HPLC法测定雷公藤内酯醇生物贴中雷公藤内酯醇

目的建立雷公藤内酯醇生物贴的质量标准,雷公藤内酯醇生物贴中雷公藤内酯醇的定量测定方法。方法雷公藤内酯醇生物贴经甲醇超声提取。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(3∶7),检测波长为220 nm。结果雷公藤内酯醇在5~120μg/mL,线性关系良好(r=0.9981)。平均回收率96.5%(n=9)。RSD3%。结论本方法重现性好,灵敏度高。     

中药对血管平滑肌细胞增殖的影响

血管平滑肌细胞(ＶＳＭＣ)增殖是动脉粥样硬化(ＡＳ)斑块病变发生和发展的重要步骤[1],也是经皮腔内冠状动脉成形术(ＰＴＣＡ)后再狭窄的最主要形成因素之一[2]。抑制ＶＳＭＣ增殖是抗ＡＳ、防治ＰＴＣＡ术后再狭窄的重要途径之一。近几年来,中药对ＶＳＭＣ增殖影响的研究取得可喜的进展,现综述如下。1　单味中药及成分对ＶＳＭＣ增殖的影响1.1　丹参和丹参酮Ⅱａ磺酸钠(ＴＮⅡａ)　　张涛等[3]用实验性ＡＳ家兔,在髂动脉狭窄处行髂内血管成型术(ＴＡ),然后每日在普通饲料中掺入丹参粉2ｇ,饲喂30天的丹参组动物髂动脉ＶＳＭＣ增生较轻,内膜…     

雷公藤氯内酯醇研究进展

雷公藤氯内酯醇是从雷公藤值物中分离得到的环氧二萜内酯化合物，足雷公藤中的主要活性物质，本文从生源、半合成、药理等三个方面对该化合物进行全面介绍。     

雷公藤内酯醇对K562细胞增殖周期的影响及对比研究

目的探讨雷公藤内酯醇抑制 K562细胞增殖的机理。方法选用 K562细胞株,运用细胞培养、MTT 法及流式细胞仪研究不同浓度雷公藤内酯醇、足叶乙甙(VP-16)对 K562细胞增殖及细胞周期的影响。结果雷公藤内酯醇能抑制 K562细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,且具有上调 K562细胞 G_1/S 检测点的能力。而 VP-16作用点是 G_2/M 期。结论雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,能干扰 K562细胞 G_1/S 检测点的转换,与 VP-16作用点不同。     

HPLC法检测雷公藤药材中雷公藤内酯醇的含量

目的：建立测定雷公藤药材中雷公藤内酯醇含量的方法。方法：雷公藤醇提物经中性氧化铝层析柱洗脱,采用HPLC法检测雷公藤内酯醇含量。色谱柱：PhenomenexLunaC18（4．6mm×250mm,5m）;流动相：甲醇-水;梯度洗脱：0min（甲醇40％）-30min（甲醇50％）;流速1．0mL·min^-1;检测波长218nm;柱温：35℃。结果：雷公藤内酯醇与其他成分分离效果良好,25～400μg·ml^-1范围内有良好的线性关系,平均回收率为98．17％。结论：该方法准确、灵敏,可作为雷公藤药材中雷公藤内酯醇的定量分析方法。     

小白菊内酯对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及机制研究

目的:探讨小白菊内酯对血管平滑肌细胞增殖的影响及作用机制。方法:培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),Western印迹杂交法检测c-fos,c-myc,p15,p16,p18,p19蛋白表达,流式细胞仪检测VSMC周期情况,[³H]TdR参入测定VSMC的DNA合成。结果:小白菊内酯以时间依赖关系抑制c-fos,c-myc蛋白表达,但不影响p15,p16,p18,p19蛋白表达,以剂量依赖关系使VSMC周期中的G₀/G₁期细胞比例明显增多,S期细胞比例显著减少,同时抑制VSMC的[³H]TdR参入。结论:小白菊内酯可能通过抑制c-fos,c-myc蛋白表达,而不是影响p15,p16,p18,p19蛋白表达来抑制VSMC增殖。     

雷公藤内酯醇在血管内皮细胞增殖移行中对u-PA、PAI-1蛋白表达的影响

目的研究雷公藤内酯醇对人脐静脉血管内皮细胞体外培养增殖过程中纤溶酶原激活物系统蛋白表达的抑制作用。方法体外培养传三代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HU-VECs),在细胞增殖的同时分别加入不同浓度的雷公藤内酯醇,以免疫组织化学方法检测内皮细胞u-PA、PAI-1蛋白表达量。结果免疫组织化学染色表明雷公藤内酯醇明显抑制内皮细胞分泌U-PA、PAI-1的作用,治疗组均明显低于对照组(P<0.01);并呈剂量依赖性,随其浓度增加抑制作用加强。结论雷公藤内酯醇可明显抑制血管内皮细胞u-PA、PAI-1蛋白表达,从而有效抑制血管内皮细胞的增殖移行。     

