C反应蛋白对人脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2的影响

目的通过观察C反应蛋白对人脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2的影响,探讨C反应蛋白导致动脉粥样硬化斑块不稳定的可能机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,给予不同浓度的人重组C反应蛋白及普伐他汀干预,分为空白对照组、C反应蛋白5mg/L组、C反应蛋白20mg/L组、C反应蛋白100mg/L组及C反应蛋白20mg/L 普伐他汀组,培养24h后采用Westernblot及逆转录聚合酶链反应法在蛋白及mRNA水平观察各组细胞表达基质金属蛋白酶2的差异。结果C反应蛋白5mg/L组、20mg/L组及100mg/L组基质金属蛋白酶2蛋白条带的相对灰度值逐渐增高,呈浓度依赖性;而普伐他汀干预组相对灰度值明显低于C反应蛋白20mg/L组(P<0.05)。随着C反应蛋白干预浓度的增加,基质金属蛋白酶2mRNA的表达量也相应增加,呈浓度依赖性,普伐他汀可以减轻这种作用。结论C反应蛋白干预体外培养的人脐静脉内皮细胞后,可上调基质金属蛋白酶2的表达,因此C反应蛋白在导致动脉粥样硬化斑块不稳定方面有直接致炎症作用及炎症放大作用。     

丹红、C反应蛋白与基质金属蛋白酶1表达的关系

目的探讨中药丹红、C反应蛋白与THP-1源性巨噬细胞基质金属蛋白酶1表达的关系。方法采用佛波醇将THP-1细胞诱导分化成巨噬细胞后,用酶联免疫吸附法测定细胞基质金属蛋白酶1蛋白表达峰值时间。再将其分为对照组、C反应蛋白干预组、丹红注射液干预组。酶联免疫吸附法测定不同组别细胞培养上清液中基质金属蛋白酶1蛋白浓度,再用逆转录聚合酶链反应测定细胞不同时间和C反应蛋白干预组基质金属蛋白酶1的mRNA表达。并将基质金属蛋白酶1蛋白浓度和mRNA表达进行比较分析。结果显微镜下观察到细胞株THP-1在佛波醇诱导下转变为巨噬细胞,在24 h细胞的上清液基质金属蛋白酶1蛋白和mRNA表达到峰值。与对照组相比,C反应蛋白干预组中基质金属蛋白酶1蛋白和mRNA表达升高,5、10、25、50 mg/L C反应蛋白干预时基质金属蛋白酶1表达逐渐增高(P<0.05),呈剂量依赖性。与对照组相比,丹红注射液干预组中基质金属蛋白酶1的表达降低,0、200、400、800、1 600、3 200 mL/L丹红干预时基质金属蛋白酶1的表达减低(P<0.05),呈节段性依赖性递减,且0 mg/L和50 mg/L C反应蛋白干预下两组干预基质金属蛋白酶1表达无差异(P>0.05)。结论 THP-1细胞分化成巨噬细胞后,在24 h基质金属蛋白酶1蛋白和mRNA表达最高,C反应蛋白能促进THP-1源性巨噬细胞表达基质金属蛋白酶1,丹红能抑制基质金属蛋白酶1分泌,在有C反应蛋白干预基质金属蛋白酶1表达无显著差别。     

吡格列酮对老年急性心肌梗死伴2型糖尿病患者血清基质金属蛋白酶9的影响

目的探讨老年2型糖尿病患者口服吡格列酮对发生急性心肌梗死时血清基质金属蛋白酶9和C反应蛋白浓度的影响。方法选择合并2型糖尿病的老年急性心肌梗死患者37例,按发病前有无口服吡格列酮分为吡格列酮组(17例)和急性心肌梗死组(20例),另选择老年健康体检者23例作为对照组,抽血测定三组血清基质金属蛋白酶9和C反应蛋白的浓度,并进行比较。结果与对照组相比,急性心肌梗死组血清基质金属蛋白酶9(396.5±67.3μg/L比290.8±75.5μg/L)和C反应蛋白浓度(8.73±2.59 mg/L比3.21±1.11 mg/L)明显升高,吡格列酮可降低血清基质金属蛋白酶9浓度(339.2±79.8μg/L)和C反应蛋白浓度(6.33±2.25 mg/L)。结论吡格列酮可降低老年急性心肌梗死患者血清基质金属蛋白酶9和C反应蛋白水平,提示吡格列酮在改善胰岛素敏感性之外还对心血管系统有益。     

