重症监护病房碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌耐药机制及同源性分析

目的分析耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌基因型,进行同源性分析,探讨碳青霉烯类抗生素耐药率升高的原因。方法应用WHONET5.0分析广州医学院第一附属医院重症监护病房(ICU)分离的鲍曼不动杆菌耐药率变化。收集2008年1月至2009年12月ICU碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌35株,应用VITEK-2全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定,采用K-B纸片扩散法测定15种抗菌药物的敏感性,PCR检测金属β内酰胺酶及碳青霉烯酶OXA基因,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析同源性。结果该院分离的鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率显著增加,对美罗培南的耐药率从10.8%升高到62.3%,对亚胺培南的耐药率从13.5%升高到58.8%。PFGE分析存在8个克隆;blaOXA-51、blaOXA-23、blaOXA-58阳性的分别为33株(94.3%)、20株(57.1%)和6株(17.1%)。ISAba1相关blaOXA-23是碳青霉烯酶主要的存在形式。未检测到金属β内酰胺酶。结论该院ICU分离的鲍曼不动杆菌OXA-23型碳青霉烯酶基因检出率最高,并存在交叉感染的情况,应引起临床重视。     

血液病患者鲍曼不动杆菌的耐药性分析及其耐药基因检测

目的了解血液病患者临床分离鲍曼不动杆菌的耐药表型和多种耐药基因的携带情况。方法收集2011年临床分离的非重复鲍曼不动杆菌120株,采用纸片扩散法进行药敏试验,试验结果按照CLSI 2011年版标准判读,采用WHONET 5.6软件进行数据分析;应用聚合酶链反应及测序方法检测10种耐药相关基因（blaOXA-51-like、blaOXA-23-like、blaOXA-24-like、blaOXA-58-like、blaTEM、blaampC、armA、ISAba1、intI 1和intI 2）。结果鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的耐药率范围为48.3%~94.2%,对碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为51.7%和48.3%;耐药相关基因blaOXA-51-like、blaOXA-23-like、blaTEM、blaampC、armA、ISAba1和intI 1的阳性率分别为100%、60.0%、46.7%、85.8%、75.8%、86.7%和85.0%,而未检出blaOXA-24-like、blaOXA-58-like和intI 2。结论碳青霉烯类抗菌药物对鲍曼不动杆菌仍具有较好的体外抗菌活性,鲍曼不动杆菌多重耐药相关基因的携带率较高,多重耐药现象非常严重,应加强其耐药性监测,合理使用抗菌药物。     

呼和浩特地区鲍曼不动杆菌的耐药表型及基因谱分析

目的了解呼和浩特地区2010年临床分离鲍曼不动杆菌的耐药表型和多种耐药基因的携带情况。方法收集2所三级甲等医院临床分离的非重复鲍曼不动杆菌113株,采用纸片扩散法进行药敏试验,试验结果按照CLSI 2010年版标准判读,采用WHONET5.6软件进行数据分析;应用聚合酶链反应(PCR)和测序方法检测10种耐药相关基因(blaOXA-51-like、blaOXA-23-like、blaOXA-24-like、blaOXA-58-like、blaTEM、blaampC、armA、ISAba1、intI1和intI2),依据耐药基因的检出情况,分析并命名相应的耐药基因谱(RGP)。结果鲍曼不动杆菌对米诺环素的耐药率最低,为15.9%;对碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为40.7%和46.0%;对其他抗菌药物的耐药率为51.3%～91.2%;耐药相关基因blaOXA-51-like、blaOXA-23-like、blaTEM、blaampC、armA、ISAba1和intI 1的阳性率分别为100%、55.8%、86.7%、61.1%、92.0%、93.8%和90.3%,未检出blaOXA-24-like、blaOXA-58-like和intI2;共发现存在18种RGP,其中RGP1、RGP2和RGP3所占的比率均大于20%,为主要的流行的RGP。结论碳青霉烯类抗生素和米诺环素对鲍曼不动杆菌仍具有较好的体外抗菌活性,鲍曼不动杆菌多重耐药相关基因的携带率较高,多重耐药现象非常严重,应加强其耐药性监测,合理使用抗菌药物。     

