整合素beta1亚单位对肝癌细胞与IV型胶原黏附与趋化行为的影响

采用微吸管实验技术 ,测定肝细胞癌 (Hepatocellular carcinom a,HCC)细胞与 IV型胶原裱衬表面的黏附力 ;进一步加入针对整合素 beta1亚单位 (CD2 9)的单克隆抗体 (Anti- CD2 9)处理 HCC细胞 ,观察 Anti- CD2 9对细胞与 IV型胶原裱衬表面的黏附力的影响。采用双微吸管实验法进行 HCC细胞趋化实验 ,在两侧微管内加入相同浓度 (6 0 0μg/ ml )的 IV型胶原 ,并引导微管尖端与同一细胞紧密接触 ,动态观察细胞两侧伪足形成过程 ;在一侧微吸管内加入 2 0μg/ ml Anti- CD2 9,考察 beta1整合素亚单位阻断对 HCC细胞伪足形成的影响。利用流式细胞仪对 HCC细胞表面整合素 beta1亚单位的表达进行分析。结果表明 ,HCC细胞与 5μg/ ml IV型胶原裱衬表面之间的黏附力为 932± 134(× 10 - 1 0 N ,n=6 0 ) ,加入 5μg/ ml Anti- CD2 9黏附力减小到 4 4 9± 119(× 10 - 1 0 N,n=6 0 ) ;加入 10 μg/ ml Anti- CD2 9时黏附力减小到 2 2 0± 78(× 10 - 1 0 N,n=5 5 )。双微吸管趋化实验表明 :两侧微吸管加入相同浓度 IV型胶原 ,细胞向两侧微吸管均有伪足形成 ;在此基础上 ,微吸管加入 Anti- CD2 9的一侧 ,HCC细胞伪足生长曲线呈现明显的抑制 ,而未加入 Anti- CD2 9的微吸管一侧与加入的对侧相比 ,该侧细胞的伪足明显增     

BSA和胶原的竞争性吸附与细胞粘附

细胞在材料表面的粘附是贴壁依赖型细胞生长的前提,细胞只有在表面以一定的粘附力发生粘附并铺展后,细胞列哨B生长。当细胞与表面的粘附力较强时,有利于细胞生长,而当粘附力较弱时,则有利于细胞分化。现在普遍认为细胞粘附过程由细胞表面的受体对细胞外基质（ECM）蛋白的特异性识别所调节。胶原等细胞外基质影响细胞的形态和功能,并提供细胞分化和增殖的信号。而培养介质是复杂的溶液,它们中许多有血清或添加的蛋白和表面活性物质。因而细胞在材料表面的粘附受蛋白质竞争性吸附所调节,包括基底预处理、培养基以及细胞分泌等许多不…     

胶原、化学改良的胶原和胶原复合物表面的细胞珠粘附与生长

本文作者比较了在胶原、化学改性胶原和胶原复合物表面上的鼠纤维细胞的粘附与生长情况。用组织培养聚苯乙烯(TCP)培养皿作对照,培养基质包括天然牛皮肤     

抗Ⅳ型胶原单克隆抗体CⅣ的研究与鉴定

用人胎盘Ⅳ型胶原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以杂交瘤技术建立了一株能稳定分泌抗ＣｏｌⅣ单抗（ＩｇＧ亚类为ＩｇＧ１）的杂交瘤细胞株。其染色体众数为８７。用胚胎及成人组织的免疫组化（ＡＢＣ－ＡＥＣ法）显示：皮肤，肾小球，肾小管，血管内皮，乳腺，肺组织，胎盘，眼球角膜的基底膜均呈特异性阳性染色，命名为ＣⅣ。此抗体的制成，对于较理想，可靠地显示基底膜，判断肿瘤的良恶性及探讨其浸润机制有重要意义。     

抗Ⅳ型胶原单克隆抗体CⅣ的研制与鉴定

用人胎盘Ⅳ型胶原（ＣｏｌⅣ）免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以杂交瘤技术建立了一株能稳定分泌抗ＣｏｌⅣ单抗（ＩｇＧ亚类为ＩｇＧ＿１）的杂交瘤细胞株。其染色体众数为８７。用胚胎及成人组织的免疫组化（ＡＢｃ＾Ｅｃ法）显示：皮肤、肾小球、肾小管、血管内皮、乳腺、肺组织、胎盘、眼球角膜的基底膜均呈特异性阳性染色，命名为Ｃ刊。此抗体的制成，对于较理想、可靠地显示基底膜，判断肿瘤的良恶性及探讨其浸润机制有重要意义。     

