苦参碱对K562细胞增殖抑制与诱导分化的实验研究

目的：观察苦参碱对K562细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法：以K562细胞为实验对象,采用体外培养技术,通过细胞生长曲线、细胞形态、乳酸脱氢酶（LDH）活性测定方法观察苦参碱的作用。结果：浓度为0．2－0．3mg/ml的苦参碱对K562细胞有明显的增殖抑制与诱导分化作用,实验组细胞的数量,形态和生化代谢都发生了变化。结论：这一结果将对白血病的诱导分化治疗提供有力的实验依据。     

K562细胞的诱导分化与表型

Ｋ＿５６２细胞的诱导分化与表型临床生化教研室泰建平综述蒋纪恺，王霞文审校中图分类号Ｒ７３３．７目前对于白血病的治疗主要是用化疗、骨髓移植等，但疗效都不能令人满意。因此，探讨新的治疗途径显得十分必要而迫切。自从ＬｅｏＳａｃｈｓ于１９７８年报告恶性肿瘤细...     

苦参碱诱导K562细胞合成γ珠蛋白

目的 体外研究苦参碱对K562细胞γ珠蛋白合成的影响.方法 以K562细胞为体外模型,采用联苯胺染色方法确定苦参碱诱导K562细胞血红蛋白表达增加的剂量效应和时间效应,进一步应用Western blotting技术检测血红蛋白F(αγ2)水平.结果 0.1mg/ml苦参碱作用于K562细胞,在96h联苯胺染色阳性细胞率达到15.67%;Western blotting检测到血红蛋白F表达增加.结论 苦参碱在体外可诱导K562细胞γ珠蛋白合成增加,从而使血红蛋白F增加.苦参碱具有与阳性对照丁酸钠相似的诱导γ珠蛋白合成增加的作用.     

cDNA表达点阵研究苦参碱诱导K562细胞凋亡基因表达的改变

1　材料和方法1.1　材料　 Atlas Human Apotosis Array kit (Clontech产品 )由美国加州希望城国家医学中心 Dr. L i惠赠 ,[α- 32 P]d ATP购自北京亚辉公司 ,苦参碱购自陕西天奇植物化学有限公司 ,K5 6 2细胞购自本校免疫学教研室 .1.2　方法　将生长状态良好细胞分为实验组和对照组 ,实验组用 0 .2 g· L- 1 苦参碱溶液处理 ,对照组细胞不做任何处理 ,3d换液 1次 .分别收集对照组及苦参碱作用 7d实验组细胞 ,提取总 RNA,紫外分光光度仪检测纯度、RNA甲醛变性凝胶电泳检测完整性后 ,冻存于 - 70℃备用 .按说明书富集两组总 RNA中…     

苦参碱对K562细胞骨架的作用观察

目的：从细胞骨架方面进一步探索苦参碱对人白血病K562细胞株的作用机制。方法：采用微管吮吸技术和基因芯片技术分析苦参碱处理前后K562细胞粘弹系数和细胞骨架蛋白基因表达的改变。结果：0.1mg/ml苦参碱作用K562细胞24h后粘弹系数下降，细胞骨架类基因prefoldin 与ezrin 的mRNA表达增强。结论：苦参碱能够导致K562细胞的细胞骨架发生变化。     

基因芯片研究苦参碱诱导K562细胞基因表达谱变化

0 引言苦参碱可影响白血病K562细胞增殖周期达到抑制肿瘤细胞增殖的作用[1],但具体机制不详. 我们拟用cDNA表达点阵研究苦参碱作用下的K562细胞周期基因表达变化情况,明确苦参碱导致K562细胞增殖周期变化的内部机制.     