关于ICU病房鲍曼不动杆菌耐药性及基因型研究

目的 调查分析聊城地区ICU病房109株鲍曼不动杆菌耐药性及β-内酰胺酶基因型.方法 用K-B法测定临床分离的109株鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的耐药性,采用PCR法检测β-内酰胺酶耐药基因型.结果 除IMP外,109株鲍曼不动杆菌对其余13种抗菌药物的耐药率均超过50%,PCR扩增对IMP中介或耐药的53株鲍曼不动杆菌有11株扩增到blaOXA-23,产ESBLs组29株中有5株扩增出blasHv、blaCTX-M-14、blaCTX-M-3,2株出现blaSHV、blaCTX-M-1.结论 聊城地区ICU病房鲍曼不动杆菌多重耐药常见,β-内酰胺酶产生率高,碳青霉烯酶以blaOXA-23型为主,ESBLs、AmpC酶两种β-内酰胺酶基因的多重PCR阳性率均低.     

耐碳青霉烯类抗生素不动杆菌的β内酰胺酶研究

目的了解不动杆菌属细菌对碳青霉烯类药物的耐药机制,耐药菌株的基因同源性和传播机制。方法采用改良Hodge试验和乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验筛选耐亚胺培南不动杆菌碳青霉烯酶,等电聚焦电泳(IEF)测定产β内酰胺酶等电点,blaTEM,blaSHV,blaCTX-M-Ga-Gc,blaPER-1,blaOXA-23,blaMBL等,引物的PCR进行β内酰胺酶的基因分型,并对PCR产物进行测序;Southern印迹进行苯唑西林酶OXA-23的基因定位脉冲场电泳(PFGE)研究耐亚胺培南不动杆菌同源性。结果6株耐碳青霉烯类不动杆菌均产OXA-23型酶,其中5株同时产PER-1型ESBLs。6株菌blaOXA-23均定位于染色体。3株琼氏不动杆菌属于同一PFGE分型,3株鲍曼不动杆菌分别属于2种PFGE分型。结论产OXA-23型碳青霉烯酶是导致不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要原因,同时存在blaOXA-23的克隆传播。     

肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌耐药基因分析

目的:分析呼吸内科肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌携带β-内酰胺酶基因及主动外排泵基因情况。方法:收集经生化鉴定为醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体的菌株160株,将鲍曼不动杆菌特异性片段(Ab-ITS)的二重PCR法确认为鲍曼不动杆菌者纳入研究。用PCR法检测鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因和主动外排泵基因,包括A类β-内酰胺酶(blaTEM、blaPER和blaCARB)、B类β-内酰胺酶(blaIMP和blaVIM)、C类β-内酰胺酶(blaADC和blaDHA)、D类β-内酰胺酶(blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-51和blaOXA-58)和主动外排泵相关基因(adeB、adeJ、macB、emrB、emrA、abeS、abeM和craA)。以微量肉汤稀释法检测加入外排泵抑制剂羰基氰化氯苯腙(CCCP)前后,携带adeB基因鲍曼不动杆菌对亚胺培南的最低抑菌浓度(MIC)的变化。结果:临床分离160株醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体中鲍曼不动杆菌143株(占90%),包括亚胺培南耐药株119株(占83.2%)和敏感株24株(占16.8%)。所有鲍曼不动杆菌均检出blaOXA-51基因,其中,亚胺培南耐药株中检出blaOXA-23(98.3%)、blaTEM(41.4%)、blaADC(98.3%)和blaDHA(0.7%),blaPER、blaCARB、blaIMP、blaVIM、blaOXA-24和blaOXA-58均未检出;敏感株中未检出blaOXA-23。adeJ、macB、abeM和craA基因在143株鲍曼不动杆菌中的携带率均为100%;emrB、emrA和abeS基因携带率均超过80%。adeB基因在亚胺培南耐药株中检出117株(98.3%)。在CCCP干预试验中,携带adeB基因的鲍曼不动杆菌MIC50降低1/2。结论:呼吸内科鲍曼不动杆菌主要携带blaOXA-23和adeB主动外排泵基因,可能与亚胺培南耐药密切相关。     

