增殖。     

补肾化痰降浊方对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞增殖影响的实验研究

目的:观察补肾化痰降浊方对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:健康Wistar清洁级大鼠,分离大鼠胸主动脉,贴块法培养VSMC,抗α-actin的免疫组织化学染色鉴定细胞。无血清培养液培养静止后,以20%胎牛血清(FBS)刺激VSMC增殖。实验分为空白对照组、补肾化痰降浊方组,分别加入不同浓度的补肾化痰降浊方,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对VSMC增殖的影响,并用流式细胞仪检测VSMC细胞周期的变化。结果:经20%FBS刺激后,VSMC细胞增殖明显升高,加入不同浓度的补肾化痰降浊方作用24小时后,细胞增殖明显下降,并呈一定程度的剂量依赖关系。随着补肾化痰降浊方浓度加大,VSMC细胞周期分布发生变化,G0/G1期细胞比例增加,而合成增殖的S期细胞比例减少,出现G0/G1期细胞周期阻滞。结论:补肾化痰降浊方对血管平滑肌细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系,可能是其防治动脉粥样硬化(AS)及AS性疾病的部分作用机制。     

淡豆豉异黄酮对Ang Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞周期的影响

目的:观察淡豆豉异黄酮对血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)诱导大鼠血管平滑肌细胞(Vascular Smooth MuscleCell,VSMC)细胞周期的影响,探讨其抑制增殖的可能机制。方法:原代培养大鼠VSMC,建立AngⅡ诱导VSMC增殖模型,MTT法观察淡豆豉异黄酮对Ang Ⅱ诱导VSMC增殖的干预作用,流式细胞仪观察淡豆豉异黄酮干预细胞后细胞周期的变化。结果:淡豆豉异黄酮50μg/L预孵育12、24 h,100μg/L预孵育1、4、12、24 h,200μg/L预孵育1、4、24 h,500μg/L预孵育4 h可显著抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖;50、100、200μg/L作用24 h抑制增殖作用最为明显,并可显著增加VSMC G0/G1期比例,降低S期比例。结论:淡豆豉异黄酮抑制Ang Ⅱ诱导的VSMC增殖作用机制可能与阻止细胞由G0/G1期进入S期,进行VSMC细胞周期的调控有关。     

糖足方对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的：用血清药理学与现代分子生物学相结合的方法，探讨糖足方对糖尿病大鼠模型血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法：选择纯种新西兰家兔，灌服不同剂量的糖足方中药制剂，制备含有不同药物浓度的兔血清；用组织块种植法体外培养糖尿病大鼠模型的髂动脉平滑肌细胞并用不同浓度含药血清进行干预；用同位素液闪测定氚标记胸腺嘧啶脱氧核糖核苷（3H-TDR）掺入量，检测含药血清对平滑肌细胞增殖的影响；流式细胞仪测定细胞周期。结果：糖足方含药血清诸组呈浓度依赖性地表现为3H,TDR掺入量显著减少，3个含药血清组3H-TDR掺入量均明显低于正常血清对照组（P〈0.01）；流式细胞仪测定各含药血清组处于S和G2／M期细胞百分比显著低于正常血清对照组（P〈0.01）。结论：糖足方舍药血清抑制体外培养糖尿病大鼠VSMC增殖，且抑制效应呈浓度依赖性，其部分机制可能是通过阻滞VSMC G0/G1期向S的转化有关。     

芪灵扶正清解颗粒对人HepG2肝癌细胞ras基因蛋白表达的影响

目的探讨芪灵扶正清解颗粒含药血清对人Hep G2肝癌细胞增殖及对ras基因和蛋白表达的影响。方法制备含药血清和空白血清,体外干预Hep G2细胞24 h。流式细胞术检测细胞周期,荧光定量PCR检测h-ras、n-ras和k-ras基因表达量,免疫细胞化学染色检测P21ras蛋白表达情况。结果芪灵扶正清解颗粒含药血清干预人Hep G2细胞后,G0/G1期细胞的百分含量明显升高,S期细胞的百分含量和增殖指数明显降低。中剂量组k-ras、h-ras和n-ras m RNA的基因表达量和蛋白表达均明显低于空白血清组。结论芪灵扶正清解颗粒抑制Hep G2细胞ras基因和蛋白的表达,影响G1/S转换的进程,进而抑制Hep G2的增殖。     

丹参注射液抑制H2 O2诱导的平滑肌细胞增殖的作用机制

目的 :观察丹参对H2 O2 诱导的离体大鼠主动脉平滑肌细胞 (VSMC)、增殖细胞核抗原 (PCNA)、核转录因子 (NF κB)蛋白表达和细胞增殖周期时相的影响 ,以探讨其可能的作用机制。方法 :以H2 O2 作为外源性活性氧(ROS)刺激VSMC增殖 ,用免疫细胞化学法检测培养的VSMC中PCNA和NF κB的表达 ,同时用流式细胞术测定细胞周期。结果 :H2 O2 可使VSMC胞核内PCNA和NF κB蛋白表达呈强阳性 ,并明显增加S期细胞百分比 (与对照组相比 ,P <0 0 5或P <0 0 1) ,加入丹参干预后 ,PCNA和NF κB蛋白表达明显受抑制 ,G0 /G1期细胞百分比升高 ,S期细胞百分比下降。结论 :抑制PCNA和NF κB蛋白表达 ,阻止细胞进入有丝分裂期可能是丹参抑制H2 O2 诱导的VSMC增殖的重要机制之一。     

