MCUR1表达对卵巢癌细胞生长的影响及作用机制

 目的 探讨线粒体钙单向转运体调节分子1（mitochondrial calcium uniporter regulator 1，MCUR1）与卵巢癌患者预后的关系，及其对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响和可能的作用机制。方法 从TCGA（the cancer genome atlas）数据库下载372例卵巢癌患者数据集，采用Kaplan-Meier法分析MCUR1与卵巢癌患者预后的关系。采用免疫组织化学法检测MCUR1在卵巢癌组织中的表达水平。转染MCUR1干扰片段及过表达质粒至卵巢癌Ａ2780细胞（siMCUR1组和MCUR1组），分别设置相应阴性对照（siCtrl组和EV组）。采用qRT-PCR和Western blot实验检测转染效果。采用MTS法、克隆形成实验检测细胞增殖情况。裸鼠皮下荷瘤后采用免疫组织化学法和组织TUNEL法检测增殖和凋亡情况，Western blot检测细胞增殖和凋亡相关分子的表达情况。结果 MCUR1高表达组中位生存期高于低表达组（53.7 个月 vs 41.3 个月，P=0.003）。与siCtrl组相比，siMCUR1组细胞增殖能力升高（P<0.01），裸鼠皮下荷瘤生长速度加快（P<0.01），Ki67表达升高（P<0.01），细胞凋亡能力减弱（P<0.05），p53、Caspase-3和Bax蛋白表达下调，而Bcl2、Cyclin D1和Cyclin E蛋白表达上调；与EV组相比，MCUR1组细胞增殖能力下降（P<0.01），裸鼠皮下荷瘤生长速度减缓（P<0.01），Ki67表达降低（P<0.01），细胞凋亡能力增强（P<0.05），p53、Ｃaspase-3和Bax蛋白表达上调，而Bcl2、Cyclin D1和Cyclin E蛋白表达下调。结论 MCUR1通过调控p53通路进而调控卵巢癌细胞的增殖与凋亡，MCUR1可能作为抑癌因子在卵巢癌中发挥作用，有望成为卵巢癌诊断及治疗靶点。     

PES1对肝细胞癌预后和肝癌BEL-7402细胞生长的影响

目的 探讨pescadillo核糖体生物发生因子1（pescadillo ribosomal biogenesis factor 1，PES1）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）组织中的表达及其对肝癌BEL-7402细胞生长的影响。方法 采用免疫组化法检测HCC癌组织和癌旁正常组织中PES1的表达。肝癌BEL-7402细胞转染PES1小干扰片段后，采用Western blot检测PES1、CDK4、CDC25A蛋白表达，MTS法检测细胞生长情况，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果 95例HCC癌组织中，PES1表达阳性率高于癌旁正常组织（90.5% vs 72.6%，χ²=10.122，P=0.001）；癌组织中PES1染色评分高于癌旁正常组织的［（6.30±3.56） 分 vs （2.10±1.64） 分，t=10.423，P<0.001］。PES1表达与HCC患者的肿瘤大小、门脉癌栓和TNM分期有关（均P<0.05）；PES1高表达患者总生存期较PES1低表达患者短（P<0.05）。转染PES1小干扰RNA组的细胞与对照组相比，细胞生长受抑制（P<0.01），G1期细胞比例增加，S期细胞比例减少（均P<0.01），CDK4、CDC25A蛋白表达下调，但细胞凋亡未见明显变化。结论 HCC组织中PES1表达上调，且与患者预后相关。PES1可通过上调CDK4、CDC25A蛋白表达，加快细胞G1/S期的转换，促进肝癌细胞生长。     

ACCα在肝细胞癌中的表达及对细胞生长的影响

目的  探讨乙酰辅酶A羧化酶α（acetyl CoA carboxylase alpha，ACCα）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma ，HCC）中的表达及其在HCC细胞生长中的调控作用。 方法 采用qRT-PCR及Western blot法检测30例HCC患者癌组织及其相应癌旁正常组织中ACCα mRNA与蛋白的表达。采用siRNA下调HCC SNU-368细胞中ACCα的表达后，采用MTS法检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡情况。结果 qRT-PCR及Western blot结果显示，HCC组织中ACCα mRNA与蛋白表达水平均显著高于癌旁正常组织（3.26±0.81 vs 1.88±0.64，P=0.021；3.41±0.71 vs 1.74±0.54，P=0.019）。下调ACCα表达后，HCC SNU-368细胞的增殖能力降低（P<0.01），细胞周期进程被抑制（P<0.05），细胞凋亡比例增多（P<0.01）。 结论 HCC细胞SNU-368中ACCα表达显著上调，可能通过诱导细胞周期进程并抑制细胞凋亡促进HCC细胞增殖，ACCα可作为HCC治疗的潜在靶点。     