鲍曼不动杆菌OXA-23基因和ISAba1基因检测和耐药性关系

目的 了解鲍曼不动杆菌的耐药现状及OXA-23型碳青霉烯酶介导的耐药性。 方法 收集临床分离的200株鲍曼不动杆菌,用K-B(Kirby-Bauer)法进行常见药物的敏感性实验;通过PCR(polymerase chain reaction)扩增、克隆测序等分析OXA-23基因及ISAba1基因。 结果 温州医学院附属第一医院分离的200株鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、多粘菌素等保持相对较高的敏感性,对其余常见抗生素的耐药率均已超过了80%;200株鲍曼不动杆菌中共检到155株携带OXA-23基因,168株携带ISAba1基因。 结论 温州医学院附属第一医院鲍曼不动杆菌耐药情况严重,大多带有OXA-23基因,该基因编码的碳青霉烯酶应为其耐药的主要原因,ISAba1常伴随OXA-23型出现。     

临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌同源性分析及常见耐药基因检测

目的了解上海市同仁医院临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌的基因同源性及耐药机制,为广泛耐药鲍曼不动杆菌感染的防治提供依据。方法采用肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)对临床分离的28株广泛耐药鲍曼不动杆菌进行分子生物学分型,采用PCR方法检测9种常见β内酰胺酶基因:blaKPC、blaIMP、blaVIM、blaNDM-1、blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-48、blaOXA-51和blaOXA-58;膜孔蛋白基因CarO;插入序列ISAba1;以及ISAba1-OXA23、ISAba1-OXA58的连锁检测。结果 28株临床分离的广泛耐药鲍曼不动杆菌大多来自危重患者呼吸道标本,ERIC-PCR基因分型提示为同一来源克隆株;所有菌株均携带blaOXA-23、blaOXA-51基因,未检测出B类β内酰胺酶基因,以及blaOXA-24、blaOXA-48、blaOXA-58等基因;膜孔蛋白基因CarO和插入序列ISAba1检测均为阳性,ISAba1-OXA23、ISAba1-OXA58连锁检测均未扩增到预期条带。结论研究期间临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌为同一克隆株,且携带相同耐药基因,提示存在克隆传播。     

多重耐药鲍曼不动杆菌携带碳青霉烯类水解酶基因情况的研究

目的 研究浙江省瑞安市人民医院多重耐药鲍曼不动杆菌中金属-内酰胺酶(IMP、VIM)、 KPC酶、 OXA-23型水解酶基因的携带情况,探讨各种碳青霉烯类水解酶在多重耐药鲍曼不动杆菌中的作用。 方法 采用Whonet 5.4 软件分析多重耐药鲍曼不动杆菌的标本类型和病区分布,以及药敏资料;设计特异性引物,用PCR方法扩增IMP、VIM、KPC和OXA-23特异基因,并用琼脂糖电泳分析其产物。 结果 70株多重耐药鲍曼不动杆菌均未检测到IMP、VIM及KPC基因,其中58株亚胺培南耐药菌株均携带OXA-23基因,阳性率为82.86%。 结论 OXA-23型水解酶是造成瑞安市人民医院鲍曼不动杆菌对临床常用碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因。     

海南省某医院103株鲍曼不动杆菌复合群-内酰胺类耐药性与碳青霉烯酶携带情况分析

目的 鲍曼不动杆菌复合群细菌是临床可造成感染的重要条件性致病菌,本研究旨在调查和分析我国海南省临床来源鲍曼不动杆菌复合群细菌对常用-内酰胺类药物的耐药性及菌株碳青霉烯酶携带情况,探讨其耐药流行性特点。方法 采用微量肉汤稀释法对103株采集自2012-2013年海南省三亚市人民医院的非重复鲍曼不动杆菌复合群细菌进行7种抗菌药物的药敏检测;应用聚合酶链反应(PCR)对收集的鲍曼不动杆菌复合群细菌进行9种碳青霉烯酶编码基因的筛查。结果 103株鲍曼不动杆菌复合群细菌对哌拉西林、头孢他啶、头孢噻肟的耐药率较高(接近50%),对头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为40%,对亚胺培南和美罗培南的耐药率均在20%左右;PCR检测显示有38株携带blaOXA-58基因,62株blaOXA-66基因,其中25株同时携带有这两种基因;其余7种碳青霉烯酶编码基因筛查结果为阴性。结论 本研究中鲍曼不动杆菌复合群细菌对-内酰胺类药物耐药性较高,菌株携带的blaOXA-58和blaOXA-66基因编码的碳青霉烯酶对菌株的耐药表型有一定贡献意义,但仍有其他耐药机制参与到碳青霉烯酶耐药表型的贡献中。     

