陕西地区血小板供者基因数据库拓展性应用的研究

目的 通过分析本地区无偿献血与造血干细胞捐献群体之间的共性和特性,挖掘包括血小板基因供者库在内的无偿献血者与造血干细胞捐献者资料库间的融合潜力,提高招募成功率和已知结果库存率。方法 应用数据库建模和比对方法对本市近10年无偿献血者与中华骨髓库陕西分库造血干细胞捐献者之间的匹配度和融合度进行筛选分层,采用Arlequin 3.5.2.2软件计算HLA、HPA基因频率及单体型频率,并根据表型频率计算不同血小板供者后备库中找到HLA、HPA全匹配供者概率。结果 在本地区已入库造血干细胞志愿捐献者中,依据其献血行为挖掘出的活跃献血者分别划分为血小板供者库后备一、二、三、四梯队,分别为696名、2 752名、9 092名和12 028名捐献者。第一梯队具有10～50次血小板捐献经历和10～20次全血捐献经历的占比最高,分别为13.65%和26.01%;第二梯队具有10～20次全血捐献经历和10～50次血小板捐献经历者占比分别为15.04%和1.38%,与其他梯队献血特征有差异(P<0.05)。在现有血小板库+一二梯队的核心库容中(n=4 955),患者找到至少1名HLA-A,B表型相同的供...     

陕西地区血小板HLA/HPA基因供者库的建库评估及应用策略

目的 探讨陕西地区血小板HLA/HPA基因供者库合适的库容水平及匹配概率,为本地区血小板供者库的建设、维护及应用提供数据支持。方法 以11 755名中华骨髓库陕西分库造血干细胞志愿捐献者、401名和249名陕西地区无血缘关系多次单采血小板捐献者为对象,分别进行HLA基因多态性分析、HPA基因分型和CD36抗原检测,应用Arlequin 3.5.2.2软件计算HLA、HPA基因频率及单体型频率,并根据表型频率计算找到HLA、HPA全匹配供者概率,评估库容水平。结果 获得了陕西地区HLA-A、-B及HPA1-6、10、15、21表型群体多态性资料,在249例健康捐献者中检测到CD36抗原Ⅰ型和Ⅱ型缺失频率均为0.40%(1/249);计算推导得到当血小板供者库库容为194人时,患者有95%的把握能在该库中找到至少1名HPA1-6、10、15、21全匹配供者;1个1 500人的血小板供者库有95%的概率可以找到1名HLA-A-B表型频率>0.002或单体型频率>0.001的相同供者,而找到任何1个交叉反应组(CREG)匹配的供者概率应在44.95%～97.57%之间;当供者数为8...     

献血者血小板1-16抗原基因遗传多态性分析及已知HPA型供者数据库的建立

本研究的目的是分析人类血小板抗原（human platelet antigen,HPA）基因多态性,根据分布频率来判断HPA抗原不配合比率以及抗体产生的机会,确定有临床意义的血小板抗原系统,并建立邯郸地区血小板基因频率数据库和供者库.采用SSP-PCR方法对邯郸地区148名随机献血者进行HPA1-16抗原32个等位基因的检测分析,并与不同人群的分布频率进行比较.结果表明：每个样本均检测到HPA-1a、2a、4a-14a、16a基因;HPA-4a、7a-14a、16a呈现单态性,未检测出相应的等位基因HPA-b;对于HPA-1、-2、-5、-6主要以a/a纯合子为多,a/a基因型频率分别是0.9595、0.8108、0.9865、0.9797,没有b/b纯合子出现.在HPA1-16中,具有最高杂合度的是HPA-15,基因型HPA15a/15a、HPA15a/15b、HPA15b/15b频率分别是0.2230、0.5270、0.2500;HPA-3在其次,基因型HPA3a/3a、HPA3a/3b、HPA3b/3b频率分别是0.3851、0.5135、0.1014.经x2检验,结果符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律.邯郸地区随机献血者HPA1-5系统基因频率与石家庄地区相似（P＞0.05）;与我国台湾人群进行HPA1-13、HPA-15的比较,HPA-1、-2、-6具有明显的不同（P＜0.05）,其它相似（P＞0.05）;与韩国人群进行HPA1-8的比较,除HPA-3具有明显不同外（P＜0.05）,其余均相似（P＞0.05）;与美国黑人进行HPA1-5的比较,HPA-1、-2、-5具有明显的差异（P＜0.05）;与英国人进行HPA1-11的比较,HPA-1、-5具有明显的不同（P＜0.05）.结论：北方地区中国人群HPA-2、-3、5、-15系统具有多态性,且HPA抗原分布不配合比率较高,这必然造成免疫暴露的机会增加,提示在临床上可能具有重要的免疫学意义.同时,在此次研究数据的基础上建立了邯郸地区血小板基因频率数据库和血小板已知型供者库.     

