水通道蛋白-1,2在大鼠内耳中表达的研究

目的 通过研究水通道蛋白1（aquaporin 1,AQP1）和水通道蛋白2（aquaporin 2,AQP2）在大鼠内耳组织中的表达及分布,为临床治疗梅尼埃病提供实验依据.方法选取6只健康雄性SD大鼠,断头后行内耳组织切片,用兔抗大鼠AQP1和AQP2的特异性多克隆抗体分别进行免疫组织化学染色,观察AQP1和AQP2在内耳组织中的表达情况.结果 AQP1在内耳组织中的分布有一定的规律,主要分布于血管纹的中间细胞,螺旋韧带Ⅲ型纤维细胞,基底膜以及圆窗膜,染色强度为中重度,前庭阶及鼓阶的外淋巴表面的细胞呈现较弱的阳性反应,其余部位为阴性反应.AQP2主要表达于螺旋韧带Ⅱ、Ⅳ及Ⅴ型纤维细胞,呈中重度染色反应,圆窗膜也有轻度表达,其余部位为阴性反应.结论 AQP1和AQP2分布于内耳中水及离子代谢的重要部位,提示两种蛋白可能参与内耳内环境稳态的调节.     

豚鼠耳蜗和内淋巴囊水通道蛋白的表达

目的 研究豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中水通道蛋白(aquaporin，AQP)不同亚型的定位表达及其意义。方法 用兔抗大鼠AQP1、AQP2、AQP3、AQP4的多克隆抗体，采用免疫组化SP法分别检测相应AQP蛋白亚型在豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中的表达模式。结果 在耳蜗组织中，AQP1、4广泛分布于耳蜗的各个区域，如血管纹、螺旋韧带、Corti器、螺旋缘、螺旋神经节等，AQP3除了在血管纹表达呈弱阳性外，其余区域的表达与AQP1和AQP4相似，AQP2则仅表达于Reissner膜。在内淋巴囊组织中，AQP1、AQP3和AQP4在内淋巴囊上皮细胞和上皮下纤维组织均呈强阳性表达，只是AQP3的表达强度稍弱于AQP1和AQP4，而AQP2在内淋巴囊上皮细胞和上皮下组织均呈阴性表达。结论 水通道蛋白1、3、4以相似的方式广泛分布于豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中，而AQP2则仅表达于Reissner膜，提示不同亚型的AQP可能在不同区域协同作用参与内淋巴的调节，从而保持内耳内环境的稳定。     

正常和膜迷路积水豚鼠内耳水通道蛋白的表达及意义

目的检测正常和膜迷路积水豚鼠内耳水通道蛋白（aquaporins,AQPs）的表达,探讨其机理和意义。方法 20只健康豚鼠随机分为实验组和对照组,每组10只,实验组（膜迷路积水模型组）豚鼠腹腔注射醋酸去氨加压素,4μg·kg-1·d-1,共1周,诱导其内耳膜迷路积水,对照组豚鼠腹腔注射等量生理盐水。用免疫组化方法检测两组豚鼠内耳水通道蛋白的表达,并进行比较。结果对照组豚鼠内耳中有AQP0、1、2、3、5、7、8的表达,其中AQP0仅在血管纹和螺旋神经节细胞有较弱的表达;AQP1分布于包绕骨迷路、内淋巴囊、内淋巴管的纤维细胞,基底膜鼓阶面细胞、螺旋韧带纤维细胞、螺旋缘纤维细胞、Corti’s器、内外螺旋沟、血管纹、椭圆囊壁、球囊壁、螺旋神经节等;AQP2表达在血管纹、Corti’s器、螺旋神经节细胞和内淋巴囊中;AQP3、7、8三者的分布类似,在螺旋神经节和包绕膜迷路的组织中表达,包括Corti’s器、内外螺旋沟、血管纹、螺旋韧带纤维细胞、螺旋缘、椭圆囊壁、球囊壁、内淋巴囊等;AQP5则表达在Corti’s器、内外螺旋沟、螺旋神经节、螺旋韧带纤维细胞。实验组豚鼠内耳中,血管纹AQP2的表达与对照组较正常豚鼠表达增加,其它亚型AQPs的表达与对照组无明显差异。结论正常豚鼠内耳中有多种AQPs表达,膜迷路积水后豚鼠内耳中AQP2的表达增强,提示膜迷路积水可能与AQP2表达上调有关。     