C反应蛋白直接刺激人单核细胞肿瘤坏死因子α与白细胞介素6的表达

目的　比较急性冠状动脉综合征患者与健康人外周血单核细胞对一定浓度的C反应蛋白或细菌脂多糖刺激的炎症反应,并观察普伐他汀的干预效应。方法　采集并培养急性冠状动脉综合征患者(急性冠状动脉综合征组,n =15 )和健康志愿者(健康组,n =15 )的外周血单核细胞,分别用C反应蛋白(终浓度为2 0mg/L)或细菌脂多糖(终浓度10 μg/L)直接刺激2 4h。或用不同浓度(1、5和10 μmol/L)的普伐他汀预先孵育细胞2h ,再用C反应蛋白刺激。采用酶联免疫吸附试验法检测培养上清液中的肿瘤坏死因子α和白细胞介素6水平。结果　健康组受C反应蛋白刺激后肿瘤坏死因子α和白细胞介素6表达增加,分别为5 5 8±15 2ng/L和987±10 2ng/L ;受细菌脂多糖刺激后肿瘤坏死因子α和白细胞介素6增加显著,分别为10 5 4±371ng/L和185 4±4 6 7ng/L。急性冠状动脉综合征组受C反应蛋白刺激后肿瘤坏死因子α和白细胞介素6表达水平分别为15 5 4±784ng/L和312 9±333ng/L ;受细菌脂多糖刺激后分别为186 5±75 3ng/L和32 16±70 3ng/L。急性冠状动脉综合征组在1、5和10 μmol/L普伐他汀干预后,肿瘤坏死因子α表达分别下降14 %、36 %和4 9% ;白细胞介素6表达分别下降18%、2 6 %和36 % ,各亚组与C反应蛋白单独刺激组比较均有显著差异。健康组在普伐     

血清高敏C反应蛋白浓度与高血压病的相关性研究

目的　探讨血清高敏C 反应蛋白浓度与高血压病的关系。方法　对开滦集团公司2 2 0 9名离休职工健康查体 ,检测血清高敏C 反应蛋白浓度及其他生化指标 ,比较高血压组和正常血压组及不同血压水平组间血清高敏C 反应蛋白浓度的差异。结果　 2 2 0 9人中符合研究目的且资料完整的共计 2 16 9人 ,其中确诊高血压病患者 12 0 5例。高血压组、正常血压组血清高敏C 反应蛋白浓度分别为 (1 97± 1 84 )mg/L和 (1 0 8± 1 2 4 )mg/L(P <0 0 0 1)。收缩压、舒张压水平随血清高敏C 反应蛋白浓度增加而增高 (P <0 0 0 1)。非吸烟组、糖尿病组、超重及肥胖组血清高敏C 反应蛋白浓度分别为 (1 87± 1 4 3)mg/L、(2 0 9± 1 85 )mg/L和 (1 5 8± 1 6 1)mg/L ,均高于吸烟组、非糖尿病组、非超重及肥胖组的 (1 33± 1 10 )mg/L、(1 2 3± 1 4 0 )mg/L、(0 82± 1 0 6 )mg/L (P <0 0 0 1)。结论　血清高敏C 反应蛋白浓度与高血压病相关 ,炎症反应可能参与了高血压病的发生。     

