人早孕胎盘绒毛膜滋养层细胞的培养

目的: 培养纯度较高的人绒毛膜滋养层细胞, 为胎盘绒毛在妊娠期间的作用及其机制研究提供细胞学基础.方法: 胰蛋白酶-DNase消化法培养人绒毛膜滋养层细胞,间接免疫染色进行细胞纯度检测,透射电镜观察细胞内部结构.结果: 倒置显微镜下,可见细胞为上皮样细胞形态,呈片状铺展生长.细胞角蛋白染色阳性,波型蛋白染色阴性,表明不含污染细胞.透射电镜观察示所获细胞有典型滋养层细胞结构.结论: 该法简便易行,可获得合乎试验要求的人绒毛膜滋养层细胞.     

应用胰蛋白酶／DNA酶消化法分散人绒毛膜滋养层细胞

目的：获得人绒毛膜滋养层细胞,方法：应用胰蛋白酶／DNA酶消化法进行消化,经光镜和电镜观察。结果：我们获得了人绒毛膜滋养层细胞。结论：取人妊娠45－55天刮宫术后的绒毛,甲胰蛋白酶消化可得到绒毛滋养层细胞。     

HrlFN-γ和hrlL-4对体外培养人早孕滋养层细胞PCNA和bcl-2表达的影响

【目的】研究人重组卜干扰素（hrlFN-7）和白细胞介素4（hrlL-4）对人早孕滋养层细胞PCNA和bel-2表达的影响。【方法】采用人工流产方法提取绒毛膜组织，在体外培养条件下加入hrlFN-7和hrlL-4，继续培养24h，用倒置光显微镜和透射电镜观察绒毛膜组织形态学变化，应用免疫组织化学法检测绒毛膜组织滋养层细胞PCNA和bel-2蛋白表达。【结果】hrlFN-7处理的滋养层细胞PCNA和bel-2表达均较对照组弱；hrlL-4处理的滋养层细胞PCNA和bel-2表达较对照组增强。【结论】hrlFN-7抑制滋养层细胞的增殖，hrlL-4促进滋养层细胞的增殖。     

TNF-a 与IFN-g 诱导人绒毛膜滋养层细胞凋亡

目的探讨TNF-a 与IFN-g 诱导妊娠早期人绒毛膜滋养层细胞凋亡的作用.方法建立人妊娠早期滋养层细胞体外培养体系;利用台盼蓝染色记数、光镜、透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳观察和检测TNF-a 与IFN-g 处理后的细胞凋亡情况.结果 TNF-a 与IFN-g 可引起活细胞数减少;透射电镜观察到染色体边集、核固缩、凋亡小体;DNA琼脂糖凝胶电泳有"梯形条带".结论 TNF-a 能够诱导人妊娠早期绒毛滋养层细胞凋亡,IFN-g 对TNF-a 具有协同作用.     

TNF—α与IFN—γ诱导人绒毛膜滋养层细胞凋亡

目的 探讨ＴＮＦ－α与ＩＦＮ－γ诱导妊娠早期人绒毛膜滋养层细胞凋亡的作用。方法 建立人妊娠早期滋养层细胞体外培养体系;利用台盼蓝染色记数、光镜、透射电镜、ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳观察和检测ＴＮＦ－α与ＩＦＮ－γ处理后的细胞凋亡情况。结果 ＴＮＦ－α与ＩＦＮ－γ可引起活细胞数减少;透射电镜观察到染色体边集、核固缩、凋亡小体;ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳有“梯形条带”。结论 ＴＮＦ－α能够诱导人妊娠早期绒毛滋养层     

