结核杆菌ESAT-6抗原Th1优势表位与FL重组纳米疫苗的制备及其特性研究

目的:制备适当粒径的壳聚糖纳米粒,并连接质粒,评价该壳聚糖纳米粒对该质粒的结合能力与保护作用,为进一步研究重组纳米疫苗的免疫效果提供基础?方法:采用离子交联法制备成pIRES-TH-FL-壳聚糖纳米粒复合物,用紫外分光光度计检测纳米颗粒对质粒的包埋率;经琼脂糖凝胶电泳分析纳米载体与质粒的结合能力及对该质粒的保护作用;通过喷金电镜观察其大小形态;另用zata电位仪测定粒径和zeta电位;最后用Western blot实验鉴定其在真核细胞中的表达情况?结果:紫外分光光度计检测到该壳聚糖纳米质粒的包埋率为99.28%,琼脂糖凝胶电泳结果显示壳聚糖纳米粒能保护该质粒免受DNaseⅠ的降解?制得的壳聚糖纳米质粒粒径为300 nm左右,zeta电位为32.4 mV?Western blot证实,该纳米质粒能转染293T细胞并表达目的融合蛋白?结论:本实验成功制备了粒径适当且分布均匀的壳聚糖纳米质粒,并能够在体外实现有效表达?     

阿昔洛韦壳聚糖纳米粒的制备及检验

目的：筛选出制备阿昔洛韦壳聚糖纳米粒的最佳处方和工艺。方法：采用离子交联法制备阿昔洛韦壳聚糖纳米粒，利用单因素试验、均匀设计试验，筛选出包封率最高的处方及工艺，并考察该条件下制备的纳米粒的形态、粒径分布、表面电位等理化性质。结果：优化筛选出了最佳处方和工艺，并在该条件下制备了阿昔洛韦壳聚糖纳米粒．测得其包封率为87．5％，载药量为17．8％，形态、粒径分布及表面电位等指标均良好。结论：利用离子交联法制备阿昔洛韦壳聚糖纳米粒，方法简便，理化性质良好。     

载阿霉素新型壳聚糖纳米粒的性质及体外抗肿瘤研究

目的 采用离子凝胶法与化学交联法联合制备新型壳聚糖纳米粒,考察其相关性质以评估此种壳聚糖纳米粒的潜在的应用价值.方法 以盐酸阿霉素为模型药物,采用离子凝胶法和化学交联法联合制备新型壳聚糖纳米粒.以离子凝胶法制备的壳聚糖纳米粒为对照,离心法测定纳米粒的包封率;膜透析法检测纳米粒在不同pH下的盐酸阿霉素累积释放度;考察纳米粒在不同介质及pH中的粒径、电位和多分散系数.以离子凝胶法制备的壳聚糖纳米粒及游离盐酸阿霉素为对照组,MTT法检测新型壳聚糖纳米粒对人乳腺癌MCF-7肿瘤细胞的体外抑制作用.结果 新型壳聚糖纳米粒较离子凝胶法制备的纳米粒粒径小(P＜0.05),且包封率明显提高(P＜0.05);中性条件下的累积释放度较pH 5.0小(P＜0.05);在pH 5.0醋酸钠缓冲液介质中的粒径和PDI较小,电位较高(P＜0.05);对MCF-7细胞的抑制作用随时间增加而逐渐强于游离盐酸阿霉素,且其对肿瘤细胞的抑制效果强于离子凝胶法制备的壳聚糖纳米粒(P＜0.05).结论 离子凝胶法和化学交联法联合制备的壳聚糖纳米粒的粒径较小,缓释性较好,对肿瘤细胞的抑制作用较强,为研究盐酸阿霉素新剂型提供了实验依据.     