流式细胞仪结合序列特异性寡核苷酸探针基因分型方法在血小板供者资料库建立中的应用

目的 探讨高通量流式细胞仪结合序列特异性寡核苷酸探针(FLOW-SSO)技术在人类血小板抗原( HPA)基因分型中的应用.方法 采用FLOW-SSO技术对1378例汉族血小板捐献者HPA1～6,15系统的基因型进行检测;并以10份国际输血协会(ISBT)第12届血小板免疫学术研讨会提供的质控样品对FLOW-SSO技术的可靠性进行考核.以3家供应商提供的不同聚合酶链反应-序列特异引物法(PCR-SSP)试剂,对50份血小板样品的基因分型结果进行比对试验.分型结果采用x2检验考察HPA系统的基因型频率分布是否符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律.结果 通过FLOW-SSO方法获得的1379例血小板供者HPA等位基因频率如下,HPA-1a为0.9927,HPA-1b为0.0073,HPA-2a为0.9536,HPA-2b为0.0464,HPA-3a为0.5700,HPA-3b为0.4300,HPA-4a为0.9982,HPA -4b为0.0018,HPA-5a为0.9804,HPA-5b为0.0196,HPA-6a为0.9822,HPA-6b为0.0178,HPA- 15a为0.5337及HPA-15b为0.4663.基因频率检测结果经x2检验,其分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律.ISBT提供的10份样品考核结果相符率为100％.50份血小板样本采用3种不同的PCR-SSP试剂测定的HPA1～6,15基因分型结果,与FLOW-SSO技术测定结果完全一致.结论 FLOW-SSO基因分型技术有便捷、重复性好及高通量等特点,适用于血小板供者资料库的血小板基因分型.     

长沙地区汉族人血小板抗原（HPA1-17）基因多态性调查

目的研究长沙地区汉族人群人类血小板特异性抗原HPA1-17基因多态性。方法采用PCR-SSP方法对长沙市血液中心618名汉族无偿献血者进行HPA1-17系统基因分型。结果长沙地区618名汉族无偿献血者HPA1a基因频率为99.3%,HPA2a基因频率为96.8%,HPA3a基因频率为58.7%,HPA4a基因频率为99.4%,HPA5a基因频率为98.9%,HPA6a基因频率为98.9%,HPA15a基因频率为53.6%。结论长沙地区汉族人群HPA1-17的基因检测填补了地方空白,为建立血小板库奠定了基础,也为临床提供同型血小板输注提供可能。     

