自体骨髓基质细胞回输促进急性白血病病人化疗后骨髓造血恢复的研究

目的通过回输成纤维集落生成单位（CFU—F）促进骨髓实质细胞造血恢复。减轻白血病化疗的副作用，促进骨髓损伤早日恢复。方法选取经明确诊断的AML患者化疗回输组前后行自身对照，化疗回输前及后采骨髓行红系造血祖细胞（BFU-E）、粒、巨系集落生成单位（CFU—GM）培养，观察化疗回输前后的外周血象。结果化疗回输CFU-F后第3周。其BFU—E、CFU-GM数明显高于化疗回输前的水平（P〈0．05）。同时高于单纯化疗组第3周测得的BFU-E和CFU-GM数（P〈0．05）。结论体外扩增造血基质细胞于化疗自体回输方法，促进了病人造血恢复，对预防和减轻化疗药物造成的骨髓损伤，缩短化疗间期，加大化疗药物剂量，具有理论意义和应用价值。     

骨髓基质细胞系QXMSC_1体外促进造血及其作用机理的研究

本实验研究了骨髓基质细胞系QXMSC_1体外对CFU-F,CFU-GM,BFU-E及CFU-E集落形成的影响,并通过建立QXMSC_1基质细胞与骨髓造血细胞的长期共培养体系,研究了QXMSC-1在体外促进造血的机理。结果表明,QXMSC_1基质细胞条件培养上清液可促进小鼠CFU-F,CFU-GM,BFU-E及CFU-E集落的生长。在无GM-CSF和Epo存在的情况下,QXMSC_1细胞能维持CFU-GM,BFU-E和CFU-E集落生长。表明QXMSC_1细胞本身可分泌GM-CSF和Epo。QXMSC_1细胞与骨髓造血细胞共培养时,可明显提高CFU-GM集落数。共培养体系中,用微孔滤膜隔断QXMSC_1与造血细胞的直接接触,也能促进CFU-GM集落生成,但比混合培养时低,说明QXMSC_1通过直接接触和分泌细胞因子促进造血的过程。     

IL-6基因转染的骨髓基质细胞系对骨髓移植小鼠造血功能恢复的促进作用

目的:探讨白细胞介素6(IL-6)基因转染的骨位基质细胞系QXMSC, IL6对骨髓移植后造血功能的重建作用。方法:将骨髓造血细胞和骨髓基质细胞系一起经尾静脉注射给同系小鼠,建立骨髓移植(BMT)模型。小鼠的造血功能用脾结节(CFU-S)、粒-单系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU-E、BFU-E)测定及外周血各项血液学指标来确定。结果:QXMSC_1 IL-6转基因骨髓基质细胞可明显增强BMT小鼠形成的CFU-S、CFU-GM、CFU-E和BFU-E数,促进外周血象的恢复。结论:QXMSC_1 IL-6细胞可明显促进小鼠骨髓移植后早期造血功能重建。     

骨髓基质细胞促进γ射线照射小鼠的造血恢复

用体外骨髓贴壁细胞长期传代法,建立一株骨髓基质细胞QXMSC1,经鉴定可能为巨噬细胞来源。用5Gyγ射线照射BALB/c小鼠建立造血功能缺损动物模型,将QXMSC1细胞输入到照射小鼠体内,用半固体琼脂法测定粒-巨噬系祖细胞,甲基纤维素法测定红系祖细胞,血细胞自动计数仪测定外周血各项血液学指标。结果表明,在照射后第10天,骨髓基质细胞可增加辐射损伤小鼠骨髓有核细胞数,增加CFU-GM,CFU-E和mBFU-E集落数。在照射后第20天,可促进外周血WBC,RBC,Hct和Hb的恢复。说明骨髓基质细胞QXMSC1可促进辐射损伤小鼠造血功能恢复。此外,QXMSC1细胞条件培养上清液具有刺激体外CFU-GM集落生长的作用。     

纤维连结蛋白、粘附抗原和造血祖细胞

纤维连结蛋白(FN)是广泛存在于多种细胞表面、基质及血浆中的一种糖蛋白,在细胞粘附、迁移、分化及成熟中的作用已有较多研究。但FN与髓系祖细胞分化成熟的关系研究尚少。除BFU-E、CFU-E和CFU-GM皆能和FN分子中RGD短肽相结合外,最近发现,原始造血祖细胞(LTBMC-IC)多向造血祖细胞(CFU-MIX)、BFU-E、CFU-E及CFU-GM还能和FN分子肝素结合片段中的“CS_1”多肽结合,并证实,祖细胞表面的粘附抗原(VLA_5)是RGD短肽的受体,而VLA4则是CS_1多肽的受体.     