HPLC法检测雷公藤超声提取物中雷公藤内酯醇的含量

目的：建立雷公藤超声提取物中测定雷公藤内酯醇含量的方法。方法：雷公藤超声提取物经中性氧化铝层析柱洗脱,采用HPLC法检测雷公藤内酯醇含量。色谱柱：大连江申公司C 18柱（4.6mm×250mm,5μm）;流动相：乙腈-水（25∶75）;检测波长：218nm;流速：1.0m l.min^-1;柱温：30℃;结果：雷公藤内酯醇与其他成分分离效果良好,线性范围为0.96-11.52μg/m l（r=0.9997）,平均回收率为97.82%。结论：该方法准确、灵敏,可作为雷公藤超声提取物中雷公藤内酯醇的定量分析方法。     

雷公藤微囊片中雷公藤内酯醇的含量测定

雷公藤微囊片主要有效成分为雷公藤内酯醇(以下简称T—d)。有关该成分的定量分析有报道用薄层扫描法,但薄层扫描仪在国内尚无法普及,测定波长用218nm,干扰因素较多;或用kedde试剂显色后扫描,显色剂的用量,颜色均匀度等等,都会影响测定结果。为此,我们改用薄层比色法,结果较满意,现报道如下。     

雷公藤内酯醇研究进展

雷公藤内酯醇具有抗肿瘤,抗炎,免疫调节,抗生育等活性,广泛用于治疗肿瘤,肾炎,哮喘等疾病,但是在运用过程中也存在多种不良反应.综述了近几年来雷公藤内酯醇的药理研究,含量测定方法及不良反应的研究概况.     

茶多酚对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨茶多酚对离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法　体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,应用不同剂量的茶多酚作用 2 4 h后 ,采用 MTS/ PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。应用流式细胞术测定细胞周期。结果　与对照组相比 ,茶多酚对血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用 (P<0 .0 0 1)。流式细胞术检测结果表明 ,茶多酚可以使血管平滑肌细胞大部分处于 G0 / G1 期 ,与对照组相比有明显差异 (P<0 .0 5 ) ,并且可以诱导其凋亡。结论　茶多酚可明显抑制离体大鼠血管平滑肌细胞的增殖。     

大蒜素抑制胰岛素诱发血管平滑肌细胞增殖和迁移实验研究

目的:探讨大蒜素(allicin)抑制胰岛素(insulin)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移及其作用机制。方法:采用组织贴块法培养大鼠的VSMCs,并进行平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光鉴定,取3~5代细胞进行实验。建立胰岛素刺激的VSMCs模型。实验分5组:对照组、胰岛素组、大蒜素组、ERK抑制剂PD98059组、大蒜素+PD98059组。噻唑蓝(CCK8)比色法检测VSMCs的增殖;细胞计数法检测VSMCs的迁移;免疫印迹实验(Western blotting)测定total ERK,PhosphoERK(p-ERK),PCNA蛋白表达的情况。结果:原代培养的VSMCs生长良好,光镜下呈长梭形及“峰与谷”样生长。α-SMA免疫荧光显示培养的细胞具有典型的VSMCs特征。胰岛素能刺激VSMCs的增殖和迁移,且以100 nmol·L-1浓度时效果最明显。大蒜素预处理能显著抑制胰岛素刺激的VSMCs的增殖和迁移,且呈剂量依赖性。PD98059、大蒜素+PD98059预处理亦能显著抑制胰岛素刺激的VSMCs的增殖和迁移。胰岛素可明显促进VSMCs表达p-ERK,PCNA蛋白。大蒜素能显著抑制VSMCs表达p-ERK,PCNA蛋白,且呈剂量依赖性。结论:大蒜素能显著抑制胰岛素诱导的VSMCs的增殖与迁移,其作用机制可能是抑制ERK信号通路的激活。     