超顺磁性Fe3O4壳聚糖纳米粒制备影响因素的初步研究

目的：制备超顺磁性Fe3O4壳聚糖纳米粒,探究不同表面活性剂及交联剂等因素对纳米粒形成及其理化性质的影响。方法：化学共沉淀法制备纳米粒,激光粒度仪检测其粒径大小、聚合物分散指数（polydispersity index,PDI）、zeta电位,振动样品磁强计检测其磁化强度。结果：制备的纳米粒粒径大小在15～60 nm之间,平均粒径29.39 nm, PDI为0.185,zeta电位绝对值约20,磁感应性良好。结论：亲水亲油平衡值（hydrophile lipophilic balance,HLB）较小的表面活性剂能减小纳米粒粒径,交联剂戊二醛用量需控制在1.5～2.0 ml,NaOH溶液浓度需控制在3.0～4.0 mol/L。     

聚乙二醇化壳聚糖纳米粒的制备及局部滴眼给药性能评价

目的 制备一种聚乙二醇修饰的壳聚糖纳米粒,评价其局部滴眼给药性能.方法 以伏立康唑为模型药物,采用离子交联法制备载药的聚乙二醇化壳聚糖纳米粒,对其进行表征后,分别考察纳米粒的药物缓释能力、对眼表药物代谢动力学的影响及其角膜渗透性.结果 聚乙二醇化壳聚糖纳米粒粒径为(235±23)nm,Zeta电位为(+23.1±0.6) mV,载药量为11.16％,包封率为61.35％.纳米粒体外释放药物非常缓慢,可持续释药48 h;相比于伏立康唑水溶液,纳米粒的药物浓度-时间曲线下面积明显增加,药物半衰期延长,清除率减少,眼表药物平均滞留时间延长(P＜0.05).荧光标记的聚乙二醇化壳聚糖纳米粒可穿透角膜上皮逐渐向角膜基质渗透.结论 与药物水溶液相比,聚乙二醇化壳聚糖纳米粒能够有效减少眼表药物的流失,改善药物的生物利用度.     

组织因子小干扰RNA壳聚糖纳米粒的制备及其特征

目的 探讨壳聚糖-组织因子小干扰RNA(TFsiRNA)纳米粒制备方法并研究其特性.方法 采用三聚磷酸钠(TPP)离子胶凝法分别制备包封型和吸附型壳聚糖-TPP-TFsiRNA纳米粒.检测纳米粒平均粒径和Zeta电位、载药率,并分析血清稳定性、体外生物活性及其细胞毒性.结果 两种纳米粒粒径均小于550 nm,粒径大小主要取决于壳聚糖类型、分子量及其浓度.酸碱度、壳聚糖TPP质量比也影响粒径大小.包封型纳米粒siRNA载药率为100%.壳聚糖-TPP-TFsiRNA纳米粒中的siRNA在5%血清中孵育24 h开始降解,60 h完全降解;50%血清孵育6 h保持完整,48 h完全降解.结论 壳聚糖纳米粒可能成为有效的siRNA转运载体.     

丹酚酸B壳聚糖纳米粒制备与大鼠心脏缺血/再灌注损伤保护作用研究

目的:制备丹酚酸B壳聚糖纳米粒,并考察对大鼠心脏缺血/再灌注损伤的保护作用。方法:采用离子凝胶化法制备丹酚酸B壳聚糖纳米粒,并以包封率(EE%)和粒径分布(nm)为评价指标,对丹酚酸B壳聚糖纳米粒处方进行优化;采用Malvern粒度仪测定纳米粒的粒径分布和Zeta电位,透射电镜考察其形态;并考察丹酚酸B壳聚糖纳米粒的体外释药行为;考察丹酚酸B壳聚糖纳米粒对大鼠心脏缺血/再灌注损伤的保护作用。结果:丹酚酸B壳聚糖纳米粒的包封率为85.8%±3.1%;粒径为(166.1±42.4)nm,Pd I为(0.189±0.032),Zeta电位为(+24.9±4.5)m V;透射电镜显示丹酚酸B壳聚糖纳米粒粒径均一,成球状;纳米粒在24 h内平稳缓慢释药;丹酚酸B壳聚糖纳米粒可以增加大鼠心脏缺血/再灌注损伤的保护作用。结论:丹酚酸B壳聚糖纳米粒对大鼠心脏缺血/再灌注损伤具有良好的保护作用。     