探讨血小板输注中血小板抗原基因分型与配型的应用效果

目的探讨血小板输注中血小板抗原基因分型与配型的应用效果。方法选取我站2011年8月~2014年8月收集的262例无偿献血者和70例血小板输注患者的血小板,采用聚合酶链序列特异性引物技术对供血者和患者的HPA1-5系统进行等位基因分型,同时采集与患者ABO血型及HPA基因型相同的血小板制剂并加以固相凝集法配型,配型结果相合后给予输注。结果 70例需输注血小板患者经血小板基因配合后,相吻合的血小板有31例(吻合组),未配型者39例(对照组),其中吻合组血小板输注后CCI1h和CCI24h效果明显优于对照组,两组差异对比有意义(P<0.05)。结论在血小板输注中应用血小板抗原基因分型与配型可防止血小板免疫性抗体的产生及输注无效的发生,从而有效提高输血疗效和安全性,安全便捷,值得推广和应用。     

太原地区血小板库供者特征及应用评价

目的 建立本地区血小板库供者库,并基于以往献血频率、献血种类区分入库供者,探索提升血小板库应用效率的方法。方法 1)依据献血频率和献血种类对本中心2011～2020年已加入中华骨髓库的献血者筛选归类,分别命名为储备供者、希望供者和活跃供者,按照活跃供者选择条件从2020年所有机采献血人群中收集这类供者,扩充本地区血小板库。2)2020年共筛选出符合活跃供者条件的献血者739例(含已入中华骨髓库活跃供者),收集其静脉血样5 mL,采用HLA高分辨基因分型方法对其进行HLA-A和-B位点检测、Q-PCR基因分型方法进行HPA检测。3)统计2021年本中心3类供者分别提供配型相合血小板的数量。结果 1)构建了由以往不同捐献经历供者组成的太原地区血小板库,其中活跃供者739例、希望供者3840例、储备供者18 715例。通过卡方检验,发现这3类供者ABO血型构成比无差异;性别均男性多于女性。2)2021年,加入血小板库的活跃供者再次捐献血小板的平均量与一般人群常规捐献之比为14.4∶3.98。3)2021年为PTR患者供应的142份相容性血小板中,83.8%来自活跃供者入库后的再次捐献,希望供...     

血小板抗原基因分型及配型的研究与初步应用

目的 对患者进行血小板抗原基因分型及配型的研究，以探讨临床血小板输注的安全、有效性。方法 应用聚合酶链序列特异性引物技术（PCR－SSP），对南京地区55例患者HPA1－5系统等位基因进行分型，并为其进行血小板基因配型输注。结果 经血小板基因配型的吻合组血小板输注效果明显优于未经配型的对照组。结论 对患者进行血小板抗原基因分型及配型可提高血小板输注的安全、有效性。     

岳阳地区血小板捐献者HPA1～17,HLA-A和B基因多态性研究

目的 研究湖南省岳阳地区机采血小板捐献者人类血小板抗原（HPA） 1-17及人类白细胞抗原HLA-A和B基因分布及多态性.方法 分别采用PCR-SSP法和PCR-SSO法对200名岳阳地区机采血小板捐献者进行HPA1-17和HLA-A和B基因分型,计算基因频率、基因型频率,并与其他人群进行比较.结果 岳阳人群HPA1-17系统中,HPA7-14和HPA16-17的基因型均为aa型,不具有多态性;HPA1,2,4和5主要以aa型为主,aa基因型频率分别是0.970 0,0.900 0,0.985 0和0.980 0,未检出bb型;仅在HPA3,6和15中检出bb型,bb基因型频率分别是0.185 0,0.035 0和0.465 0;杂合度最高的是HPA15,其aa,ab和bb基因型频率分别是0.305 0,0.230 0和0.465 0,HPA3杂合度居次,其aa,ab和bb基因型频率分别是0.380 0,0.435 0和0.185 0.HLA-A位点检出12个等位基因,频率最高的3个是A＊11（0.3325）,A＊02（0.295 0）和A＊24（0.205 0）;HLA-B位点检出28个等位基因,频率最高的5个是B＊ 40（60）（0.177 5）,B＊ 46（0.142 5）,B＊ 13（0.100 0）,B＊51（0.082 5）和B＊ 15（75）（0.077 5）.结论 岳阳地区机采血小板捐献者HPA1-17和HLA-A,B基因多态性与南方汉族接近,但也呈现出自身特点,需建立该地HLA/HPA基因分型血小板供者库服务于临床.     