盐霉素通过靶向调控ALDH影响三阴性乳腺癌细胞MDA-MB- 231增殖和凋亡

目的 探讨盐霉素（salinomycin,Sal）对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 采用流式细胞术筛选ALDH高表达乳腺癌细胞系;采用MTT法检测不同浓度Sal（1~32 μmol/L）对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测Sal对细胞凋亡以及肿瘤干细胞表面标志物ALDH表达的影响;采用qRT-PCR、Western blot检测凋亡相关分子Caspase-3、Bax、Bcl-2、PARP mRNA和蛋白表达;TCGA（the Cancer Genome Atlas）数据库下载乳腺癌患者数据集（n=1 218）,采用Pearson法分析ALDH与凋亡相关分子表达的相关性。结果 Sal在24 h、48 h、72 h均可以剂量依赖的方式抑制MDA-MB-231细胞增殖（均P<0.001）;Sal作用MDA-MB-231细胞48 h后,与对照组比较,2 μmol/L组、4 μmol/L组、8 μmol/L组的细胞凋亡率均升高（均P<0.05）;Bcl-2、PARP、Caspase-3 mRNA表达下降（均P<0.05）,Bax mRNA表达升高（均P<0.05）;Bcl-2、Caspase-3 蛋白表达下降（均P<0.05）,PARP、Bax 蛋白表达升高（均P<0.05）;MDA-MB-231乳腺癌干细胞表面标志物ALDH表达下降（均P<0.05）。TCGA数据库分析显示,ALDH与抗凋亡分子Bcl-2、Caspase-3的表达呈正相关（r=0.209,P=0.007;r=0.235,P=0.002）,与Bax、PARP的表达呈负相关（r=-0.326,P＜0.001;r=-0.453,P＜0.001）。结论 Sal可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,可能通过下调肿瘤干细胞表面标志物ALDH表达实现。     

TIPIN分子与肝细胞癌预后的关系及其生物学作用机制

目的 分析节律分子Timeless（TIM）相互作用蛋白（TIM interacting protein,TIPIN）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中的表达及其与患者预后的关系,并探究TIPIN对肝癌细胞增殖的影响及可能的生物学作用机制。方法 通过UALCAN数据库分析TIPIN在HCC组织中的表达情况及其与HCC患者预后的关系。将siTIPIN及其阴性对照序列分别转染至肝癌MHCC⁃97H细胞,采用qRT⁃PCR和Western blot检测TIPIN的表达情况,采用MTS实验和平板细胞克隆形成实验检测TIPIN表达对细胞增殖的影响。利用UALCAN数据库对TIPIN进行GO和KEGG富集分析,以及TIPIN与TIM、TP53的关联分析。 结果 UALCAN数据库分析结果显示,TIPIN在HCC组织中的表达明显高于正常肝组织（P<0.01）;TIPIN高表达患者的总生存期和无病生存期均明显短于TIPIN低表达患者（P=0.037,0.021）。与正常肝细胞HL7702相比,肝癌细胞MHCC⁃97H、MHCC⁃97L、HepG2、BEL⁃7402中TIPIN的mRNA和蛋白表达水平均明显升高（均P<0.01）。MTS和克隆形成实验结果显示,沉默TIPIN表达后肝癌MHCC⁃97H细胞的增殖和平板细胞克隆形成能力明显受到抑制（均P<0.05）。GO和KEGG富集分析结果显示,TIPIN可能通过调控细胞分裂、DNA复制、细胞周期的相互作用通路促进肝癌的恶性进程。Pearson相关性分析结果显示,TIPIN分子与TIM表达呈明显正相关（r=0.67,P<0.01）。TIPIN在TP53突变HCC患者中的表达显著高于TP53野生型HCC患者（P<0.01）。 结论 TIPIN在肝癌中表达上调,且与患者不良预后密切相关,沉默TIPIN可抑制肝癌细胞增殖。TIPIN在肝癌中可能通过与TIM形成复合体或调控TP53信号通路发挥其生物学作用。     