乙型肝炎病毒感染原代培养人绒毛膜滋养层细胞的实验研究

目的探讨原代培养的人绒毛膜滋养层细胞感染乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）的可能性及规律。方法采用胰酶/DNA酶序贯消化及Percoll密度梯度离心分离纯化人绒毛膜滋养层细胞后,采用血清直接感染法进行滋养层细胞的HBV感染,同时通过与对正常成人肝细胞株L02细胞的HBV感染后及转染HBV的肝癌细胞株（HepG2.2.15）的传代培养比较,实时荧光定量PCR检测培养上清的HBV DNA;并用透射电镜观察HBV感染后滋养层细胞的超微结构改变及其在滋养层细胞中的定位。结果原代培养的滋养层细胞感染HBV后释放至培养上清中的HBV DNA于感染后48-72h达高峰,而L02细胞则于感染后12-24h达高峰,HepG2.2.15细胞株感染后则一直攀升。透射电镜观察HBV感染后滋养层细胞超微结构发生了明显改变,主要表现为溶酶体大量增生,出现空泡状结构,并可观察到病毒样颗粒,主要定位于细胞核周。结论HBV可以感染滋养层细胞,定位于核周并导致滋养层细胞的超微结构改变。     

HrIFN-γ和hrIL-4对体外培养人早孕滋养层细胞PCNA和bcl-2表达的影响

【目的】研究人重组γ-干扰素(hrIFN-γ)和白细胞介素4(hrIL-4)对人早孕滋养层细胞PCNA和bcl-2表达的影响。【方法】采用人工流产方法提取绒毛膜组织,在体外培养条件下加入hrIFN-γ和hrIL-4,继续培养24 h,用倒置光显微镜和透射电镜观察绒毛膜组织形态学变化,应用免疫组织化学法检测绒毛膜组织滋养层细胞PCNA和bcl-2蛋白表达。【结果】hrIFN-γ处理的滋养层细胞PCNA和bcl-2表达均较对照组弱;hrIL-4处理的滋养层细胞PCNA和bcl-2表达较对照组增强。【结论】hrIFN-γ抑制滋养层细胞的增殖,hrIL-4促进滋养层细胞的增殖。     

组织块法培养人绒毛膜滋养层细胞

目的 培养符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。方法 用组织块法行原代培养,胰蛋白酶消化法行传代培养,免疫组织化学染色进行细胞鉴定。结果 ６ｄ时,细胞开始由组织块边缘向外生长;１５ｄ时,即可进行传代。角蛋白染色示细胞纯度达９５％以上。结论 组织块法培养人绒毛膜滋养层细胞简便易行,可获得符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。     

TNF-α与IFN-γ诱导人绒毛膜滋养层细胞凋亡

探讨ＴＮＦ－α与ＩＦＮ－γ诱导妊娠早期人绒毛膜滋养层细胞凋亡的作用。方法　建立人妊娠早期滋养层细胞体外培养体系：利用台盼蓝染色记数、光镜、透射电镜、ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳观察和检测ＴＮＦ－α与ＩＦＮ－γ处理后的细胞凋亡情况。结果ＴＮＦ－α与ＩＦＮ－γ可引起活细胞数减少;透射电镜观察到染色体边集、核固缩、凋亡小体：ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳有“梯形条带”。结论ＴＮＦ－α能够诱导人妊娠早期绒毛滋养层细胞凋亡,ＩＦＮ－γ对ＴＮＦ－α有协同作用。     

组织块法培养人绒毛膜滋养层细胞

目的培养符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。方法用组织块法行原代培养,胰蛋白酶消化法行传代培养,免 疫组织化学染色进行细胞鉴定。结果６ｄ时,细胞开始由组织块边缘向外生长;１５ｄ时,即可进行传代。角蛋白染色示细 胞纯度达９５％以上。结论组织块法培养人绒毛膜滋养层细胞简便易行,可获得符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。     

