ERK1/2信号通路在角质细胞生长因子-2诱导角膜基质细胞增殖中的作用

目的观察角质细胞生长因子(keratinocyte growthfactor-2,KGF-2)对角膜基质细胞的增殖作用及ERK1/2信号在角膜基质细胞增殖中的调控作用,探讨KGF-2对角膜基质细胞增殖的可能机制。方法体外培养角膜基质细胞,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测磷酸化ERK1/2表达水平。结果 KGF-2在1～100 mg·L-1对角膜基质细胞有明显的促进增殖作用且呈现剂量-效应关系;100 mg·L-1 KGF-2处理角膜基质细胞,5、15、30 min后ERK1/2磷酸化表达水平明显升高,60、90、120、180 min后ERK1/2磷酸化表达水平逐渐减弱;20μmol.L-1 ERK1/2抑制剂PD98059可抑制KGF-2对角膜基质细胞的促增殖作用。结论 KGF-2激活ERK1/2信号通路,提高细胞增殖率,可被抑制剂PD98059阻断;ERK1/2信号通路调控角膜基质细胞的增殖,在角膜基质细胞损伤中发挥作用。     

Erk信号传导通路在雷公藤甲素诱导人乳腺癌MCF-7细胞自噬与凋亡中的影响

目的：探讨雷公藤甲素通过Erk信号传导通路对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、自噬和凋亡的影响。方法：培养MCF-7细胞,MTT法检测细胞存活率,Western-blot方法分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3,自噬相关蛋白LC3B、p62和Beclin-1和有关MAPK信号通路p38和Erk1/2蛋白水平的变化。结果：10 nmol·L^-1雷公藤甲素显著抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖,促进凋亡,且呈剂量-时间依赖性;TPI能够增加LC3BⅡ和Beclin-1的表达,降低p62的蛋白水平,诱导MCF-7细胞自噬。雷公藤甲素促进p38和Erk1/2磷酸化,当联用自噬抑制剂时,磷酸化水平下降。结论：雷公藤甲素能够显著抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖,促进凋亡,通过诱导细胞自噬及促进p38及Erk1/2磷酸化等多途径发挥抗肿瘤作用,并首次证明其自噬的发生可能与Erk1/2的激活有关。     

rhddADAM15蛋白抑制小鼠黑色素瘤细胞生长及其机制

目的探讨重组人ADAM15去整合素结构域蛋白(rhddADAM15)对小鼠黑色素瘤细胞B16体外增殖、迁移、侵袭和凋亡等细胞行为的影响以及对p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的作用。方法 MTT法检测rhd-dADAM15对B16细胞增殖的抑制作用;划痕实验观察rhdd-ADAM15对B16细胞迁移的影响;"侵袭小室法"检测rhdd-ADAM15对B16细胞侵袭的作用;流式细胞术分析细胞周期变化;Western blot法检测rhddADAM15作用导致的p38MAPK激酶活性的变化。结果 rhddADAM15作用明显抑制B16细胞生长(IC50为13.80 mg.L-1),当浓度为7.5mg.L-1时,侵袭细胞数较对照组减少了0.55,对B16细胞迁移的抑制作用与共培养的时间呈正比,主要将B16细胞生长阻滞在G2/M期;当rhddADAM15浓度为10 mg.L-1时,p38MAPK激酶的磷酸化程度达0.80。结论 rhddADAM15对B16细胞行为具有明显的抑制作用,其机制可能与激活p38MAPK信号通路有关。     