中山地区血小板供者HLA基因分型资料库的建立

目的 建立血小板供者HLA基因分型资料库,探讨HLA-A、B基因频率及单体型频率,为临床患者提供HLA匹配的血小板,解决血小板输注无效(PTR)患者的血小板输注.方法 采用聚合酶链反应-序列特异寡核苷酸探针杂交技术 (PCR-SSOP)对568名中山地区单采血小板捐献者进行HLA-I类(A、B位点)基因分型并形成数据库,根据HLA表型群体资料,使用最大数学预期值算法(EM)计算HLA-A、B单体型频率.结果 HLA-A位点共检出17种等位基因,HLA-B位点共检出29种等位基因,单体型数153种.结论 血小板供者HLA分型资料库的建立可以为PTR患者迅速寻找到HLA相合血小板,提高血小板输注效果.     

中国牡丹江地区献血人群HPA基因分布特征的研究及数据库的建立

本研究旨在探讨中国牡丹江地区献血人群HPA基因及其多态性分布特征,判断HPA抗原不配合比率,确定有临床意义的抗原系统,建立已知HPA基因型血小板献血者数据库。采用PCR-SSP方法对154名无血缘关系的献血者做HPA基因分型,计算基因频率与基因型频率,并与国内外不同人群进行比较。结果表明,154名健康、无血缘关系的献血者均表达出HPA-a基因中的1a-17a基因;仅表达HPA-b基因中的1b、2b、3b、5b、6b和15b,未表达HPA4b、7b-14b、16b和17b;在基因型中主要以aa纯合子表达为多,具有最高杂合度的为HPA15,其次为HPA3。HPA基因组合型有23种组合型,其中5种频率>10%,其余18种频率<8%,经χ2检验验证本地区HPA基因频率分布符合Hardy-Weinberg遗传定律。结论:本研究已确立牡丹江地区154人的HPA血型分布遗传特征,与其他地区和国家相比具有本地区人群特点,由此建立了牡丹江地区已知HPA基因型的血小板供者数据库,可为临床血小板输注无效者提供相匹配的供者,在临床上具有重要的免疫学意义。     

Establishment of platelet donor registry improves the treatment of platelet transfusion refractoriness in Guangzhou region of China

Platelet transfusion refractoriness (PTR) is the major complication of long‐term platelet supportive care. To improve the effectiveness of platelet transfusion therapy in PTR patients, we aimed to establish a platelet donor registry in our region (Guangzhou, China) by typing the human leukocyte antigen (HLA) and human platelet antigen (HPA). Blood donors (n = 864) from our population were genotyped for HLA‐A, HLA‐B and HPA systems by polymerase chain reaction amplification with sequence‐specific primer(PCR‐SSP) techniques. Using this cohort, we compared the results of platelet transfusions (matched vs. random) in 23 patients with PTR. Matched platelets were selected either by HLA antigen matching or by HLA antibody matching, as predicted by antibody specificity prediction (ASP) analysis. Significantly higher platelet recovery (PPR) values were obtained with HLA‐matched platelets in comparison with random platelets. No significant difference in PPR was observed between HLA matching and ASP methods. In two patients, platelet‐specific alloantibodies (alloabs) (anti‐HPA‐3b and anti‐HPA‐5b) were detected besides HLA class I alloabs. Transfusion with HLA‐ and HPA‐compatible platelets in both the patients resulted in significantly higher PPR when compared with HLA‐compatible platelet transfusion alone. In this study, we demonstrated that the establishment of an HLA‐ and HPA‐typed platelet aphaeresis donor registry is useful to improve the treatment outcome of PTR patients and to maintain a long‐term platelet transfusion strategy.     