整合素α2对神经母细胞瘤细胞粘附于胶原蛋白的调节作用

目的：探讨两价阳离子和针对整合素α2的 特异性阻断性单克隆抗体对神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞粘附于胶原蛋白（Col）的影响，探讨整合素α2β1对该细胞粘附反应的调节作用。方法:将含有不同M g2+、Ca2+浓度和有或无抗α2单克隆抗体6F1的SK-N-SH细胞混悬液。加入96孔 平底非细胞培养板，此反应板已包被Ⅰ型大鼠尾Col（4 μg/well），所粘附的细胞用BCA方 法测定，以吸光度（A570）代表粘附细胞的数量。结果:Mg 2+能明显增加SK-N-SH细胞Ⅰ型Col的粘附反应；Mg2+浓度为1 mmol/L时，细胞 粘附的反应已接近高峰,与对照组相比A570分别为0.59±0.03和0.2 5±0.0 1 (P＜0.01），而Ca2+对细胞的粘附无明显影响；抗α2单克隆抗体6F1（10 mL /L）能显著阻断SK-N-SH细胞粘附于胶原蛋白(A=0.27±0.01)，其粘附水平接近无Mg 2+的粘附反应水平（A=0.32±0.01）。 结论:整合素α2介导 SK-N-SH细胞对胶原蛋白粘附反应，提示整合素α2可能参与调节神经母细胞瘤的转移。     

冷冻保存对肝癌患者粘附性LAK细胞生物学特性的影响

为了观察冷冻保存对肝癌患者粘附性LAK (A LAK )细胞生物学特性的影响。我们采用苯丙氨酸甲酯 (PME )处理肝癌患者外周血单个核细胞 (PBMC )以制备A LAK细胞 ,并观察冷冻保存后A LAK细胞增殖能力、杀伤活性及细胞表型的变化。实验结果显示 ,A LAK细胞在冷冻复苏后的短时间内 ,增殖能力、杀伤活性均受到损伤 ,但随着IL 2的刺激而迅速恢复。至复苏后第 5天 ,冻存的A LAK细胞的杀伤活性明显高于未经冻存的新鲜A LAK细胞。而A LAK细胞的表面标志则在冷冻前后无显著性改变。因此 ,冷冻保存可促进肝癌患者A LAK细胞的免疫活性     

基底硬度对肝细胞与肝癌细胞迁移行为的影响

目的通过比较不同硬度基底对肝细胞和肝癌细胞迁移特征的影响,研究肿瘤细胞迁移行为变化的成因。方法运用免疫荧光染色、形态学分析法和Transwell侵袭实验,观察不同硬度基底上HCCLM3和L02细胞的形态特征及对细胞运动能力进行检测和定量分析。结果 (1)相对于极软(0.5 kPa)和极硬(玻璃)基底,HCCLM3和L02细胞在较软基底(4 kPa)上具有较高的迁移速率和迁移净距离,且L02细胞表现出高的迁移效率。(2)HC-CLM3和L02细胞在不同硬度基底上均方位移趋势一致,较软基底上L02细胞具有较高的方向持续能力。(3)0.5和1 mg/mL三维胶原基质中,HCCLM3细胞穿透基底膜的个数分别显著多于L02细胞穿透基底膜的个数;加入40μg/mL水解酶抑制剂GM6001后,HCCLM3细胞穿透基底膜的个数显著增加,而L02细胞穿透基底膜的个数显著减少。结论 (1)二维较软基底上,L02细胞因有较高的方向持续能力而表现出高的迁移效率。(2)三维胶原基质中,HCCLM3细胞以不同迁移模式适应周围环境,从而表现出更大的侵袭能力。     

整合素β1对人体滋养层细胞黏附和迁移行为的影响

在体内,滋养层细胞是通过何种方式到达子宫螺旋动脉血管并对其基础结构进行重构的机制目前尚不清楚,但这一过程涉及到了细胞在血管内黏附和迁移的行为。采用微管吸吮技术和平行平板流动腔系统对整合素β1在滋养层细胞黏附和迁移中的作用进行检测。将滋养层细胞分别培养在I型鼠尾胶原和血管内皮细胞上,进行细胞黏附力测量和剪切应力加载,实验分为整合素β1抗体阻断组、非特异性抗体阻断组和正常对照组。结果显示:整合素β1抗体阻断组可显著降低细胞的黏附力和抵抗流体剪切应力引起位移的能力,而非特异性抗体组的结果与对照组差异不显著;内皮细胞可显著增强滋养层细胞的黏附力和抵抗流体剪切应力引起位移的能力。结果表明,整合素β1参与了滋养层细胞与血管内皮细胞间的黏附并调控了流体剪切应力作用下滋养层细胞的迁移行为。     

