龙血通络胶囊对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:本文探讨过氧化氢(H_2O_2)诱导PC12细胞损伤后,龙血通络胶囊的神经保护作用及其潜在作用机制。方法:以500μmol·L~(-1)H_2O_2构建PC12细胞损伤模型,实验分为空白组,模型组(H_2O_2,500μmol·L~(-1)),龙血通络胶囊组(LTC,1,2,4 mg·L~(-1))。通过细胞增殖毒性检测(CCK-8),胞内活性氧(ROS)水平,线粒体膜电位水平(JC-1),细胞凋亡率以及蛋白免疫印迹法(Western blot)评价龙血通络胶囊对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的神经保护作用。结果:与空白组比较,模型组的细胞存活率显著降低(P0.01),ROS水平显著上升(P0.01),线粒体膜电位水平下降,细胞凋亡率显著升高(P0.01),剪切的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)水平显著上升(P0.01)。与模型组比较,LTC组(1,2,4 mg·L~(-1))能浓度依赖性升高细胞的存活率(P0.01),降低ROS水平(P0.05),维持线粒体膜电位水平,降低细胞的凋亡水平(P0.01),并显著降低PARP蛋白的剪切水平(P0.01)。结论:龙血通络胶囊对H_2O_2诱导的PC12细胞损伤具有显著的保护作用,其作用机制可能是通过抑制胞内氧化应激,维持线粒体功能,促进DNA修复等途径进而抑制神经细胞凋亡。     

基于指纹图谱分析和多成分同时定量的龙血通络胶囊质量评价研究

目的建立龙血通络胶囊指纹图谱,并进行多成分定量分析,为评价龙血通络胶囊提供依据。方法采用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,柱温35℃,检测波长为280、325 nm。测定10批次龙血通络胶囊,建立指纹图谱,同时采用Q-TOF/MS对指纹图谱中共有峰进行指认及对部分特征峰进行定量分析。结果得到分离度、重复性均较好的龙血通络胶囊指纹图谱,标示出18个共有峰,相似度在0.92以上;采用LC-Q-TOF/MS方法指认了16个共有峰,其中7个共有峰经对照品比对,分别为白藜芦醇、7,4′-二羟基黄酮、龙血素A、龙血素B、紫檀茋、2,6-二甲氧基-4,4′-二羟基二氢查耳酮和2-甲氧基-4,4′-二羟基二氢查耳酮,并对这7个成分进行了定量分析,平均回收率在98.47%~101.93%(RSD均小于2.27%)。结论同时对龙血通络胶囊指纹图谱和7个指标成分进行分析,方法快速、简便、准确,可作为全面评价该制剂质量的有效方法之一。     

基于代谢组学分析注射用丹参多酚酸治疗缺血性脑卒中作用机制

[目的] 利用代谢组学方法探究注射用丹参多酚酸治疗缺血性脑卒中恢复期的作用机制。[方法] 采用超高效液相色谱质谱联用仪（UHPLC-Q-Orbitrap MS）对39例符合相应纳入、排除标准的缺血性脑卒中恢复期患者的血液样本进行代谢组学检测,通过无监督的主成分分析（PCA）、有监督模式的正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）对患者用药治疗前后的血浆进行分析。[结果] 代谢组学共筛选出42个与治疗疾病相关的生物标记物,涉及22种代谢通路,其中磷脂生物合成、磷脂酰胆碱生物合成、卟啉代谢、组氨酸代谢、类固醇生成、嘧啶代谢为变化最显著的6条代谢通路。[结论] 通过代谢组学方法证实,注射用丹参多酚酸可能通过调节磷脂代谢、氨基酸代谢、核酸代谢及能量代谢,进而发挥治疗缺血性脑卒中恢复期的作用。表明代谢组学对指导中医临床及机制研究方面的可行性。     

