聚合酶链反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因

建立聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳ．ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）ｍｅｃＡ基因的技术。四种ＤＮＡ提取方法检测灵敏度依次为超声裂解法（５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ）、溶菌酶表面活性剂法（５×１０６ＣＦＵ／ｍｌ），表面活性剂法（１×１０７ＣＦＵ／ｍｌ）和直接煮沸法（１×１０８ＣＦＵ／ｍｌ），直接煮沸法具有简便性。引物的正链位于１８１～２００、负链位于３１１～３３０，序列分别为５＇－ＧＡＡＡＴＧＡＣＴＧＡＡＣＧＴＣＣＧＡＴ，５＇－ＧＣＧＡＴＣＡＡＴＧＴＴＡＣＣＧＴＡＧＴ，其扩增产物长度为１５０ｂｐ。五种常见菌证明本法具有较高特异性。苯唑青霉素ＭＩＣ水平与ｍｅｃＡ基因之间具有很好的相关性，ＭＩＣ≥４μｇ／ｍｌ的２２株菌均检出ｍｅｃＡ基因，提示苯唑青霉素常规检测ＭＲＳＡ的可行性。ＰＣＲ方法对于隐匿型耐药株的检出具有重要价值。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌快速检测方法的比较

目的 筛选出快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcous aureus,MRSA)的实验方法.方法 从天津医科大学附属肿瘤医院细菌室菌库中提取源自肿瘤患者感染的44株金黄色葡萄球菌,利用苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、微量肉汤稀释法、Etest法、青霉素结合蛋白2a(penicillin-binding protein 2a,PBP2a)乳胶凝集法5种表型检测MRSA方法进行检测,并与PCR方法进行比较.结果 PCR法检测mecA基因,确定MRSA 36株;以PCR作为金标准,苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法和苯唑西林微量肉汤稀释法检测出MRSA均为32株,敏感度和特异度均为88.9%和100%;E试验检测出MRSA为33株,敏感度与特异度分别为88.9%、87.5%;PBP2a乳胶凝集法检测出MRSA 29株,敏感度与特异度分别为80.5%、100%.结论 PBP2a乳胶凝集法比上述试验报告周期缩短24 h,是一种快速、简便、特异度好且便于临床试验室推广开展的检测MRSA方法.     

多重聚合酶链反应检测耐甲氧西林葡萄球菌

目的应用一种敏感快速的多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）,检测耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）和凝固酶阴性葡萄球菌（ＭＲＣＮＳ）。方法临床分离的北京地区金黄色葡萄球菌１２３株,ＭＲＣＮＳ１２２株,用溶壁素和蛋白酶Ｋ制备模板ＤＮＡ,设计葡萄球菌甲氧西林耐药的决定基因,金黄色葡萄球菌独有的一个辅助基因和细菌中均有的１６ＳｒＲＮＡ基因引物,通过多重ＰＣＲ技术对标本进行扩增。结果１２３株金黄色葡萄球菌的ｆｅｍＡ基因１００％（１２３／１２３）阳性,ｍｅｃＡ基因阳性的占１８．７％（２３／１２３）,１２２株ＭＲＣＮＳ的ｆｅｍＡ１００％（１２２／１２２）阴性,ｍｅｃＡ阳性的占２４．６％（３０／１２２）。１６ＳｒＲＮＡ基因片断在多重ＰＣＲ中作为内部参照避免了假阴性结果的出现。结论建立的多重ＰＣＲ技术检测ＭＲＳＡ和ＭＲＣＮＳ具有敏感、快速、特异的特点,是一种可靠的实验诊断手段。     

多重聚合酶链反应检测耐甲氧西林葡萄球菌

目的 应用一种敏感快速的多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）,检测耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）和凝固酶阴性葡萄球菌（ＭＲＣＮＳ）。方法 临床分离的北京地区金黄色葡萄球菌１２３株,ＭＲＣＮＳ１２２株,用溶壁素和蛋白酶Ｋ制备模板ＤＮＡ,设计葡萄球菌甲氧西林耐药的决定基因,金黄色葡萄球菌独有一个辅助基因和细菌中均为有１６ＳｒＲＮＡ基在引物,通过多重ＰＣＲ技术对标本进行放增。结果 １２３株金黄色葡萄球菌的     

三种检测甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌方法的比较

目的:比较苯唑西林纸片扩散法、苯唑西林-高盐琼脂筛选试验和PBP2′乳胶凝集试验(PBP2′ latex agglutination test,LA)检测甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)的差异。方法:用上述3种方法同时检测85株临床分离的金黄色葡萄球菌。结果:3种方法同时检测出38株MRSA和47株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌,一致性为100%。结论:LA法适于临床实验室快速准确检测MRSA。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的快速检测方法

