与人类疾病相关的布尼安病毒研究进展

近几年,布尼安病毒的研究进展较快,新的布尼安病毒不断被发现。布尼安病毒科（Bunyauiridne）至少包括350种病毒,被分为5个属：Orthobunyavirus、Hantanvirus、Nairovirus、Phlebovirus、Tospovirus（见表1）,是动物病毒家族中最大的一个病毒科。至少有60种布尼安病毒可引起人类或家畜的疾病,其中对人类健康及社会经济生活产生严重威胁的病毒主要有裂谷热病毒（RVFV）、Lacrosse脑炎病毒（LACV）、奥罗普切热病毒（OROV）、白蛉热病毒（SFV）、克里米亚一刚果出血热病毒（CCHFV）和汉坦病毒属成员等。     

定向破坏弓形虫GRA2基因位点降低了小鼠体内的虫体毒性

GRA蛋白为弓形虫速殖子期纳虫泡膜和缓殖子期包囊壁的主要成分。在控制弓形虫感染方面,对GRA2蛋白的免疫反应可能很重要。为研究弓形虫在细胞内存活和鼠感染弓形虫期间GRA2蛋白的作用,作者构建了一个无GRA2蛋白表达的弓形虫基因突变体,并分析了这种突变体在体外培养和体内感染时的特性。     

弓形虫感染家兔精液中虫体含量的动态变化

目的检测弓形虫感染家兔精液中虫体DNA,观察虫体在精液中动态变化情况。方法用RH株弓形虫速殖子105个/只的剂量腹腔感染雄性家兔16只。在家兔感染前后分别采集精液,-40℃冻存备用,采用两种方法提取精液中总DNA,用实时定量PCR(quantitativereal-timePCR,QRT-PCR)检测弓形虫感染家兔精液中弓形虫DNA,依据对照计算虫体拷贝量,绘制感染后时间与精液中虫体含量的动态曲线图。结果16只雄兔感染前其精液中均不能检测到弓形虫DNA,精液中虫体含量在感染后7wk左右达到高峰期,然后虫体含量逐渐下降。在感染9wk~15wk维持较低水平。结论弓形虫感染雄兔精液中虫体含量随感染后时间不同而变化。     

弓形虫感染家兔血液中虫体的动态观察

目的探明虫体在家兔血液中动态变化情况。方法用RH株弓形虫速殖子105个/只的剂量腹腔感染雄性家兔16只。在家兔感染前后分别采集家兔血液,抗凝处理后,-40℃冻存备用,用实时定量PCR检测弓形虫感染家兔血液中弓形虫DNA,依据对照计算虫体拷贝量,绘制感染后时间与血液中虫体含量的动态曲线图。结果雄兔弓形虫感染后4d血液中即可检测到虫体DNA,血液中虫体含量为217.887×103个/ml,血液中虫体含量在感染后8 d达到高峰期,血液中虫体含量为248.019×103个/ml,然后虫体含量逐渐下降,在感染后121 d雄兔血液中虫体密度为1.45×103/ml。结论弓形虫感染雄兔血液中虫体含量随感染后时间不同而变化。     

COPD疾病相关基因的研究进展

迄今为止，发现与慢性阻塞性肺疾病（COPD）易感性相关的分子遗传标志只有一个，即基因型PiZ/Z。但它远远不能解释COPD易感性的全貌。作为一种复杂疾病，COPD的易感性依赖于多个基因多种多态性的共同作用，而确定其疾病易感基因往往需要同时应用多种策略。     

弓形虫的基因研究与应用

弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫，所致弓形虫病多见于胎儿和免疫力低下的人群。由于弓形虫感染是导致先天性畸形的主要原因之一，还由于不少艾滋病患者和肿瘤病人死于弓形虫性脑炎，更由于弓形虫可侵犯人体各个器官系统，所致病症涉及临床各科。本文简要介绍弓形虫基因研究与应用方面的最新进展。1弓形虫的基因研究1．1染色体与分子核型弓形虫生活史有无性繁殖与有性生殖两个世代。除有性生殖期间及无性二分裂之前的虫体外，弓形虫的核是单倍体型的。单倍体核合染色体数目尚未完全弄清，经脉冲电场凝胶电泳确定的染色体有8条，估计总数不超…     