CGI-100基因在苦参碱诱导K562细胞分化和凋亡中的作用研究

目的了解功能未知的CGI-100基因在苦参碱诱导K562细胞分化和凋亡中的作用研究。方法利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测苦参碱作用前后K562细胞中CGI-100基因的表达情况。结果在苦参碱作用K562细胞后CGI-100基因表达下调。结论不同浓度不同作用时间下苦参碱能使K562细胞中CGI-100基因表达下降。     

苦参碱诱导K562细胞向红系分化伴随凋亡

目的 体外研究苦参碱诱导K562细胞向红系分化伴随的细胞凋亡改变.方法 体外培养K562细胞,采用不同浓度的苦参碱诱导K562细胞4 d.分别采用倒置显微镜、透射电子显微镜观察诱导前后细胞的形态学和超微结构改变,进一步采用免疫细胞化学方法检测细胞周期调控蛋白p27kipl表达变化.结果 与阴性对照组K562细胞相比,0.10/gL浓度的苦参碱诱导后K562细胞形态学和超微结构均显示有凋亡特征,同时细胞内p27kipl蛋向表达明显增加.结论 苦参碱在体外诱导K562细胞向红系分化伴随凋亡.可能与p27kipl蛋白表达增加相关.     

苦参碱诱导K562细胞分化的差异表达基因的研究

目的研究苦参碱诱导人红白血病K562细胞分化的分子机制。方法应用改良的mRNA差异显示逆转技术(DDRT—PCR)筛选苦参碱诱导K562细胞分化相关的差异表达基因；对差异cDNA片段纯化、克隆、测序及Blast分析，采用逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)方法验证。进一步对其中的未知差异cDNA片段采用Northern杂交确定其转录本的大小及组织分布特性，进而充分利用多种生物信息学资源对差异片段进行结构和功能的预测。结果苦参碱诱导K562细胞前后存在明显的基因表达差异，筛选获得了17条差异条带。其中4个差异显著片段经RT—PCR验证后，在Genbank中分析，有3个为已知基因，1个可能为未知基因，暂命名为KH基因。Northern杂交证实KH基因转录本的大小为1．35kb，分布于正常人体脑组织中。结论苦参碱具有诱导K562细胞基因表达谱发生变化的作用，由苦参碱诱导的K562细胞分化是一个多基因参与的过程；KH基因可能是苦参碱作用K562细胞后表达量发生改变的未知基因，可能与细胞癌变有关。     

苦参碱诱导 K562 细胞分化相关 cDNA 的克隆

目的 克隆苦参碱诱导人白血病Ｋ５６２细胞分化的相关基因,以求了解白血病分化及苦参碱的作用机制。 以人白血病细胞Ｋ５６２为研究对象,在苦参碱诱导其分化的基础上,利用ｍＲＮＡ差异显示技术对Ｋ５６２细胞在苦参碱诱导前及诱导后４８小时的基因表达情况进行分析。结果 在苦参碱诱导前后Ｋ５６２细胞之间存在明显的基因表达差异。一些基因在诱导后表达增强,而一些基因经苦参碱作用后表达减弱甚至完全抑制。经克隆和筛选获得     

苦参碱对K562细胞增殖及凋亡相关分子表达的影响

目的 研究苦参碱对人白血病细胞K562增殖、凋亡的影响及其机制。方法 苦参碱（0.2mg/ml）作用于K562细胞,每日计数白细胞、计算抑制率;流式细胞分析仪检测苦参碱对K562细胞周期的改变及凋亡的影响;电子显微镜观察凋亡细胞形态;Western blot检测BCL－6及增列细胞核抗原（PCNA）表达情况。结果 苦参碱对K562细胞有明显的抑制作用,用药72h的细胞增殖抑制率达69％;用药5d后,G1期细胞明显增多,高达58.5%,68％的细胞发生凋亡。电子显微镜可观察到苦参碱诱导的早、中、晚期K562凋亡细胞;BCL－6表达增强,PCNA表达下降。结论 苦参碱能显著抑制K562细胞增殖、促进其凋亡,其机制可能与细胞增殖周期受阻及PCNA表达下降、BCL－6表达增加有关。     