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）具有对多种抗生素耐药的广谱耐约特征，是临床常见的、致病性强的耐药性细菌。传统敏感性检测MRSA的方法程序多、繁杂费时，且结果滞后，因此快速有效的MRSA检测显得尤为重要。随着免疫学和分子生物学等多学科理论技术的不断渗人，MRSA的快速检测技术取得了新的进展。现就MRSA的快速检测方法作一综述。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌：耐药特点和快速检测

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是引进医院和社区获得性感染的主要原菌之一,由于其质性和多重耐药,导致临床检测,治疗的困难,MRSA耐药分子机理,检测方法及防止新的耐药菌出现一直是这一领域研究特点,本文对MRSA耐药特点和快速检测方法的研究进展作一综述。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌:耐药特点和快速检测

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)是引起医院和社区获得性感染的主要病原菌之一。由于其异质性和多重耐药 ,导致临床检测、治疗的困难。MRSA耐药分子机理、检测方法及防止新的耐药菌出现一直是这一领域研究热点。本文对MRSA耐药特点和快速检测方法的研究进展作一综述     

甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的定量分析

美国疾病预防与控制中心主办的细菌感染实时监测网络计划对美国9个社区的侵袭性MRSA感染报道进行了分析。在8987例确诊病例中,13.7%为社区获得性,其余为医疗保健机构相关。在7639例医疗保健机构相关病例中,5250例(68.7%,占病例总数的58.4%)为社区发病,1234例(16.2%,占总数的13.7%)为医院发病。标化发病率为31.8例/10万人,发病率在>65岁、男性和黑人中最高(分别为127.7、37.5和66.5例/10万人)。5~17岁的人群发病率最低(1.4例/10万人)。不同区域间差异很大,最少的县为19.2/10万人;最多者为116.7/10万人。USA300(一种美国CA-MRSA的流行株)占150株社区获得菌株的66.6%,占485株医疗保健机构获得菌株的22.2%,及216株医疗保健机构菌株并有医院发病病例中的15.7%。在感染病例中血流感染占75.2%,肺炎13.3%,蜂窝织炎9.7%,骨髓炎7.5%,心内膜炎6.3%,感染性休克4.3%。标化死亡率为6.3例/10万人。据作者估计,2005年美国共发生94360例侵袭性MRSA感染,其中18650例死亡。美国住院患者中金葡菌感...     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌多重耐药基因检测

目的 了解金黄色葡萄球菌（金葡菌）β内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类抗生素耐药基因的分布特点，评估耐药性基因型与表型测定法的相关性。方法 聚合酶链反应（PCR）测定本地分离100株金葡菌的β内酰胺类耐药基因mecA、氨基糖苷修饰酶基因aae（6′）／aph（2″）、aph（3′）-Ⅲ、ant（4′，4″）、大环内酯类23s rRNA甲基化酶基因erm、四环素类核糖体保护蛋白基因tetM的发生率，纸片扩散法测定苯唑西林、庆大霉素、红霉素、四环素的耐药性。结果 100株受试菌中mecA阳性66株（MRSA），最常见的耐药基因是erm＋tetM，存在于89．4％的MRSA中，最少见的是ant（4′，4″），存在于4．5％的MRSA中，MRSA的aae（6′）／aph（2″）、aph（3′）-Ⅲ、erm、tetM检出率分别为97．.％、72．7％、100％、89．4％，明显高于MSSA的11．8％、2．9％、44．1％、8．8％；66株MRSA中，43株（65．2％）同时检出aae（6′）／aph（2″）、aph（3′）-Ⅲ、erm、tetM4种基因，58株（87．9％）同时检出aae（6′）／aph（2″）、erm、tetM3种基因，34株MSSA中，仅2株（5．9％）同时检出aae（6′）／aph（2″）、erm、tetM3种基因；苯唑西林、庆大霉素、红霉素、四环素与其相应的耐药基因mecA、age（6′）／aph（2″）、erm、tetM的符合率分别为96％、99％、96％、84％，81株红霉素表型耐药菌中79株（97．5％）为大环内酯．林可霉素．链霉菌素B（MLS8）结构型耐药。结论耐药基因在金葡菌中均可检出，金葡菌对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类抗生素耐药与苯唑西林耐药紧密相关，大环内酯类主要是结构型耐药，基因型与表型测定有较高的符合率。     

社区获得甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌

金葡菌是引起感染性疾病的重要致病菌，侵袭性金葡菌感染常可导致患者死亡。上世纪40年代青霉素应用于临床后患者的预后获显著改善，但不久便出现产青霉素酶的耐药菌株，甲氧西林等耐酶青霉素能有效抑制该耐药株。随后迅即出现遍布世界各地医院的耐甲氧西林金葡菌（MRSA），该菌对所有β内酰胺类抗生素耐药，但迄今MRSA在社区中仍很少发现。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药机制及检测方法研究进展