miR-7及SP-1与非小细胞肺癌患者放疗敏感性的相关性研究

目的 探讨miR-7及其下游靶点特异性蛋白1（specific protein 1,SP-1）与非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者放疗敏感性的相关性。方法 收集湖南师范大学附属第一医院2018年7月—2020年9月收治的116例原发性NSCLC患者癌组织及其相应癌旁组织,并采集外周血。采用实时荧光定量PCR法测定组织和外周血血清中miR-7的表达水平,免疫组化检测SP-1蛋白表达水平,Logistic回归模型分析影响NSCLC患者放射敏感性的因素。结果 NSCLC患者癌组织中miR-7表达水平低于癌旁组织（P<0.001）,SP-1阳性表达率高于癌旁组织（P<0.001）。Pearson相关分析显示,血清miR-7与癌组织中的miR-7表达呈正相关（r=0.492,P<0.001）,SP-1表达阳性患者血清中的miR-7相对表达量低于阴性表达患者（P=0.005）。T3~4分期、TNM分期ⅢA~B期、有吸烟史、发生放射性肺损伤者血清和癌组织中的miR-7表达水平降低（均P<0.05）;癌组织中SP-1阳性表达率升高（均P<0.05）。与放射敏感组比较,放射抵抗组血清和癌组织中miR-7相对表达量降低（均P<0.001）,SP-1阳性表达率升高（P<0.001）。受试者工作特征曲线显示,血清miR-7预测NSCLC患者发生放射抵抗的曲线下面积为0.822 （95%CI：0.746~0.897）。血清miR-7表达水平降低是放疗敏感性的危险因素（P=0.009）。结论 血清miR-7在预测放疗抵抗中具有良好的效能,miR-7及其下游靶分子SP-1可能是潜在的放疗增敏靶点。     

YEATS2在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 探讨YEATS2在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中的表达及其与预后的关系。方法 收集我院2010年1月至2014年1月112例手术切除的HCC癌组织和癌旁组织石蜡标本，采用Real-time PCR检测HCC癌组织及癌旁组织中YEATS2 mRNA的表达，Western blot和免疫组化染色检测YEATS2蛋白水平，免疫荧光染色检测YEATS2在HCC癌组织中的表达定位，并分析YEATS2与HCC患者临床病理特征和预后的关系，同时采用TCGA数据库数据验证。结果 Real-time PCR结果显示，YEATS2 mRNA在HCC癌组织中的表达较癌旁组织上调（P<0.001）；Western blot检测结果显示，YEATS2在约66.67%（12/18）的HCC癌组织表达升高；免疫组化染色分析发现，约71.43%（80/112）的HCC患者中YEATS2表达上调，其表达与TNM分期明显相关（P<0.001）；YEATS2主要在HCC癌组织细胞核中表达；多因素分析结果显示YEATS2高表达是患者不良预后的独立危险因素（HR=2.204，95%CI：1.388~3.500，P=0.001）。TCGA中HCC队列分析也表明YEATS2高表达的患者OS更差（HR=1.751，95%CI:1.107~2.770，P=0.017）。 结论 YEATS2在HCC组织中高表达，且与患者不良预后相关。     

IncRNA MAFG-AS1及miR-143-3p对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的 探讨lncRNA MAFG-AS1和miR-143-3p对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的作用机制。方法 MAFG-AS1和miR-143-3p表达载体转染至宫颈癌细胞Hela后,采用qRT-PCR检测宫颈癌组织及相应癌旁正常组织,宫颈癌细胞Hela和正常宫颈细胞株Ect1/E6E7中miR-143-3p和MAFG-AS1 mRNA的表达水平;Western blot检测增殖相关蛋白Bcl-2、Cyclin D1及凋亡相关蛋白Bax、cleaved-Caspase-3、p21、p27的表达;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因突变检测lncRNA MAFG-AS1与miR-143-3p的相互作用。结果 与癌旁正常组织相比,宫颈癌组织中MAFG-AS1 mRNA表达升高（0.905±0.115 vs 2.835±0.164,t=43.091,P<0.001）,miR-143-3p表达降低（0.944±0.075 vs 0.382±0.071,t=24.336,P<0.001）;相较于正常宫颈细胞株Ect1/E6E7,宫颈癌细胞Hela中MAFG-AS1 mRNA的表达显著升高（P<0.001）,miR-143-3p表达显著降低（P<0.001）。下调MAFG-AS1和过表达miR-143-3p均可抑制Hela细胞增殖活性,促进细胞凋亡;抑制Bcl-2和Cyclin D1蛋白表达,促进Bax、Caspase-3、p21、p27蛋白表达。MAFG-AS1可靶向调控miR-143-3p表达,且抑制miR-143-3p表达可逆转下调MAFG-AS1表达对Hela细胞抑制细胞增殖、促进细胞凋亡作用。结论 lncRNA MAFG-AS1可抑制宫颈癌细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向调控miR-143-3p有关。     