鸡血藤单体化合物对骨髓抑制小鼠造血祖细胞增殖的影响

背景:机体造血主要依靠造血祖细胞来扩增,当受到放射线、化学药物等损伤时,即会发生造血功能障碍.目的:观察从传统中药鸡血藤中提取的九个单体化合物对骨髓抑制小鼠造血祖细胞增殖的影响.设计: 随机对照实验.单位:中国人民解放军总医院临床药理研究室.材料:实验于2002-11/2003-02在中国人民解放军总医院药理研究室完成,选用348只健康昆明种小鼠,体质量22.25g,清洁级,雌雄各半,由解放军军事医学科学院实验动物中心提供,许可证号码为SCXK-2001-001.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.鸡血藤由中国人民解放军总医院中药房提供,单体化合物没食子儿茶素、芒柄花素、儿茶素、焦性粘液酸、丁香酸、Demethylvestitol、间苯三酚、芒柄花甙、表儿茶素由中国医学科学院药物研究所从鸡血藤乙酸乙酯部位中分离.TGL-16型离心机为上海医疗器械六厂生产,CO2培养箱为日本SANYO公司产品,MK型倒置显微镜为日本OLYMPUS公司产品.方法:[1]实验分组:随机抽签法将小鼠分为29组:鸡血藤九种单体化合物没食子儿茶素、芒柄花素、儿茶素、焦性粘液酸、丁香酸、Demethylvestitol、间苯三酚、芒柄花甙、表儿茶素高剂量组、中剂量组及低剂量组共27组,同时设立正常组及对照组,每组12只.[2]实验干预:除正常组外,小鼠均给予全身60Co γ射线照射,剂量为4Gy.照射后第3天,9种单体化合物高、中、低剂量组小鼠分别腹腔注射2,0.4,0.08g/L相应单体化合物药液0.5mL,正常组和对照组小鼠腹腔注射等体积的生理盐水.[3]实验评估:给药30min后分別取正常组及对照组各8只及其他组全部小鼠静脉血制备正常、对照及各单体含药血清,取对照组剩余4只小鼠的骨髓细胞进行造血祖细胞培养,培养分为对照组和九个单体化合物高、中、低剂量组,分别在各组培养体系中加入对照及各单体含药血清,另取正常组小鼠4只进行骨髓造血祖细胞培养作为细胞培养的正常组,通过计数各组CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-Meg集落数来观察九个单体化合物对骨髓抑制小鼠造血祖细胞增殖的影响.主要观察指标:各组CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-Meg集落数.结果:纳入小鼠348只,均进入结果分析,无脱失值.[1]CFU-E集落数:儿茶素、没食子儿茶素、丁香酸、表儿茶素高剂量组CFU-E显著高于对照组(P<0.05-0.01),儿茶素中、低剂量组及没食子儿茶素中剂量组CFU-E也显著高于对照组(P<0.05).[2]CFU-GM集落数:除焦性粘液酸、芒柄花甙各剂量组外,鸡血藤其余单体化合物各剂量组CFU-GM均较对照组明显增加(P<0.01).[3]BFU-E集落数:儿茶素、没食子儿茶素、丁香酸各剂量组及表儿茶素高、中剂量组的BFU-E较对照组明显增加(P<0.05).[4]CFU-Meg集落数:儿茶素和表儿茶素各剂量组、丁香酸高、低剂量组及没食子儿茶素低剂量组的CFU-Meg显著高于对照组(P<0.05).对照组所有集落数均明显少于正常组,差异有统计学意义(P<0.01).结论从中药鸡血藤中提取的单体化合物可刺激骨髓抑制小鼠造血祖细胞的增殖,其中儿茶素的刺激增殖活性相对最强.     