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是引起医院感染的重要病原菌之一，其感染巳成为临床治疗中颇为棘手的问题，MRSA感染、乙型肝炎和获得性免疫缺陷综合征被列为世界范围内三大最难解决的感染性疾患，成为各国学者关注与研究的热点。本文结合分子生物学技术的发展，就MRSA的耐药机理及检测方法的研究进展作一综述。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药机制及检测方法研究进展

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)广泛传播是全球重要的公共卫生问题。葡萄球菌染色体mec基因盒元件(SCCmec)在金黄色葡萄球菌中转移是导致MRSA广泛传播的重要原因。SCCmec中的mecA和mecC基因分别编码PBP2a和PBP2c,其结合β-内酰胺类抗菌药物能力低下,是导致MRSA发生的关键因素,而且mecA和mecC介导的耐药表型存在一定差异。本文就SCCmec的基本结构与功能、mecA与mecC介导的耐药机制与表型以及MRSA的检测方法等方面做以下综述。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药机制及检测方法研究进展

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是引起医院感染的重要病原菌之一,其感染巳成为临床治疗中颇为棘手的问题,MRSA感染、乙型肝炎和获得性免疫缺陷综合征被列为世界范围内三大最难解决的感染性疾患,成为各国学者关注与研究的热点。本文结合分子生物学技术的发展,就MRSA的耐药机理及检测方法的研究进展作一综述。     

聚合酶链反应检测mecA和mecI及其对葡萄球菌甲氧西林耐药的影响

目的了解葡萄球菌甲氧西林耐药基因mecA和调节基因mecR中的抑制基因mecI在葡萄球菌中的分布,探讨mecA、mecI和β-内酰胺酶对甲氧西林耐药性的影响。方法琼脂稀释法测定158株葡萄球菌苯唑西林MIC;聚合酶链反应检测mecA和mecI;用内切酶TrulⅠ进行mecI酶切分型。结果 158株葡萄球菌中,金黄色葡萄球菌(SA)66株,凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)92株,葡萄球菌对苯唑西林的总耐药率达44.3%(70/158)。158株葡萄球菌中,检出mecA阳性70株,其中SA 8株,CNS 62株。70株mecA阳性葡萄球菌中,检出mecI阳性12株,其中SA7株,CNS 5株;88株mecA阴性葡萄球菌中未检出mecI。对mecA阴性、苯唑西林MIC≥4μg/mL的菌株进行抑制实验后,再测定苯唑西林MIC,抑制后MIC下降8倍以上。结论耐甲氧西林葡萄球菌以mecA为其主要的甲氧西林耐药决定子;β-内酰胺酶和mecI基因对葡萄球菌甲氧西林耐药有一定的影响。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及其检测方法

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)以其多重耐药率高,致病性强,常引起院内感染的暴发流行等特性,已引起世界范围的广泛重视,寻找一种简便、快速、准确的检测方法,对于控制院内感染,积极救治患者有重要意义。本文概述了MRSA的一些特性以及近年来检测MRSA的方法,可望有助于充分认识MRSA以及选择准确检测MRSA的方法。     

快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的应用评价

快速、准确地筛选高危病人成为医院有效控制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (ＭＲＳＡ)的关键。目前 ,临床上对ｍａｃＡ基因以及其编码ＰＢＰ2ａ进行检测是最有效的方法。我们将ＰＢＰ2ａ胶乳法和ｍｅｃＡ基因探针法与ＰＣＲ检测法进行了比较 ,并评价了它们的可靠性和临床应用价值 ,报道如下。一、材料与方法1 菌株 :采用ＡＰＩ系统试条鉴定为金黄色葡萄球菌 ,共96株。分别选ＡＴＣＣ4330 0、ＡＴＣＣ2 5 92 3为阳性和阴性质控菌。2 ＭＲＳＡ筛选 :按标准制备菌悬液 ,接种于苯唑西林琼脂筛选平板上 ;35℃ ,2 4ｈ孵育 ,有菌落生长为ＭＲＳＡ。3 …     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药机制及检测

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是医院内感染和社区感染的重要病原菌之一,其检出率逐年增高,耐药性不断增强,对临床治疗提出严峻挑战。阐明 MRSA的耐药机制以及快速准确地检测MRSA是预防和控制MRSA感染的基础和重要环节,也是当前 MRSA研究的热点。现就MRSA的耐药机制及其检测方法的研究进展作一综述。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药机制及检测

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是医院内感染和社区感染的重要病原菌之一，其检出率逐年增高，耐药性不断增强，对临床治疗提出严峻挑战。阐明MRSA的耐药机制以及快速准确地检测MRSA是预防和控制MRSA感染的基础和重要环节，也是当前MRSA研究的热点。现就MRSA的耐药机制及其检测方法的研究进展作一综述。