C反应蛋白诱导外周血内皮祖细胞衰老及非诺贝特的保护作用

目的研究非诺贝特对C反应蛋白诱导的外周血内皮祖细胞衰老的影响及可能机制。方法随机将分离培养的内皮祖细胞分为4组:①对照组;②C反应蛋白各浓度组(1.0、2.5、5.0 mg/L);③C反应蛋白(5.0 mg/L)+非诺贝特(10.0μmol/L)组;④非诺贝特组(10.0μmol/L)。加入不同浓度的C反应蛋白干预,或预先加入非诺贝特作用4 h,再加入5 mg/L C反应蛋白,培养7天后行SA-β-半乳糖苷酶染色,检测细胞衰老并计数每组衰老细胞数。逆转录-聚合酶链反应检测人端粒酶逆转录酶mRNA表达。免疫印迹杂交法半定量测定内皮型一氧化氮合酶蛋白表达。结果 (1)不同浓度的C反应蛋白与内皮祖细胞培养后,C反应蛋白促进内皮祖细胞的衰老,且C反应蛋白对内皮祖细胞衰老的影响随着C反应蛋白浓度的增加而增加,5 mg/L C反应蛋白组对内皮祖细胞衰老的影响最显著(P<0.01)。加入10μmol/L非诺贝特后能减少C反应蛋白诱导的衰老细胞数量(P<0.01)。(2)C反应蛋白作用内皮祖细胞后人端粒酶逆转录酶mRNA表达随着C反应蛋白作用浓度的增加而下降,加入非诺贝特10μmol/L后可以明显逆转C反应蛋白诱导的人端粒酶逆转录酶mRNA表达下调(P<0.01)。(3)C反应蛋白抑制内皮型一氧化氮合酶蛋白表达,但在加入10μmol/L非诺贝特后能明显上调内皮型一氧化氮合酶蛋白表达(P<0.01)。结论 (1)C反应蛋白削弱内皮祖细胞的内皮型一氧化氮合酶表达,引起人端粒酶逆转录酶的逆转录下降,从而使端粒酶活性下降,最后加速内皮祖细胞的衰老,从而影响内皮祖细胞的功能。(2)非诺贝特活化人端粒酶逆转录酶,抑制C反应蛋白诱导的细胞衰老,可能与内皮型一氧化氮合酶表达上调有关,从而起到保护内皮祖细胞的作用。     

过氧化体增殖物激活型受体α/γ激动剂对代谢综合征患者高敏C反应蛋白和基质金属蛋白酶9的影响

目的了解过氧化体增殖物型激活受体α/γ激动剂单用与联用对代谢综合征患者高敏C反应蛋白和基质金属蛋白酶9的影响。方法 256例代谢综合征患者随机分为基础治疗组、非诺贝特组、吡格列酮组、非诺贝特+吡格列酮组。所有患者进行生活方式干预及应用相应药物。在控制血压的基础上,基础治疗组加服安慰剂;非诺贝特组加服非诺贝特0.2 g,每日1次,睡前服;吡格列酮组加服吡格列酮15 mg,每日1次;非诺贝特+吡格列酮组按相同剂量加服上述2种药物。共干预24周。干预前后测定所有患者高敏C反应蛋白和基质金属蛋白酶9的浓度。结果干预前后各组的血清高敏C反应蛋白分别为:非诺贝特组6.32±1.65 mg/L和3.52±1.98 mg/L,吡格列酮组5.85±1.59 mg/L和3.33±1.16 mg/L,非诺贝特+吡格列酮组6.49±1.34 mg/L和2.47±0.91 mg/L;干预前后各组的基质金属蛋白酶9的浓度分别为:非诺贝特组179.3±54.9μg和L/144.9±30.8μg/L,吡格列酮组188.7±62.4μg/L和146.9±27.8μg/L,非诺贝特+吡格列酮组177.5±58.7μg/L和128.8±34.8μ...     

氧化型低密度脂蛋白对人血单核细胞基质金属蛋白酶表达及活性的影响

探讨氧化修饰低密度脂蛋白对人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶的表达及其活性的影响。采用体外培养人单核细胞源巨噬细胞，分别应用逆转录聚合酶链式反应和蛋白印迹检测基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9基因和蛋白表达，酶谱法检测基质金属蛋白酶活性。结果发现，不同浓度(10、20、40mg/L)氧化修饰低密度脂蛋白对人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9基因表达的影响均明显高于相应浓度低密度脂蛋白组；基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9蛋白表达也明显高于相应浓度低密度脂蛋白组；基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9的活性明显高于相应剂量低密度脂蛋白组，又随剂量增加而增高。提示氧化修饰低密度脂蛋白可刺激人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9基因及蛋白的表达，增强其活性，因而有可能促进动脉粥样硬化斑块内基质降解，形成易损斑块，而易损斑块破裂可引起急性冠状动脉事件。     