骨髓基质细胞移植加快化疗小鼠造血与免疫功能恢复的实验研究

目的 探讨骨髓基质细胞移植对化疗小鼠造血和免疫功能的影响。方法 BABL／C小鼠骨髓基质细胞体外扩增培养，然后移植化疗后的同系小鼠，观察不同时点外周血象、骨髓集落形成单位、骨髓细胞增殖指数和脾细胞增殖反应的变化。结果 输注扩增培养的骨髓基质细胞无毒副反应，移植了骨髓基质细胞的小鼠各项指标到第7天就已恢复至正常水平，而对照组则需14d，两组间差异有统计学意义（P〈O．05）。结论 骨髓基质细胞移植不仅能够加快化疗小鼠造血功能的重建，而且有助于免疫功能的恢复。     

慢性肾衰贫血与骨髓无效造血相关性研究

目的探讨慢性肾衰骨髓无效造血血液系统改变及其临床意义。方法随机抽取2005年1月至2010年1月本院不同病期慢性肾衰未透析患者224例为研究对象,进行血常规、网织红细胞、外周血血细胞形态及平均红细胞体积(MCV)、红细胞体积分布宽度(RDW)检测;94例尿毒症患者同时进行血清铁、血清铁蛋白、叶酸、维生素B12检测,23例尿毒症患者同时进行骨髓造血微环境、三系血细胞超微结构观察,并对骨髓CFU-F、CFU-E及CFU-GM三系祖细胞进行体外培养和骨髓三系细胞形态学观察。结果骨髓造血微环境损害、三系祖细胞生成减少、三系血细胞形态学异常,三系血细胞数减少与贫血、出血、感染相一致,其程度随肾功能减退而加重。结论慢性肾衰血液系统改变与骨髓无效造血呈正相关,且随病情进行性加重而不可逆转。     

阿霉素诱导Egr-1启动子调控的造血因子GM-CSF基因表达对荷瘤小鼠造血功能恢复的影响

本研究探讨阿霉素（ADM）诱导早期生长因子（Egr-1）启动子调控的造血因子基因表达对荷瘤小鼠化疗后造血功能恢复的作用。将构建的携带有Egr-1启动子的粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）cDNA和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）cDNA双顺反子真核表达载体导入基质细胞HFCL后,输入重症联合免疫缺陷（SCID）小鼠体内。实验小鼠随机分4组：①ADM诱导的HFCL／EG组（HFCL／EG＋ADM组）,②ADM诱导的HFCL组（HFCL＋ADM组）,③单纯输注HFCL／EG组（HFCL／EG组）和④单纯输注HFCL组（HFCL组）,每组6只动物。观察外周血象动态改变,用流式细胞术检测eGFP^＋人基质细胞,用RT-PCR和Westernblot分别检测GM-CSFmRNA及其蛋白的表达。结果表明：化疗组与未化疗组相比外周血白细胞降低,而且下降幅度较低,恢复加快;各组间CFU-GM数无显著性差异;肿瘤抑制率与化疗相关,而与外源基因表达不相关;ADM处理后实验组小鼠骨髓可见绿色荧光阳性的基质细胞;RT,PCR和Westernblot显示GM-CSFmRNA和GM-CSF蛋白表达增强。结论：ADM诱导的Egr-1启动子造血因子基因疗法具有化疗后促进造血恢复作用。     

人脐血前红系祖细胞(BFU-E)体外培养的动态观察

<正> 脐血含各系造血干/祖细胞和多种造血集落刺激因子,是继骨髓、外周血、胎肝之后第4个新开发的、可移植的造血干细胞来源;还可静脉输注,用于一切放化疗后血细胞减少的病人、刺激造血功能,从而扩大了血源供应。笔者通过对37份人脐血和11份正常骨髓的BFU-E体外培养观察,再次证明脐血含有丰富的造血干细胞,并对脐血红系定向祖细胞的2个亚群(CFU-E、BFU-E)进行了动态观察,结果报告如下。     

IL—6基因转染的骨髓基质细胞系对骨髓移植小鼠造血功能恢复？…

目的：探讨白细胞介素６（ＩＬ－６）基因转染的骨髓基质细胞系ＱＸＭＳＣ１ＩＬ－６对骨髓移植后造血功能的重建作用。方法：将骨髓造血细胞和骨髓基质细胞系一起经尾静脉注射给同系小鼠，建立骨髓移植（ＢＭＴ）模型。小鼠的造血功能用脾结节（ＣＦＵ－Ｓ）、粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）、红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ）测定及外周血各项血液学指标来确定。结果：ＷＸＭＳＣ１ＩＬ－６转基因骨髓基质细胞可明显增强ＢＭ     

