荧光定量PCR测定HBV DNA的线性评价和临床可报告范围

目的探讨荧光定量PCR测定乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)检测系统的线性评价和临床可报告范围(CRR)。方法选取接近线性范围上限的患者标本(8.81E+08)IU/mL,用阴性标本进行系列稀释至比厂商声明的线性范围下限低一个数量级(8.81E+01)IU/mL,共制备8种浓度梯度的标本,每个标本重复测量3次,在一个分析批内完成,采用平均斜率法、美国临床和实验室标准化委员会EP 06-A指南方法和线性稀释回收法进行线性评价。在线性范围内选取3份高浓度患者标本,采用最大稀释度试验确定CRR。结果采用平均斜率法,相关系数(r)=0.999,斜率(b)=1.004(t=93.326,P=0.000),符合线性要求;按EP 06-A指南,经多项式回归分析,最适多项式为二次,二次多项式中每种浓度的线性偏差均小于允许误差0.4(log值);采用线性稀释回收法,r=0.999,b=0.993(t=75.82,P=0.000),符合线性要求,各浓度梯度的稀释回收量均≤±0.4(log值)。采用最大稀释度试验确定最大稀释倍数为1∶100 000。结论 HBV DNA在(8.81E+01)～(8.81E+08)IU/mL为临床可接受线性关系,CRR为(8.81E+01)～(8.81E+13)IU/mL。     

临床检验定量项目线性性能验证方法的比较

目的 观察4种不同标准对检测系统进行线性性能验证时的差异,为临床实验室选择合适的线性验证标准提供参考。方法 以直接胆红素(D-Bil)为例,收集接近线性范围的高值(H)、低值(L)混合血清2份,按L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、H的比例混匀,得到6份样品作为验证样品组。每个样品重复检测3次,分别用CLSI EP06-Ed2、CLSI EP06-A、WS/T 408—2012、WS/T 420—2013标准对检测数据进行统计分析并作出评价。结果 A、B 2种D-Bil试剂的线性数据均无离群值。A试剂的检测结果为(1.40±0.10)、(89.00±0.66)、(167.63±1.25)、(237.07±1.80)、(297.00±0.92)、(363.27±2.63)μmol/L;B试剂的检测结果为(1.13±0.15)、(88.67±0.35)、(174.20±0.50)、(255.97±1.74)、(327.23±2.50)、(396.50±2.01)μmol/L。EP06-Ed2判定A试剂线性验证未通过,B试剂通过;EP06-A和WS/T 420—2013判定2...     

罗氏尿微量清蛋白检测试剂盒性能评价

目的评价罗氏第2代尿微量清蛋白(ALBU2)在Cobas 8000C702全自动生化分析仪上的检测性能。方法 (1)精密度评价:以CLIA′88规定的允许误差TEa为依据,要求重复精密度1/4TEa,中间精密度1/3TEa;(2)线性范围及可报告范围评价:采用EP6-A方案,并延伸计算平均稀释回收率,以平均稀释回收率在90%~110%,评价临床可报告范围;(3)携带污染评估:评估血清清蛋白对尿量微量清蛋白检测的携带污染,以携带污染率≤0.5%标准判定;(4)方法比对分析:以Siemens BNⅡ为参考系统,将罗氏Cobas 8000C702与BN2结果进行相关性比对分析。结果重复精密度:低浓度CV为1.98%,高浓度CV为1.64%;中间精密度:低浓度CV为4.35%,高浓度CV为1.20%。线性范围验证:测量范围为5.6~413.55mg/L;临床可报告范围:最大稀释倍数为30倍,临床可报告范围为5.6~12 406.5mg/L。携带污染率:血清清蛋白(42.6g/L)对尿液微量清蛋白(6.9mg/L)的携带污染为0.28%。室内比对:标本浓度在200mg/L时,回归直线为Y=0.896 X+5.049,r2=0.994 4,医学决定水平处系统偏移通过;当标本浓度在201~413.55mg/L时,回归直线为Y=0.848 X-10.44,r2=0.917,医学决定水平处系统偏移未通过。结论罗氏ALBU2在Cobas 8000C702平台上检测能满足临床的需求,不同仪器间的比对,在不同浓度范围内有差异,应根据各自仪器的系统建立独立的参考范围。     