尿Ⅳ型胶原与糖尿病微血管病变的关系

目的 :探讨尿Ⅳ型胶原 (ⅣC)对糖尿病微血管病变早期诊断的价值。方法 :采用放射免疫分析法对 3 5例正常人及 86例糖尿病患者尿ⅣC进行测定 ,并与病程、年龄、血ⅣC、空腹血糖 (FBG)、胰岛素 (INS)及收缩压 (SBp)等指标作相关分析。结果 :对照组、糖尿病无微血管病变组、微血管病变组尿ⅣC浓度分别为77 70± 12 91μg/ 2 4h、88 74± 19 5 8μg/ 2 4h、12 9 99± 3 0 2 3 μg/ 2 4h。微血管病变组显著高于无微血管病变组及对照组 (p <0 0 0 1,0 0 0 1) ;无微血管病变组显著高于对照组 (p <0 0 1)。糖尿病患者尿ⅣC浓度与病程、血ⅣC及SBp呈正相关 (p <0 0 1,0 0 5 ,0 0 5 )。结论 :糖尿病患者尿ⅣC浓度随微血管病变进展而逐渐增高 ,可作为早期诊断微血管病变的指标     

人Ⅳ型胶原放射免疫分析方法的建立

本文将人胎盘用胃蛋白酶消化、氯化钠分级沉淀及DE-52、CM-52层析提取、纯化N M胶原（ⅣC）。提取物紫外最大吸收峰在230nm,富含羟脯氨酸、羟赖氨酸,两个α链分子量分别为95000和70000,与Sigma产品特性相似。免疫新西兰兔产生的抗血清效价为1:512（间接血凝法）,与其它间质成份无或弱交叉反应。建立的放射免疫分析方法,灵敏度为8μg/L,批内及批间C.V.分别为7.3％和11.2％,测得正常献血员血清ⅣC浓度为49.77±15.00μg/L,慢性肝炎患者显著升高,并与PANASSAY ⅣC EIA法检测结果相关显著,提示本方法灵敏可靠,有推广应用价值。     

大鼠肝癌细胞与I型胶原的黏附特性及其与细胞周期的关系

肿瘤细胞和胞外基质之间的黏附特性与肿瘤的侵袭转移有密切关系。作者从细胞周期的角度,采用微管吸吮技术和细胞同步技术研究了不同细胞周期肝癌细胞与I型胶原裱衬表面的黏附力学特性。结果表明:胸腺嘧啶脱氧核苷、秋水仙碱顺序阻断和胸腺嘧啶脱氧核苷双阻断后释放培养的方法可分别获得G 1期和S期肝癌细胞,平均同步率分别为74.09%和90.39%;在研究剂量和时间范围内,肝癌细胞与I型胶原的黏附力具有浓度和时间依赖性;S期肝癌细胞和I型胶原的黏附力值与G 1期和未同步组(对照组)相应值比较明显降低。结果提示:肝癌细胞经血道转移的侵蚀细胞间质阶段,G 1期细胞可能起更重要的作用。这一研究对全面认识肝癌的转移机理有重要意义。     

大鼠肝癌细胞与Ⅰ型胶原的黏附特性及其与细胞周期的关系

肿瘤细胞和胞外基质之间的黏附特性与肿瘤的侵袭转移有密切关系。作者从细胞周期的角度，采用微管吸吮技术和细胞同步技术研究了不同细胞周期肝癌细胞与Ⅰ型胶原裱衬表面的黏附力学特性．结果表明；胸腺嘧啶脱氧核苷、秋水仙碱顺序阻断和胸腺嘧啶脱氧核苷双阻断后释放培养的方法可分别获得G1期和S期肝癌细胞，平均同步率分别为74．09％和90．39％；在研究剂量和时间范围内，肝癌细胞与Ⅰ型胶原的黏附力具有浓度和时间依赖性；S期肝癌细胞和Ⅰ型胶原的黏附力值与G1期和未同步组（对照组）相应值比较明显降低．结果提示；肝癌细胞经血道转移的侵蚀细胞间质阶段，G1期细胞可能起更重要的作用。这一研究对全面认识肝癌的转移机理有重要意义。     

整合素细胞信号转导通路与肝星状细胞行为

Integrins are the main mediators of the complicated interaction between hepatic stellate cells (HSCs) and extracellular matrix (ECM) components. Signal transduction by integrins is initiated by both occupancy and crosslinking of integrins by ECM components. Focal adhesion kinase (FAK) and mitogenactivated protein kinase (MAPK), which are the downstream molecules, involve in integrin - mediated cellular behaviors. In this review, we briefly summarize the integrin‘ s structure, intracellular signaling cascades and its role in HSC behaviors, such as activation, proliferation and aoontosis.     