壳聚糖纳米基因载体的制备及特性的研究

目的 制备适当粒径的壳聚糖纳米粒,并连接上质粒,研究壳聚糖纳米粒对质粒DNA的结合能力及保护作用.方法 采用离子交联法制备壳聚糖纳米粒,通过喷金电镜观察其大小、形态及分布;经琼脂糖凝胶电泳分析纳米载体与DNA的结合能力及对DNA的保护作用;通过紫外分光光度计检测其包埋率.结果 喷金电镜证实壳聚糖纳米粒分布均匀,呈近似球形,平均粒径约5 nm.琼脂糖凝胶电泳结果显示壳聚糖纳米粒能有效地结合质粒,并保护DNA免受Dnase Ⅰ的降解,紫外分光光度计检测按不同比例结合质粒的壳聚糖纳米粒(纳米粒:质粒)的包埋率分别为98.7%(10:10),98.1%(10:20),96.7%(10:30),87.1%(10:40),74.6%(10:50).结论 成功制备了适当粒径且分布均匀的壳聚糖纳米粒.壳聚糖纳米粒能有效地结合质粒,并保护其免受Dnase Ⅰ的降解.     

巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1 (+) -EGFP纳米粒的构建和对HeLa细胞体外转染活性的研究

目的 制备巯基化壳聚糖,构建巯基化壳聚糖-质粒DNA (pDNA) 纳米粒,并研究该纳米粒对HeLa细胞的体外转染活性.方法 1- (3-二甲胺基丙基) -3-乙基碳二亚胺盐酸盐 (EDAC) 催化巯基乙酸与壳聚糖反应生成巯基化壳聚糖,傅里叶变换红外光谱仪测量产物的红外光谱,5-5'-二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB) 法检测产物的巯基含量;以pcDNA 3.1 (+) -EGFP为报告基因,巯基化壳聚糖为载体,用复凝聚法制得巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1 (+) -EGFP纳米粒,Zeta电位和粒度分析仪检测该纳米粒的表面电位和粒径.纳米粒经DNase I处理、再在肝素作用下解聚,用琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性.评价巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1(+) -EGFP纳米粒对HeLa细胞的体外转染活性,MTT法测定该纳米粒对HeLa细胞的毒性.结果 红外光谱图显示壳聚糖在EDAC的作用下被巯基化.DTNB法显示1 g巯基化壳聚糖的巯基含量为 (202.85±3.05) μ moL (n=6) .Zeta电位及粒度分析仪的结果表明巯基化壳聚糖-pcDNA3.1 (+) -EGFP纳米粒的平均粒径为288.7nm,Zeta电位为+ (25.2±2.1) mV.DNase I保护实验证明该纳米粒能有效抑制DNase I对内部pDNA的降解.体外转染实验表明巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1 (+) -EGFP纳米粒能有效转染HeLa细胞系,且对HeLa细胞生长无抑制作用.结论 该制备工艺生产的巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1 (+) -EGFP纳米粒能将质粒DNA导入HeLa细胞,使报告基因有效地表达.所以巯基化壳聚糖是基因转运和基因治疗中有应用潜力的非病毒类载体.     

胸腺五肽pH-敏感壳聚糖纳米粒的制备、体外释放及生物活性

目的 为了提高胸腺五肽口服的稳定性及生物利用度,制备胸腺五肽pH-敏感壳聚糖纳米粒并考察其理化性质、体外释放及生物活性.方法 采用离子胶凝法制备胸腺五肽壳聚糖纳米粒并用Eudragit S100包衣制备pH-敏感纳米粒;透射电镜和环境扫描电镜观察纳米粒形态;粒度及表面电位分析仪测量纳米粒的粒径及Zeta电位;超速离心法测定载药纳米粒的包封率;动态透析法研究载药纳米粒的体外释放特性;模拟人工消化液考察纳米粒中胸腺五肽的生物稳定性;淋巴细胞增殖反应评价制剂的生物活性.结果 pH-敏感胸腺五肽壳聚糖纳米粒的平均粒径为(175.6±17)nm,Zeta电位为(28.44±0.5)mV,包封率为(76.70±2.6)%.胸腺五肽pH-敏感壳聚糖纳米粒具有良好的pH依赖性:在0.1 mol·L-1 HCl溶液中累积释放24.65%,在pH 5.0 PBS溶液中累积释放41.01%,在pH 7.4 PBS溶液中累积释放81.44%.pH敏感壳聚糖纳米粒制剂中的胸腺五肽在人工胃液中稳定,在人工肠液中半衰期为15 min.淋巴细胞体外转化实验表明,胸腺五肽pH-敏感壳聚糖纳米粒保留了TP5的生物活性并且具有浓度依赖性.结论 pH-敏感壳聚糖纳米粒可能是口服胸腺五肽的良好载体.     