艾瑞德免疫分析仪C反应蛋白检测项目的性能评价

目的对检测C反应蛋白的艾瑞德干式免疫分析仪进行性能验证,确保其结果的准确、可靠。方法参考美国临床和实验室标准化协会(CLSI)推荐的EP5-A2文件进行精密度验证,参考EP15-A2文件进行正确度的验证,参考EP6-A2文件进行线性范围的验证,参考CLSI C28-A2文件进行参考区间的验证,参考常规检测方法进行携带污染率的验证。结果全血高、低浓度批内精密度分别为3.29%、3.68%,总精密度分别为4.91%、5.26%;参考区间为0~10mg/L;线性回归方程Y=1.070 2 X+0.448 4,r=0.979;线性范围为2.5~160.0mg/L;携带污染率小于1%。结论艾瑞德免疫分析仪具有良好的精密度、准确度,较宽的线性范围、较快的检测速度等优点,适用于临床检测。     

临床常用线性评价方案的应用比较

目的熟悉美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP6-A线性评价方案的应用;探讨美国临床病理学家协会设备委员会(CAP-IRC)法、EP6-P、EP6-A线性评价方案的区别及适用性。方法按照EP6-A对采用电化学发光法检测的甲胎蛋白(AFP)、速率法检测的尿素和丙氨酸转氨酶(ALT)、免疫比浊法检测的载脂蛋白B(apo B)和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测的乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)进行线性评估;以尿素为例建立检测线性范围;比较CAP-IRC法、EP6-P、EP6-A方案评价apo B线性结果的异同。结果按照EP6-A,AFP、ALT和HBV DNA(对数)可直接判断呈线性;尿素的真实线性范围为5.305~46.975 mol/L。apo B目测法可判断呈线性;EP6-P判断呈非线性;CAP-IRC法判断呈非线性但在临床可接受范围;EP6-A判断呈非线性,但在一定范围内呈线性。结论推荐临床实验室使用EP6-A线性评价方案对各个检测项目进行线性评价保证检测结果的准确可靠。     

CLSIEP6-A2在原子吸收光谱法全血铅测定线性评价中的应用

目的 对北京博晖BH2100原子吸收光谱仪检测血铅(Pb)的线性范围进行评价.方法 运用CLSI EP6-A2线性评价方案及其统计学方法对数据进行拟合分析,同时结合临床可接受限判断线性程度.结果 当全血铅在0.0~569.5 mg/L 范围时,BH2100检测为一级线性,最佳拟合多项式为Y=114.971 429X-90.566 667.结论 与厂家提供的数据作比较,BH2100型原子吸收光谱仪测定Pb的线性范围能够满足临床需要.     

肌氨酸氧化酶法检测尿肌氨酸的方法学性能评价及参考值分析

目的对肌氨酸氧化酶法检测尿肌氨酸进行方法学性能评价,初步估计尿肌氨酸的生物参考值。方法参考CLSI EP5-A2、EP17-A、EP6-A、C28-A3等文件,评价肌氨酸氧化酶法检测尿肌氨酸的重复性、空白限(limits of blank,LoB)、检测限(limitsof detection,LoD)、定量限(limits of quantitation,LoQ)、线性范围、回收率和生物参考值。结果肌氨酸氧化酶法检测2.0μmol/L肌氨酸溶液、2.9μmol/L新鲜尿液样本,总不精密度均14.0%;肌氨酸氧化酶法检测5.0、10.0μmol/L肌氨酸溶液及6.4、9.8μmol/L新鲜尿液样本,总不精密度均10.0%。肌氨酸氧化酶法检测尿肌氨酸的LoB约为0.35μmol/L;肌氨酸溶液的LoD、LoQ分别为1.1、1.9μmol/L,新鲜尿样本分别为1.2、2.0μmol/L;线性范围为2.0～125.6μmol/L;回收率为65.3%～90.5%。健康人群尿肌氨酸的生物参考值为0.01～0.06μmol/g肌酐。结论肌氨酸氧化酶方法检测尿肌氨酸的精密度、检测限、线性范围等可满足临床实验室的要求,但仍需在校准品基质方面有所改进以提高准确度。     