K562和HL60细胞分化抗原的表达

目的:研究髓系白血病细胞系K562和HL60分化抗原的表达,分析其免疫学表型特征.方法:收集RP-MI 1640培养3 d的对数生长期K562和HL60细胞,用流式细胞仪测定细胞膜表面CD7、CD11b、CD13、CD14、CD33、CD34、CD38、CD64、CD41a、CD117和HLA-DR11种分化抗原表达百分率,了解其免疫学表型,同时进行瑞特-姬姆萨(Wright-Giemsa)染色观察细胞形态和髓过氧化物酶染色(MPO).结果:K562白血病细胞的髓系特征分化抗原CD13和CD117表达率较低,为5.3%和5.2%,其他分化抗原CD11b、CD14、CD33、CD64、CD41a和反映细胞阶段性特征的分化抗原CD7、CD34、CD38和HLA-DR表达均处于极低水平,MPO染色为阴性;HL60白血病细胞的髓系特征分化抗原CD13表达率高达94.0%,仅伴随有少量CD11b、CD64和CD41a表达,祖细胞特征的CD38表达率为36.7%,MPO染色为阳性;细胞形态学上K562细胞原始未分化特性比较明显,HL60细胞质内已有嗜天青颗粒和空泡等细胞分化特征.结论:K562细胞的免疫学表型和形态学均表现出未分化细胞特征,因其具有多项分化潜能,因此更适合进行细胞多向分化研究.HL60的髓系祖细胞特性明显,适合进行粒系、单核系分化研究.     

苦参碱诱导K562细胞凋亡相关基因bcl-6表达上调

0　引言　自 2 0世纪 80年代即发现苦参碱具有抗鼠肿瘤的活性[1 ] .最近 ,有人发现它能抑制人红白血病 K5 6 2细胞增殖 [2 ] ,未见有关引起细胞凋亡及其机制的报道 .我们研究发现 ,苦参碱可诱导 K5 6 2细胞凋亡相关基因 bcl- 6表达上调、增殖细胞核抗原 (PCNA)表达受抑 .1　材料和方法1.1　细胞培养　人红白血病细胞株 K5 6 2接种于含 10 0m L· L- 1胎牛血清的 RPMI16 40培养液中 ,置于 37℃、饱和湿度、5 0 m L·L- 1 CO2 孵箱内培养 ,3d换液、传代 1次 .1.2　药品和试剂　苦参碱 (matrine)购自西安市天其植物化学药品公司 (纯度 >…     

氧化苦参碱对人白血病K562细胞株凋亡作用的研究

目的探讨氧化苦参碱（Oxymatrine,Oxy）对人慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞凋亡的影响。方法用Oxy处理K562细胞,MTT法检测药物对细胞的抑制作用;荧光显微镜及透射电镜观察细胞形态变化;流式细胞仪分析细胞DNA含量变化及凋亡细胞的比例,琼脂糖凝胶电泳技术观察DNA降解。结果 Oxy能够抑制K562细胞生长,对K562细胞的IC50约为2.33mg.mL-1。Oxy作用后的K562细胞呈现凋亡形态学改变,流式细胞仪可在2倍体前检测到凋亡峰,凋亡细胞比例为7.03%～54.99%,琼脂糖凝胶电泳呈现出细胞凋亡特征性的DNA梯状带。结论 Oxy能够诱导K562细胞发生凋亡。     

苦参碱对K562细胞培养液中PGE_2含量的影响

目的 :研究苦参碱诱导 K5 62细胞分化的胞外信号。方法 :运用酶联免疫法 ,动态检测苦参碱作用于 K5 62细胞后 ,培养液中 PGE2 含量的变化。结果 :培养液中 PGE2 含量在苦参碱作用于K5 62细胞 2天后有增高 ,并与苦参碱浓度有关。结论 :在苦参碱诱导 K5 62细胞分化的过程中 ,PGE2 含量的增高可能涉及到 PLA2 的激活 ,并且 PGE2 可能作为胞外信号影响 K5 62细胞的增殖与分化。     

苦参碱对K562细胞培养液中PGE2含量的影响

目的：研究苦参碱诱导K562细胞分化的胞外信号：方法：运用酶联免疫法，动态检测苦参碱作用于K562细胞后，培养液中PGE2含量的变化。结果：培养液中PGE2含量在苦参碱作用于K562细胞2天后有增高，并与苦参碱浓度有关。结论：在苦参碱诱导K562细胞分化的过程中，PGE2含量的增高可能涉及到PLA2的激活，并且PGE2可能作为胞外信号影响K562细胞的增殖与分化。     