系统性红斑狼疮骨髓受累机制初步研究

目的 初步探讨系统性红斑狼疮(SLE)骨髓受累的可能机制.方法 对21例初治SEE患者骨髓标本21份,10例正常对照骨髓标本分别进行骨髓单个核细胞(BMMNC)Coombs试验并采用甲基纤维素法检测CFU-E、CFU-GM、BFU-E产率.结果 10份正常对照骨髓标本BMMNC-Coombs试验均为阴性,21例SLE患者,有12例(57.1%)阳性,其中17例合并血细胞减少者中有10例(58.2%)阳性;4例血细胞正常者中有2例(50.0%)阳性,SLE患者BMMNC-Coombs试验阳性率显著高于正常对照组(P＜0.05).而SLE合并血细胞减少组与血细胞正常组相比,阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).BMMNC抗体类型与血细胞水平无显著相关性.SLE合并血细胞减少组的CFU-E、CFU-GM产率与正常对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).SLE血细胞正常组CFU-E、CFU-GM产率显著高于正常对照组(P＜0.05).SLE患者中,合并血细胞减少组CFU-E、CFU-GM产率显著低于血细胞正常组(P＜0.05).SEE患者无论是否合并血细胞减少其BFU-E产率均显著低于正常对照组(P值均＜0.05).而SLE合并血细胞减少组与血细胞正常组患者相比,其BFU-E产率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SLE患者BMMNC膜表面被覆自身抗体;造血祖细胞增殖、分化功能无明显异常,某些SLE患者可能通过造血祖细胞的代偿增殖维持正常的血细胞水平.     

放烧复合伤大鼠血清对小鼠骨髓造血祖细胞的影响

以单纯烧伤、放射损伤为对照 ,观察放烧复合伤大鼠血清对骨髓造血祖细胞的影响及细胞因子的变化。用6 0 Coγ射线全身照射 12Gy ,5kW溴钨灯致大鼠背部 30 %全身体表面积Ⅲ度烧伤。伤后 3、12、2 4、4 8、72和 96小时无菌抽取大鼠血清。按 10 μg m1蛋白加入到骨髓红系或粒系培养体系中培养。伤后 2 4小时 ,应用ELISA法检测血清TNFα水平 ,应用放射免疫法检测IL 6含量。结果显示 ,无论烧伤或放烧复合伤血清组 ,伤后 3、12、2 4、4 8、72和 96小时的CFU E、BFU E和CFU GM培养集落数 ,均显著高于正常对照组 (P <0 .0 1) ,且以伤后 2 4小时最高 ,烧伤组高达 342 .8%、2 6 1.6 %和 2 2 8.4 % ;复合伤组为 2 5 2 .4 %、2 0 5 .1%和 174 .2 %。但当加入放射损伤大鼠血清时 ,CFU E、BFU -E和CFU GM集落数生长较少 ,最高为 12 .7%。同时 ,烧伤组和复合伤组血清TNFα和IL 6水平显著高于正常对照组 ,更高于放射损伤组。结论 :烧伤或放烧复合伤后的血清对骨髓红系和粒系造血均有明显的促进作用 ,放射损伤后的血清则有明显的抑制作用 ;该作用与血清细胞因子变化有关。     

Human hematopoietic progenitor cells in long-term cultures express HLA-DR antigens and lack HLA-DQ antigens

The expression of HLA-DR antigenic determinants on human hematopoietic progenitor cells (HPC) capable of differentiating into mature blood cells, as determined in semisolid cultures, has been demonstrated previously (3-7). Here, we investigated the expression of class II determinants on HPC responsible for the sustained proliferation of colony-forming units of granulocyte/macrophage (CFU-GM), of multilineage HPC (CFU-GEMM, granulocyte/erythrocyte/macrophage/megakaryocyte), and burst-forming units of erythroid cells (BFU-E) in liquid long-term cultures. Using both fluorescence-activated cell sorting and complement-dependent cytotoxicity assays, HLA-DR determinants could be identified on virtually all these HPC capable of proliferating in long-term cultures. Experiments in which the stromal layer had been irradiated provided evidence that the HPC themselves were truly HLA-DR+, and that the sustained proliferation of HPC was not due to activation of HLA-DR- residual HPC in the stromal layer by reinoculated HLA-DR+ accessory cells. Furthermore, it was shown that all HPC recognized in semisolid and liquid long-term cultures were HLA-DQ-. These results suggest that the human true pluripotential stem cell is HLA-DR+. These results open the possibility of studying class II-dependent regulation of hematopoiesis in liquid long-term cultures.     