全自动生化分析仪检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶性能验证

目的对奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)进行性能验证。方法参照CLSI EP5-A2、EP6-A、C28-A2文件和相关文献要求,对奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪检测NAG进行精密度、功能灵敏度、线性范围、临床可报告范围和参考区间的验证试验。结果 NAG的高、低浓度标本总变异系数分别为6.05%和9.50%;功能灵敏度为0.72U/L;线性范围为1.5~196.0U/L;临床可报告范围为0.72~1 960.00U/L;参考区间为0.3~12.0U/L。结论奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪检测NAG的各项分析性能与厂家的声明基本一致,可用于临床检测。     

均相酶法检测香草扁桃酸方法学评估及相关指标生物参考区间建立

目的评估均相酶法检测香草扁桃酸(VMA)主要方法学性能;建立适合本地区成年人群随机尿VMA/尿肌酐(Ucr)比值生物参考区间。方法参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP15-A、EP6-A、EP17-A、C28-A3文件,对精密度、线性范围、定量检测下限,参考区间进行验证。采用两个水平校准品,测定均值,计算均值与靶值的偏倚,验证其准确度;参照CLSI C28-A3,建立随机尿VMA/Ucr比值生物参考区间。收集37例肾上腺疾病及高血压相关疾病患者随机尿及24h尿,分别检测其VMA及Ucr,比较24h尿VMA及随机尿VMA/Ucr之间的相关性。结果均相酶法检测VMA,计算均值与靶值的平均偏倚为17.34%;批内、批间精密度CV10%;线性范围为1.74~96.77mg/L(R~2=0.989 5);VMA的LoQ为2.2mg/L;健康个体24h尿VMA均在厂家声明参考区间内。随机尿VMA/Ucr比值95%参考区间为(0.333~1.259)×10~(-3) mg/μmol(1.67~6.29μmol/mmol)。肾上腺疾病及高血压患者24h尿VMA与随机尿VMA/Ucr相关性为r=0.579(P0.01),二者具有明显相关性。结论均相酶法检测VMA主要方法学性能符合实验室要求,满足临床应用;成功建立适合本地区成年人群随机尿VMA/Ucr比值的生物参考区间。     

氨基糖苷类药物对尿液总蛋白检测的干扰分析

目的探讨美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP7-A2文件对于筛查、量化临床化学尿液样本分析干扰的实际应用,评价氨基糖苷类抗菌药物对尿总蛋白检测的干扰效应。方法遵循CLSI EP7-A2文件,选取尿总蛋白浓度为77、146、538、832 mg/L的新鲜尿液样本,分别加入最大治疗剂量时每升尿液中3倍浓度的硫酸依替米星溶液,采用邻苯三酚红钼法分别进行干扰筛选试验。4种浓度尿液样本中分别加入由硫酸依替米星和一级纯水配制而成的梯度浓度溶液(0、0.15、0.30、0.45、0.60 mg/mL),进行干扰效应试验。通过多项式回归分析量化干扰效应,估计在任何干扰物浓度水平下的干扰度。结果在尿总蛋白浓度分别为77、146、538、832 mg/L的尿液样本中加入0.6 mg/mL硫酸依替米星溶液,其干扰效应点估计值置信区间下限均超过医学决定水平处的允许误差。在尿总蛋白浓度分别为77、146、538、832 mg/L的尿液样本中加入5个干扰浓度(0、0.15、0.30、0.45、0.60 mg/mL)的硫酸依替米星溶液,得出的系列浓度均为线性剂量效应关系,其线性方程分别为Y=202X-1.2、Y=187.3X+4、Y=325.3X+0.6、Y=345.3X+6.4。通过回归方程分析得出尿总蛋白浓度为77、146、538、832 mg/L时,加入0.08、0.15、0.35、0.50 mg/mL硫酸依替米星溶液所引起的正干扰效应均超过临床可接受的允许误差。结论硫酸依替米星对邻苯三酚红钼法测定尿总蛋白存在正干扰;临床实验室需进行分析干扰实验,筛选潜在干扰物质、量化干扰效应、评估潜在风险,并建立对临床有意义的干扰声明。     