银杏二萜内酯葡胺注射液对缺血性脑卒中小鼠黑质脑区的调控机制研究

目的 研究银杏二萜内酯葡胺注射液（Diterpene Ginkgolides Meglumine Injection,DGMI）在C57BL/6J小鼠大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型黑质脑区中抗脑缺血再灌注损伤的潜在作用通路。方法 C57BL/6J小鼠按随机数字表分为假手术组、模型组、DGMI（25 mg/kg）组及银杏叶提取物761（Ginkgo biloba extract-761,EGb-761,100 mg/kg）组,构建MCAO模型,通过测定各组小鼠术后24 h的改良版神经功能缺损评分和脑梗死率,评价DGMI相较于EGb-761治疗缺血性脑卒中的疗效。进一步利用Illumina二代测序平台对各组小鼠脑组织黑质样本进行高通量转录组测序,并结合基因集富集分析（gene set enrichment analysis,GSEA）、差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）的基因本体（gene ontology,GO）功能和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析等生物信息学分析方法,评价DGMI抗脑缺血再灌注损伤作用及潜在作用机制。采用qRT-PCR验证转录组测序中关键基因表达。结果 与假手术组比较,模型组改良版神经功能缺损评分和脑梗死率显著升高（P＜0.001）;与模型组比较,DGMI组治疗效果与EGb-761接近,可显著改善改良版神经功能缺损评分和脑梗死率（P＜0.01、0.001）。转录组的数据降维分析显示,模型组与假手术组样本显著分离。GSEA结果显示,模型组与假手术组对比显著富集35条通路,DGMI组相较于模型组可有效逆转7条通路。与假手术组相比,模型组共筛选出88个DEGs,将其与他人发现的大小鼠MCAO模型组共同差异基因比较（15个）,有10个基因相同。模型组GO功能分析主要富集在炎症和细胞趋化等过程,KEGG通路分析主要富集在细胞因子互作、肿瘤坏死因子等信号通路。与模型组相比,DGMI组DEGs的GO功能分析主要富集在神经信号传导过程,KEGG通路分析主要富集在多巴胺能信号通路、神经活性受体配体作用等。qRT-PCR验证与转录组结果基本一致。结论 DGMI可有效抵抗脑缺血再灌注损伤,发挥作用的关键基因及信号通路主要集中于抗炎、调节神经突触等生物学过程,可能通过改善多巴胺能通路治疗损伤。     

芪龙胶囊对大鼠脑缺血的保护作用

目的:研究观察中药芪龙胶囊对大鼠脑缺血的保护作用.方法:采用光化学诱导局灶性脑梗塞模型(PITCI)和三氯化铁所致大鼠单侧大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,观察了芪龙胶囊对缺血性中风的保护作用;采用双侧颈总动脉结扎模型研究药物对脑毛细血管通透性的影响.结果:芪龙胶囊0.6g·kg-1,0.3g·kg-1,0.15g·kg-1可明显减轻光化学诱导局灶性脑梗塞模型大鼠神经症状,减少脑梗塞范围(P＜0.05,P＜0.01);0.6g·kg-1,0.3g·kg-1可明显减轻该模型大鼠脑含水量变化率(P＜0.05,P＜0.01).芪龙胶囊0.6g·kg-1,0.3g·kg-1可明显减轻MCAO大鼠神经症状,减少脑梗塞范围(P＜0.05,P＜0.01).该药还能显著降低双侧颈总动脉结扎大鼠血脑屏障毛细血管通透性,减少模型大鼠脑组织EB含量(P＜0.05,P＜0.01).结论:芪龙胶囊具有很好的脑保护作用.     

参附注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究

[目的]探讨参附注射液对局灶性脑缺血大鼠Na-K-Cl协同转运蛋白1(NKCC1)的影响。[方法]雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham),缺血模型组(Ischemia)和缺血后给予参附注射液治疗组(SFI)。利用线栓法制作脑缺血/再灌注模型,再灌注3 h及24 h后进行神经功能评分,再灌注24 h后2,3,5氯化三苯基四氮唑蓝(TTC)法比较脑梗死面积,免疫组织化学及蛋白印迹法检测NKCC1的表达。[结果]参附注射液治疗组的脑梗死面积、神经功能缺损程度均比对照组明显降低(P0.05)。和对照组相比,SFI组的NKCC1表达明显低于Ischemia组(P0.05)。[结论]参附注射液对大鼠脑缺血模型的神经保护作用可能与抑制NKCC1相关。     

