HMGB1介导的炎症通路在雷公藤致大鼠肝损伤中的作用研究

目的:研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)介导的炎症通路HMGB1-Toll样受体4(TLR4)/核转录因子κB(NF-κB)在雷公藤致大鼠肝损伤中的作用,为阐明雷公藤致肝损伤的作用机制提供参考。方法:将24只SD大鼠随机分为空白组(生理盐水,灌胃)、雷公藤组(以生药计16 g/kg,灌胃)和中和剂组(腹腔注射100 mg/kg甘草酸铵溶液3 h后再灌胃以生药计16 g/kg的雷公藤),每组8只,各组大鼠均连续给药3周。每周给药后均检测大鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)水平;给药结束后,采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清中HMGB1、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-2、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blot法检测大鼠肝组织中HMGB1、NF-κB p65、TLR4蛋白表达,苏木精-伊红染色后观察大鼠肝组织病理学改变。结果:给药3周后,雷公藤组大鼠血清中AST、ALT、HMGB1、IL-1β、IL-2、TNF-α水平以及肝组织中HMGB1、NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平均显著高于空白组和中和剂组(P<0.05或P<0.01)。雷公藤组大鼠肝组织中央静脉周围肝细胞水肿,部分肝细胞浆内可见圆形空泡;中和剂组大鼠仅少量细胞内可见大小不一的空泡。结论:雷公藤致大鼠肝损伤的机制可能与其激活了HMGB1-TLR4/NF-κB炎症通路有关。     

TLR4/NF-κB通路在脂多糖诱导喉癌细胞释放HMGB1中的作用

目的探讨脂多糖(LPS)对喉癌细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放的诱导作用。方法采用酶联免疫吸附试验、实时荧光定量PCR和Western blot检测LPS诱导后人喉癌细胞株Hep-2培养上清液中HMGB1含量、细胞HMGB1mRNA表达水平和细胞Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平的变化,观察TLR4单克隆抗体、NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对HMGB1释放的影响。结果 LPS诱导12h和18h后,HMGB1mRNA表达水平和HMGB1含量均升高,且呈时间依赖性;LPS诱导24h后,TLR4及NF-κB p65蛋白明显升高。TLR4单克隆抗体和PDTC对LPS诱导的HMGB1释放有不完全的抑制作用。结论 LPS诱导喉癌细胞释放HMGB1;其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关。     

脂氧素A4受体激动剂及白介素-1β在Toll样受体2/髓样分化因子88/核因子-κB信号通路对哮喘小鼠气道炎症的调控作用

目的:研究脂氧素(LX)A4受体激动剂及白介素-1β抗体在Toll样受体2(TLR2)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB（NF-κB)信号通路中对哮喘小鼠气道炎症的调控机制。方法:以卵清蛋白(OVA)致敏激发法制备小鼠哮喘模型,60只二级雄性Balb/c小鼠随机分为6组,分别给予脂氧素A4受体激动剂(BML-111)、白介素(IL)-1β抗体、BML-111载体、兔IgG治疗。末次激发后留取血清和肺组织标本,光镜下观察支气管周围炎症浸润情况;测定血清IL-1β、IL-4、IL-8、干扰素(IFN)-γ水平;检测肺组织TLR2、MyD88、NF-κB的表达。结果:OVA致敏的小鼠血清IL-1β、IL-4、IL-8水平升高,IFN-γ浓度降低; OVA致敏导致明显的支气管周围炎症细胞浸润,使支气管炎症分级指数有明显提高;BML-111或IL-1β抗体治疗均能明显阻止上述OVA介导的炎症变化(χ2=28.14,P<0.01)。OVA致敏使肺组织TLR2、MyD88 表达及NF-κB活性升高,BML-111及抗IL-1β抗体可抑制由OVA引发的上述表达变化。结论:OVA可诱导产生气道炎症,这一作用可能受TLR2/MyD88/NF-κB信号通路调控,IL-1β在这一过程中起了至关重要的作用。BML-111和IL-1β抗体可能通过对TLR2/MyD88/NF-κB信号通路的负调控而实现抑制OVA诱发的呼吸道炎症的作用。     

小檗碱促进骨再生的研究进展

小檗碱作为一种从传统中药中提取的天然异喹啉生物碱,具有预防骨质疏松、抗炎、降血糖等多种生物功效且副作用小。小檗碱不仅可以通过激活经典成骨信号通路Wnt/β-catenin和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）等有效促进干细胞成骨分化,还可以通过干扰核因子κB(NF-κB)受体活化因子配体（RANKL）与NF-κB受体活化因子（RANK）之间的结合,进而影响下游的信号通路如MAPK、NF-κB等抑制破骨细胞的分化,促进骨再生。本文对小檗碱促进骨再生的作用机制进行综述,旨在为骨再生的研究提供新的思路。     