人胎盘滋养层细胞的分离培养及HCV体外感染试验

目的：体外分离培养较高纯度的胎盘滋养层细胞，观察其生物学特性，探讨丙型肝炎病毒（HCV）经胎盘母婴传播的具体途径。方法：采用胰蛋白酶消化法消化人足月胎盘组织，以35％，45％两个Percoll密度梯度进行分离纯化。并用免疫组化及透射电镜等技术对其生物学特性进行观察。HCV阳性血清感染体外分离培养的胎盘滋养层细胞，通过逆转录聚合酶链反应及扩增敏感试验对培养上清进行定性、定量检测，以观察HCV的感染及复制情况。结果：胎盘组织中滋养层细胞角蛋白染色阳性，血管内皮细胞及基质成分波形蛋白染色阳性，经该法分离纯化的细胞角蛋白染色阳性者（滋养层细胞）占90％以上，电镜下滋养层细胞可观察到成熟型、中间型、未成熟型三种形态。HCV感染细胞培养16d内培养上清中可间断检测出HCV RNA.结论：改进后的分离方法可以得到较高纯度的滋养层细胞，HCV感染胎盘滋养层细胞可能是HCV宫内母婴传播的途径之一。     

抗人滋养层细胞表面抗原-2单抗的制备及免疫学特性分析

目的:利用杂交瘤技术制备抗人滋养层细胞表面抗原-2(trophoblast cell-surface antigen 2,Trop2)单克隆抗体并鉴定其免疫学特性?方法:以胰腺癌细胞系BxPC3免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合后制备单抗?通过酶联免疫法?免疫荧光?免疫沉淀和质谱分析?流式细胞术?免疫组织化学等方法,鉴定单抗的免疫学特性?结果:通过细胞的融合与筛选,获得了持续分泌抗Trop2单抗的杂交瘤细胞株,该抗体可以识别细胞表面的Trop2膜蛋白,也可用于免疫组化识别人肿瘤组织中的Trop2蛋白,同时该抗体对乳腺癌细胞的生长具有一定的抑制作用?结论:该单抗具有作为Trop2阳性表达肿瘤靶向治疗的潜在应用价值?     

人胎盘滋养层细胞的分离培养及IgG FcγRⅢ在滋养层细胞的表达

目的：体外分离培养人胎盘滋养层细胞，观察其生物学特性，研究IgGFcγRⅢ（CD16）在人胎盘组织中的定位及体外培养的滋养层细胞是否存在CD16，从而为HCV母婴传播机制的研究提供细胞学实验基础。方法：采用胰蛋白酶消化法消化人足月胎盘组织，以35%、45%两个Percoll密度梯度进行分离纯化，用ABC免疫组化染色法对足月分娩后的胎盘组织石蜡包埋切片及体外分离培养的胎盘滋养层细胞进行染色。结果：胎盘组织中滋养层细胞角蛋白染色阳性，血管内皮细胞及基质成分波形蛋白染色阳性，经该法分离纯化的细胞角蛋白染色阳性者（滋养层细胞（占90%以上，胎盘组织切片的滋养层细胞及体外分离培养的滋养层细胞抗CD16染色阳性，阳性信号定位于胞质，未见胞核着色，结论：改进后的分离方法可能得到较高纯度的滋养层细胞，胎盘组织的滋养层细胞和体外分离培养的滋养层细胞均有CD16表达。     

肺腺癌A549细胞中Nestin的表达

目的探讨nestin在肺腺癌A549细胞中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,用免疫组化检测肺癌标记物及nestin表达.结果四个肺癌标记物中鼠抗人p63蛋白,鼠抗人细胞角蛋白7,鼠抗人甲状腺转录因子染色阳性,nestin在肺腺癌A549细胞中部分细胞表达.结论肺癌细胞中存在部分神经干细胞的标记物nestin.     

