ClC-3氯通道在二甲双胍抑制鼻咽癌细胞周期进程中的作用

目的:探讨ClC-3氯通道在二甲双胍抑制鼻咽癌细胞周期进程中的作用。方法:采用不同浓度二甲双胍处理低分化鼻咽癌细胞CNE-2Z,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期分布,Western blot法检测ClC-3氯通道蛋白表达,全细胞膜片钳技术检测细胞氯电流。构建高表达ClC-3氯通道蛋白的质粒pEZ-M03-ClC-3转染CNE-2Z细胞,流式细胞术检测ClC-3氯通道对细胞周期分布的影响。结果:5、10和20 mmol/L浓度的二甲双胍均可有效抑制CNE-2Z细胞的活力。10 mmol/L二甲双胍可阻抑CNE-2Z细胞周期于G₀/G₁期,并抑制CNE-2Z细胞氯电流及ClC-3氯离子通道蛋白的表达。ClC-3氯通道蛋白高表达可逆转二甲双胍对CNE-2Z细胞周期分布的影响。结论:二甲双胍抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞周期进程可能与抑制ClC-3氯通道功能和蛋白表达有关。     

他莫昔芬对不同生长周期鼻咽癌细胞容积激活性电流的作用

 目的：研究Cl-通道抑制剂他莫昔芬（tamoxifen）对G₁期和S期鼻咽癌细胞容积激活性电流的抑制效应。方法：运用血清饥饿法或化学药物双阻断法分别将鼻咽癌低分化上皮细胞（CNE-2Z）同步化至G₁或S期，用膜片钳技术研究不同细胞周期细胞容积激活性氯通道对阴离子的通透性及他莫昔芬对CNE-2Z细胞容积激活性电流的作用。结果：47%低渗刺激下，G₁期和S期细胞产生容积激活性电流，G₁期的电流密度大于S期。10-30 μmol/L他莫昔芬能完全抑制G₁期和S期容积激活性电流，但随浓度升高，达到完全抑制效应所需要的时间缩短。G₁期或S期细胞电流被完全抑制的时间有明显差异，在相同浓度他莫昔芬作用下，G₁期细胞达到最大抑制效应时间明显短于S期细胞。 G₁期与S期细胞容积激活性氯通道对阴离子的通透性均为I->Cl->葡萄糖酸根离子，但G₁期细胞对I-的通透性高于S期，S期细胞对葡萄糖酸的通透性高于G₁期。结论：CNE-2Z细胞G₁期与S期的容积激活性电流密度及对阴离子的通透性有差异， G₁期和S期细胞对他莫昔芬敏感性不同，提示CNE-2Z细胞对他莫昔芬敏感的容积激活性氯通道在不同生长周期中表达有差异。     

低渗诱导高分化鼻咽癌细胞CNE-1容积激活性氯电流

目的： 研究细胞外低渗诱导的高分化鼻咽癌细胞CNE-1的容积激活性氯电流。方法：全细胞膜片钳记录氯电流,通过应用氯通道阻断剂、离子置换和改变细胞容积方法研究该电流的特性。结果：当细胞在等渗环境中背景电流微弱且稳定,细胞外给予47%低渗刺激后电流迅速增大,呈外向优势,对阴离子通透性的大小为：I->Br->Cl->葡萄糖酸。氯通道阻断剂ATP和NPPB可逆性地抑制此电流,ATP的抑制作用在外向电流显著强于内向电流。此电流对细胞容积改变敏感,细胞肿胀时被激活,细胞发生皱缩时则被抑制。结论：细胞外低渗诱导CNE-1 细胞产生氯电流,此电流对细胞容积的改变敏感,在CNE-1细胞容积调节中起重要作用。     

蟾蜍灵激活低分化鼻咽癌细胞氯通道

目的: 研究蟾蜍灵(bufalin)对低分化鼻咽癌(CNE-2Z)细胞氯通道的激活作用以及通道的特性。方法: 采用全细胞膜片钳技术记录蟾蜍灵激活CNE-2Z细胞膜电流并分析其电流特征。结果: 细胞外灌流1 μmol/L 的蟾蜍灵可诱发CNE-2Z细胞产生一个氯电流,该电流潜伏期较长,为(12.1 ± 6.4)min, 其翻转电位接近氯离子平衡电位。该电流具有较明显的外向优势,没有明显的时间依赖性失活和电压依赖性失活。氯通道阻断剂他莫昔芬(tamoxifen)可完全抑制该电流, 细胞外灌流高渗液也可完全抑制该电流。结论: 蟾蜍灵可以激活CNE-2Z细胞氯通道产生氯电流,与容积激活性氯电流相比,该电流的潜伏期较长,并且有更明显的外向优势。     