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的 对临床分离亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌耐药性及碳青霉烯酶基因型进行研究,以指导临床合理应用抗生素.方法 用琼脂稀释法检测最低抑菌浓度(MIC),聚合酶链反应(PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-58、IMP和VIM碳青霉烯酶基因,并对PCR产物进行测序.结果 鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药率为36.9%,且亚胺培南耐药组菌株对12种抗菌药物耐药率与敏感组比较,差异有统计学意义(P<0.05);在24株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌中21株PCR扩增出OXA-23基因,2株扩增出VIM基因,检出率分别为87.5%和8.3%,OXA-24、OXA-58、IMP基因均未检出;PCR产物测序表明与Genbank相关基因同源性为100%.结论 该院亚胺培南耐药鲍不动杆菌耐药现象严重;OXA-23碳青霉烯酶基因的产生是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要机制之一.     

鲍曼不动杆菌耐药性和金属β内酰胺酶的检测

目的 了解本院鲍曼不动杆菌对抗菌药物的耐药性以及对碳青霉烯类抗生素和头孢他啶耐药菌株是否产金属β内酰胺酶。方法 对2002年4月—2003年1月本院临床分离的101株鲍曼不动杆菌采用NCCLS推荐的琼脂双倍稀释法测定了对15种抗菌药物的最低抑菌浓度（MICs），将对亚胺培南耐药或对头孢他啶高度耐药的菌株用金属螯合剂-抗生素稀释法检测是否产金属β内酰胺酶。结果 101株鲍曼不动杆菌最常分离自痰，分布于全院16个临床科室，但有1／3以上来自于ICU病房。这101株对抗菌药物的耐药性突出，仅对亚胺培南、美罗培南和头孢吡肟保持较高的敏感率，分别为90．1％、88．1％和81．2％；而对包括头孢他啶的其他11种抗菌药物的敏感率均低于50％；而且多重耐药菌株常见。共有19株鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药和（或）对头孢他啶高度耐药。金属螯合剂．抗生素稀释法检测出9株产金属β内酰胺酶。结论 本院鲍曼不动杆菌分离率高、分布广，对抗菌药物耐药严重；仅碳青霉烯和四代头孢菌素保持较高的敏感性；存在对亚胺培南耐药和（或）对头孢他啶高度耐药的鲍曼不动杆菌，其中部分耐药株产金属β内酰胺酶。     

耐碳青霉烯类药物鲍曼不动杆菌的碳青霉烯酶、整合酶基因型研究

目的研究碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶、整合酶基因型情况。方法收集93株碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌和16株碳青霉烯类敏感的鲍曼不动杆菌,采用改良Hodge实验检测碳青霉烯酶,EDTA协同试验检测金属β-内酰胺酶;采用聚合酶链反应(PCR)扩增和测序分析碳青霉烯酶和整合子基因。结果耐药株碳青霉烯酶表型检测阳性率为62.4%,金属酶表型检测均为阴性;PCR结果显示耐药菌中OXA-23、Int1检出率为100%,OXA-51检出率为96.8%,OXA-58检出率为1.1%,未检出OXA-24、VIM、IMP和Int2,敏感株除Int1检出率为37.5%外,其余基因均未检出。结论临床分离的碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌主要携带OXA-23、OXA-51碳青霉烯酶基因型,并且均携带Ⅰ类整合酶基因。     

桂西地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药情况和β-内酰胺酶基因分型分析

目的探讨桂西地区临床分离鲍曼不动杆菌的耐药情况和碳青霉烯耐药菌株的β-内酰胺酶基因分型,为临床抗感染治疗和耐药性控制提供参考。方法收集该院临床感染患者标本培养分离出的鲍曼不动杆菌526株。采用K-B纸片扩散法测定其对14种抗菌药物的耐药性;提取细菌DNA进行PCR扩增,检测耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的基因分布情况。结果526株鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药率为11.6%(61/526),对氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、美罗培南、阿米卡星、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星均有不同程度的耐药。61株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌对上述抗菌药物全部耐药,均能检测到β-内酰胺酶基因。鲍曼不动杆菌基因ADC、OXA-51、Ampc、OXA-23、TEM、CTX-M-2、PER、SHV、NDM-1阳性率分别为96.70%、95.08%、95.08%、72.13%、58.00%、3.28%、1.64%、1.64%、1.64%,未检出的基因为OXA-24、OXA-58、CTX-M-1、IMP、VIM。结论桂西地区患者感染的鲍曼不动杆菌耐药形势严峻,耐碳青霉烯类菌株能产生不同类型β-内酰胺酶基因,其中以Ampc、ADC、OXA-51为主,OXA-23、TEM次之。     