河南汉族人群血小板抗原HPA1-16bw基因多态性研究

摘要：目的：研究河南地区汉族人群血小板抗原基因分布频率,建立地区性血小板抗原基因库,为血小板配合输注提供实验依据。 方法：用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）对160例无血缘关系的河南汉族体检健康者进行HPA1-16bw系统基因分型。 结果：HPA1-6和HPA-15基因频率分别为1a 0.987 5,1b 0.012 5; 2a 0.946 9,2b 0.053 1; 3a 0.590 6,3b 0.409 4; 4a 0.996 9,4b 0.003 1; 5a 0.990 6,5b 0.009 4; 6a 0.981 2,6b 0.018 8;15a 0.540 6,15b 0.459 4。 HPA7-14bw,16bw仅检测到a/a等位基因,基因频率均为1.000 0。经χ²检验各系统HPA符合Hardy-Weinberg平衡法则。HPA基因分布存在种族和地区差异。 结论:河南汉族人HPA-15 和HPA-3基因型杂合率最高。HPA基因分型有助于输注血小板时降低免疫性血小板减少症的发生概率。     

Establishment of an HPA-1- to -16-typed platelet donor registry in China

In order to determine gene frequencies of human platelet antigen (HPA) and establish a panel of accredited HPA-1a, -2a, -4a, -5a and -6a-negative donors as well as an HPA-typed platelet donor registry, a total of 1000 Chinese donors of Han nationality (500 from north China and 500 from south China) were typed for HPA-1 through -16 using a DNA-based polymerase chain reaction with sequence-specific primers genotyping method. The gene frequencies of HPA-1b, -2b, -3b, -4b, -5b, -6bw, -10bw and -15b were 0.0060, 0.0485, 0.4055, 0.0045, 0.0140, 0.0135, 0.0005 and 0.4680, respectively. The HPA-7bw, -8bw, -9bw, -11bw, -12bw, -13bw, -14bw and -16bw alleles were not found. The HPA-2b and -5b homozygous donors were detected at low frequencies. The HPA mismatch probabilities potentially leading to alloimmunization in random platelet transfusion vary with a region from 0.1% to 37% depending on the distribution patterns of common and less common alleles in each system. This study provides a useful HPA-typed plateletpheresis donor registry in China and could improve platelet antibody detection and HPA-matched platelet transfusion in alloimmune thrombocytopenic patients.     

Pooled platelet concentrates provide a small benefit over single-donor platelets for patients with platelet refractoriness of any etiology

BackgroundAt our institution, patients with platelet refractoriness (of any etiology) are sometimes switched from apheresis platelets to pooled platelets before human leukocyte antigen (HLA)-matched units become available.Study design and methodsSeven patients were analyzed. Platelet counts were available from 57 single-unit transfusions (26 pooled, 31 apheresis). A mixed linear effects model was used and significance was determined using a likelihood ratio test.ResultsWhen analyzed as the only fixed effect in the model, the use of pooled versus single-donor units and time from transfusion to post-transfusion blood sampling each showed a significant effect on platelet count increments. A mixed linear effect model including both factors showed that transfusing a pooled unit correlated with a 4500±2000/µL greater platelet count increment compared with a single-donor unit, and an increase in time from transfusion to post-transfusion blood sampling lowered the platelet count increment by 300±100/µL per hour.ConclusionA small but potentially clinically relevant benefit was observed in transfusing pooled random-donor platelets compared with single-donor units for patients with platelet refractoriness (of any etiology).     