顺铂激活的低分化鼻咽癌细胞氯电流

目的： 研究抗癌药顺铂对低分化鼻咽癌细胞（CNE-2Z）氯通道的激活作用以及该电流的特性。方法：采用膜片钳技术记录顺铂激活的CNE-2Z细胞全细胞电流;离子置换法等方法分析通道的特性。结果：细胞外灌流5 μmol/L的顺铂诱发CNE-2Z细胞产生一个有明显外向优势的电流,电流的翻转电位为(-6.69 ± 0.51) mV,接近氯离子平衡电位(-0.9 mV)。该电流的激活依赖于细胞内ATP。顺铂激活的细胞膜氯通道对阴离子的通透性顺序为：I-≥Br->Cl->gluconate。氯通道阻断剂tamoxifen完全抑制该电流。结论：抗癌药顺铂可以激活一个电流特征与容积激活性氯通道相似的氯通道。     

低氧-复氧对人鼻咽癌细胞增殖、细胞周期、黏附和侵袭能力的影响

目的: 研究细胞外微环境低氧-复氧对人鼻咽癌细胞(CNE-2Z)增殖、细胞周期、黏附和侵袭能力的影响。方法: 以混合气体(5% CO₂, 95% N₂, O₂<0.1%)置换法建立体外低氧培养模型;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期分布;同质黏附实验和细胞-基质黏附实验检测细胞黏附能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果: (1) 低氧24 h后抑制CNE-2Z细胞增殖(P<0.01),复氧后细胞快速增殖,在复氧第5 d A值与常氧对照组相比无显著差异(P>0.05);(2) 低氧24 h后细胞阻滞于G₁期(P<0.01),复氧后G₁期阻滞得到快速解除,在复氧24 h细胞周期分布与常氧对照组相比无显著差异(P>0.05);(3)低氧24 h后细胞的同质黏附能力下降(P<0.01)而细胞-基质黏附能力无明显改变(P>0.05),细胞侵袭能力降低(P<0.01);复氧24 h细胞同质黏附能力恢复至常氧对照组水平(P>0.05),而细胞-基质黏附能力(P<0.01)和细胞侵袭能力较常氧对照组显著增加(P<0.01)。结论: 鼻咽癌细胞能耐受微环境低氧的不利影响;低氧环境下存活的鼻咽癌细胞产生的适应性变化赋予肿瘤更强的增殖和转移潜能,从而促进肿瘤细胞的恶性演进。     

氯通道在不同生长周期的鼻咽癌细胞迁移中的作用

目的：研究不同生长周期的鼻咽癌低分化上皮细胞（CNE-2Z）的迁移能力及氯通道在迁移过程中所起的作用。 方法： 运用血清饥饿法、化学药物双阻断法、有丝分裂药物阻断及摇落法分别将CNE-2Z细胞同步化至细胞周期的G1、S、M期，流式细胞仪检测其同步化效果。结合应用迁移小室和图像分析法，测定迁移率。台盼蓝活细胞染色法测定药物的细胞毒性。 结果： 不同生长周期的细胞迁移能力不同，G1期细胞迁移能力最强，随后是M期， S期迁移能力最弱。氯通道阻断剂（ATP、NPPB、tamoxifen）抑制CNE-2Z细胞迁移，但不同的氯通道阻断剂对不同生长周期CNE-2Z细胞迁移的阻滞效应不相同。 结论： CNE-2Z细胞的迁移能力与其所在的生长周期密切相关，氯通道在各期CNE-2Z细胞的迁移过程中起着重要作用。     

蛋白激酶C在鼻咽癌细胞周期中的作用

目的：探讨蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）调控人鼻咽癌细胞ＣＮＥ－２Ｚ生长的机制，研究ＰＫＣ与ＣＮＥ－２Ｚ细胞周期的关系。方法：使用同位素标记有丝分裂法测细胞周期总时间及流式细胞仪（ＰＣＭ）测细胞周期；ＭＴＴ法测细胞增殖，蛋白－ＤＮＡ双参数法检测ＰＫＣα亚型在细胞周期中的分布。结果：细胞周期总时间为１８．５ｈ；各时相分别为Ｇ１期８．７ｈ，Ｓ期７．１ｈ，Ｇ２／Ｍ期３．９ｈ。作用于ＰＫＣ蛋白催化区的ＰＫＣ抑制剂Ｓ     

EB病毒LMP1表达对鼻咽癌细胞增殖及细胞周期分布的影响

目的:观察EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)表达对鼻咽癌细胞系增殖和细胞周期分布的作用。方法:用免疫组化(LSAB)法检测LMP1蛋白的表达;用MTT法测定鼻咽癌细胞系的增殖能力;用流式细胞术检测细胞周期的分布。结果:表达LMP1的鼻咽癌细胞系L-CNE1的OD值明显高于LMP1阴性的鼻咽癌细胞系V-CNE1和CNE1(P＜0.001)。L-CNE1细胞系的G₁期细胞百分率明显减少和S期细胞百分率明显增加,与V-CNE1和CNE1细胞系比较均有非常显著性差异(P＜0.001)。而V-CNE1与CNE1细胞系之间各期细胞百分率则无明显差异(P＞0.05)。结论:EBV-LMP1表达可使鼻咽癌细胞系细胞周期分布改变和增殖能力增强。     

血小板氯通道

Chloride channels distribute widely in the body, and participate in many physiological actions and regulatory processes. Based on their physiological roles and molecular structures, six kinds of chloride channels have been identified: (1) The chloride channels family; (2) Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator; (3) Swelling- activated chloride channels; (4) Calcium- activated chloride channels; (5) The p64 (CLIC) gene family; (6) γ- aminobutyric acid and glycine receptors. The chloride channels do exist in platelets, and their appearances are dependent on the presence of intracellular calcium. Blocking agents of chloride channels inhibit the thrombin - activated platelet aggregation and the elevation of the intracellular calcium concentration in a dose - dependent manner. It is suggested that chloride channels play a role in the activation of platelets. In addition, chloride channels act on both the cell volume regulation and the intracellular pH regulation in platelets.     