冠心病患者动脉弹性与血清高敏C反应蛋白和基质金属蛋白酶9的相关性

目的 探讨冠心病患者动脉弹性与高敏C反应蛋白和基质金属蛋白酶9的关系.方法 运用动脉弹性功能测定仪检测大动脉弹性指数(C1)和小动脉弹性指数(C2);采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测血清高敏C反应蛋白及基质金属蛋白酶9.结果 C1、C2、基质金属蛋白酶9及高敏C反应蛋白在冠心病组与对照组之间存在差异,且有统计学意义.Logistic逐步回归分析显示:男性、吸烟、低密度脂蛋白、C2、高血压史、高敏C反应蛋白是冠心病的独立危险因素.冠心病患者C1与高敏C反应蛋白及基质金属蛋白酶9相关系数分别为-0.51(P＜0.01)和-0.49(P ＜0.01);C2与高敏C反应蛋白及基质金属蛋白酶9相关系数分别为-0.69(P ＜0.01)和-0.55(P＜0.01).冠心病患者动脉弹性影响因素多元逐步回归分析显示,C1独立影响因素为年龄、脉压、收缩压、高敏C反应蛋白、低密度脂蛋白、、基质金属蛋白酶9,C2独立影响因素为年龄、脉压、空腹血糖、高敏C反应蛋白、低密度脂蛋白.结论 冠心病患者动脉弹性与血清炎症因子高敏C反应蛋白及基质金属蛋白酶9均呈明显负相关,炎症反应可能是冠心病患者动脉弹性的重要影响因素之一.     

大剂量阿托伐他汀对急性冠状动脉综合征的调脂及抗炎作用

目的探讨40 mg/d阿托伐他汀对急性冠状动脉综合征行经皮冠状动脉介入治疗术后患者的调脂及抗炎作用。方法将92例急性冠状动脉综合征行经皮冠状动脉介入治疗术后患者随机均分为两组,对照组给予阿托伐他汀10 mg/d,试验组给予阿托伐他汀40 mg/d,用药后4、12、24周检测两组患者血脂、血清中超敏C反应蛋白和基质金属蛋白酶9浓度,对比两组调脂及抗炎作用差异。结果①用药后12周,试验组患者血清总胆固醇较对照组显著降低(P<0.05);用药后24周,试验组患者血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇均较对照组显著降低(P<0.01)。②用药后12周,试验组患者血清基质金属蛋白酶9较对照组显著降低(P<0.01);用药后24周,试验组患者血清超敏C反应蛋白较对照组显著降低(P<0.05)。③降脂强度与病人的血清超敏C反应蛋白和基质金属蛋白酶9的浓度下降趋势呈线性正相关。④随访期内两组心脏事件发生率无统计学差异(P>0.05)。结论①服用阿托伐他汀40 mg/d安全可靠。②服用阿托伐他汀40 mg/d可显著提高急性冠状动脉综合征患者行经皮冠状动脉介入治疗术后血脂达标率。③服用阿托伐他汀40 mg/d对炎症因子血清基质金属蛋白酶9和血清超敏C反应蛋白具有更强抑制作用。     

缬沙坦对氧化低密度脂蛋白诱导的人内皮细胞基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的观察缬沙坦对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人内皮细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,待细胞生长到融合状态时,将细胞分为4组:对照组;OX-LDL组(加ox-LDL 100 mg/L);低浓度组(先加ox-LDL 100 mg/L,再加缬沙坦10 μmol/L);高浓度组(先加ox-LDL 100mg/L,再加缬沙坦30μmol/L)。RT-PCR测定MMP-1 mRNA的表达。结果与对照组比较,ox-LDL组MMP-1mRNA的表迭明显增多(P<0.05),与ox-LDL组比较,低、高浓度组抑制MMP-1 mRNA的表达(P<0.05),并呈浓度依赖性。结论缬沙坦的抗炎及稳定动脉粥样硬化斑块的作用,可能与抑制内皮细胞MMP-1的表达有关。     