鼠源性单克隆抗体Met4用于检测胃癌组织Met的表达及临床意义

目的:观察研究肝细胞生长因子受体Met在胃癌组织及相对应的淋巴结转移灶中的表达水平,同时比较分析抗Met单克隆抗体Met4和多克隆抗体C28在检测Met表达水平中的差别?方法:采用免疫组织化学间接法检测胃癌组织芯片中Met表达水平,比较Met4与C28的检测效能?结果:Met在细胞膜及胞浆阳性表达率在不同病理分级组间无统计学意义(P > 0.05)?Met4组Met的阳性染色部位于细胞膜(浆),而C28组Met阳性染色部位在细胞浆中,二者在Met亚细胞染色定位上有差别?Met4的阳性检出率(58.3%)高于C28阳性检出率(30.5%),具有统计学意义(P < 0.05)?Met4组21例胃癌原发灶Met阳性病例中14例淋巴结转移灶Met表达阳性,C28组11例原发灶Met阳性病例中6例淋巴结转移灶Met表达阳性?原发灶中Met阳性表达与转移淋巴结中Met的阳性表达有显著相关性(P < 0.05)?结论:Met阳性表达可能在肿瘤的淋巴转移过程起重要作用?Met4用于肿瘤的诊断及靶向治疗,具有良好的临床应用前景?     

人腹膜间皮细胞的原代培养及传代

目的探讨建立一种有效的HPMC体外原代培养及传代的方法。方法用0.25%的胰蛋白酶0.02%EDTANa2消化腹部择期手术者大网膜组织,细胞悬液经100目筛网滤过后进行培养。采用形态学、免疫组织化学（ABC法）、电镜等鉴定细胞。结果分离培养的细胞光镜下呈铺路样鹅卵石状,免疫组化鉴定显示角蛋白、波形蛋白抗原阳性,第Ⅷ因子、白细胞CD45抗原阴性,电镜下可见细胞表面的微绒毛,证明培养的细胞的为HPMC。结论胰蛋白酶消化法是一种简单实用的培养HPMC的方法 。     

抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的制备及其对抗原决定簇特异性的研究

用杂交瘤技术建立三株分泌抗甲状腺球蛋白(TG)单克隆抗体的杂交瘤细胞株。所获三种单克隆抗体经兔抗小鼠IgG亚类、IgM及IgA血清鉴定表明,两种为IgG_1,一种为IgA;三种含单克隆抗体小鼠腹水的滴度(ELISA法)均为51200以上;以竞争性固相抗体结合试验测定它们对抗原决定簇的特异性差异,结果发现三种单克隆抗体的抗原结合部位是不同的,但对抗原的结合有一定的相互竞争抑制现象。     

石棉诱发大鼠间皮瘤的超微结构及免疫组织化学研究

作者对23例大鼠间皮瘤作了超微结构研究,其中7例混合型作了免疫组化研究。结果说明,间皮瘤可能来自间皮下多功能的原始间叶细胞。作者还就本组间皮瘤与人和其他动物的间皮瘤进行了比较,并对电镜及免疫组化在研究间皮瘤中的作用进行了讨论。     

ALKBH5通过抑制上皮-间质转化降低人滋养细胞的迁移和侵袭能力

目的 探讨去甲基酶ALKBH5对滋养细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭功能及对上皮-间质转化（EMT）过程的影响。方法 将ALKBH5高表达、抑制及其阴性对照NC质粒转染人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及Westen boltting（WB）实验检测各组细胞中ALKBH5 mRNA及ALKBH5蛋白的表达水平。并通过Transwell实验检测转染后滋养细胞迁移、侵袭功能变化,同时通过 WB 实验检测各组细胞中上皮-间质转化（EMT）相关蛋白：Vimentin、Fibronectin、E-cadherin、N-cadherin、MMP9及MMP2的表达水平。结果 ALKBH5组与未转染组（Control）和无意义序列组（NC）相比,ALKBH5 mRNA及蛋白高表达效果显著（P<0.05）;shALKBH5组与未转染组（Control）和无意义序列组（NC）相比,ALKBH5 mRNA及蛋白抑制效果显著（P<0.05）。ALKBH5高表达后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能降低（P<0.05）,EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达上调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达下调,差异有统计学意义（P<0.05）。ALKBH5表达抑制后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能增强（P<0.05）,EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达下调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达上调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 ALKBH5通过抑制EMT过程降低滋养细胞迁移、侵袭能力,从而参与子痫前期的发病机制。