中药单体成分及复方促进骨折愈合的作用机制研究进展

中药在治疗骨折愈合过程中具有多成分、多途径、多靶点的作用特点,对于具有复杂病理机制的骨折具有较好的治疗优势和潜力。笔者对中药单体成分及复方促进骨折愈合的作用机制进行了归纳,发现内脂素A、葛根素等可通过激活丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路,续骨丹、固本增骨方等可通过激活骨形态发生蛋白（BMP）信号通路,黄芩苷、牛膝多糖等可通过激活Wnt/β-catenin信号通路,芹菜素、三七皂苷等可通过激活核因子κB(NF-κB)受体激活蛋白/NF-κB受体激活蛋白配体/护骨因子（RANK/RANKL/OPG）信号通路,活血接骨复方胶囊、健骨颗粒等可通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路,淫羊藿苷等可通过激活Notch信号通路,桃红四物汤、藏红花素等可通过激活Hippo信号通路,酸枣仁皂苷A、蛇床子素等可通过抑制NF-κB信号通路,发挥促进骨折愈合的作用。     

TLR4/MAPK信号通路在藁本内酯抗神经炎性反应中的作用

目的研究TLR4/MAPK信号通路在藁本内酯(LIG)抗急性神经炎性反应中的作用。方法 SPF级雄性SD大鼠40只随机分为正常组、模型组、LIG低剂组和LIG高剂组。模型组及LIG组:双侧icv给予LPS(50μg/只),其中LIG给药组在LPS造模前30 min腹腔注射给予LIG(10和20 mg·kg-1);正常组:同法给予等体积人工脑积液。LPS给予后6 h,LIG组同前重复给药;24 h后取大脑、-80℃保存备用。采用比色法测定NO含量,ELISA检测炎症因子(IL-1β,TNF-α和PEG2)含量,试剂盒测定iNOS与COX-2酶活性、以及NF-κB DNA结合活性,Western Blotting分析p-ERK/ERK,p-JNK/JNK,p-p38/p38,p-STAT3/STAT3以及核内NF-κBp65蛋白表达,定量PCR检测TNF-α,COX-2及iNOS的mRNA水平。结果 LPS通过激活TLR4/MAPK介导的NF-κB和STAT3信号通路,上调其主要的炎性靶基因的转录和表达,从而诱导急性神经炎性反应;LIG可剂量依赖性地显著抑制LPS激活的ERK,JNK及p38 MAPK通路,抑制其下游的转录因子NF-κB和STAT3活性,降低IL-1β,TNF-α和PEG2炎症因子的mRNA水平和蛋白表达、以及iNOS和COX-2的mRNA水平和酶活性。结论 LIG对LPS介导的神经炎性具有显著的抑制作用,其机制与抑制MAPK/NF-κB与MAPK/STAT3信号通路有关。     

丁苯酞对糖氧剥夺条件下人脑微血管内皮细胞炎症反应的调节作用

目的 研究丁苯酞调节糖氧剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）条件下人脑微血管内皮细胞（human brainmicrovascular endothelial cells,HBMEC）炎症反应的机制。方法 采用OGD方法处理HBMEC,将细胞分为对照组、模型组和丁苯酞低、中、高剂量组。其中对照组为正常培养的HBMEC,模型组为OGD处理的细胞,低剂量组为OGD+5 μmol·L^-1的丁苯酞,中剂量组为OGD+10 μmol·L^-1的丁苯酞,高剂量组为OGD+20 μmol·L^-1的丁苯酞。采用流式细胞术检测细胞凋亡水平,CCK-8法检测细胞活力的变化,Western-Blot法检测细胞中HMGB1、TLR4、NF-κB （p-P65）、caspase-1和procaspase-1的表达水平,免疫酶联法检测上清中白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）,白细胞介素6（IL-6）的分泌水平。实时荧光定量PCR检测HMGB1、TLR4、NF-κB（P65）、caspase-1、IL-1β的mRNA表达。结果 OGD处理可以诱导HBMEC活力下调和HBMEC细胞凋亡,且具有时间依赖性,相比对照组具有显著性差异（P<0.05）;而丁苯酞干预后,HBMEC细胞活力比模型组显著上调（P<0.05）,细胞凋亡率比模型组显著下降（P<0.05）。OGD处理可以导致HBMEC中HMGB1-TLR4-NF-κB信号的激活,诱导炎症因子caspase-1、IL-1β的表达上调,相比对照组具有显著性差异（P<0.05）;而丁苯酞干预可以显著下调HMGB1-TLR4-NF-κB信号的表达,下调caspase-1、IL-1β的表达。结论 丁苯酞可能通过抑制HMGB1-TLR4-NF-κB信号的表达调节OGD下HBMEC细胞炎症反应。     