CLSI EP06-Ed2文件在定量测量程序线性验证中的应用

目的 以三碘甲状腺原氨酸(T3)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)项目为例,探讨美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP06-Ed2文件在定量测量程序线性验证中的应用.方法 收集接近线性区间上、下限的样本,按比例配制7份线性样本,各重复测定2次,以稀释比例和重复测定均值(x)进行加权线性回归分析,计算预期值,将线性偏差的...     

应用EP6-A2方案评价自建检测系统中尿蛋白的线性范围

目的建立自建检测系统中尿蛋白的线性范围,以供临床检验做参考。方法根据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)颁发的EP6-A2文件,配制11组U-pro浓度为等间距排列的试验标本,每个样本重复测定2次,用SPSS软件对数据进行多项式回归,得出该项目的线性范围。结果自建检测系统检测尿蛋白重复性CV为1.59%,小于实验室所规定的重复性目标2%,数据重复性好,符合实验要求。实验数据经多项式回归分析后得出的最适模型为三次多项式,通过对其非线性度分析,判断其为临床可接受的线性,对应的自建检测系统中检测尿蛋白线性范围为5.2~1 355.15mg/L。结论自建检测系统中尿蛋白的线性范围为5.2~1 355.15mg/L,小于试剂盒说明书上的线性范围0~2 000mg/L。临床实验室应对检测系统的分析性能进行评价,以保证其检测结果的准确可靠。     

临床常用线性评价方案的应用比较

目的熟悉美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）EP6-A线性评价方案的应用；探讨美国临床病理学家协会设备委员会（CAP-IRC）法、EP6-P、EP6-A线性评价方案的区别及适用性。方法按照EP6-A对采用电化学发光法检测的甲胎蛋白（AFP）、速率法检测的尿素和丙氨酸转氨酶（ALT）、免疫比浊法检测的载脂蛋白B（apoB）和荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测的乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBVDNA）进行线性评估；以尿素为例建立检测线性范围；比较CAP—IRC法、EP6-P、EP6-A方案评价apoB线性结果的异同。结果按照EP6-A，AFP、ALT和HBVDNA（对数）可直接判断呈线性；尿素的真实线性范同为5．305～46．975mol／L。apoB目测法可判断呈线性；EP6-P判断呈非线性；CAP—IRC法判断呈非线性但在临床可接受范围；EP6-A判断旱非线性，但在一定范围内呈线性。结论推荐临床实验室使用EP6-A线件评价方案对各个检测项目进行线性评价保证检测结果的准确可靠。     

VITROS XT 3400生化分析系统测定8种新型复合干片项目的性能验证

目的 评价清蛋白(Alb)、总蛋白(TP)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酐(Cr)、尿素(Urea)、总胆固醇(TC)和三酰甘油(TG)8种复合干片项目在VITROS XT 3400生化分析系统中的性能。方法 参照CLSI EP15-A3文件验证8种复合干片项目的正确度；参照WS/T492—2016文件验证项目的精密度；参照CLSI EP06-Ed2文件验证项目的线性范围；参照CLSI C28-A3c文件验证项目的参考区间；参照CLSI EP7-A2文件验证项目的抗干扰能力；参照CNAS-GL047文件进行方法学比对。结果 8种复合干片项目的正确度验证结果显示，检测结果的均值均在确认区间(VI)内或检测偏差≤1/2允许总误差(TEa),符合EP15-A3文件要求。8种复合干片项目2个水平的精密度测定样品实验室内变异系数均≤1.66%,符合<1/3TEa的要求。所有项目检测结果的线性偏差90%置信区间(CI)均与1/2TEa相交，符合EP06-Ed2文件要求。参考区间验证显示90%以上的表观健康人群检测值落在厂商预设的参考区间之内，符合C28-A3...     