耐亚胺培南革兰阴性杆菌产碳青霉烯酶研究

目的 了解细菌产碳青霉烯酶及其对亚胺培南、美罗培南等碳青霉烯类抗生素耐药性之间的关系。方法 应用改良Hodge Test和乙二胺四乙酸（EDTA）协同试验法对2003．6～2004．5收集自复旦大学华山医院的耐亚胺培南革兰阴性杆菌进行碳青霉烯酶筛选。blaVIM-1、blaVIM-2、blaIMP-2、blaIMP-2、blaSPM、blaOXA-23为引物进行PCR扩增，并对PCR扩增阳性产物进行DNA测序分析。结果 在75株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌中，共检出产VIM-2型金属13内酰胺酶菌株2株（2／75），在10株耐亚胺培南的假单胞菌属细菌中检出2株产VIM-2型金属13内酰胺酶（2／10），均为恶臭假单胞菌；耐亚胺培南的8株弗劳地柠檬酸杆菌和6株不动杆菌中全部分别检出IMP金属酶新亚型和OXA-23型碳青霉烯酶。结论 细菌产碳青霉烯酶是不动杆菌和弗劳地柠檬酸杆菌对亚胺培南和美罗培南等碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因之一，但对铜绿假单胞菌而言，产碳青霉烯酶不是导致其对亚胺培南耐药的主要原因。     

乌鲁木齐地区耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型及同源性分析

目的 探讨乌鲁木齐地区临床分离的对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌耐药性、同源性和碳青霉烯酶型.方法 收集42株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌,采用纸片扩散法测定亚胺培南耐药菌对18种抗菌药物的敏感性,采用PCR方法扩增碳青霉烯酶基因型包括OXA-23,OXA-24,OXA-58,IMP和VIM型.采用随机扩增多态性DNA(RAPD)分析同源性.结果 42株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌对阿米卡星耐药率最低(28.5%),左氧氟沙星、庆大霉素、头孢他啶耐药率均为53.6%,头孢哌酮/舒巴坦耐药率为39.3%,其余抗菌药物耐药率均大于80.0%;RAPD分型发现42株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌属于6个型,其中以A型(8株)、D型(20株)和F型(6株)3个型为主.42株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌有33株携带 OXA-23组基因,未检测到金属酶基因.结论 耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药现象非常严重,临床应根据药敏结果合理选用抗生素,克隆播散是对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌最主要的传播方式,OXA-23型是最主要的碳青霉烯酶基因型.     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型及插入序列ISA ba1研究

目的：检测耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的碳青霉烯酶基因型及其基因周围环境。 方法：对101株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌进行药物敏感试验,头孢他啶与2-巯基丙酸协同试验筛选金属酶,多重PCR同时检测6种碳青霉烯酶耐药基因,对部分阳性产物进行测序比对,同时分析碳青霉烯酶基因上游插入序列。 结果：协同试验未检出产金属酶菌株。所有菌株都携带OXA-51-like基因,87株（86.1%）OXA-23-like基因阳性,2株OXA-24-like基因阳性,OXA-58-like基因与金属酶基因全为阴性。85株OXA-23-like基因上游检测到插入序列ISA ba1,OXA-51-like基因上游未检测到ISA ba1。 结论：OXA-23和OXA-51组β-内酰胺酶基因是本组鲍曼不动杆菌最主要的碳青霉烯酶基因型,OXA-23组碳青霉烯酶基因与插入序列 ISA ba1关系密切。     