小鼠内耳水通道蛋白的定位及其意义

目的 检测水通道蛋白（water channel proterin;aquaporin,Aqp)亚型在小鼠内耳不同部位的分布和亚型所在部位。方法 使用成年小鼠30只,经活体灌注,切取双侧颞骨,按石虹包埋技术处理和切片。使用免疫组织化学方法标记确认小鼠内耳组织中水通道蛋白亚型1、3、4、5、7、9分布情况。结果 Aqp-1为1:200和Aqp－3、7、9为1:100的一抗浓度可以看一它们在内耳不同部位稳定、清晰的染色反应,但Aqp-4和5使用1：50甚至1：30也未观察到染色。Aqp－1在圆窗膜、螺旋韧带、内淋巴囊和内淋巴管、椭滞 和球囊以及内耳血管壁等处被标记;Aqp-3在螺旋韧带、前庭唇、内、外螺旋沟、基底膜和基底膜嵴、内淋巴囊和内淋巴管、膜半规管和椭圆囊、 球囊斑等处显示荧光染色。Aqp-7在血管纹、基底膜、前庭膜、椭圆囊和球囊及其囊斑有反应染色,而Aqp-9在螺旋缘、前庭唇、内、外螺旋沟、前庭膜、膜半规管和球囊及其囊斑有较强染色。结论 水通道蛋白亚型1、3、7、9广泛分布于小鼠内耳不同组织中,其分布部位和反应强弱存在差异,主要存在与内淋巴密切相关的组织结构中。     

正常豚鼠内耳水通道蛋白的表达及意义

目的：检测正常豚鼠内耳组织中水通道蛋白（aquaporins,AQPs）的表达,探讨其在内耳液体平衡中的意义.方法：用免疫组织化学方法,以兔抗大鼠AQP0、1、2、3、5、7、8的多克隆抗体,检测正常豚鼠内耳组织中水通道蛋白亚型0、1、2、3、5、7、8的表达.结果：水通道蛋白亚型0、1、2、3、5、7、8在豚鼠内耳有不同程度、不同模式的表达,其中AQP0仅在血管纹上皮细胞、螺旋神经节细胞有较弱的表达,AQP1的分布见于包绕骨迷路、内淋巴囊、内淋巴管的纤维细胞,基底膜鼓阶面细胞、螺旋韧带纤维细胞、螺旋缘纤维细胞、Corti器、内外螺旋沟、血管纹、椭圆囊壁、球囊壁、螺旋神经节细胞等.AQP2表达在血管纹、Corti器、螺旋神经节细胞和内淋巴囊中.AQP3、7、8的分布类似,在螺旋神经节和包绕膜迷路的组织中均有表达,其中Corti器、内外螺旋沟、血管纹、螺旋神经节表达较强,在螺旋韧带、螺旋缘纤维细胞表达较弱.AQP5则在Corti器、内外螺旋沟、螺旋神经节细胞表达较强,在螺旋韧带纤维细胞表达稍弱.结论：在正常豚鼠内耳中,尤其是膜迷路中有多种水通道蛋白亚型,以不同的方式表达,他们可能在维持膜迷路液体平衡中起着协同作用.     

氯化物协同转运蛋白KCC2在正常大鼠内耳中的表达及意义

目的 研究氯化物协同转运蛋白KCC2(potassium-chloride cotransporter-2)在内耳中的表达及分布.方法 用免疫荧光素FITC(异硫氰酸荧光素)标记的方法检测KCC2在正常大鼠内耳的分布,荧光素标记阳性部位揭示大鼠耳蜗内KCC2的分布情况.结果 KCC2的阳性表达部位主要分布在耳蜗的盖膜、柯蒂器、螺旋神经节细胞以及前庭壶腹嵴顶部的毛细胞,耳蜗螺旋韧带及血管纹上KCC2为弱阳性表达.结论 在正常大鼠的内耳中,KCC2在耳蜗和前庭中有表达,提示KCC2可能通过对K 、Cl-转运的控制,配合其它的离子通道共同维持淋巴液中K 、Cl-的离子平衡.     