日立7600-020全自动生化分析仪检测FDP和D-D的性能验证

目的 验证由纤维蛋白(原)降解产物(F-DP)和D二聚体(D-D)试剂盒及其校准品、质控品及日立7600-020全自动生化仪组成的检测系统检测FDP,D-D的分析性能.方法 根据美国临床实验室标准化研究所(CLSI)系列文件(EP5-A2,EP15-A2,EP6-A2,EP7-A2,C28-A2)和其他相关文献的实验方案,对用日本积水医疗株式会社生产的FDP和D-D试剂盒应用在日立7600-020全自动生化仪上检测FDP和D-D的精密度、准确度、线性范围、临床可报告范围、干扰试验和参考范围等性能进行验证,并与试剂说明书提供的质量性能进行比较.结果 F-DP的不精密度(CV)低水平为4.6％,高水平为2.69％;D-D的批内不精密度(CV)低水平为4.82％,高水平为3.5％.检测限:F-DP的检测限为0.75 mg/L,D-D的检测限为0.35 mg/L,均小于说明书提供的检测限,符合要求.F-DP的线性方程为:Y=0.997X+0.3(P＜0.05),检测范围为:0.75～176.00 mg/L,D-D的线性方程为:Y=1.01X-0.2(P＜0.05,检测范围为:0.35～92.00 mg/L).准确度:方法学比较:FDP:Y=0.997 X+ 1.20 mg/L,r=0.998;D-D:Y=1.02X+1.02 mg/L,r=0.990;F-DP加样平均回收率为97.4％,比例系统误差为2.6％;D-D的加样平均回收率为100.4％,比例系统误差为0.4％.干扰试验:当样品中的结合胆红素≤0.2 g/L、血红蛋白≤3.0 g/L时没有观察到对检测结果的干扰,乳糜≥300,对F-DP的检测结果有正干扰.参考范围区间:20个个体的F-DP,D-D的生物参考区间验证结果均在厂商的生物参考区间范围内.结论 日本积水医疗株式会社生产的纤维蛋白(原)降解产物(F-DP)和D二聚体(D-D)试剂盒应用在日立7600-020全自动生化仪上,主要性能指标符合要求.     

KX-21N线性范围的评价方法与结果分析

目的 探讨KX-21N血细胞分析仪线性范围的评价方法.方法 依据CLSI的EP6-A文件要求对全血样品进行等比稀释成9个样品,再用KX-21N对9个样品进行双份测定,我们采用了北京中创易达公司开发的MVS软件对测定结果按照EP6-A文件要求进行线性评价.结果 KX-21N检测RBC、Hb、HCT,RBC在0.01～6.14×1012/L、Hb在24～175g/L、HCT在0.071～0.54L/L范围内呈线性关系,在检测WBC时在0.1～5.2×109/L,10.1～86.3×109/L范围内呈线性,血小板在6～863×109/L呈线性而中值样品的研究结果是在51.5～167.5×109/L范围内呈线性.结论 按照EP6-A文件的评价方法进行线性范围的评价,同时采用中创易达公司开发的MVS软件进行数据统计,使得复杂的统计变得简单快捷,方便实用,值得推广应用.     

胶乳增强免疫透射比浊法测定血清胱抑素C的方法学评价

目的对胶乳增强免疫透射比浊法测定血清胱抑素C进行方法学评价。方法用免疫透射比浊法测定血清胱抑素C,依据美国临床实验室标准化委员会EP9-A2文件要求进行精密度、线性关系、回收试验、干扰试验以及与颗粒增强的免疫散射比浊法比较等系列试验。结果胶乳增强免疫透射比浊法在0.64～8.05mg/L范围内线性良好,相关方程为Y=1.024 8 X-0.094 3;批内、批间平均变异系数均小于5%;平均回收率为94.7%;5.0g/L和10.0g/L血红蛋白、3.5mmol/L和8.0mmol/L三酰甘油、79.3μmol/L胆红素干扰物对测定干扰均小于3%;与颗粒增强散射免疫比浊法比较,回归方程为Y=1.00 7 X-0.016 4,r=0.993 7,两种方法具有高度相关性(P<0.01)。结论胶乳增强免疫透射比浊法法干扰因素少、重复性好、线形范围较宽并与颗粒增强散射免疫比浊法有很好的相关性,操作简单,完全符合实验室常规检测的需要。     