益气通络胶囊对缺血性中风气虚血瘀型患者ET、NO影响的临床研究

研究益气通络胶囊对缺血性中风气虚血淤型患者ET、NO的影响。60例患者随机分为治疗组和对照组各30例。治疗组给予中西医结合治疗,对照组仅给予西医治疗,治疗组疗效优于对照组。研究表明益气通络胶囊能显著改善各种临床症状,值得临床推广应用。     

藏成药如意珍宝丸对缺血性脑卒中大鼠亚急性期的干预作用

缺血性脑卒中是全球导致死亡及长期致残的主要原因,是由于脑部供血障碍引起脑组织相应区域缺血、低氧,致使脑血管功能障碍出现一系列生化代谢失常、生理功能丧失的疾病,其高致残率给社会、政府和家庭带来了巨大的负担,但目前尚缺少理想的治疗药物。该文在建立大鼠右侧大脑中动脉阻塞模型基础上,从减轻神经元尼氏小体损伤、降低脑水肿及炎症反应、阻止细胞凋亡等方面着手,观察藏成药如意珍宝丸多途径、多方位的干预作用,为探讨该药对缺血性脑卒中的疗效机制奠定重要研究基础。     

基于GC-TOF-MS结合代谢组学分析阳虚证缺血性脑卒中生物标志物的研究

目的:运用气相色谱-飞行时间质谱联用技术(GC-TOF-MS)结合代谢组学方法探究缺血性脑卒中阳虚证患者与健康平和质人群血清中的代谢产物差异,总结缺血性卒中阳虚证相关生物标志物特点,从而进一步揭示疾病的发生机制.方法:将10例缺血性脑卒中阳虚证患者作为观察组,10例中医体质为平和质的健康者作为对照组.应用GC-TOF-...     

芪蛭胶囊对缺血性中风大鼠PKC-MARCKS信号通路相关蛋白表达的影响

目的:研究芪蛭胶囊对缺血性中风大鼠PKC-MARCKS信号通路相关蛋白表达干预作用.方法:制备SD大鼠大脑中动脉闭塞模型,随机分为假手术组、模型组、中药组、西药组,缺血2h后行再灌注,除假手术组外,其余3组分为4个亚组,即IR6h、IR24h、IR72h、IR7d组.对各组进行神经功能缺损评分、运用免疫组化方法检测大鼠...     

化痰通络汤辨证加减治疗中老年急性缺血性脑卒中(风痰瘀阻证)的疗效观察

目的:研究化痰通络汤辨证加减治疗中老年急性缺血性脑卒中(风痰瘀阻证)的疗效.方法:筛选我院收治的114例中老年急性缺血性脑卒中(风痰瘀阻证)患者,按随机数字表电脑抽取法分组,分为各为57例的两组,两组均进行西医常规治疗,观察组在此基础上进行化痰通络汤辨证加减治疗,对治疗前后两组的中医证候积分、神经功能受损程度及炎性因子...     