葛根素与大豆苷元对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的 :研究葛根素与大豆苷元对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,并探讨其机制。方法 :分离培养人脐动脉平滑肌细胞 ,不同浓度葛根素、大豆苷元与细胞共孵育 ,使用MTT法检测细胞活性 ,同时用Rt PCR法检测Survivin ,Bcl xl,Bax ,GapdhmRNA的表达。结果 :葛根素与大豆苷元都可降低细胞增殖活性 ,升高Bax/Gapdh/Bcl xl/Gapdh的比值。与葛根素组相比 ,相同浓度的大豆苷元组细胞活性较低 ,Bax/Gapdh/Bcl xl/Gapdh比值较高。结论 :与葛根素相比 ,大豆苷元抑制血管平滑肌细胞增殖的作用更强。     

川芎嗪抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的研究川芎嗪对大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖和凋亡的影响。方法采用改良组织块和胰酶消化联合培养原代ASMCs,以血小板源生长因子(PDGF)诱导ASMCs增殖建立模型。采用MTT法检测不同浓度川芎嗪作用不同时间对ASMCs增殖的抑制,Hoechst33342染色检测细胞凋亡,Western blot检测ERK1/2蛋白表达情况。结果 MTT检测川芎嗪处理(6,12,24,36和48 h)后,与对照组比较,12.5μmol/L组、25μmol/L组、50μmol/L组和100μmol/L组的细胞平均抑制率均显著增加(P均<0.05)。Hoechst 33342染色观察到50μmol/L组、100μmol/L组和200μmol/L组川芎嗪中强荧光细胞比例随川芎嗪剂量增大而增多,细胞核内多个不均一蓝染现象。川芎嗪(200μmol/L组)和PDGF(20 pg/L)共同处理后,随作用时间增加,ERK1/2蛋白表达水平显著降低。结论川芎嗪对ASMCs增殖有抑制作用,同时高浓度的川芎嗪可促进ASMCs凋亡,可能与下调ERK1/2的表达有关。     

氧化苦参碱对人脐静脉平滑肌细胞钙化的影响及其可能机制

目的:观察氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对人脐静脉平滑肌细胞(humans umbilical vein smooth muscle cells,HUSMCs)钙化的影响及其可能机制。方法:以β-甘油磷酸盐诱导HUSMCs钙化,实验分为对照组、钙化组、单纯OMT组、OMT干预高、中、低剂量组。采用Von Kossa染色鉴定细胞钙化,比色法检测细胞钙含量,磷酸苯二钠法测定ALP活性,放射免疫法测定骨钙素(OC)含量,ELISA检测细胞培养液中TGF-β1和细胞内psmad2/3,smad2/3的含量变化,Western blot法检测细胞内Cbfα1蛋白的表达。结果:钙化组与对照组相比平滑肌细胞内可见大量黑色颗粒聚集,钙含量,ALP活性,OC,TGF-β1,smad2/3磷酸化和Cbfα1蛋白的含量均明显增加;OMT干预后钙化指标均下降,TGF-β1,smad2/3磷酸化和Cbfα1蛋白表达量亦明显减少,且高剂量OMT组效应强于中、低剂量组。结论:OMT可有效抑制β-甘油磷酸盐诱导的HUSMCs钙化,且OMT降低TGF-β1,smad2/3磷酸化和Cbfα1蛋白表达可能是OMT抑制HUSMCs钙化的机制之一。     

Effects of Panax notoginseng saponins on proliferation and apoptosis of vascular smooth muscle cells

Aim of the study

Atherosclerosis is a common cardiovascular disease, and linked with the development of many cardiovascular complications, such as myocardial ischemia and stroke. Although pathogenesis of atherosclerosis is not completely elucidated, increasing evidence has demonstrated that abnormal proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) plays an important role in formation of atherosclerosis. Previous studies showed that saponins from Panax notoginseng (PNS) possess anti-atherosclerotic properties. However, the mechanism of PNS against atherosclerosis is not well understood. Therefore, the present study observed the effects of PNS on proliferation and apoptosis of VSMCs.

Materials and methods

Rat VSMCs were cultured, and platelet-derived growth factor (PDGF) was used to stimulate cell proliferation. The viability of VSMCs was assessed with the MTT method. VSMCs apoptosis was detected by flow cytometry. Expressions of apoptosis related protein p53, Bax, caspase-3 and Bcl-2 were determined using Western blot.

Results

Pretreatment of the cells with PNS (200, 400, 800 μg/mL) significantly inhibited proliferation of PDGF-stimulated VSMCs, and induced apoptosis of the proliferated VSMCs in a concentration-dependent way. Western blot analysis showed that PNS upregulated expressions of pro-apoptotic protein p53, Bax and caspase-3, downregulated expression of anti-apoptotic protein Bcl-2, and enlarged Bax/Bcl-2 ratio in the proliferated VSMCs induced by PDGF.