苦参碱逆转人白血病K562/ADM细胞对阿霉素耐药性的研究

[目的] 探讨苦参碱对人白血病K562／ADM细胞对阿霉素耐药性的逆转作用。[方法] MTT法测定苦参碱的细胞毒性及其对K562／ADM细胞药敏性的影响,荧光分光光度法检测细胞内药物浓度的改变,流式细胞术检测耐药细胞凋亡百分率的变化。[结果] 苦参碱的非细胞毒性剂量为50μg／mL,低细胞毒性剂量为125μg／mL。50μg／mL苦参碱可增加K562／ADM细胞内阿霉素(ADM)浓度和K562／ADM细胞凋亡百分率,使K562／ADM细胞的IC50由原来的35．2μg／mL降低至15．8μg／mL,其逆转倍数为2．2倍。[结论] 苦参碱可部分逆转人白血病K562／ADM细胞对阿霉素的耐药性,其逆转机制与增加细胞内药物积累有关。     

活血化瘀中药复方诱导K562细胞凋亡

目的研究活血化瘀复方对人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞增殖、凋亡的影响.方法 通过台盼蓝拒染法活细胞计数,绘制细胞生长曲线.光镜、透射电镜观察细胞形态学变化.流式细胞检测定量观察细胞凋亡及其与药物的关系.结果 活血化瘀复方对K562细胞生长具有抑制作用,并且细胞呈现典型的凋亡形态学改变.流式细胞检测显示药物血清作用6h,K562细胞即已出现凋亡,100 mL·L-1含药血清组细胞凋亡率较50 mL·L-1含药血清组高(13.4±1.3)% vs (7.6±0.9)%, P<0.01.结论 活血化瘀复方具有抑制白血病细胞生长,诱导白血病细胞凋亡的作用,从而为其临床应用提供了理论依据.     

活血化瘀中药复方诱导K562细胞凋亡

目的 :研究活血化瘀复方对人慢性粒细胞白血病细胞株K5 6 2细胞增殖、凋亡的影响 .方法 :通过台盼蓝拒染法活细胞计数 ,绘制细胞生长曲线 .光镜、透射电镜观察细胞形态学变化 .流式细胞检测定量观察细胞凋亡及其与药物的关系 .结果 :活血化瘀复方对K5 6 2细胞生长具有抑制作用 ,并且细胞呈现典型的凋亡形态学改变 .流式细胞检测显示药物血清作用 6h ,K5 6 2细胞即已出现凋亡 ,10 0mL·L-1含药血清组细胞凋亡率较 5 0mL·L-1含药血清组高 (13.4± 1.3) %vs(7.6± 0 .9) % ,P <0 .0 1.结论 :活血化瘀复方具有抑制白血病细胞生长 ,诱导白血病细胞凋亡的作用 ,从而为其临床应用提供了理论依据 .     

雄黄对K562细胞端粒酶活性和凋亡的作用

目的 :探讨雄黄对慢性粒细胞白血病细胞株K5 6 2细胞端粒酶活性及凋亡的调节作用和机制 .方法 :MTT法检测细胞增殖力 ;PCR ELISA法测定端粒酶活性 ;流式细胞仪测量细胞周期和细胞凋亡 .结果 :0 .3,0 .6 ,1.5和 3.0mg·L-1雄黄 (72h)在诱导K5 6 2细胞凋亡的同时可显著抑制细胞端粒酶活性和细胞增殖 ,并呈剂量相关 ;1.5 ,3.0mg·L-1雄黄 (72h)可诱导K5 6 2细胞G2 /M期阻滞 .结论 :雄黄诱导K5 6 2细胞凋亡达到抑制细胞生长的作用 ,端粒酶活性下降是雄黄诱导K5 6 2细胞凋亡的机制之一 .由大剂量雄黄诱导的K5 6 2细胞G2 /M期阻滞可能与端粒酶活性显著下降有关