TRPM8激活Calcineurin-NFATc3通路调节结肠癌细胞免疫逃逸

目的  探讨TRPM8调节结肠癌细胞免疫逃逸的机制。方法 采用qRT-PCR和Western blot检测结肠癌细胞系SW620和正常人结肠上皮细胞系CCD 841 CoN中TRPM8的表达水平。将干涉和过表达TRPM8载体TRPM8 siRNA和pcDNA3.1-TRPM8转染至SW620细胞，并设置相应对照组（Control siRNA组和pcDNA3.1组），用CCK-8、集落形成实验和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡，酶标仪检测Calcineurin活性，Western blot检测Calcineurin-NFATc3信号通路相关蛋白的表达。采用CCK-8检测CD8⁺T细胞与SW620细胞共孵育的细胞活力，Western blot检测Calcineurin特异性抑制剂FK506处理SW620细胞后NFATc3和PD-L1蛋白表达。结果 与CCD 841 CoN细胞相比，TRPM8 mRNA和蛋白在SW620细胞中的表达均增加（P<0.01）。与Control siRNA组比较，干涉 TRPM8表达后SW620细胞活力、细胞增殖能力、Calcineurin活性，以及TRPM8、PD-L1和 NFATc3蛋白表达均降低（P<0.01），而细胞凋亡率和p-NFATc3蛋白表达均升高（P<0.01）；过表达TRPM8可增强细胞活力、细胞增殖能力和Calcineurin活性，上调TRPM8、PD-L1及NFATc3蛋白表达（P<0.01），下调p-NFATc3蛋白表达（P=0.002）。CD8⁺ T细胞与干涉TRPM8表达的SW620细胞共孵育后总细胞活力降低（P=0.002），而与过表达SW620细胞共孵育后总细胞活力增强（P=0.005）。FK506处理可抑制SW620细胞Calcineurin活性，下调NFATc3、PD-L1蛋白表达（P<0.01）。结论 TRPM8过表达可能通过激活Calcineurin-NFATc3信号通路而促进PD-L1表达，从而增强结肠癌细胞免疫逃逸能力，促进结肠癌细胞增殖。     

卵巢癌组织中SSBP1的表达意义及作用

目的 探讨线粒体DNA单链结合蛋白SSBP1在卵巢癌(Ovarian cancer)组织中的表达水平变化及其意义.方法 从The Cancer Genome Atlas(TCGA)数据库中选取经转录组测序分析的正常卵巢组织97例及卵巢癌组织373例,分析癌组织中SSBP1的表达变化,并利用Kaplan-Meier模型分...     

过表达lncRNA LINC00886 抑制食管鳞状细胞癌Eca109 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的: 检测lncRNA LINC00886 在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织及细胞系中的表达及其对Eca109 细胞体外增殖、迁移及侵袭的影响。方法: 收集2014 年6 月至2016 年12 月河北医科大学第四医院生物标本库69 例ESCC手术患者的癌及对应的癌旁组织标本,以及ESCC细胞系Eca109、TE13、TE1、Kyse150、Yes-2 和Kyse170,用qPCR 法检测LINC00886 在ESCC组织及细胞系中的表达情况。分别用pIRES2-LINC00886、pIRES2-NC转染Eca109 细胞,用qPCR法检测pIRES2-LINC00886 转染Eca109细胞后LINC00886 的过表达效率;用MTS、克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell 侵袭实验分别检测过表达LINC00886 对Eca109 细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果: 在ESCC组织中LINC00886 表达水平明显低于癌旁组织（P<0.01）,其表达水平与肿瘤TNM分期和淋巴结转移相关（均P<0.05）。LINC00886 在ESCC 细胞中的表达水平也低于对照组（均P<0.01）。转染pIRES2-LINC00886 后,Eca109 细胞中LINC00886 的表达水平显著高于对照组（均P<0.05）。与对照组相比,过表达LINC00886 明显抑制Eca109 细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01)。结论: lncRNA LINC00886 低表达可能与ESCC的发生发展相关,过表达LINC00886可抑制ESCC细胞的增殖、迁移与侵袭能力。     