玻片虫体过氧化物酶法检测人血清弓形虫抗体的研究

<正> 用于血清弓形虫抗体测定的各型酶联免疫吸附试验(ELISA),均使用粉碎虫体的可溶性抗原,因此实验结果都不能直接排除与抗核抗体的交叉反应。1983年以来,我们用制纯的弓形虫速殖子(Tachyzoite)完整虫体涂于载玻片上,进行过氧化物酶弓形虫抗体测定,在生物显微镜下判读结果,称     

囊虫性脑脓肿内虫体的观察

手术摘除单发脑实质小型脓肿５０例，作光镜、部分作电镜观察。共检出活虫５例，死虫４３例，未发现囊虫组织者２例，４３例死虫中１６例尚具有完整或不完整的囊壁，１３例仅为囊虫残体，１４例囊虫已完全崩，４８例囊虫多位于灰质或灰白质相间外，其中顶部２７例，额部１０例、枕部５例，颞部５例及基底神经节处１例。     

ADAM33基因多态性与慢性气道疾病相关研究进展

ADAM33基因位于第20号染色体短臂上(20p13),是ADAM家族的一个成员.ADAM33基因可以影响多种疾病表型.近期研究发现,ADAM33基因在慢性气道疾病中发挥重要作用;ADAM33在间质细胞限制性表达,参与气道结构的改变,与支气管高反应性和加速肺功能下降有关.目前已经确认ADAM33基因是哮喘的易感基因,而该基因与COPD也有关联.ADAM33基因与不同种族及区域人群慢性气道疾病的相关性成为研究热点.本文以ADAM33的结构功能为基础,从哮喘链接到COPD,对ADAM33基因多态性与慢性气道疾病的相关性作一综述.     

FcRL3基因多态性与自身免疫性甲状腺疾病相关

运用PCR-RFLP对506例Grayes病(GD)患者,80例桥本甲状腺炎(HT)患者和261名正常对照者的可结晶片段受体样因子3(FcRL3)基因外显子4进行多态性研究,结果提示FcRL3基因外显子4等位基因82G可能为重庆地区汉族GD男性患者的易感基因.     

猪感染刚地弓形虫的抗体水平与所分离虫体的致病性间的关系

1991年9月至1992年5月在阿根廷布宜诺斯艾利斯的拉帕拉塔屠宰场,随机抽样采集了体重为90—110kg的109头猪的血清和隔肌样本。用IFAT检测血清弓形虫IgG抗体,并用免疫印渍技术测定血清中抗体与虫体抗原的反应性。隔肌经切碎、制匀浆、消化、离心处理后,制成混悬液,然后腹腔注射接种5—7周龄的ICR小鼠。接种后监测28天,在此期间如发现死亡小鼠,即抽取腹腔渗     

弓形虫ROP2基因的克隆与鉴定

目的 体外扩增弓形虫棒状体分泌抗原2（ROP2）靶基因，构建真核表达载体pc-DNA3-ROP2。 方法 收集、纯化RH株弓形虫速殖子，提取基因组DNA；根据基因库ROP2基因序列设计合成1对引物，应用PCR扩增ROP2基因片段，回收纯化后克隆入TA载体质粒pUCm-T；用限制性内切酶EcoRⅠ、HindⅢ双酶切该重组子，将切下的ROP2基因在T4DNA连接酶作用下插入真核细胞表达载体质粒pc-DNA3，并进一步作双酶切、PCR及测序鉴定。 结果 以弓形虫基因组DNA为模板，PCR扩增出1.7 kb ROP2基因片段，克隆于pUCm-T载体中，再将ROP2基因亚克隆于真核表达载体质粒pc-DNA3，经筛选鉴定，构建pc-DNA3-ROP2重组质粒；测序结果显示，重组质粒包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列，能完整表达ROP2的抗原蛋白。 结论 弓形虫ROP2基因片段，经TA克隆及亚克隆，构建弓形虫pc-DNA3-ROP2重组质粒。     

抑制性消减杂交筛选疾病相关基因的研究进展

随着人类基因组测序的完成，疾病相关基因的鉴定和克隆将会变得更加快捷和方便。一旦疾病基因的功能被揭示，将会对疾病发病机制产生新的认识。由于基因表达在疾病发展的不同阶段呈现出差异性，这就为我们寻找、鉴定和克隆致病基因提供了一个重要线索。抑制性消减杂交(SSH)就是近年来发展起来的一种有效的分离差异表达基因的方法。     