去氧鬼臼毒素抑制肺癌 NCI-H358 细胞增殖和 体外迁移的研究

摘要： 目的 探讨去氧鬼臼毒素对人肺癌 NCI-H358 细胞增殖和体外迁移的影响, 并初步探讨其作用机制。方 法 应用 CCK-8 法、 流式细胞术、 细胞划痕实验和 DCFH-D 法分别检测去氧鬼臼毒素对 NCI-H358 细胞增殖、 周期 分布、 凋亡、 体外迁移能力和细胞内活性氧（ROS）的影响, 并通过 Western blot 检测去氧鬼臼毒素对细胞周期蛋白 （Cyclin） B1、 细胞分裂周期蛋白 25 同源蛋白 （Cdc25c）、 细胞周期蛋白依赖性激酶 （CDK） 1、 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 （Caspase） -3、 p53 肿瘤蛋白、 B 淋巴细胞瘤 （Bcl） -2 和基质金属蛋白酶 （MMP） 9 的表达水平, 以及细胞外信号调节激 酶（ERK） 1/2、 p38 分裂原激活蛋白激酶（MAPK）和 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）的磷酸化水平的影响。结果 去氧鬼 臼毒素能明显抑制肺癌 NCI-H358 细胞的生长, 流式细胞结果显示其能诱导细胞停滞在 G2/M 和 S 期, 诱导细胞凋 亡和细胞 ROS 产生, 同时细胞体外迁移能力也明显下调。Western blot 结果显示, 去氧鬼臼毒素能使 Cyclin B1、 Cdc25c、 CDK1、 Bcl-2 和 MMP9 的蛋白表达明显下调, 而 Caspase-3 和 p53 的表达明显上调, 且 ERK1/2、 p38MAPK 和 JNK 的磷酸化水平明显受到抑制。结论 去氧鬼臼毒素可抑制肺癌 NCI-H358 细胞的增殖和体外迁移, 是一种潜在 的抗肿瘤药物     

ERK1/2和p38MAPK介导BAPTA-AM抑制RANKL诱导小鼠骨髓巨噬细胞分化的机制研究

目的探讨BAPTA-AM对RANKL诱导的小鼠骨髓巨噬细胞分化成破骨细胞能力的影响以及其信号通路机制的研究。方法体外分离培养小鼠骨髓巨噬细胞,建立RANKL诱导的小鼠骨髓巨噬细胞分化成破骨细胞的实验模型。应用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法检测RANKL诱导的小鼠破骨细胞分化和存活的能力及BAPTA-AM对其的抑制作用;采用免疫印迹法(Western blot)测定ERK1/2和p38MAPK蛋白的磷酸化水平。结果 RANKL诱导的小鼠骨髓巨噬细胞胞质内可见多核,并能分化成为破骨细胞。不同浓度的BAPTA-AM(1、2μmol·L-1)对破骨细胞的形成具有明显的抑制作用,且随着浓度增加能明显地降低TRAP阳性细胞数目。RANKL对小鼠骨髓巨噬细胞的ERK1/2和p38MAPK具有明显的激活作用,诱导胞质ERK1/2和p38MAPK磷酸化,而不同浓度的BAPTA-AM可明显地抑制这种磷酸化作用。结论 BAPTA-AM能明显地抑制RANKL诱导的小鼠骨髓巨噬细胞分化成破骨细胞,这种抑制作用可能是通过ERK1/2和p38MAPK信号蛋白介导。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂JNJ-26481585抗食管癌活性及其作用机制研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂JNJ-26481585的抗食管癌活性及其分子机制。方法使用溶剂对照和浓度梯度的JNJ-26481585作用于食管癌细胞株TE-1,采用MTT法和克隆形成实验检测处理后的细胞活力;EdU染色检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;划痕和Transwell侵袭实验检测JNJ-26481585的抗转移活性;Western blot实验检测JNJ-26481585对食管癌生长相关信号通路的影响。结果 JNJ-26481585在较低浓度即可有效抑制TE-1细胞的活力、克隆形成和增殖,诱导细胞G_2/M期阻滞和凋亡,同时可抑制细胞迁移和侵袭的活性。Western blot实验结果显示,JNJ-26481585可明显提升TE-1细胞中p21蛋白表达水平,并有效抑制PI3K/mTOR和MAPK通路中的关键蛋白Akt、ERK的磷酸化。结论 HDAC抑制剂JNJ-26481585可通过上调细胞周期抑制剂p21表达,以及抑制Akt/mTOR、ERK信号通路,发挥抗食管癌作用。     