降脂通络软胶囊对膜性肾病大鼠肾保护作用及对肾组织Bcl-2和Bad表达的影响

目的观察降脂通络软胶囊对膜性肾病大鼠模型血液生化指标及对肾组织Bcl-2、Bad表达的影响,探讨降脂通络软胶囊对膜性肾病大鼠的肾保护作用和可能机制。方法将60只SD大鼠随机选取10只为对照组,其余50只进行造模,造模成功后将大鼠随机分为模型组、贝那普利组和降脂通络软胶囊(25、50、100 mg/kg)组,每组各10只,各组按相应剂量给药,在给药的第4周末检测大鼠24 h尿蛋白定量(UTP)及血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平;采用电镜、免疫荧光观察肾脏病理形态学变化,免疫组化及Real-time PCR法检测各组大鼠肾组织Bcl-2、Bad的表达情况。结果与模型组比较,各给药组UTP、TC、TG均有所降低(P0.05),各给药组TP、ALB均有所升高(P0.05)。降脂通络软胶囊50、100 mg/kg组与贝那普利组UTP、TC、TG、TP、ALB比较差异不显著(P0.05),效果优于降脂通络软胶囊25 mg/kg组(P0.05)。与对照组比较,各给药组及模型组BUN、Scr均未见明显变化,差异不显著(P0.05)。与模型组相比,各给药组大鼠肾组织中Bcl-2 mRNA的表达较模型组明显上调,Bad mRNA表达下调,差异显著(P0.05);降脂通络软胶囊50、100 mg/kg组与贝那普利组Bcl-2、Bad比较差异不显著(P0.05),效果优于降脂通络软胶囊25 mg/kg组(P0.05)。结论降脂通络软胶囊对膜性肾病大鼠的肾保护作用可能与其上调肾组织中Bcl-2 mRNA表达,下调Bad mRNA表达,抑制足细胞凋亡、修复受损足细胞有关。     

绞股蓝总皂苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察绞股蓝总皂苷对大鼠急性局灶性脑缺血再灌损伤NO的保护作用。方法 采用大脑中动脉内栓线阻断不（MCAO）造成大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，测定脑亚细胞器内NO含量的变化并观察病理组织学变化。脑缺血再灌注后脑亚细胞器内NO含量显著升高，海马CA1区存活的锥体细胞数显著降低。绞股蓝总皂苷能显著降低脑亚细胞器内NO含量，升高海马CA1区存活的锥体细胞数。结论 论股蓝总皂苷通过降低NO的毒性，发挥保护脑组织，减轻缺血再灌注损伤。     

通腑法开通玄府对MCAO大鼠脑AQP4mRNA表达的影响

目的研究通腑醒神胶囊（简称TFXSJN）通腑法开通玄府对大鼠大脑中动脉阻塞（Middle cerebral artery occlusion,简称MCAO）模型脑组织水通道蛋白4（Aqμaporin-4,简称AQP-4）mRNA表达的影响。方法采用线栓法制作大鼠MCAO模型,2h后拔线造成缺血再灌注损伤。观察拔线后12h、1d、2d、3d及7d不同时间点大鼠神经行为评分、脑组织AQP-4mRNA的表达水平,以及各组大鼠在1d、3d及7d时脑含水量变化。结果TFXSJN治疗后能明显减轻大鼠在1d、2d、3d及7d时的神经功能评分,与模型组比较P〈0.05或P〈0.01;造模后,TFXSJN组及模型组大鼠脑含水量在1d及3d时均明显高于假手术组及正常组,具有显著差异（P〈0.01）,以3d时的脑含水量最高,7d时4组大鼠的脑含水量无显著差异（P〉0.05）;与模型组比较,TFXSJN组3d时脑含水量明显降低（P〈0.01）;TFXSJN组及模型组大鼠脑组织损伤侧AQP-4mRNA的表达在12h时已经明显升高,与健侧、假手术及正常组比较均有显著差异（P〈0.05）;模型组在3d时达高峰,TFXSJN组在2d时达高峰,3d时已有所下降,与模型组损伤侧比较有显著差异（P〈0.05）,但仍高于健侧（P〈0.05）。7d时两组损伤侧的AQP-4mRNA表达水平基本恢复正常,与健侧、假手术及正常组比较无显著差异（P〉0.05）。假手术组在各时点内其损伤侧AQP-4mRNA表达水平与健侧及正常组比较均无显著差异（P〉0.05）。结论急性脑缺血再灌注损伤时存在AQP-4mRNA基因表达的上调。12h时即明显升高,3d时达高峰,7d时基本恢复正常。AQP-4mRNA表达的上调可能与缺血性脑水肿的形成密切相关,而TFXSJN通腑法开通玄府法能够调节缺血再灌注损伤后AQP-4mRNA表达的失衡状态,减轻缺血后脑水肿,其调节AQP-4mRNA基因的异常表达可能是通腑法开通玄府治疗缺血性中风的分子机制之一。因此推测玄府与神经细胞膜上通道蛋白（如AQP-4等）之间可能存在共同的实质内涵。     

