耳蜗螺旋神经节细胞的电生理实验研究现状

耳蜗螺旋神经节细胞(spiral gaaglion cell,SGC),可将毛细胞的信号传向听觉中枢,在听觉信息的传导中起着极其重要的作用.目前,应用全细胞记录膜片钳技术,证实了SGC细胞膜上可表达多种离子通道,如电压门控离子通道,ATP控制的离子通道,神经递质受体介导的离子通道等,而各种病理状态下的SGC均伴有某些特定离子通道的电变化.对这些电变化的研究,将为我们在细胞和分子水平上诊断和治疗许多由内耳疾病所导致的耳聋和听力障碍提供可能.     

小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电生理学特性的研究

目的：应用膜片钳技术记录小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的全细胞电流,了解电压依赖性离子通道的基本电生理学特性,并比较耳蜗顶、底转螺旋神经节细胞电生理学特性的差异。方法：应用全细胞构型电压钳制技术,采用不同的电极内液及阻断剂,在不同的刺激参数下记录耳蜗顶、底转螺旋神经节细胞的电压依赖性离子通道电流,并进行分析比较。结果：实验记录到了内向的钠电流、延迟整流钾电流、超极化激活内向阳离子通道电流及瞬时外向钾电流,并发现耳蜗顶、底转螺旋神经节细胞的延迟整流钾电流及瞬时外向钾电流的电生理学特性具有显著性差异（P〈0．05）。结论：实验记录到的各种离子电流数据表明耳蜗螺旋神经节细胞具有完成动作电位的形成、传导并对其功能进行调节的离子通道基础;耳蜗顶、底转螺旋神经节细胞电生理学特性的差异有助于听觉的形成过程。     

利用膜片钳技术对急性分离小鼠螺旋神经节神经元的电生理研究

目的 探讨小鼠螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons，SGN)的电生理特性。方法 应用全细胞电压钳技术对急性酶分离的小鼠耳蜗SGN细胞膜上的离子通道电流进行记录和分析。结果 在SGN细胞膜上记录到对氯化四乙胺、4-氨基吡啶敏感的外向延迟整流钾电流和瞬时钾电流，以及对河豚毒素敏感的内向钠电流。并且离子通道活动具有明显的电压依赖性，在没有记录到钠电流的细胞记录到延迟整流钾电流。结论 急性酶分离的小鼠耳蜗SGN细胞的电生理特性可为听觉传导机制的研究提供了重要的参考，并指导下一步通道药理学的研究。     

小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电压依赖性离子通道的研究

目的了解小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电压依赖性离子通道的特性。方法采用耳蜗螺旋神经节细胞与耳蜗基底膜整体培养和膜片钳全细胞记录方法。结果采用出生后0至5d的C57BL/10J小鼠(n=30)，耳蜗螺旋神经节细胞与基底膜一道取出，培养8～48h后，基底膜内侧和周围散落的螺旋神经节细胞贴壁良好，便于进行生理学记录。螺旋神经节细胞根据在电流钳记录下有无动作电位来鉴别，健康的细胞在刺激电流的起始端和结束端均可记录到动作电位。细胞平均静息电位(     

顺铂对大鼠耳蜗螺旋神经节细胞外向延迟整流钾电流的影响

目的:观察记录顺铂作用下急性分离新生大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(SGNs)延迟整流钾通道的电流曲线,分析顺铂对SGNs钾电流激活动力学的影响,并初步探讨其耳毒性机制。方法:采用全细胞膜片钳技术记录SGNs外向延迟整流钾电流及顺铂对此电流的影响。结果:钳制电压为-60mV,刺激电压从-60mV到 80mV逐渐去极化,阶跃电压为10mV,持续时间为500ms,可在SGNs上记录到外向钾电流,该电流对TEA-Cl(4-乙基胺)敏感,具有延迟整流特性;在细胞外液中加入10μmol/L顺铂,能明显抑制SGNs延迟整流钾电流;顺铂对此电流的抑制作用与细胞外液中顺铂的浓度呈剂量依赖性;外液洗脱后SGNs电流可基本恢复正常。结论:钾通道与SGNs动作电位的产生密切相关,顺铂可抑制SGNs钾通道电流,导致听觉功能障碍。     