藏药臭蚤草不同提取部位对CIA大鼠的影响北大核心CSCD

目的明确藏药臭蚤草抗类风湿性关节炎的作用,筛选其抗类风湿性关节炎的活性部位,初步探讨其抗类风湿性关节炎作用机制。方法以牛Ⅱ型胶原与弗氏不完全佐剂建立大鼠类风湿性关节炎(CIA)模型。观察臭蚤草总提物、大孔树脂不同浓度乙醇洗脱部位及雷公藤多苷(GTW)对类风湿性关节炎模型大鼠的足肿胀度的影响,检测大鼠血清中的肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和类风湿性因子(RF)的含量,借助滑膜组织病理学验证臭蚤草对类风湿性关节炎的治疗作用,利用Western blot法探究臭蚤草对类风湿性关节炎大鼠滑膜组织中MAPK/p38/NF-κB、TLR4/NF-κB炎症通路蛋白表达的影响,探讨臭蚤草抗类风湿性关节炎的作用机制。结果与模型组相比,臭蚤草总提取物和大孔树脂60%乙醇洗脱部位能够明显降低CIA大鼠关节肿胀度;有效改善大鼠滑膜的病理变化,并明显降低血清中炎症因子中大鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和类风湿性因子(RF)水平;明显降低滑膜组织中(TLR4、NF-κB、Myd88、p-p38、p-IκBα、iNOS等)相关炎症蛋白的表达。结论(1)臭蚤草可以缓解类风湿性关节炎大鼠的关节炎症症状,且臭蚤草60%乙醇洗脱部位为臭蚤草抗类风湿性关节炎的有效活性部位;(2)臭蚤草总提物及不同极性提取物能抑制MAPK/p38/NF-κB、TLR4/NF-κB信号通路缓解CIA大鼠的关节炎症状。     

miRNA介导的TLR4炎症信号通路在辐射损伤中的研究进展

放疗是目前全球公认的治疗各种肿瘤的主要手段之一,但放疗过程中产生的各类射线会对辐射周围的正常组织造成炎症性损害,因此探寻有效治疗靶点以改善辐射造成的炎症性损伤,提高放疗疗效是当务之急。研究发现,微小RNA(microRNA,miRNA)作为一种新型的炎症调节因子,主要通过TLR4介导的NF-κB信号通路来调控辐射诱发的炎症反应。因此,miRNA与TLR4形成的交互网络系统有望成为防辐射损伤药物研发的筛选靶点。本文从TLR4介导的炎症相关信号通路对辐射的调控作用、miRNA对辐射的调控作用、miRNA对辐射中TLR4/NF-κB信号通路调控的炎症反应的靶向作用及靶向miRNA-TLR4改善辐射后炎症反应的治疗策略4个方面进行综述,以期找到miRNA靶向调控TLR4介导的NF-κB信号通路的有效靶点,为辐射损伤的防治研究提供新的思路。     

黄芪多糖抑制NF-κB/MAPK信号通路和改善哮喘大鼠气道炎症的作用

目的观察黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对哮喘大鼠气道炎症及NF-κB/MAPK信号通路的影响。方法采用卵蛋白(ovalbumin,OVA)致敏法制备哮喘模型并予以药物治疗。观察支气管灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中炎症细胞分类计数、肺组织病理变化、肺泡Ⅰ型上皮超微结构变化;测定肺组织NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、磷酸化IκBα(p-IκBα)、ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、JNK、磷酸化JNK(p-JNK)、p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6及IL-13含量的变化。结果与正常组比较,OVA致敏明显升高哮喘组炎症细胞数量、增强NF-κB/MAPK信号通路活性。APS可改善哮喘大鼠气道炎症、肺Ⅰ型上皮损伤,并明显抑制NF-κB/MAPK信号通路活性。结论 APS改善哮喘大鼠气道炎症、细胞损伤的机制可能与抑制NF-κB/MAPK信号通路有关。