整合素分布变化与肝癌细胞迁移取向调节的相关性

目的采用机械拉伸方法并通过裱衬纤连蛋白(胞外基质成份)调节整合素受配体结合,探索整合素再分布变化对肝癌细胞黏附运动行为的影响,以及骨架重排对整合素再分布变化的影响。方法运用免疫荧光染色、激光共聚焦显微技术和定量形态学分析法,观察整合素分布变化和细胞骨架装配调整,及对细胞运动变形能力进行检测和定量分析。结果 (1)不同形态细胞的整合素表达和分布特征不同,铺展细胞β1整合素表达高于未铺展的圆细胞,分布峰值为基底面,而圆细胞游离面的整合素分布反较基底面多。(2)机械拉伸5h后不同形态细胞β1整合素表达均升高,分布带增宽;卸载1h整合素表达下调,出现弥散分布倾向,其中以圆细胞最为明显。(3)裱衬FN后β1整合素表达增加,不同形态细胞整合素分布均向基底转移,并使肝癌细胞净迁移距离减小。(4)机械拉伸5h后60%的细胞长轴取向集中在70°～110°之间,细胞骨架倾向垂直于拉伸方向排列,卸载1h细胞骨架明显解聚。结论肝癌细胞整合素分布变化受胞内骨架调整和胞外配体数量的影响,单个圆细胞的整合素分布特征与其较强的转移浸润能力相关。     

Ⅳ型胶原和Laminin在人体慢性肝病和肝癌中的病理学研究

目的：观察基膜中Ⅳ型胶原（ＣｏⅣ）及Ｌａｍｉｎｉｎ（ＬＭ）在人体慢性肝病和肝细胞癌（ＨＣＣ）的病理形态学改变,并探讨其临床病理意义。方法：对１１例慢性肝炎、２６例肝硬化和３０例人体ＨＣＣ组织进行了ＣｏⅣ和ＬＭ的免疫组化检测,系统地观察基膜成分在正常、慢性肝病和肝癌中的形态和数量的改变,行半定量计数,对其结果进行临床病理分析。结果：正常肝窦无ＬＭ的表达,ＣｏⅣ沿窦壁呈断续弱阳性表达,慢性肝病时可有少     

蛋白酶处理对Ⅳ型胶原,层粘连蛋白免疫组化染色的影响

蛋白酶处理对Ⅳ型胶原、层粘连蛋白免疫组化染色的影响蒋海鹰沈明对常规石蜡切片组织内已知抗原的检测中，利用酶预处理以暴露被封闭的组织抗原决定簇，是免疫组化技术中常用方法，亦是关键的步骤。但不同组织和不同的抗原，要求酶的种类、浓度及消化时间不同〔１，２〕，...     

整合素介导低剪切力诱导的肝癌细胞迁移

低剪切力是肿瘤体内微环境的组成部分,是调控肿瘤细胞迁移、侵袭的重要因素。作为细胞膜表面受体,整合素(integrin)不仅介导细胞与细胞外基质之间的黏附,而且作为细胞的重要力学感受器起到整合细胞内的力学、化学信号的作用。本研究的目的是探讨低剪切力引起肝癌细胞整合素的变化及其对肝癌细胞迁移的影响。采用低剪切力(1.4dyn/cm2)作用于肝癌HepG2细胞,划痕法测定在0、1、2、4h细胞的迁移情况,F-actin染色观察低剪切力作用2h和4h后细胞骨架的变化,Western blot测定integrinα亚基在瞬时(15s和30s)、短时(5、15和30min)和长时(1、2和4h)的表达规律。结果表明:与对照组比较,低剪切力刺激HepG2细胞后,细胞迁移距离显著增加,应力纤维丝排列规则,integrinα亚基在不同的时间点的表达呈现出时序性的差异,提示integrin的不同亚基在剪切力诱导肝癌细胞迁移中具有不同的调控作用。     

右旋糖酐40,70对红细胞与内与细胞粘附的影响

采用流室显微观察系统，定量研究右旋糖酐４０（ＤＸ４０）和右旋糖酐７０对红细胞与内皮细胞动态粘附特性的影响。统计分析处理数据，到得反映应力与细胞间动态粘附数关系的经验权式及粘附特征常数ａ，ｂ值。