黄芩苷-血根碱离子对壳聚糖纳米粒的制备及表征

目的 以离子凝胶法制备黄芩苷-血根碱离子对壳聚糖纳米粒（BSI-CS-NPs）。方法 以单因素为主要考察方法,筛选最佳处方和制备工艺;采用透射电子显微镜（TEM）观察BSI-CS-NPs的形态,激光粒度分析仪测定粒径大小和Zeta电位,HPLC法检测包封率和载药量。结果 所制BSI-CS-NPs外观圆整,粒度分布均匀,平均粒径为326.4 nm,Zeta电位为45.7 mV,包封率为68.73%,载药量为26.68%。相比黄芩苷-血根碱离子对原料药,BSI-CS-NPs 2 h的药物累积释放率减少了约36.51%,12 h累积释放率为92.29%。结论 离子凝胶法适用于BSI-CS-NPs的制备,且具有缓释性能。     

负极性驻极体对胰岛素介电特性及降糖效果的影响

目的 研究负极性驻极体外静电场对胰岛素介电特性和结构的影响,观察经电场作用的胰岛素的降糖效果。方法 采用栅压电晕充电系统将聚丙烯膜制备成－500、－1 000、－1 500 V的负极性驻极体,分别作用于胰岛素,使用补偿法测量实验各驻极体在48 h内的等效表面电位,通过介电常数d₃₃测量胰岛素的极化规律与外静电场的关系,采用核磁共振和凝胶电泳检测外静电场对胰岛素分子结构的影响。将经不同表面电位负极性驻极体作用12 h的胰岛素溶液注入糖尿病大鼠体内,观察驻极体作用后胰岛素的降糖效果。结果 不同表面电位负极性驻极体作用胰岛素溶液48 h时,0～4 h内胰岛素溶液两侧的电位差均随时间延长呈指数规律上升,4 h后逐渐趋于恒定。－500、－1 000和－1 500 V驻极体作用胰岛素贴剂12 h时d₃₃值相比无驻极体静电场作用分别提高了14.7倍、26.7倍和45.0倍,12 h后趋于稳定。经外电场作用后胰岛素的空间结构没有发生明显变化,而大部分基团的氢键含量减少;胰岛素结构中单聚体的比例提高,主要以单聚体和二聚体的形式存在。－500 V和－1 000 V驻极体作用胰岛素治疗组处理8 h时大鼠的血糖含量与无驻极体作用胰岛素组相比分别下降了50.9%和22.1%（P<0.05）,具有良好的降糖效果。结论 负极性驻极体可进一步改善胰岛素的降糖效果。     

重组人血管内皮抑素壳聚糖纳米粒的制备及体外评价

采用离子凝胶法制备重组人血管内皮抑素(商品名:Endostar)壳聚糖纳米粒,并对纳米粒的载药量、包封率、粒径、形态、体外释放、体外活性及Endostar结构的完整性进行考察。制得的Endostar壳聚糖纳米粒载药量为(10.5±1.1)%,包封率为(81.3±1.8)%;平均粒径为137 nm,为球形结构;体外释放10 d累积释放达到80%。凝胶电泳实验说明Endostar结构完整,制备与释放过程结构均未被破坏;人脐静脉内皮细胞增殖实验说明Endostar纳米粒仍保留原有的生物活性。结果表明壳聚糖作Endostar的载体,制得的纳米粒具有合适的粒径及包封率,并能达到缓释作用,不会破坏Endostar的结构,同时保留原有的生物活性。     