利用膜片钳技术对急性分离小鼠螺旋神经节神经元的电生理研究

目的 探讨小鼠螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons SGN)的电生理特性。方法 应用全细胞电压钳技术对急性酶分离的小鼠耳蜗SGN细胞膜上的离子通道电流进行记录和分析。结果 在SGN细胞膜上记录到对氯化四乙胺、4-氨基吡啶敏感的外向延迟整流钾电流和瞬时钾电流,以及对河豚毒素敏感的内向钠电流。并且离子通道活动具有明显的电压依赖性,在没有记录到钠电流的细胞记录到延迟整流钾电流。结论 急性酶分离的小鼠耳蜗SGN细胞的电生理特性可为听觉传导机制的研究提供了重要的参考,并指导下一步通道药理学的研究。     

硫酸庆大霉素对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞生长的影响

为观察硫酸庆大霉素对培养的小鼠耳蜗螺旋神经节细胞（SGC）的细胞生存数和细胞突起长度的影响，在单离培养的出生1～5d的NIH小鼠SGC培养液中，加入不同浓度的硫酸庆大霉素（25，50，100mg／L）。培养14d后，标本用4％多聚甲醛固定，甲苯胺蓝染色，在光镜下计数SGC生存数，目镜测微尺下测量细胞突起长度。结果显示，实验组与对照组间、不同浓度实验组间的细胞生存数及细胞突起长度无明显差异（P＞0．05）。提示硫酸庆大霉素对小鼠耳蜗SGC的生存和生长无明显影响，氨基糖甙类抗生素对SGC的影响可能是继发性的。     

豚鼠耳蜗单离螺旋神经节细胞外毛细胞同时分离法

随着细胞生物学及分子生物学技术的进步 ,保持活性的单离螺旋神经节细胞 ( SGC)和 (或 )外毛细胞 ( OHC)已成为听觉生理、生化、病理及药理实验的重要模型。OHC为听觉的感受细胞 ,SGC为听觉初级神经元 ,观察同一因素对 OHC及 SGC的影响有重要意义 ,这就需要同时获得来源于同一耳蜗的单离的 SGC和 OHC。为此 ,我们尝试了在同一耳蜗同时分离单离的 SGC和 OHC的可能性 ,获得较好结果 ,报告如下。1　材料与方法1 .1 　 实验动物及溶液配制选用耳廓反射阳性、体重 2 0 0～ 30 0 g的花色豚鼠 6只 ,雌雄兼有。培养液为标准细胞外液 ,组…     

耳蜗螺旋神经节细胞损伤和保护机制

耳蜗螺旋神经节细胞是听神经传入初级神经元,与听觉信息的传输过程密切相关,它的损伤程度直接反映了听力的受损程度.临床上多种损伤因素如耳毒性药物、强噪声、缺血等均可诱导其出现凋亡.目前研究耳蜗螺旋神经节细胞的损伤机制主要包括线粒体损伤、神经递质的改变、细胞凋亡途径的激活和离子通道改变等方面,而相应的从降低活性氧的浓度、抑制...     

庆大霉素对小鼠螺旋神经节神经元电生理特性的影响

目的 探讨庆大霉素对小鼠耳蜗螺旋神经节神经元细胞电生理特性的影响及其意义。方法 应用全细胞电压钳技术研究庆大霉素对急性酶分离小鼠螺旋神经节神经元细胞膜上的钾、钠离子通道电流的峰值的影响．与细胞外液中庆大霉素浓度的关系，以及庆大霉素洗脱后电流的恢复情况。结果 庆大霉素能抑制电压依赖性钾通道，但不能抑制电压依赖性钠通道，其钾通道抑制作用与细胞外液中庆大霉素的浓度呈剂量依赖性，庆大霉素洗脱后电流恢复不完全。结论 庆大霉素通过抑制螺旋神经节神经元细胞的钾离子通道而产生耳毒性。     

内皮素1在豚鼠耳蜗螺旋神经节的分析

内皮素1是1988年日本学者Yanagisawa从猪主动脉内皮细胞培养液中分离纯化的一种活性肽，研究发现内皮素1不仅是收缩能力最强的血管收缩物质，而且具有多种生物学活性，对气道张力形成，细胞增殖与凋亡，离子转运，基因调控等均发挥多种生物学影响，近来发现内皮素1对神经系统的生理活动亦具有调控作用。     