水通道蛋白-1,3在豚鼠耳蜗及内淋巴囊的表达

目的:检测水通道蛋白(AQP)-1,3在豚鼠耳蜗及内淋巴囊中的表达情况。方法:运用免疫组织化学二步法及免疫荧光染色检测豚鼠耳蜗及内淋巴囊中AQP-1,3的表达。结果:AQP-1主要表达于耳蜗螺旋韧带基底部、Corti器基底膜及鼓阶内侧上皮面及内淋巴囊上皮细胞下的基质组织中;AQP-3主要表达于血管纹、螺旋韧带、Corti器、螺旋神经节细胞及内淋巴囊的上皮细胞及其下的基质成分中。结论:AQP-1,3在豚鼠耳蜗及内淋巴囊中存在广泛表达,但其功能仍未明确。     

前庭学

20050401脉鼠耳蜗和内淋巴囊水通道蛋白的表达/钟时勋…//听力学及言语疾病杂志.2004,12(5).337～339目的:研究脉鼠耳蜗和内淋巴囊组织中水通道蛋白(AQP)不同亚型的定位表达及其意义。方法:用兔抗大鼠AQP1、AQP2、AQP3、AQP4的多克隆抗体,采用免疫组化SP法分别检测相应AQP蛋白亚型在豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中的表达模式。结果:在耳蜗组织中,AQP1、4广泛分布于耳蜗的各个区域,如血管纹、螺旋韧带、Corit器、螺旋缘、螺旋神经节等,AQP3除了在血管纹表达呈弱阳性外,其余区域的表达与AQP1和AQP4相似,AQP2则仅表达于Reissner膜。…     

大鼠耳蜗组织中Nedd4及SGK1的表达

目的 研究大鼠耳蜗组织中神经前体细胞表达-发育性下调基因亚型(neural precursor celI-ex-pressed,developmentally downregulated isoforms,Nedd4)及血清糖皮质激素诱导激酶1(serum glucocorticoid-in-ducible kinase1,SGK1)蛋白分子的表达.方法 选取健康Wistar大鼠8只.用特异性多克隆兔抗鼠Nedd4-1/2、Nedd4-2及SGK1抗体,采用免疫组化法研究大鼠耳蜗组织中Nedd4-1/2、Nedd4-2及SGK1蛋白的表达模式.结果 Nedd4-1/2、Nedd4-2及SGK1蛋白广泛表达于大鼠耳蜗组织的各个区域中,包括血管纹、螺旋韧带、Corti器、螺旋缘、螺旋神经节、前庭膜等处.结论 在耳蜗组织中,存在一个由SGK1、Nedd4和上皮钠通道(ENaC)组成的Na+转运系统,它们协同作用转运Na+,从而保持内耳内环境的稳定.     

小鼠内耳水通道蛋白的定位及其意义

目的检测水通道蛋白(waterchannelprotein;aquaporin,Aqp)亚型在小鼠内耳不同部位的分布和各亚型所在的部位。方法使用成年小鼠30只,经活体灌注,切取双侧颞骨,按石蜡包埋技术处理和切片。使用免疫组织化学方法标记确认小鼠内耳组织中水通道蛋白亚型1、3、4、5、7、9分布情况。结果Aqp-1为1∶200和Aqp-3、7、9为1∶100的一抗浓度可以看到它们在内耳不同部位稳定、清晰的染色反应,但Aqp-4和5使用1∶50甚至1∶30也未观察到染色。Aqp-1在圆窗膜、螺旋韧带、内淋巴囊和内淋巴管、椭圆囊和球囊以及内耳血管壁等处被标记;Aqp-3在螺旋韧带、前庭唇、内、外螺旋沟、基底膜和基底膜嵴、内淋巴囊和内淋巴管、膜半规管和椭圆囊、球囊斑等处显示荧光染色。Aqp-7在血管纹、基底膜、前庭膜、椭圆囊和球囊及其囊斑有反应染色,而Aqp-9在螺旋缘、前庭唇、内、外螺旋沟、前庭膜、膜半规管和球囊及其囊斑有较强染色。结论水通道蛋白亚型1、3、7、9广泛分布于小鼠内耳不同组织中,其分布部位和反应强弱存在差异,主要存在与内淋巴密切相关的组织结构中。     