芦荟大黄素对动脉损伤后血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :探讨中药大黄的活性提取成分———芦荟大黄素对兔髂动脉损伤后离体培养的平滑肌细胞的增殖动力学的影响。方法 :纯种日本大耳白兔髂动脉内皮剥脱术后 48h ,取中膜做平滑肌细胞原代培养。指数增长期中的平滑肌细胞同步化于G0 期后 ,加入浓度梯度为 1 0 - 1 ～ 1 0 - 5g/L的芦荟大黄素于含 1 0 %胎牛血清的细胞培养液中 ,2 4h后 ,用3H TdR脉冲标记 6h ,然后测平滑肌细胞中TdR掺入量 (cpm ,每份样品每分钟脉冲数 )。同样地 ,细胞同步化于G0 期后 ,加入 2 0mg/L芦荟大黄素于含 1 0 %胎牛血清的细胞培养液中 ,作用 2 4h后 ,用流式细胞仪对细胞周期时相进行了测定。以上两实验与对照组加入等体积的细胞培养液。结果 :药物组与对照组比较 ,3H TdR的掺入量有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,药物浓度为 1 0 - 1 ～ 1 0 - 2g/L时 ,抑制率 (对照组cpm -药物组cpm/对照组cpm× 1 0 0 % )高达 90 %以上。药物对平滑肌细胞的抑制呈剂量依赖关系 ,药物浓度越高 ,抑制作用越大。与对照组比较 ,加入芦荟大黄素后 ,G0 /G1 期细胞百分比升高 ,S期百分比下降。细胞由G0 期向S期的转化受到阻滞。结论 :芦荟大黄素是一种强平滑肌细胞抑制剂 ,这种药理作用在体内可能有利于减轻平滑肌细胞的增殖 ,从而减轻导致动脉损伤后再狭?     

密蒙花方对缺氧状态下人血管内皮细胞细胞周期的影响

目的探讨密蒙花方对缺氧状态下人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vascular endothelialcell,HUVEC)细胞周期的影响。方法体外培养HUVEC,采用二氯化钴(CoCl2)建立细胞化学缺氧模型,采用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测不同浓度密蒙花方水提液(10、20、40 mg/ml)对缺氧状态下HUVEC细胞周期的影响。结果①缺氧组较正常组G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增高,差异具有统计学意义(P<0.01);②各密蒙花方组均较缺氧组G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例减少(P<0.01),组间具有浓度依赖关系(P<0.01);③密蒙花方组在G0/G1期前还出现了指示细胞凋亡的亚G1期凋亡峰,表明密蒙花方对缺氧状态下的HUVEC具有促凋亡作用。结论密蒙花方抑制HUVEC增殖的作用与阻滞细胞由G1期进入S期,促进细胞凋亡有关。     

蜂毒素对人胃癌细胞株BGC-823凋亡及其细胞周期的影响

目的：观察蜂毒素体外对人胃癌细胞株BGC-823增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法：采用MTT法观察不同浓度的蜂毒素（32,16,8,4,2μg/mL）体外对人胃癌细胞株BGC-823增殖的影响,并用流式细胞仪检测其诱导的细胞凋亡和周期阻滞效应。结果：①与对照组比较,蜂毒素有抑制人胃癌细胞株BGC-823增殖的作用（P〈0.01）,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大,呈现剂量依赖性。②蜂毒素浓度从4μg/mL开始,即可诱导细胞产生凋亡,随着剂量的增加诱导凋亡的效果更加明显。③在细胞周期方面,与阴性对照比较,蜂毒素作用24小时后S期细胞比例上升,而G0/G1期比例明显下降,蜂毒素浓度达到16μg/mL时G0/G1期前出现明显的亚二倍体区。结论：蜂毒素对人胃癌细胞株BGC-823的增殖具有抑制作用,且能够引起该细胞的凋亡及改变其细胞周期。     

Inhibition of rat vascular smooth muscle cell proliferation by extract of Ligusticum chuanxiong and Angelica sinensis

Ligusticum chuanxiong (LC) and Angelica sinensis (AS) have been widely used as traditional Chinese medicine to treat some pathological settings such as atherosclerosis and hypertension. The aim of this paper is to determine the effects of the extract of LC and AS (ELCAS) on serum-induced vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation, cell cycle and nitric oxide production. The results show that ELCAS significantly inhibited proliferation and protein synthesis of VSMC in a dose and time dependent manner. The cell population assessed by flow cytometry in the G(0)/G(1) phase increased 74% versus 79.8%, concomitant with a decrease in the S phase, 7.4% versus 4.2%, for control versus ELCAS (300 microg/ml). On the other hand, ELCAS significantly increased nitric oxide production of VSMC. The data suggest that ELCAS markedly inhibited VSMC proliferation by arresting G(1) to S progression, which may be associated with nitric oxide production.     