苦碟子注射液对缺血性脑卒中火毒证大鼠作用的差异蛋白质研究

探讨中药苦碟子注射液对缺血性脑卒中火毒证大鼠脑组织蛋白质表达的调控作用。采用角叉菜胶复合大脑中动脉阻塞（MCAO）方法制备缺血性脑卒中火毒证大鼠模型,按随机数字表法将SD大鼠分为药物组、模型组和假手术组。采用TTC染色法和HE染色法对脑组织进行大体观察和病理形态学观察;利用双向凝胶电泳技术寻找缺血性脑卒中火毒证大鼠和假手术大鼠之间与疾病相关的差异表达蛋白,并观察应用苦碟子注射液连续干预72 h后,对差异蛋白表达水平的影响。结果显示,缺血性脑卒中火毒证大鼠与假手术大鼠间有差异表达蛋白,连续给予具有清热解毒通络作用的苦碟子注射液能够减轻脑组织缺血形态学改变,调节部分差异蛋白表达水平。     

“白脉散”抗脑缺血ECG对实验性MCAO/R模型神经保护作用的研究

目的研究民族大复方"白脉散"中抗脑缺血有效成分组(ECG)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及相关机制。方法 60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、银杏叶提取物组、"白脉散"ECG高、中、低剂量组,采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,缺血2 h再灌注,再灌注24 h后进行神经功能评分和提高躯体摆动实验(EBST),然后连续灌胃给药7 d,1次/d。利用常规HE染色法观察病灶皮层细胞的病理变化,TTC染色法观察脑梗死体积,并检测病灶区脑匀浆上清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、还原型谷胱甘肽含量(GSH)、一氧化氮合酶(NOS)活性。结果与模型组比较,"白脉散"ECG高、中、低3个剂量组神经功能评分和对侧旋转次数水平显著改善(P<0.05、P<0.01或P<0.001);病理学研究显示病灶处皮质神经元肿胀坏死有所减轻;TTC染色结果显示脑梗塞体积显著减少;脑匀浆上清SOD活性和GSH含量显著升高,MDA含量显著降低(P<0.01或P<0.001),总NOS(T-NOS)、诱导型NOS(iNOS)、构建型NOS(cNOS)活性均显著降低(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。结论 "白脉散"ECG可保护MCAO/R模型大鼠神经功能,其机制可能与"白脉散"抗脑缺血ECG的清除自由基,增强机体抗氧化能力,减轻脑缺血再灌注所致的氧化性损伤,减轻脑梗塞体积及抑制NOS尤其是iNOS介导的NO生成有关,为在"有效成分组"理论指导下攻克民族大复方物质基础研究难题提供依据。     

中药治疗缺血性脑卒中致多器官损伤的研究进展

缺血性脑卒中(cerebral ischemic stroke,CIS)可引发包括心、肝、脾、肺、肾在内的多个器官损伤,该类疾病是由多个病理环节组成,具有复杂的发病机制及高发病率、高致残率和高死亡率的特点,严重者可形成多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndromes,MOD...     

基于分子对接技术虚拟筛选葛根治疗缺血性脑卒中的物质基础研究

目的在分子对接技术的基础上研究葛根治疗缺血性脑卒中的作用机制。方法采用分子对接技术将筛选出的葛根的活性分子与选取的21种缺血性脑卒中关键靶点进行对接,通过Cytoscape 3.1.1软件构建多成分-蛋白靶点网络模型。结果通过分子对接技术虚拟筛选,葛根中有28个活性小分子(比前期研究增加12个),其中有11种成分与10个或10个以上蛋白靶点有比较强烈的相互作用。结论分子对接技术有助于寻找葛根中治疗缺血性脑卒中的活性成分,同时也给中药复方的多成分、多靶点研究提供新的参考。