严重型再生障碍性贫血患者骨髓造血祖细胞集落形成与免疫抑…

OBJECTIVE: To explore the defect of hematopoietic stem cell and analyze the relationship between the colony formation capacity of bone marrow hematopoietic progenitor cells and the results of immunosuppressive therapy (IST) in severe aplastic anemia (SAA) patients. METHODS: Methylcellulose semisolid culture was used. RESULTS: Thirty patients with SAA at diagnosis were studied. In 90% of the patients, the CFU-E and CFU-GM yields were strikingly decreased and in 56.7% of the patients there was no colony formation at all. Nevertheless, there was still 10% of the patients having normal CFU-E, BFU-E or/ and CFU-GM yields. After IST, 59.1% of the patients showed colony formation improvement. The difference between the results obtained pre- and post-IST(for CFU-E and BFU-E, P < 0.01, for CFU-GM, P < 0.05) was significant. In the majority of the patients, the colony formation capacities were still under the normal post-IST. Moreover, 22.7% of the patients remained no colony formation post-IST. The IST response rates between the patients with or without colony formation had no statistically difference (80% versus 50%, P < 0.05). The increment of colony formation appeared later than the therapeutic effect did, but frequently concurred with the appearance of magkaryocytes in the bone marrow smear. CONCLUSION: In the majority of SAA patients, the hematopoietic stem cells or progenitors were defective perhaps caused by immune damage; IST can improve the hematopoiesis in vitro and in vivo of SAA patients.     

人巨细胞病毒感染致造血祖细胞增殖抑制与更昔洛韦的影响

背景:临床研究显示,骨髓移植后人巨细胞病毒感染可阻碍血小板植入、出现表型异常的外周血白细胞,导致骨髓移植失败,这可能是由于人巨细胞病毒感染直接影响了造血祖细胞所致.目的:观察更昔洛韦对人巨细胞病毒感染所致脐血粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞体外增殖抑制的影响及更昔洛韦对此的保护作用. 设计:对比观察性实验.单位:泸州医学院附属医院分子生物学实验室.对象:正常足月顺产新生儿脐血标本20例,每份10 mL,由泸州医学院附属医院妇产科提供,产妇对本实验知情同意.实验经医院伦理委员会批准.方法:实验于2004-06/2006-12在泸州医学院附属医院分子生物学实验室完成.采用脐血标本造血祖细胞培养技术,观察、计数100 TCID50人巨细胞病毒-AD169感染粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞后各祖细胞集落数,记录集落维持时间.用PCR和荧光定量PCR技术检测集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA.将7.5 mg/L更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的造血祖细胞,再分别计集落数、集落维持时间及集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA.设正常培养的造血祖细胞为空白对照组,设与含灭活性人巨细胞病毒的正常造血祖细胞培养系统为灭活对照组.主要观察指标:①祖细胞集落数、祖细胞集落维持时间.②祖细胞集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA. 结果:①集落数和集落维持时间:人巨细胞病毒感染的祖细胞集落数较对照组明显减少(P < 0.01),集落维持时间较对照组明显缩短(P < 0.01).在人巨细胞病毒感染的集落细胞内检测到人巨细胞病毒-DNA的存在;更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的祖细胞后,与人巨细胞病毒感染的祖细胞比较集落数明显提高,差异有非常显著性意义(P < 0.01) ,集落维持时间明显延长,差异有非常显著性意义(P < 0.05).②集落增殖提高率: 粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞、巨核系祖细胞分别为37.4%,74.2%,40.1%,67.4%,38.9%.③集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA:荧光定量PCR显示更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的祖细胞后核酸载量较人巨细胞病毒感染的祖细胞降低,差异有非常显著性意义(P < 0.01).结论:人巨细胞病毒-AD169株在体外能明显抑制粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞集落细胞的增殖;在体外更昔洛韦有抗人巨细胞病毒的活性,能促进人巨细胞病毒感染的造血祖细胞增殖.