半枝莲含药血清对小鼠肝癌细胞生长的抑制和诱导凋亡作用

目的：探讨中药半枝莲提取物（ESB）对小鼠肝癌细胞生长的抑制和诱导凋亡作用。方法：体外培养小鼠H22肝癌细胞,以ESB高、中、低剂量含药血清培养液作用于H22细胞,并设立空白血清及5-氟尿嘧啶组。应用MTT法检测药物对细胞增殖的抑制作用;Hoechst33258染色,荧光显微镜下观察细胞凋亡;流式细胞术检测肿瘤细胞周期及细胞凋亡情况。结果：ESB高、中剂量含药血清组有一定的抑制H22肝癌细胞增殖的作用,且呈明显的时效关系。荧光显微镜下可见部分细胞呈典型凋亡形态学改变。流式细胞仪检测结果显示：细胞周期各时相中,ESB高、中、剂量含药血清组S期细胞所占的比例明显减少,G1期细胞增多,有明显的诱导凋亡作用。其中空白对照、ESB低、中、高剂量组、5-氟尿嘧啶组H22细胞凋亡率分别为0.51%、1.07%、3.15%、7.83%、11.26%。结论：ESB含药血清不仅可直接抑制小鼠H22肝癌细胞生长,而且可有效诱导细胞凋亡。     

淫羊藿苷对血管平滑肌细胞周期及周期相关蛋白表达的影响

目的 研究淫羊藿苷（icariin．ICA）对同型半胱氨酸（homocysteinemia,HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascular smooth musckle cell．VSMC）细胞周期的影响及其机制。方法建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48h后,用流式细胞仪检测VSMC细胞周期变化及细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1和CDK4的表达。结果0．2mg／L、0．4mg／L ICA组G0／G1期细胞数明显增多,s期细胞数明显减少,与HCY组相比有统计学意义（P〈0．01）;CyclinDl和CDK4的表达量均随ICA剂量增加而减少。结论 ICA桔抗HCY诱导的兔VSMC增殖．其主要机制可能与Cyclin D1及CDK4的低表达所致的细胞周期抑制有关。     

天麻钩藤饮对胰岛素促自发性高血压乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的观察天麻钩藤饮对胰岛素诱发的心肌成纤维细胞增殖升高的影响。方法从1日龄的自发性高血压乳鼠取得心肌,进行心肌成纤维细胞培养,并通过显微镜和免疫组化鉴定,观察天麻钩藤饮含药血清对胰岛素所致心肌成纤维细胞增殖升高的作用;以MTT比色法和3-H-TdR掺入法检测细胞增殖情况,以流式细胞仪检测细胞DNA周期。结果两种细胞增殖检测方法均显示天麻钩藤饮对胰岛素所致的心肌成纤维细胞增殖升高有抑制作用;胰岛素造模后细胞增殖升高主要是促进细胞从G0/G1期向S期转化,使细胞DNA合成增加而促进细胞增殖;天麻钩藤饮组与模型对照组比较G0/G1期百分率明显增加、S期百分率明显减少。结论天麻钩藤饮对胰岛素所致细胞增殖有抑制作用;可通过将细胞阻抑在G0/G1期,抑制其向S期转化从而抑制细胞增殖。这可能是天麻钩藤饮临床上治疗高血压病和防治心肌纤维化的作用机理之一。     

鹿茸多肽对人胶质瘤细胞生长抑制率及细胞周期的影响

目的观察鹿茸多肽对人胶质瘤细胞生长抑制率及细胞周期的影响,探讨鹿茸多肽抑制肿瘤细胞的增殖及调节细胞周期作用的机制。方法在体外传代的培养人胶质瘤细胞(U251)细胞株中加入不同浓度(50、100、200、400、800μg/mL)的鹿茸多肽,诱导培养48 h,镜下观察细胞的形态学变化,MTT法检测鹿茸多肽对肿瘤细胞增殖情况,计算抑制率;流式细胞术(FCM)分析鹿茸多肽,诱导培养肿瘤细胞48 h后,细胞周期变化情况。结果形态学观察表明,与对照组相比,随着药物剂量的增加,实验组细胞密度逐渐降低,细胞间隙逐渐增宽,细胞体积逐渐缩小,细胞内颗粒逐渐增多。MTT法检测结果表明,鹿茸多肽对肿瘤细胞的增殖抑制作用明显,细胞生长抑制率随着剂量增加抑制率逐渐增加,呈现出良好的剂量依赖性。FCM检测表明,肿瘤细胞G0/G1期与S期所占百分比逐渐减少,G2/M期阻滞。48 h均出现凋亡峰,及凋亡细胞群。结论鹿茸多肽对体外培养的人胶质瘤细胞的增殖有抑制作用,并具有量效关系。可使肿瘤细胞阻滞在细胞周期的G2/M期,继而引起的细胞周期阻滞和诱导其凋亡。