应用碳青霉烯酶失活法检测产碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌

目的评估碳青霉烯酶失活法(carbapenem inactivation method,CIM)试验检测耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌产生碳青霉烯酶的能力。方法收集121株鲍曼不动杆菌,应用全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定和药敏试验,CIM检测鲍曼不动杆菌所含碳青霉烯酶,应用PCR方法检测OXA-23型碳青霉烯酶基因。结果 121株鲍曼不动杆菌中68株对亚胺培南和美罗培南耐药,其中65株菌PCR显示携带OXA-23基因,66株菌CIM试验为阳性。52株鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南均敏感,其中49株菌OXA-23阴性,52株菌CIM试验全为阴性。1株菌对亚胺培南耐药、对美罗培南敏感,CIM试验阴性,OXA-23阳性。CIM试验的敏感性和特异性分别为94.2%和98.1%。结论与PCR方法相比较CIM试验操作简便,成本小,结果易读,易于在实验室开展。应用CIM试验可以检测鲍曼不动杆菌OXA-23型碳青霉烯酶,     

革兰阴性杆菌碳青霉烯酶产生与细菌耐药性关系的研究

目的 研究耐亚胺培南革兰阴性杆菌碳青霉烯酶产生及流行情况.方法 采用琼脂稀释法测定亚胺培南和美罗培南对199株革兰阴性杆菌的MIC,采用乙二胺四乙酸(EDTA)协同实验筛选金属β内酰胺酶表型.PCR扩增耐药菌株碳青霉烯酶基因,并测序分析.脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析产酶菌株同源性.结果 141株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南药敏试验结果显示具有3种模式,以亚胺培南和美罗培南同时耐药为主94株(66.7%)、亚胺培南耐药和美罗培南敏感46株(32.6%)、亚胺培南敏感和美罗培南耐药仅1株(0.7%).但其他耐碳青霉烯类的鲍曼小动杆菌、洛菲不动杆菌、弗劳地柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯菌和黏质沙雷菌均对亚胺培南和美罗培南同时耐药.EDTA协同试验结果显示,仅4株耐亚胺培南铜绿假单胞菌为EDTA协同试验阳性(2.8%),其余菌株均为EDTA协同试验阴性.PCR扩增碳青霉烯酶基因结果显示,4株EDTA协同试验阳性的铜绿假单胞菌产VIM-2型金属酶;34株鲍曼不动杆菌菌株中30株(88.2%)产OXA型碳青霉烯酶,其中OXA23型27株(79.4%),OXA24型13株(38.2%),OXA66型23株(67.6%).并且22株(64.7%)细菌同时产生一种以上的OXA型碳青霉烯酶.7株洛菲不动杆菌全部产OXA-23型碳青霉烯酶;11株弗劳地柠檬酸杆菌、5株肺炎克雷伯菌和1株黏质沙雷菌均产KPC-2型碳青霉烯酶,其中6株弗劳地柠檬酸杆菌同时具有IMP-8新亚型金属酶.PFGE结果显示,34株鲍曼不动杆菌中PFGE谱型共有15种,其中有14株属于A型,7株属于B型;7株洛菲不动杆菌不属于同一克隆;4株产VIM-2型金属酶铜绿假单胞菌不属于同一PFGE谱型;11株柠檬酸杆菌属于同一PFGE谱型;5株肺炎克雷伯菌属于同一PFGE谱型.结论 耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌对12种抗生素的耐药率均高于碳青霉烯类敏感革兰阴性杆菌的耐药率,而且产生多种碳青霉烯酶,并在弗劳地柠檬酸杆菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌中有产酶克隆株的流行.     

鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药机制研究

目的了解鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药性及耐药机制。方法琼脂稀释法对62株鲍曼不动杆菌进行药敏检测,对其中20株亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌进行耐药机制研究。酶三维试验检测ESBLs和AmpC酶,PCR扩增和测序分析检测碳青霉烯酶VIM、IMP、OXA-23和OXA-24,SDS-PAGE方法研究外膜蛋白表达情况,利血平协同抑制试验检测膜外排机制。结果62株鲍曼不动杆菌中,亚胺培南耐药25株,占41%;20株亚胺培南耐药菌中,ESBLs和AmpC酶阳性株分别为10株(50%)和20株(100%),PCR扩增VIM、IMP和OXA-24均阴性;OXA-23基因扩增显示19株(95%)阳性,PCR产物并经序列分析证实为OXA-23;与敏感株相比,部分菌株存在22、29、33kD的外膜蛋白缺失;利血平不能降低亚胺培南对鲍曼不动杆菌的MIC值。结论产OXA-23型β-内酰胺酶是本院鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药的重要原因,产AmpC酶合并外膜蛋白缺失与鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药有密切关系。