麦胚凝集素修饰的EGCG-明胶-壳聚糖纳米粒的制备、表征及体外抗肿瘤活性研究

目的?制备麦胚凝集素（WGA）修饰的表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）-明胶(Gel)-壳聚糖(Cs)纳米粒,研究其对结肠癌HT-29细胞的作用。方法?以明胶及壳聚糖为载体辅料,采用静电自组装的方法制备EGCG-Gel-Cs纳米粒,以包封率为指标,通过Box-Behnken设计-效应面法（BBD-RSM）优化纳米粒的制备处方及工艺,再将经戊二醛活化的WGA修饰到纳米粒表面。采用差示扫描量热分析药物在纳米粒中的存在状态,采用细胞毒性及细胞凋亡实验,比较研究纳米粒与原料药的体外抗肿瘤活性。结果?EGCG-Gel-Cs纳米粒的最优处方:Gel与Cs的质量比为4.2,Gel与EGCG的质量比为2.82,反应温度为34℃,包封率为(74.42±0.074)%。EGCG-Gel-Cs纳米粒粒径为(264.13±6.48)nm,经过修饰后纳米粒粒径为(389.70±9.00)nm。WGA-EGCG-Gel-Cs纳米粒对HT-29细胞的细胞毒性和细胞凋亡率显著高于EGCG原料药。结论?WGA-EGCG-Gel-Cs纳米粒可显著提高细胞毒性作用。      

pH响应性PTEN/PLGA-(HE)10-MAP纳米粒的构建及体外评价

构建一种pH响应性细胞穿膜肽（cell-penetrating peptides,CPPs）修饰的载抑癌基因第10号染色体同源缺失性磷酸酯酶-张力蛋白（PTEN）质粒DNA的纳米粒PTEN/PLGA-（HE）₁₀-MAP,探讨其基因递送和体外靶向抗肿瘤作用。采用双乳化-溶剂挥发法制备载PTEN质粒DNA的聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）纳米粒PTEN/PLGA;利用酰胺缩合反应将pH响应性组氨酸-谷氨酸（HE）重复寡肽与模型两亲性多肽（MAP）的重组体（HE）₁₀-MAP偶联至PLGA纳米粒表面,得到纳米粒PTEN/PLGA-（HE）₁₀-MAP。以粒径、Zeta电位以及包封率与载药量为指标对其进行表征分析;通过考察其细胞毒性、细胞摄取,以及靶向转染真核表达质粒和抗肿瘤细胞增殖的能力,分析其作为目的基因靶向递送系统的可行性。结果显示,制备的纳米粒粒径为（266.5 ± 2.86） nm,包封率为（80.6 ± 6.11）%,在pH 7.4、7.0和6.5条件下Zeta电位分别为-（6.7 ± 0.26） mV、 +（0.7 ± 0.22） mV和+（37.5 ± 0.85） mV;未载质粒DNA的空载体纳米粒PLGA-（HE）₁₀-MAP在肿瘤和正常细胞中的细胞毒性试验显示细胞存活率均在80%以上,制备的纳米粒可以被细胞摄取表达,且具有pH靶向抑制肿瘤细胞增殖的作用,在肿瘤的基因治疗中具有一定的应用前景。     

PEG可脱除材料修饰miRNA纳米粒的制备以及体内外性质的考察

制备PEG可脱除材料修饰miRNA纳米粒,考察其细胞摄取以及体内分布情况。采用酰胺键缩合的方法合成可被β-环糊精包合的金刚烷修饰的PEG材料,通过静电作用与miR-34a复合制得纳米粒,加入与β-环糊精亲和力更高的布洛芬后可置换脱除纳米粒的PEG壳,测定该PEG可脱除纳米粒的粒径和Zeta电位;考察其在4T1细胞上的摄取能力以及在荷有4T1细胞的BALB/c小鼠体内的分布情况。结果显示,可被β-环糊精包合的金刚烷修饰的PEG材料合成成功;通过静电作用与miR-34a复合后制得的PEG可脱除纳米粒,粒径为107.7 nm,Zeta电位为15.8 mV;相比于PEG未脱除的纳米粒,被4T1细胞摄取的能力与在小鼠体内肿瘤部位的浓度都有显著提高,该体系在肿瘤治疗领域的应用具有很大的潜力。     