脑性瘫痪与弓形虫感染

<正> 我国应用间接血凝法和酶联免疫吸附法对83例脑性瘫痪(下称脑瘫)患儿进行弓形虫血清学调查,并与40例正常儿童对照,结果如下。     

日本血吸虫单性感染虫体与复性感染虫体的比较

目的 对单性感染或复性感染钉螺的日本血吸虫发育结果进行观察。 方法 采用单个毛蚴感染单个钉螺,26 ℃恒温箱中饲养,60 d后逸蚴感染小白鼠（单性感染）,40 d后解剖小白鼠,以检获的成虫性别鉴别各个钉螺中的尾蚴性别。再分别以单性尾蚴和混合双性尾蚴感染鼠、兔,40 d后解剖观察宿主感染情况及虫体。 结果 单性感染小鼠和兔后解剖获得日本血吸虫雄虫或雌虫。复性感染小鼠或兔后检出的虫体主要有3种形态：雌雄合抱、雄虫和雌虫,极少数能看到雄虫合抱未发育成熟雌虫的现象。单性感染的鼠、兔肝脏均未见虫卵,而复性感染的鼠、兔肝脏均查见虫卵。单性感染的雄虫能发育成熟,但体型较合抱成熟的雄虫略小,仅凭肉眼难以与合抱成熟雄虫区分;而单性感染的雌虫则不能发育成熟,镜下卵巢不易见到或仅见到雏形,体型明显细小。 结论 单性感染的雄虫和雌虫体型比复性感染合抱成熟的雄虫和雌虫的体型小,单性感染的雄虫能发育成熟,而雌虫则不能发育成熟。在解剖哨鼠时,即使未查见肝脏虫卵,仍需检查肠粘膜血管中是否有单性感染的血吸虫。     

用虫体抗原进行斑点酶联免疫吸附试验检测弓形虫抗体的研究

应用完整弓形虫速殖子为抗原,以HRP-SPA代替酶标第二抗体进行Dot ELISA检测58例兔血清中弓形虫抗体,同时用速殖子可溶性抗原检测比较。两种抗原检测结果一致。阳性反应最高稀释度为1:25600。本法检测阿米巴阳性兔血清、感染球虫的兔血清,血吸虫阳性兔血清无交叉反应。阻抑试验显示高抗体滴度的阳性兔血清经抗原吸收后,反应明显抑制。实验表明本法特异性强、敏感性高、重复性好抗原制备简单不需特殊设备。为人畜弓形虫病临床诊断、流行病学现场调查、单克隆抗体杂交瘤细胞的筛选提供了一种较理想的简易可行的方法。     

弓形虫GRA6抗原基因的克隆与表达

目的在大肠杆菌中高效表达弓形虫抗原GRA6。方法采用聚合酶链反应(PCR)从弓形虫昆山分离株和RH株总DNA中分别扩增到编码GRA6的基因，经DNA序列分析后导入表达载体。PGEX-5X-3。然后在大肠杆菌BL21-Codon Plus(DE3)-RP中进行表达，以SDS-PAGE和Westen blotting进行鉴定，用GST亲和层析柱纯化表达产物。结果1．在我们所比较的336个碱基中，弓形虫昆山分离株与RH株之间碱基基本一致。2．得到一分子量为49kDa的融合蛋白。占大肠杆菌总蛋白的25．55％，通过Westen blotting证实，该重组抗原能被弓形虫感染的人特异性IgM和IgG血清所识别。结论1．弓形虫昆山分离株和RH株的GRA6基因片段几乎完全一致；2．在大肠杆菌中得到了高效表达的融合蛋白；3．该重组抗原能被弓形虫感染的人特异性IgM和IgG血清所别．可用于构建具有高度敏感性和特异性的弓形虫病检测试剂盒．     

弓形虫表面抗原SAG3基因的克隆与表达

目的克隆表达弓形虫RH株SAG3基因,为深入研究其结构及功能奠定基础。方法从弓形虫RH株基因组DNA中特异性扩增出编码SAG3基因的片段,相应酶切后克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,构建pET-SAG3重组质粒。将pET30-SAG3重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株。经EcoRⅠ、Hind III酶切及测序鉴定后,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,用SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达情况。结果体外扩增的SAG3基因片段与目的片段大小相符约1 155bp,成功构建了重组表达质粒pET30-SAG3,SDS-PAGE、Western blot显示SAG3-His融合蛋白的分子量大小约为50kd。结论弓形虫表面抗原SAG3基因在大肠杆菌中成功表达,为进一步研究SAG3的结构和功能奠定基础。