Conclusions

This study demonstrates that PNS both inhibits VSMCs proliferation and induces VSMCs apoptosis through upregulating p53, Bax, caspase-3 expressions and downregulating Bcl-2 expression, which constitute the pharmacological basis of its anti-atherosclerotic action.     

白藜芦醇抑制血管平滑肌细胞成骨样转化的实验研究

目的 研究白藜芦醇（resveratrol,Res）对血管钙化的抑制作用,观察不同浓度的Res对高钙高磷诱导的人脐动脉血管平滑肌细胞（hVSMC）成骨样转化的影响。方法 体外培养hVSMC细胞,通过形态学和α-SMA标记进行鉴定。用高钙高磷（钙2.5 mmol/L、磷3.0 mmol/L）培养基诱导hVSMC成骨样转化,通过茜红素染色法鉴定成骨样转化。以普通培养hVSMC作为对照组,加高钙高磷为阳性对照组,实验组为阳性对照加不同浓度的Res（5、10、20 μmol/L）干预,培养12 d后,检测各组细胞含钙量,实时荧光定量PCR检测hVSMC成骨样转化相关基因骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨形态蛋白（BMP-2）、骨桥蛋白（OPN）的表达水平;Western blotting和免疫荧光标记方法检测BAP、BMP-2、OPN蛋白的表达。结果 与对照组比较,阳性对照组细胞内含钙量明显升高约5倍,α-SMA蛋白表达下降,而成骨样细胞特异性标记BAP、BMP-2、OPN mRNA和蛋白质表达均显著升高（P<0.01）。不同浓度Res干预后后,细胞内含钙量下降,BAP、BMP-2、OPN mRNA水平降低（P<0.05、0.01）;BMP-2及OPN的蛋白表达显著降低（P<0.01）,并与Res浓度呈负相关。结论 hVSMC在高钙高磷条件下发生成骨样转化,而Res抑制此过程的进展并与其浓度呈正相关。     

3种他汀药物调控纤溶活性抑制人血管平滑肌细胞增殖与迁移

 目的 探讨3种常用他汀药物(普伐他汀、辛伐他汀和氟伐他汀)介导纤溶酶原激活物及其抑制剂对体外培养人血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响。方法 采用四唑盐(MTT)比色法测定VSMC增殖活性,刮伤实验和改良Transwell chamber装置测定细胞迁移能力;用RT-PCR分析细胞tPA,uPA和PAI-1 mRNA表达;采用发光底物法测定细胞分泌tPA和PAI-1蛋白含量。结果 辛伐他汀和氟伐他汀可通过下调细胞PAI-1 mRNA表达和上调tPA mRNA表达,抑制10％胎牛血清诱导VSMC增殖和迁移,不同他汀药物对纤溶活性的调控时相不尽相同。普伐他汀在指定时间对基因转录活性无影响,随培养时间延长对tPA和PAI-1蛋白分泌伴有轻度增加和抑制。结论　他汀类药物抑制VSMC增殖和迁移可能与非调脂性抗动脉粥样硬化作用机制有关,辛伐他汀和氟伐他汀通过上调tPA mRNA和下调PAI-1 mRNA基因转录活性,而普伐他汀可能与tPA和PAI-1通过翻译后修饰或与辅助因子相互作用而调控纤溶酶及其抑制物活性,进而促进纤溶,抑制细胞增殖和移行。     

冠心舒通胶囊含药血清对AGEs诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨冠心舒通胶囊含药血清对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其可能机制。方法:分别以0.5g/kg、1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊内容物对大鼠灌胃给药28d制备冠心舒通胶囊含药血清;以各剂量含药血清单独或联合体外制备的AGE-牛血清白蛋白(AGE-BSA)处理原代培养大鼠VSMCs,MTT法检测各处理组细胞增殖水平、RT-PCR检测细胞血小板源性生长因子-B(PDGF-B)mRNA表达水平、酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清PDGF-B浓度。结果:40mg/L终浓度AGE-BSA显著增强VSMCs增殖水平(P<0.05),0.5g/kg、1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊含药血清对正常VSMCs生长未见显著影响(P>0.05),但显著抑制AGE-BSA诱导的VSMCs增殖(P<0.05),作用具有明显的剂量依赖性。AGE-BSA诱导VSMCs PDGF-B表达与分泌显著增强(P<0.05),1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊含药血清可有效抑制AGE-BSA这一作用(P<0.05),0.5g/kg剂量血清对AGE-BSA这一作用则未见明显影响(P>0.05)。结论:冠心舒通胶囊可剂量依赖性抑制AGEs诱导的VSMCs增殖,作用机制与抑制AGE诱导的PDGF-B表达与分泌有关。