LncRNA NBAT1通过调控miR-3664-5p/Caspase 9分子轴对人乳腺癌细胞增殖的影响

目的 探究lncRNA NBAT1通过调控miR-3664-5p/Caspase 9分子轴对人乳腺癌细胞增殖的影响。方法 通过在线生物软件分析TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库比较lncRNA NBAT1在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达量。RT-qPCR方法比较正常细胞株MCF-10A和乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231及MDA-MB-453中lncRNA NBAT1的表达水平。生物信息学预测lncRNA NBAT1、miR-3664-5p、Caspase 9三者之间关系,并进一步通过荧光素酶报告系统进行验证;lncRNA NBAT1过表达载体转染乳腺癌MCF-7细胞株,RT-qPCR检测转染后lncRNA NBAT1的表达,qPCR检测miR-3664-5的表达,Western blot检测Caspase 9的蛋白表达水平;CCK-8和克隆形成实验检测细胞的增殖能力;同时将lncRNA NBAT1过表达载体和mimics miR-3664-5p转染MCF-7细胞,观察mimics miR-3664-5p对lncRNA NBAT1抑制细胞增殖能力产生的缓解效应。结果 TCGA数据库分析发现,lncRNA NBAT1在乳腺癌组织中的表达量显著低于正常组织(P＜0.001);qPCR检测发现lncRNA NBAT1在正常细胞株MCF-10A细胞中表达量最高(P＜0.001),MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞中表达量比MCF-10A细胞低(P＜0.001),MCF-7细胞表达量最低(P＜0.001);通过生物信息学预测lncRNA NBAT1可以吸附miR-3664-5p,Caspase 9是miR-3664-5p的靶基因,并进一步通过荧光素酶报告系统进行验证;lncRNA NBAT1过表达载体转染乳腺癌细胞株MCF-7,qRT-PCR检测发现pc-NBAT1组比pc-NC组LncRNA NBAT1的表达增高(P＜0.001),miR-3664-5的表达降低(P＜0.001),Western blot检测发现pc-NBAT1组比pc-NC组Caspase 9的表达增高(P＜0.001)。CCK-8和克隆形成实验发现pc-NBAT1组比pc-NC组细胞的增殖能力降低(P＜0.001);同时将lncRNA NBAT1过表达载体和mimics miR-3664-5p转染MCF-7细胞,发现mimics miR-3664-5p能够对lncRNA NBAT1抑制细胞增殖能力产生缓解效应(P＜0.001)。结论 lncRNA NBAT1通过调控miR-3664-5p/Caspase 9分子轴抑制乳腺癌细胞的增殖,为乳腺癌治疗提供新的潜在靶点。     

SCHIP1促进Hippo通路的激活抑制结肠癌的发生发展

目的:检测SCHIP1在结肠癌的组织和细胞中的表达水平以及其在结肠癌中对Hippo通路的影响。方法:利用TCGA数据库分析SCHIP1在结肠癌中的表达情况;免疫组化的方法检测SCHIP1在结肠癌组织标本中的表达情况;采用Transwell试验、集落实验及MTS检测对细胞迁移和增殖能力进行检测;采用Western blot检测YAP、P-YAP、CTGF在结肠癌中的表达情况。结果:TCGA数据库显示结肠腺癌中SCHIP1的表达低于正常组织;SCHIP1在结肠癌组织及细胞系中表达较低;SCHIP1过表达抑制了RKO细胞迁移和增殖能力;SCHIP1低表达促进了RKO细胞的迁移和增殖;过表达SCHIP1的RKO细胞明显抑制了YAP、CTGF的表达,促进了P-YAP的表达。低表达SCHIP1的RKO细胞促进了YAP、CTGF的表达,抑制了P-YAP的表达。结论:SCHIP1增强了结肠癌中Hippo通路活性,抑制结肠癌的发生进展;SCHIP1可能作为结肠癌治疗的一个潜在靶向分子。     