电刺激螺旋神经节细胞的形态学研究

为定量确定刺激螺旋神经节神经元的电流强度的安全范围，利用图象分析仪测量不同电流强度刺激下兔螺旋神经节经（ＳＧＮ）面积、周长、直径和体积的变化，发现ＳＧＮ形态各主要参数对０．４～１．２ｍＡ电流有显著改变，对０．１ｍＡ电流的变化则不显著，与正常组和对照组（药毒致聋组）比较无显著性差异。     

碱性成纤维细胞生长因子对耳蜗螺旋神经节细胞谷氨酸钠 …

OBJECTIVE: To understand the effects of basic fibroblast growth factor (bFGF) on survival and neurogenesis of the cultured spiral ganglion cell (SGC) of mouse after exposed to glutamate, and the effects of hFGF and glutamate on free intracellular calcium ion concentration. METHODS: After exposed to 2 x 10(-2) mol/L glutamate for 2 hours, the medium of SGC was replaced with the media containing 25, 50, 100 micrograms/L bFGF. Medium without bFGF was used as control. RESULTS: Twenty-four hours later, more cells in the control group showed signs of cell death than in bFGF groups. After 14 days, specimens were fixed in 4% paraformaldehyde and stained with toluidine blue. It was shown that the SGC in medium with bFGF exhibited more survival and longer neurites, and the effect was dose dependent (P < 0.01). Application of glutamate to the medium induced an increase to the the free intracellular calcium ion concentration in SGC, but bFGF had no such effect. CONCLUSION: Glutamate excitotoxicity was associated with free intracellular calcium ion concentration elevation in SGC, and bFGF could protect SGC against glutamate neurotoxicity.     

缺氧对体外培养耳蜗螺旋神经节细胞及神经纤维的影响

目的:建立耳蜗器官体外培养模型,详细观察缺氧对体外培养耳蜗螺旋神经节细胞(SGC)及神经纤维的影响。方法:分离生后3 d Wistar大鼠耳蜗基底膜,平铺在含有DMEM培养液的培养基内(每盘6条基底膜),2盘为1组,随机分为5组。4组作为实验组,按不同时间段(6 h、12 h、24 h、48 h)进行缺氧(37℃,90%N2,5%CO2,5%O2)培养。1组作为对照组放置在37℃、5%CO2培养箱。用抗神经丝蛋白作为一抗,对耳蜗SGC及神经纤维进行免疫荧光染色。激光共聚焦显微镜下观察缺氧时耳蜗SGC及神经纤维形态变化并计数单位面积(24 mm×36 mm)SGC数即细胞密度。结果:缺氧早期(6 h)神经纤维局灶性水肿,SGC变化不明显。12 h神经纤维局灶性断裂及崩解,SGC减少,细胞密度与对照组相比差异有显著性(P<0.01)。随缺氧时间延长,神经纤维崩解和SGC缺失逐渐加重,48 h神经纤维完全崩解破坏,SGC严重缺失,细胞密度与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:缺氧造成体外培养耳蜗SGC及神经纤维损伤,神经纤维对缺氧更敏感。     

内皮素1在豚鼠耳蜗螺旋神经节的分布

内皮素1是1988年日本学者 Yanagisawa从猪主动脉内皮细胞培养液中分离纯化的一种活性肽,研究发现内皮素1不仅是收缩能力最强的血管收缩物质,而且具有多种生物学活性,对气道张力形成、细胞增殖与凋亡、离子转运、基因调控等均发挥多种生物学影响,近来发现内皮素1对神经系统的生理活动亦具有调控作用.     