瑞舒伐他汀对ox-LDL诱导的人单核巨噬细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达的影响

目的 探讨瑞舒伐他汀对ox-LDL诱导的健康人单核巨噬细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）mRNA及蛋白表达的影响.方法 体外密度梯度离心法分离并培养单核巨噬细胞并传至2～4代用于实验.单核巨噬细胞培养24 h作为空白对照组,ox-LDL 100 mg/ml培养24 h作为ox-LDL对照组,实验组分别用ox-LDL 100 mg/ml培养2 h后,各加入不同剂量瑞舒伐他汀（0.01、0.1、1.0、10.0 μmol/L）共同作用24 h.分别提取各组细胞RNA,用半定量逆转录聚合酶链式反应法（RT-PCR）测定MMP-9 mRNA表达,用ELISA法测定MMP-9的蛋白含量.结果 单核巨噬细胞经100 mg/ml ox-LDL诱导后,与空白对照组比较MMP-9mRNA和蛋白表达显著增加;ox-LDL诱导后,不同剂量瑞舒伐他汀组与ox-LDL对照组比较MMP-9 mRNA和蛋白表达显著降低,并呈剂量-效应关系,P＜0.05;与空白对照组比较,瑞舒伐他汀10.0μmol/L组MMP-9蛋白表达无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 外周血单核巨噬细胞在ox-LDL诱导后,MMP-9mRNA和蛋白含量明显增加.瑞舒伐他汀呈剂量依赖性,可能通过ox-LDL途径来下调人单核巨噬细胞MMP-9 mRNA和蛋白含量的表达,起到抗炎和稳定斑块的作用.     

阿托伐他汀对C反应蛋白诱导的CD14+单核细胞Toll样受体4表达影响的实验研究

目的 观察阿托伐他汀对C反应蛋白(CRP)诱导的外周血CD14+单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达,以及TLR4信号传导下游炎症因子肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-6(IL-6)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响,探讨阿托伐他汀的抗炎机制.方法 不同浓度(0、5、25、50、100 μg/ml)和不同作用时间(0、6、12、24、48 h)的C反应蛋白(CRP)刺激正常人外周血CD14+单核细胞.给予CRP 50 μg/ml预先干预CD14+单核细胞2 h后,再用不同浓度的阿托伐他汀(1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 μmol/L)进行干预.应用流式细胞仪检测细胞表面TLR4蛋白的表达,并应用定量PCR方法检测TLR4 mRNA和髓样分化蛋白2(myeloid differentiation protein,MD2)mRNA的表达,ELISA法检测刺激前后细胞上清液TNFα、IL-6和MMP-9的蛋白水平.结果 (1)CRP 0 μg/ml组TLR4蛋白表达量为19.59%,CRP 5 μg/ml组的TLR4蛋白表达为29.33%,差异有统计学意义(P<0.01),并随着CRP浓度的增加,TLR4蛋白表达量逐渐增加.以CRP 0 h组为空白对照,CRP 6 h组的TLR4蛋白表达量为25.75%,差异有统计学意义(P<0.01),并随着时间的增加,TLR4表达量逐渐增加.(2)以CRP 50 μg/ml组为对照组,CRP 50 μg/ml和阿托伐他汀1.0 μmol/L组、2.5 μmol/L组、5.0 μmol/L组、7.5 μmol/L组、10.0 μmol/L组,TLR4蛋白表达分别为(68.17±1.71)%、(52.43±1.38)%、(27.72±4.55)%、(17.46±3.20)%、(9.99±2.81)%.(3)以CRP 50 μg/ml组为标准,CRP 50 μg/ml〖JP〗和阿托伐他汀1.0 μmol/L组、2.5 μmol/L组、5.0 μmol/L组、7.5 μmol/L组、10.0 μmol/L组,TLR4 mRNA分别为对照组的82.72%、67.34%、48.16%、30.88%、13.85%.MD2 mRNA分别为对照组的81.78%、71.04%、47.85%、27.06%、18.30%.随着阿托伐他汀浓度增加,TLR4和MD2的mRNA含量减少.(4)当单核细胞未受CRP和阿托伐他汀刺激时,分泌TNFα、IL-6和MMP-9的基础值分别为(16.3±5.8)pg/ml、(31.1±9.5)pg/ml 和(155.0±47.2)ng/ml.CRP 50 μg/ml组,单核细胞分泌TNFα、IL-6和MMP-9分别为(106.9±7.5)pg/ml、(566.9±10.0)pg/ml和(416.9±37.1)ng/ml,与空白对照组比较,差异均有统计学意义,P均<0.01.而CRP和阿托伐他汀2.5 μmol/L组,单核细胞分泌TNFα、IL-6和MMP-9分别为(81.1±5.4)pg/ml、(433.9±18.1)pg/ml和(310.5±16.3)ng/ml,与CRP 50 μg/ml组比较差异均有统计学意义,P均<0.01.结论 CRP可剂量依赖性和时间依赖性地增加CD14+单核细胞TLR4和MD2的表达,阿托伐他汀通过抑制CRP诱导单核细胞TLR4信号转导途径,降低炎症因子TNFα、IL-6和MMP-9的分泌,是其抗炎作用的机制之一.