Expression of aquaporins in the cochlea and endolymphatic sac of guinea pig

It has been shown that the aquaporin (AQP) family forms membrane pores selectively permeable for water and some small solutes such as glycerol and urea, and thus plays important roles in regulating the fluid in many organs involved in fluid transport such as kidney, lung and brain. The aims of the present study were to investigate the cellular localization and its significance of aquaporins (AQPs) in various subregions of the cochlea and endolymphatic sac of guinea pig. The expression patterns of AQP1, 2, 3 and 4 were immunolabeled with the specific polyclonal rabbit antibodies against the rat AQP1, 2, 3 and 4. Our immunohistochemical examination showed that in the cochlea, AQP1, 3 and 4 were widely distributed in various locations including stria vascularis, spiral ligament, the organ of Corti and spiral ganglion in the similar patterns except that AQP3 in the stria vascularis was lightly weaker than AQP1 and AQP4. AQP2 was labeled only in Reissner's membrane. In the endolymphatic sac, AQP1, AQP3 and AQP4 were strongly expressed in the epithelial cells and subepithelial cells similarly with the exception that AQP3 was lightly weaker than AQP1 and AQP4. No AQP2 immunoreactivity was detected in the endolymphatic sac. Theses results suggest that different members of the AQP family in the labyrinth may work in concert to regulate endolymph and to maintain homeostasis in the inner ear.     

Adenylate cyclase activity in the fetal and the early postnatal inner ear of the mouse

The adenylate cyclase activity was analyzed in fetal, early postnatal and adult inner ears of the CBA/CBA mouse and also in approximately one month old inner ears from Shaker ?1 and Shaker ?2 mice. A comparison was made with the maturation of potassium levels in endolymph as investigated with the X-ray energy dispersive technique.Adenylate cyclase activity in the developing normal inner ear shows two significant periods of increases: from the 16th to the 19th gestational day in both the cochlear and vestibular parts of the labyrinth, and from birth to day 6 after birth in the lateral wall tissues of the scala media. During the first period the anatomical boundaries of the secretory epithelia are developing. The postnatal rise in adenylate cyclase activity correlates with the morphological maturation of stria vascularis at the cellular and subcellular levels and the rise in potassium content of endolymph. The rise of enzyme activity in the cochlea during the maturation of endolymph supports a link between adenylate cyclase and the control of inner ear fluids. Adenylate cyclase activity in stria vascularis/spiral ligament of Shaker ?1 and Shaker ?2 mice were at normal levels and correlated better with the rather normal morphology of the tissues than the abnormal composition of endolymph in these mutants.     

The orientation and its significance of water channel protein in the mouse inner ear]

OBJECTIVE: To examine the distribution of various subtypes of water channel protein (aquaporin, Aqp) in various structures of the mouse inner ear. METHODS: Thirty mice with white color were used in this study and were cardiacally perfused. The temporal bones were taken out and were processed and sectioned by paraffin-embedded technique. The sections were labeled with fluorescent antibody by immunohistochemical method. The distribution of Aqp1, 3, 4, 5, 7, 9 were confirmed in the inner ear of mouse. RESULTS: The constant and clear fluorescent reaction could be observed in the inner ear tissue with the first antibody concentration of 1:200 for Aqp-1 and 1:100 for Aqp-3, 7, 9. But the reaction of Aqp-4 and 5 could not be found with the concentration of 1:50, even 1:30. Aqp-1 was labeled in the round window membrane, spiral ligament, endolymphatic sac and duct, utricle and saccule and the wall of inner ear blood vessel; Aqp-3 in the spiral limb, vestibular lip, internal and external sulci, basilar membrane and basilar membrane crest, endolymphatic sac and duct, membranous semicircular canal and utricle and saccular macula; Aqp-7 in the stria vascularis, basilar membrane, Reissner's membrane, utricle and saccule and their maculae; Aqp-9 in the spiral limb, vestibular lip internal and external sulci, Reissner's membrane, membranous semicircular canal, saccule and its macula. CONCLUSION: Aqp-1, 3, 7, 9 were extensively distributed in various tissues of mouse inner ear. Their distribution sites and reaction degree were different, and mainly located in the structures related to the endolymph.     

水通道蛋白-2在大鼠内耳的定位及其意义

目的：探讨水通道蛋白-2(Aqp-2)在大鼠内耳中的定位，分析其在内耳水代谢中的作用机制。方法：使用正常成年SD大鼠15只，制备颞骨组织标本，采用SP免疫组织化学技术，检测Aqp-2蛋白在大鼠内耳的表达情况。结果：Aqp-2在大鼠的内淋巴囊、血管纹、螺旋神经节有较强表达，在Corti器、基底膜、螺旋缘的前庭唇和鼓唇、盖膜、螺旋凸也有表达。结论：Aqp-2主要分布在与内淋巴代谢有关的结构(内淋巴囊和血管纹)，它在Corti器的表达为膜迷路积水时伴有的听力下降提供了又一解释；Aqp-2在螺旋神经节的表达，提示它可能与正常听觉的维持有关。