lncRNA01296 在食管癌组织中的表达及其对食管癌TE-2 细胞增殖和迁移的影响

目的：探究lncRNA01296 在食管癌组织中的表达及其对食管癌TE-2细胞增殖和迁移的影响。方法：收集2017年1 月至2018年9月承德医学院附属医院肿瘤科收治的36例食管癌组织及相应的癌旁组织,并培养人正常食管上皮细胞（HEEC）及人食管癌细胞系ECA109、TE-1 及TE-2。用qPCR检测癌组织及ECA109、TE-1 及TE-2 细胞中lncRNA01296、小核核糖核蛋白A(SNRPA)及神经生长因子（NGF）mRNA的表达水平。重组慢病毒干扰载体转染食管癌细胞系及相应对照细胞系,分别分为干扰1组、干扰2组及对照组,WB实验检测转染后细胞SNRPA 及NGF 蛋白的表达水平,MTS 实验检测转染后TE-2 细胞的增殖能力,Transwell实验检测TE-2 细胞侵袭和迁移能力。结果：lncRNA01296、SNRPA及NGF mRNA在食管癌组织及细胞系中呈高表达（均P<0.01）,且lncRNA01296、SNRPA及NGF mRNA在低分化的TE-2细胞中表达高于其他癌细胞（均P<0.05）。干扰1组和干扰2组lncRNA01296、NGF mRNA表达水平明显低于对照组（均P<0.01）,而SNRPAmRNA表达水平与对照组无明显差异（P>0.05）;干扰1组和干扰2 组SNRPA及NGF蛋白表达水平明显低于对照组（均P<0.01）。敲减48、72 h后,干扰1组及干扰2组TE-2细胞相对增殖能力明显低于对照组（P<0.05或P<0.01）;对照组、干扰1组及干扰2组侵袭细胞数分别为（72.0±6.3）、（36.6±4.3）及（33.9±3.7）个,迁移细胞数分别为（85.2±9.9）、（47.5±8.1）及（43.8±6.5）个,干扰1 组及干扰2 组侵袭及迁移细胞数显著低于对照组（均P<0.01）;结论：lncRNA01296可通过上调SNRPA表达促进NGF介导的食管癌细胞的增殖和迁移,为临床食管癌诊断和治疗提供新的靶点。     

Glypican-6在胃肠道间质瘤组织中的表达及其通过ERK1/2通路促进细胞的增殖、迁移及侵袭

目的:探究Glypican-6对胃肠道间质瘤的作用及其可能的作用机制.方法:收集胃肠道间质瘤组织及其癌旁组织27例,RT-PCR和Western blot检测组织中Glypican-6的表达.选取胃肠道间质瘤细胞系GIST-T1进行体外研究.RT-PCR实验检测细胞中Glypican-6 mRNA的表达;Western...     

KRT6A调控胰腺导管腺癌细胞生物学行为的作用及作为诊断与预后判断靶标的研究

目的：通过生物信息学分析以及细胞生物学实验研究角蛋白6A（KRT6A）对胰腺导管腺癌（PDAC）诊断、预后判断、免疫微环境以及PDAC 细胞PANC1 增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法：通过GEPIA 平台整合TCGA（The Cancer Genome Atlas）数据库与GTEx（Genotype-Tissue）数据库中的数据,分析KTRT6A在PDAC组织中的表达情况,并通过CIBERSORT工具分析KRT6A表达与PDAC组织中免疫细胞浸润的关系,然后通过GSEA方法研究与KRT6A基因表达相关的肿瘤信号通路。选取长海医院病理科保存的60 例PDAC 组织与癌旁组织标本进行免疫组化分析,验证KRT6A在肿瘤组织中表达情况;通过干扰RNA敲减PANC1细胞中KRT6A的表达,采用CCK-8实验以及流式细胞术检测敲减KRT6A对细胞的增殖、凋亡的影响。结果：利用TCGA与GTEx数据库数据分析发现,KRT6A在人PDAC组织中呈高表达,且与患者较差的生存期存在关联（P=0.015）。利用CIBERSORT 软件以及GSEA 分析发现,KRT6A 高表达的PDAC组织中M2型巨噬细胞浸润性升高（P=0.034）,且与Wnt 通路（NES:1.7359272,P<0.05）、磷酸戊糖途径（PPP）（NES:1.5613053,P<0.05）等信号通路上调有关联（P<0.05 或P<0.01）;免疫组化结果进一步验证了KRT6A在PDAC组织中呈高表达（P<0.001）。增殖和凋亡实验发现,干扰KRT6A能够显著抑制PANC1细胞的增殖（P<0.05）以及凋亡（P<0.001）。结论：KRT6A在人PDAC组织中呈高表达,敲减其表达能够抑制PANC1细胞的增殖和凋亡,具有作为PDAC诊断与预后判断新靶标的潜力。