Abstract：

Objective To investigate the effects of atorvastatin on C-reactive protein (CRP)induced Toll-Like receptor 4(TLR4)expression on CD14+ monocyte, and the production of proinflammatory cytokines tumor necrosis factor α (TNFα), interleukin-6 (IL-6), matrix metalloproteinases-9 (MMP-9), and to study the anti-inflammatory mechanisms of statins. Methods The monocytes were isolated from blood of healthy volunteers by the Ficoll density gradient and stimulated by CRP with different doses (5, 25, 50, 100 μg/ml)and different exposure time (6, 12, 24, 48 h). Cells were also incubated with atorvastatin of different doses (1.0, 2.5, 5.0, 7.5, 10.0 μmol/L)in the presence of CRP 50 μg/ml. The protein expression of TLR4 was measured by flow cytometry, mRNA expression of TLR4 and of myeloid differentiation protein (MD2)was detected by quantitative PCR. TNFα, IL-6, MMP-9 concentrations in supernatants of cultured medium were measured by ELISA.Results (1)Compared with the un-stimulated control group, enhanced TLR4 protein expression was already detected at a concentration of 5 μg/ml of CRP and increased in a dose-dependent manner (32.22±2.80)%, (49.94±5.58)%, (74.82±3.24)% and (90.82±2.88)% at 5, 25, 50 and 100 μg/ml CRP. (2)TLR4 protein expression on 50 μg/ml CRP stimulated cells also increased in a time-dependent manner (29.80±2.70)%, (47.44±4.41)%, (81.71±2.92)% and (50.57±3.34)% after 6 h, 12 h, 24 h, 48 h.(3)When monocytes were incubated with CRP 50 μg/ml and atorvastatin (1.0, 2.5, 5.0, 7.5, 10.0 μmol/L), protein expression [(68.17±1.71)%, (52.43±1.38)%, (27.72±4.55)%, (17.46±3.20)%, (9.99±2.81)%］and mRNA expression (82.72%, 67.34%, 48.16%, 30.88%, 13.85%)of TLR4 as well as mRNA expression of MD2 (81.78%, 71.04%, 47.85%, 27.06%, 18.30%)were reduced in a dose-dependent manner. (4)Level of TNFα, IL-6 and MMP-9 in supernatants was significantly reduced by atorvastatin (2.5 μmol/L)compared with control group(P<0.01). When monocyte incubated with CRP 50 μg/ml and atorvastatin 10.0 μmol/L, the level of TNFα, IL-6, MMP-9 decreased to (25.8±2.5)pg/ml, (128.2±14.7)pg/ml, (65.2±12.3)ng/ml, respectively.Conclusion CRP increased the protein expression of TLR4 on CD14+ monocyte in a dose-dependent and time-dependent manner. Atorvastatin can inhibit the signal transduction of TLR4 and reduce proinflammatory cytokines release induced by CRP on CD14+ monocyte, and this might be one of the anti-inflammatory mechanisms of atorvastatin.     

洛伐他汀抑制人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶9表达和活性

目的观察洛伐他汀对人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶9表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,加入20μg/L肿瘤坏死因子α诱导后,再用0.05～1.35μmol/L洛伐他汀处理0～24 h,蛋白印迹以及逆转录聚合酶链反应分别检测基质金属蛋白酶9的蛋白和mRNA表达情况,明胶酶谱法测定基质金属蛋白酶9活性。结果肿瘤坏死因子α能诱导人脐静脉内皮细胞的基质金属蛋白酶9表达和活性增强,洛伐他汀处理后,基质金属蛋白酶9的mRNA水平、蛋白量及活性均降低,且呈明显的时间和剂量依赖性,其中0.05μmol/L洛伐他汀能显著降低基质金属蛋白酶9的mRNA水平,但在蛋白水平和基质金属蛋白酶9活性上,0.05μmol/L洛伐他汀并没有表现出显著的降低效果,其余洛伐他汀各浓度均能对基质金属蛋白酶9的mRNA水平、蛋白量及活性产生显著的抑制作用,以1.35μmol/L洛伐他汀的抑制效果最显著。结论洛伐他汀能抑制肿瘤坏死因子α诱导的人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶9的表达。     