c-Jun/AP-1在因子Ⅶa促进SW620细胞增殖和迁移中的激活及其调控作用

目的 探讨c-Jun/激活蛋白1(AP1)在活化的凝血因子Ⅶa促进SW620细胞增殖、迁移过程中的作用及其调控机制.方法 Western blot检测人结肠癌SW620细胞中Ⅶa、组织因子(TF)、蛋白酶激活受体2 (PAR2)、细胞外调节蛋白激酶1/2 (ERK1/2)抑制剂U0126、p38抑制剂SB203580处理后cJun、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)的蛋白水平变化;MTT和Transwell法分别检测AP-1 抑制剂姜黄素对细胞增殖和细胞迁移能力的影响.结果 单克隆抗TF和PAR2抗体、U0126均能抑制Ⅶa促进SW620细胞中c-Jun/AP-1活化的过程(P＜0.05).姜黄素降低Ⅶa诱导的SW620细胞增殖和细胞迁移能力(P＜0.05).结论 TF/Ⅶa复合物通过激活PAR2促进SW620细胞增殖和迁移,c-Jun/AP-1在此过程中被激活并发挥重要作用,ERK1/2为c-Jun/AP-1上游分子具有调控效应.     

黄酮类新化合物LFG-500通过调控MAPK和AKT/mTOR信号通路抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖

目的 考察黄酮类新化合物LFG-500对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用,并初步探讨其抑制细胞增殖的作用机制。方法 体外培养MCF-7细胞,实验设置空白对照组,以及浓度为10、20、30μM的LFG-500处理组,处理细胞24 h。通过平板克隆形成实验检测LFG-500对细胞的增殖能力的抑制作用;利用Western blot实验检测LFG-500对MCF-7细胞内MAPK信号通路关键蛋白ERK/p-ERK、JNK/p-JNK、p38/p-p38及AKT/mTOR信号通路核心蛋白AKT/p-AKT、mTOR/p-mTOR的调节作用。结果 平板克隆形成实验结果显示,与对照组相比,LFG-500中、高剂量组MCF-7细胞增殖明显受到抑制（P <0.01）;Western blot结果显示,LFG-500可上调MCF-7细胞中MAPK信号通路核心蛋白p-JNK和p-p38的表达,下调p-ERK的表达（P <0.05）。此外,LFG-500也可抑制AKT/mTOR信号通路的核心蛋白p-AKT和p-mTOR的表达水平（P <0.05）。结论 LFG-500可能通过调控MAPK...     

白藜芦醇抑制人结肠癌细胞增殖与p38 MAPK的关系研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)抑制人结肠癌细胞生长的作用与p38 MAPK的可能关系。方法利用结晶紫染色、Western blot和流式细胞术检测Res对LoVo细胞增殖的抑制作用;Western blot分析Res对LoVo细胞凋亡的促进作用,以及Res对p38 MAPK磷酸化的影响;利用p38MAPK抑制剂,通过结晶紫染色和Western blot实验,分析Res抑制结肠癌LoVo细胞增殖的作用与p38 MAPK之间的关系。结果与对照组相比,Res在20μmol·L~(-1)时就能明显抑制LoVo细胞增殖(P<0.05),并促使细胞周期阻滞在S期,上调PCNA蛋白水平;Res能呈浓度依赖性增加Bad的蛋白水平,而抑制Bcl-2蛋白表达;Res对p38 MAPK总蛋白水平无明显影响,但可明显增加p38 MAPK的磷酸化水平;抑制p38 MAPK明显促进LoVo细胞增殖,并能减弱Res对LoVo细胞增殖的抑制作用、对Bad表达促进作用和对Bcl-2表达的抑制作用。结论 Res对LoVo细胞的增殖具有抑制作用并促进凋亡,其机制可能与Res促进p38 MAPK的磷酸化有关。     

去甲肾上腺素对人肺癌细胞株H460增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:研究去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)对人肺癌细胞株H460增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:体外培养人肺癌细胞株H460,用NE干预后,CCK-8法检测细胞增殖,划痕愈合实验评价细胞迁移能力,侵袭小室实验观察细胞侵袭力,Western Blotting法检测细胞p38MAPK磷酸化蛋白(Phos-p38)的表达。结果:10μmol/L NE可显著促进H460细胞增殖,增强细胞的迁移和侵袭能力,增加p38MAPK磷酸化蛋白水平,与空白对照组比较,差异均有极显著统计学意义(P<0.01),且均能被β-肾上腺能受体(β-AR)的阻断剂普莱洛尔(PRO)和p38MAPK抑制剂U0126逆转。结论:NE能促进H460细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制与p38MAPK通路激活有关。