广西地区壮族 瑶族人群人类血小板抗原基因的多态性分析

目的研究广西地区壮族、瑶族人群人类血小板抗原(HPA)1～17bw基因的表达差异。方法采用序列特异引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法对广西地区100例壮族和100例瑶族健康个体进行HPA 1～17bw系统基因分型,比较壮族和瑶族的HPA基因频率。结果等位基因a是广西地区壮族、瑶族健康个体主要的HPA1～17bw基因型别。在H-W平衡检验中,瑶族健康人群HPA1～17bw基因多态性中除HPA1、2、6外,其他均符合H-W群体遗传平衡法则(P>0.05);壮族健康个体中,所有HPA各系统符合H-W群体遗传平衡法则(P>0.05)。瑶族和壮族HPA系统抗原不配合率分析中,HPA3和HPA15不配合率最高,皆超过30%。比较两个民族的基因频率,发现瑶族的HPA-3和HPA-15的基因多态性明显低于壮族(χ2=12.242,P=0.002;χ2=6.209,P=0.045)。结论广西地区壮族和瑶族HPA基因多态性分布存在明显的种族差异,特别是HPA-3和HPA-15系统杂合度最高,抗原分布不配合比例相对高,在临床配合性血小板输注中必须加以重视。     

达峰时间在重症患者血小板功能评估中的临床价值

目的 采用达峰时间对重症患者血小板功能进行评估。方法 收集2018年5月至2021年8月解放军第九○八医院重症医学科治疗的79例重症患者临床资料,依据入科时患者的血小板计数分为血小板减少组和血小板未减少组,并选取同期体检的30例健康者作为对照组,比较凝血与血小板功能分析仪和血栓弹力图(TEG)相关指标。结果 与血小板未减少组相比,血小板减少组患者的凝血激活时间(ACT)、达峰时间(TP)明显延长,凝血速率(CR)、血小板功能指数(PF)显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。随机森林显示,TP和血块最大强度(MA)是重症患者血小板功能障碍的主要风险因素(P<0.01)。相关性分析显示,TP与血小板计数(r=-0.52,P<0.05)和MA(r=-0.48,P<0.05)均呈负相关。ROC曲线分析显示,ROC曲线下面积为0.88(95%CI:0.776～0.991),当TP取564.0 s时,敏感性为86%,特异性为91%。结论 达峰时间能够准确判断重症患者的血小板功能。     

基于NCBI数据库的皮氏不动杆菌分子分型及bla0XA基因分析

摘要:目的分析全球皮氏不动杆菌 的分布特点、序列分型(ST)及blaox基因分布,为感染防控及临床用药提供参考。方法采用Aspera软件从NCBI批量下载所有皮氏不动杆菌基因组序列(截止日期为2023年11月30日),并使用perl脚本从下载的gbk文件中批量提取菌株元信息。使用自制的Perl程序从每个皮氏不动杆菌基因组序列文件中提取该基因的核苷酸编码序列作为分析数据库。从网站下载不动杆菌属7个管家基因的等位基因序列作为查询数据库进行BLASTN比较分析,确定每个基因组的ST。从NCBI病原细菌耐药基因数据库下载耐药基因blaoxa 的核苷酸序列,采用自我编写的AMRG软件进行blaoxa基因的分布分析。结果共获取 305株皮氏不动杆菌的基因组,主要分离自1990年至2020年,分离率呈逐年增长趋势,其中2015年分离率最高。美国、中国、德国的分离率位居前三位,分别为29.5%(90株)、15.7%(48株)、13.4%(41株)。180株(59.0%)标本来源为人类,其中,痰液[42株(23.3%)]、血液[27株(15.0%)]和皮肤软组织[ 15株(8.3%)]位居前三位。305 株皮氏不动杆菌共鉴定出79种ST,其中,ST93( 14.4%)、ST64(12.1%)和ST63( 11.8%)占比较高。美国、中国、德国分别以ST64、ST63、ST93流行分布为主。305 株皮氏不动杆菌中除6株不携带blaoxA 基因外,其余299株菌共携带31种blaoxA .变异体,其中252个blaox基因具有碳青霉烯酶水解活性,另有146株携带bax.00基因。结论皮氏不动杆菌 全球流行分布存在地域差异,D型碳青霉烯酶基因blaoxx的高度流行提示其潜在多药耐药趋势,值得临床监测。