大鼠耳蜗螺旋神经节细胞的定量观察

目的 为定量观察SASCO Sprague Dawley(SD)大鼠耳蜗蜗轴螺旋管(Rosenthal's canal)切片中螺旋神经节细胞的数量提供实验依据.方法 11只SD大鼠用于本实验研究,其中5只正常SD大鼠用于对照,另966只SD大鼠用于制备乌苯苷引起的螺旋神经节细胞损害模型.耳蜗样品制作耳蜗中轴半薄切片,常规甲苯胺蓝染色,对耳蜗各回蜗轴螺旋管内的螺旋神经节细胞进行计数,计数结果采用方差分析检验.结果 一个完整蜗轴螺旋管内的螺旋神经节细胞数量在底回末段多于耳蜗底回起始段和中回中段.与正常大鼠耳蜗螺旋神经带数量相比,1mM乌苯苷仅造成耳蜗底回的部分螺旋神经节细胞破坏,而10mM乌笨苷可破坏绝大部分螺旋神经节,乌苯苷引起的螺旋神经节破坏模式是从耳蜗底回逐渐向顶回发展.结论 计数耳蜗各回不同部位切片中的蜗轴螺旋管内螺旋神经节细胞数量是一种简便可靠的耳蜗螺旋神经节细胞定量分析方法.     

大鼠耳蜗切片螺旋神经元的红外可视膜片钳技术

目的建立大鼠离体耳蜗切片技术，结合红外可视膜片钳技术探讨耳蜗螺旋神经元（spiral ganglion neuron，SGN）的电生理特性。方法0～2日龄、3～6日龄及7～14日龄的健康SD大鼠各10只，快速制作耳蜗切片，应用红外微分干涉相差技术，结合膜片钳记录，观察SGN的基本电生理特性，并分析影响耳蜗切片制作质量及膜片钳记录成功的因素。结果3～6日龄大鼠耳蜗切片的成功率最高，每只耳蜗可制备2～4张切片；保持部分颅骨与耳蜗的连接及耳蜗骨壳的完整是影响切片成功的关键，切片时蜗轴与刀片的位置及切片取材的时间也是影响切片质量和细胞活性的重要因素。红外可视膜片钳技术可准确找到状态良好的SGN，有助于对封接过程的判断。全细胞记录SGN静息膜电位平均为（-45．6±5．3）mV（x±s，n=52），可记录到Na^＋和K^＋电流。结论耳蜗切片技术能够较完整地保持耳蜗结构以及各种构成细胞的活性及其相互之间的联系，红外可视膜片钳技术具有实时、直视的特点，可操作性强，二者结合能为深入研究SGN的电生理特性及听觉传导机制提供良好的手段和平台。     

快速老化痴呆小鼠听功能及耳蜗螺旋神经节细胞MeCP2增龄性变化

目的探讨快速老化痴呆小鼠听觉功能、耳蜗螺旋神经节细胞（spiral ganglion cell,SGC）甲基化CpG结合蛋白2（methyl-CpG-binding protein 2,MeCP2）表达的增龄性变化。方法检测5、7月龄快速老化小鼠亚系8（senescence accelerated dementia mouse/prone,SAMP8）和同龄抗快速老化小鼠亚系1（senescenceaccelerated mouse/resistance 1,SAMR 1）8 kHz短纯音听觉脑干反应阈值以及SGC的MeCP2免疫组化染色等方面的增龄性变化。结果①第5、7月龄SAMP8小鼠双耳听觉脑干反应阈值较同龄SAMR1小鼠明显提高（5月龄左侧t=5.84,P〈0.05,右侧t=3.31,P〈0.05;7月龄左侧t=5.11,P〈0.05,右侧t=5.11,P〈0.05）;②MeCP2蛋白在不同月龄快速老化小鼠耳蜗组织中均有表达,第5、7月龄SAMP8小鼠SGC中的MeCP2蛋白较同龄SAMR1小鼠明显降低（5月龄t=2.80,P〈0.05;7月龄t=4.64,P〈0.05）。结论 SGC中MeCP2蛋白的表达水平随着快速老化小鼠听觉功能增龄性减退而降低,说明MeCP2蛋白可能与听觉形成有关。     

耳蜗毛细胞和螺旋神经节及其神经纤维的联合定量观察

目的：将耳蜗基底膜取材技术与耳蜗切片技术相结合以观察同一耳蜗中几个主要结构在病理发展中的相互关系。方法：耳蜗铺片用于定量观察毛细胞，骨性螺旋板切片用于定量观察缰孔内的神经纤维，中轴切片用于定量观察螺旋神经节。结果：将卡铂耳中毒灰鼠的耳蜗标本与正常灰鼠进行比较，显示内毛细胞，神经纤维和螺旋神经节的损失百分比基本一致。结论：卡铂对内毛细胞，神经纤维和螺旋神经节都有破坏作用，至于在卡铂病变早期，究竟哪一