Cl-在鼻咽癌细胞调节性容积回缩中的作用

目的:研究鼻咽癌细胞的调节性容积回缩(RVD)及Cl^-在其中所起的作用。方法:活细胞图像分析低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)在细胞外低渗刺激时的细胞容积改变,用离子置换法和通道阻断法阐明Cl^-在RVD中所起的作用。结果:细胞外低渗刺激使细胞膨胀并诱发RVD。在160-230mOsmol/L范围内,RVD与细胞膨胀程度正相关。用葡萄糖酸取代灌流液Cl^-时RVD增强,细胞内Cl^-耗竭时RVD消失。氯通道阻断剂阻抑RVD,但不同的阻断剂对RVD的阻抑率有明显差异。结论:Cl^-是CNE-2Z细胞RVD的关键离子,Cl^-通道激活,Cl^-外流是RVD的主要机制。     

渗透压、细胞容积与鼻咽癌细胞增殖

目的:研究渗透压、细胞容积与鼻咽癌细胞增殖的关系。方法:用MTT法检测在不同渗透压培养条件下低分化鼻咽癌细胞(CNE－2Z)的增殖能力,流式细胞仪测定细胞周期分布,活细胞图像分析测量细胞容积,台盼蓝拒染法检测细胞存活率。结果:高渗(370、440mOsmol/L)培养增大细胞容积和促进细胞增殖,细胞容积分别增大8.7%、27.8%,增殖率分别提高22.2%和33.9%;而低渗(160、230mOsmol/L)培养减小细胞容积和抑制增殖,细胞容积分别减小12.8%和4.1%,增殖率分别降低34.0%和15.6%;细胞容积与细胞增殖率呈正相关。非等渗长期培养条件下,细胞周期各时相分布没有显著差异。低渗培养降低细胞生存率。结论:胞外渗透压、细胞容积与鼻咽癌细胞增殖密切相关,低渗培养可能通过减小细胞容积、促进细胞死亡而抑制细胞增殖。     

乙醇激活的鼻咽癌细胞氯电流的分子机制

 目的：研究乙醇对低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞氯通道的影响并探讨其分子机制。方法：MTT检测乙醇对细胞生长的影响;全细胞膜片钳技术记录乙醇对氯电流的影响;应用氯通道阻断剂分析该电流的特性;siRNA干扰技术分析乙醇敏感氯通道的分子本质。结果：在等渗灌流液中记录到微弱的背景氯电流,随灌流液中乙醇浓度（0.17~170 mmol/L）的升高,所激活的氯电流呈倒U型曲线状,17 mmol/L的乙醇激活电流达到峰值,电流呈较明显的外向优势,能被高渗液及氯通道阻断剂5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)benzoic acid（NPPB）所阻断;干扰ClC-3氯通道基因表达后乙醇激活的氯电流明显减小。结论：乙醇可能通过激活CNE-2Z细胞的ClC-3氯通道,诱导氯电流的产生。     

CFTR氯通道在硫化氢诱导的心肌保护及细胞增殖中的作用

目的： 探讨囊性纤维化跨膜传导调节因子（CFTR）氯通道在硫化氢（H2S）诱导的心肌保护及细胞增殖中的作用。方法：应用氯化钴（CoCl2）在大鼠H9c2心肌细胞建立化学性缺氧损伤心肌细胞实验模型;CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率;Hoechst 33342核染色法检测心肌细胞凋亡。结果：在400-2 000 μmol/L浓度范围内,CoCl2呈剂量依赖性地抑制H9c2心肌细胞的存活率,600 μmol/L CoCl2 能诱导H9c2心肌细胞产生明显的凋亡;在100-800 μmol/L浓度范围内,硫氢化钠（NaHS）呈剂量依赖性地促进H9c2心肌细胞增殖;NaHS能保护H9c2心肌细胞对抗CoCl2引起的细胞损伤作用,使细胞存活率升高,凋亡率降低;100 μmol/L CFTR氯通道拮抗剂5-硝基-2-（3-苯丙胺）-苯甲酸（NPPB)能明显地阻断NaHS对CoCl2的细胞毒性的抑制作用,但不能阻断NaHS抗心肌细胞凋亡作用及促进心肌细胞增殖作用。结论：CFTR氯通道可能参与H2S的抗CoCl2引起的心肌细胞毒性作用。