肿瘤靶向性药物载体叶酸-壳聚糖微球的制备及特性研究

目的 探索叶酸偶联壳聚糖(FA-CTS)纳米粒的合成方法 及对肿瘤细胞的靶向性.方法 利用叶酸活性酯与壳聚糖分子上的氨基反应形成稳定的酰胺键,制备FA-CTS.再利用壳聚糖在偏酸性溶液中带正电荷,在高速磁力搅拌作用下能与阴离子凝集的特性,将紫杉醇(PTX)做模型药物,制备负载PTX叶酸偶联壳聚糖(FA-CTS/PTX)纳米粒.采用荧光标记法和MTT法评价其肿瘤细胞靶向性.结果 所制备的FA-CTS/PTX纳米粒,形态均质规则,无粘连,平均粒径282.8 nm,包封率75.4%,载药量9.0%.荧光标记法结果 表明FA-CTS纳米粒的肿瘤细胞亲和性均高于普通CTS纳米粒.MTT法结果 显示FA-CTS/PTX纳米粒组的肿瘤细胞抑制率均高于普通CTS/PTX纳米粒组.结论 合成的FA-CTS纳米粒可通过叶酸受体途径特异靶向于叶酸受体丰富的肿瘤细胞.     

正交法制备羧甲基壳聚糖－纳米银纳米微球

目的:制备以纳米银为模型药物的羧甲基壳聚糖载药纳米微球,探索载药纳米微球的制备条件对粒径、包封率的影响,确定最佳制备工艺。方法:三聚磷酸钠为交联剂,采用离子交联法制备载药纳米微球,测量药物的包封率及粒径。紫外分光光度法测定该制剂中纳米银释放情况。结果:通过正交实验设计,优化了制备工艺条件,其最佳条件是羧甲基壳聚糖浓度4.2 mg/mL,滴速为5 s/滴,纳米银投药量为20 mg（500 μL）。在此条件下进行实验,制备出的载药纳米微球的平均粒径为514.1 nm,多分散系数0.204,包封率61.67%。8 h内累计释放量达80%以上,方程拟合以一级动力学方程拟合效果最好。结论:该制备工艺简单、稳定,可制备出包封率高、粒径适宜的羧甲基壳聚糖-纳米银纳米微球。     

5-氟尿嘧啶壳聚糖纳米粒冻干粉的制备

目的 为研究5-氟尿嘧啶壳聚糖纳米粒冻干粉的制备工艺,提高5-氟尿嘧啶壳聚糖纳米粒的稳定性.方法 首先制备5-氟尿嘧啶壳聚糖纳米粒,并以外观和再分散性为指标,进行单因素考察并利用正交实验优化工艺.结果 5-氟尿嘧啶壳聚糖纳米粒冻干粉的最佳制备工艺为预冻时间24 h、冻干保护剂为甘露醇、用量为80 mg、浓度为10％.冻干前后包封率差异无统计学意义(P＞0.05),冻干后的粒径和冻干前相比有一定增大.结论 5-氟尿嘧啶壳聚糖纳米粒冻干粉有望成为新剂型.     

流感疫苗壳聚糖脂质体的制备工艺

目的在流感疫苗脂质体的基础上制备壳聚糖脂质体载药微粒,建立流感疫苗壳聚糖脂质体的制备工艺．方法采用薄膜分散法制备流感疫苗脂质体,以不同N/P比（壳聚糖中的氮和卵磷脂中的磷比值）制备壳聚糖载药微粒．观察形态并测定其平均粒径、粒度分布、包封率与结合率．通过对比不同N/P比制备壳聚糖载药微粒的包封率与结合率等指标,确定流感疫苗壳聚糖脂质体的制备工艺．结果流感疫苗脂质体形态均呈圆或椭圆形,粒度分布较均匀,壳聚糖包覆后脂质体仍为圆形,平均粒径由2．14μm增加到4．05μm．壳聚糖包覆前后流感疫苗脂质体平均包封率由80．41％变为84．37％．比较6种不同N/P比流感疫苗壳聚糖脂质体的结合率,当N/P为5：1时,为壳聚糖与脂质体孵育的最佳比例,结合率为19．40％．结论壳聚糖包覆后脂质体仍接近圆形,粒径增加,包封率提高,当N/P为5：1时,为壳聚糖与脂质体孵育的最佳比例．