免疫荧光分析仪测定CRP和hs-CRP性能评价

目的 验证和评价i-CHROMATM Reader免疫荧光分析仪测定C反应蛋白(CRP)和超敏CRP(hs-CRP)的分析性能.方法 根据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)系列文件(EP15-A、EP6-A2、EP9-A2)的要求设计试验方案,分析i-CHROMATM Reader免疫荧光分析仪检测CRP和hs-CRP的精密度、准确度、线性范围等性能,比较全血和血清标本测定CRP和hs-CRP结果的差异.结果 CRP和hs-CRP测定精密度符合临床要求;i-CHROMATM Reader免疫荧光分析仪与罗氏Modular系统CRP检测性能相当,hs-CRP检测性能不相当.CRP和hs-CRP检测均呈一次线性(r2>0.95,P<0.05),CRP线性范围为5.0～200.0 mg/L,hs-CRP线性范围为0.1～5.0 mg/L,符合临床要求.全血和血清标本CRP和hs-CRP测定结果差异无统计学意义(P>0.05).结论 i-CHROMATM Reader免疫荧光分析仪测定CRP和hs-CRP的主要分析性能基本符合质量目标要求,可在临床实验室推广应用.     

临床化学检测自建检测系统的性能验证

目的 以谷丙氨酸氨基转移酶（ALT）检测项目为例,探讨由国产上海玉兰公司生产的ALT试剂盒／罗氏公司校准品c．f．a．s／日立7600—020全自动化生化分析仪组成的自建检测系统性能验证试验方法和评价方案。方法分别根据美国临床实验室标准化委员会（cI｜sI）标准文件EP5-A、EP6-A、EP9-A2对系统进行方法学比对、精密度、线性试验,并根据与本院临床科室沟通后Au报告范围,进行最大稀释倍数验证。结果方法学比对：与ROCHEALT试剂／ROCHE校准品／罗氏Cobas8000全自动生化分析仪组成的检测系统测定的结果相关系数r=0．993,在选定的医学决定水平,相对偏差〈3％;精密度：批内变异系数4．072％,总变异系数5．046％,二者均小于本实验室质量目标要求精密度。线性范围：在5—400U／L线性范围,线性方程Y=2．7＋0．99X,r2=0．9992,b值95％置信区间（0．982,1．008）;临床可报告范围：ALT检测项目在临床需求范围内通过最大稀释度验证。结论：自建检测系统ALT检测项目分析性能均能满足要求。评价方案可行性好,以此评价方案为例,可以对本实验室其他检测项目继续评价确保该科检测结果的准确性。     

方法学评价的设计及对葡萄糖试剂盒的评价

目的 对由希森美康(sysmex)生产的葡萄糖测定试剂盒、校准品、日立7170A组成的葡萄糖测定系统进行了精密度、线性、方法学对比以及干扰实验的研究.方法 分别根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准文件EP5-A,EP6-A,EP9-A2对系统进行精密度评价、线性评价、方法学对比实验,并选取临床常见的五种干扰物质对试剂盒进行干扰实验.结果 精密度:批内不精密度<1.0%,总不精密度<1.2%;线性范围:在0～60 mmol/L,r2=0.998 9;方法学对比:与Roche葡萄糖试剂盒/ROCHE校准品/日立7170A系统测定结果的相关系数r=0.998 3.在选定的医学决定水平,相对偏差小于3%;干扰试验:游离胆红素在20 mg/dl以内、结合胆红素在20 mg/dl以内、乳糜在3 000度以内、抗坏血酸在50 mg/dl以内,血红蛋白在500 mg/dl以内对实验结果无明显影响(偏差在3%以内).结论 该系统精密度好,线性达到说明书的规定指标,和比对系统间的偏差较小;常见干扰物对其无明显干扰.