脂蛋白(a)免疫复合物对U937细胞基质金属蛋白酶1及其抑制物的作用

目的探讨脂蛋白(a)免疫复合物对U937细胞基质金属蛋白酶1及其抑制物组织金属蛋白酶抑制剂1mRNA表达的影响。方法分别采用不同浓度的天然脂蛋白(a)、氧化型脂蛋白(a)及其免疫复合物作用U937细胞,通过半定量RT-PCR分析U937细胞中基质金属蛋白酶1和组织金属蛋白酶抑制剂1基因表达的变化。结果正常U937细胞低表达基质金属蛋白酶1(0.076±0.012),而高表达组织金属蛋白酶抑制剂1(0.973±0.031)。等量的天然脂蛋白(a)、氧化型脂蛋白(a),及其免疫复合物作用后,基质金属蛋白酶1mRNA表达量分别为0.361±0.016,0.330±0.019,0.106±0.006和0.089±0.008;组织金属蛋白酶抑制剂1表达量分别为0.229±0.017,0.360±0.018,0.157±0.025和0.967±0.031。天然脂蛋白(a)对细胞基质金属蛋白酶1和组织金属蛋白酶抑制剂1mR-NA表达没有影响。氧化型脂蛋白(a)引起基质金属蛋白酶1轻度表达,但显著地下调组织金属蛋白酶抑制剂1的表达;而天然、氧化型脂蛋白(a)免疫复合物均非常显著地增加基质金属蛋白酶1和降低组织金属蛋白酶抑制剂1的mRNA表达(P<0.001),且较氧化型脂蛋白(a)对基质金属蛋白酶1的作用更为显著(P<0.001),并呈剂量效应关系。结论脂蛋白(a)免疫复合物增强U937细胞基质金属蛋白酶1mRNA表达,下调其抑制物组织金属蛋白酶抑制剂1的表达。     

重组C反应蛋白促进脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2

目的观察重组C反应蛋白(CRP)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应及蛋白质免疫印迹分析检测MMP-2mRNA转录和蛋白水平表达,观察不同浓度CRP及不同孵育时间对HUVEC MMP-2表达的影响。结果CRP呈浓度和时间依赖性增加培养HUVEC的MMP-2mRNA转录和蛋白水平的表达。结论CRP可上调HUVEC MMP-2表达。     

C-reactive protein induces matrix metalloproteinase-1 and -10 in human endothelial cells: implications for clinical and subclinical atherosclerosis.

OBJECTIVES: We examined the effect of C-reactive protein (CRP) on matrix metalloproteinase (MMP) and inhibitor expression in endothelial cells and in patients with clinical and subclinical atherosclerosis. BACKGROUND: In addition to predicting atherosclerotic vascular disease, CRP may directly promote a proinflammatory/proatherosclerotic phenotype. METHODS: Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) and aortic endothelial cells (HAECs) were incubated in the presence or absence of CRP (50 mug/ml). Microarray analysis, real-time polymerase chain reaction, immunological and activity assays for MMPs were performed. Specific inhibitors of mitogen-activated protein kinase pathway were used. The MMP-1 and -10 plasma levels were measured in apparently healthy subjects (n = 70). Immunolocalization of CRP, MMP-1, and MMP-10 was performed in human mammary arteries and carotid endarterectomy specimens. RESULTS: C-reactive protein augmented MMP-1 and -10 messenger ribonucleic acid expression in HUVEC (p < 0.05) and HAEC (p < 0.01). C-reactive protein stimulation also increased MMP-1 and -10 protein in conditioned culture medium (p < 0.001), as well as MMP activity (p = 0.001). Specific inhibition of p38 or MEK abolished the CRP induction of the MMP-1, whereas MMP-10 induction blockade required the simultaneous inhibition of p38 and Jun N-terminal kinase pathways. Subjects with CRP values >3 mg/l (n = 37) had increased plasma MMP-1 and -10 (p < 0.05), the association being significant after adjustment for confounding variables (p = 0.04 and p = 0.008, respectively). The MMP-10 levels were elevated in subjects with higher carotid intima-media thickness (p = 0.009). Increased CRP and MMP-10 colocalized in endothelial layer and macrophage-rich areas in advanced atherosclerotic plaques. CONCLUSIONS: Increased local and systemic CRP-related MMP activation might provide a link between inflammation and plaque vulnerability.