小鼠骨质疏松合并骨性关节炎模型的建立及评价

[目的]探讨骨质疏松合并骨性关节炎的小鼠动物模型的制备方法.[方法]ICR雌性小鼠20只,随机分成对照组和模型组各10只.模型组采取切除双侧卵巢4周后膝关节注射碘乙酸制备模型,对照组不作任何处理.碘乙酸注射8周后对小鼠进行X-ray活体成像观察,并测定骨密度;取膝关节及腰椎做病理切片行HE染色观察.[结果]模型组小鼠骨密度明显下降,关节间隙变窄,骨赘形成,HE染色见关节面不平整,出现凹陷及软骨缺损,腰椎骨小梁变少变细,结构不完整.[结论]切除双侧卵巢及膝关节注射碘乙酸的方法能为研究骨质疏松合并骨性关节炎提供较为理想的动物模型.     

基因修饰小鼠的骨性关节炎模型研究进展

目的：搜集整理近年来国外关于基因修饰小鼠在骨性关节炎（OA）研究,以便了解其动态发展状况。方法通过注射关节腔内5种不同致病因子及手术切除4种模式来人工制造类似骨关节炎的病理模式。结果经过基因敲除的小鼠具有基因趋同性和稳定性,使实验数据更为准确和客观。结论基因敲除后的小鼠种群较适合于骨性关节炎的人工造模。     

小鼠胶原性关节炎模型的制备及评价

为研究小鼠胶原性关节炎(CIA)模型的制作并建立评价方法，用皮内注射完全弗氏佐剂的方法建立小鼠CIA模型。容积法检测小鼠足爪炎症的肿胀度并进行评分；分光光度计法检测前列腺素(PGE)；^3H-TdR掺入法检测脾淋巴细胞增殖反应、白细胞介素-1(IL-1)和IL-2；HE染色法对关节组织作病理检查。结果发现，小鼠足爪的炎症反应强烈，关节肿胀明显；前列腺素产生加剧，T、B淋巴细胞增殖反应、IL-1、IL-2水平显著升高；病理检查关节组织可见其纤维组织增生，水肿，粘液样变，伴有大量炎性细胞浸润，局部血管充血，血管壁增厚。表明皮内注射完全弗氏佐剂建立小鼠CIA模型成功。     

类风湿性关节炎及骨性关节炎关节滑液TNF-α水平的相关性

目的　研究类风湿性关节炎 (RA)及骨性关节炎 (OA)关节滑液肿瘤坏死因子α(TNF α)差异 ,探讨可否将此作为RA、OA的鉴别指标 ,提供一种早期鉴别分析方法 ,以利早期针对性治疗。方法　取 8例RA患者 ,9例OA患者 ,10例年轻急性关节内损伤 (AAT组 )及 6例老年慢性关节内损伤患者 (CAT组 )关节滑液 ,采用ELISA检测TNF α水平。结果　RA组滑液TNF α水平显著高于其他 3组 ,差异有极显著性 (P <0 .0 1)。OA组TNF α水平高于AAT组及CAT组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　在RA和OA滑液中有TNF α的存在 ,TNF α水平在RA和OA患者滑液有显著性差异 ,可作为鉴别因素。     

两种炎症性关节炎小鼠模型的比较

目的 通过比较胶原诱导(CIA)和人肿瘤坏死因子α转基因(hTNFα-Tg)小鼠关节炎模型的临床特征,为炎症性关节炎疾病的致病机理和药物筛选研究提供合适的模式动物.方法 分别采用鸡Ⅱ型胶原注射DBA/1小鼠建立经典的类风湿性关节炎(RA)模型,利用人肿瘤坏死因子α注射FVB小鼠建立关节炎转基因小鼠模型,通过关节表观特征观察、关节炎指数分析和病理观察评分对炎症性关节炎模型进行评价.结果 在炎症细胞浸润方面,CIA模型主要有中性粒细胞浸润,hTNFα-Tg模型主要是淋巴细胞浸润,且差异有统计学意义(P<0.05);在细胞增殖方面,两种模型都显示滑膜细胞的增生,与CIA模型相比,hTNFα-Tg模型滑膜增生最为严重,差异有统计学意义(P<0.05);在骨侵蚀方面,两种模型都显示增生滑膜对骨的侵蚀,两种模型比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 两种关节炎模型均在一定程度上模拟人关节炎的临床症状,但也存在着差异.CIA模型造模时间长,能较好模拟RA临床特征;hTNFα-Tg模型属于自发型,表现为滑膜不断增生,符合RA晚期临床特征.     

兔膝关节骨性关节炎动物模型的复制与评价

目的制作家兔膝关节骨性关节炎的模型,并通过观察软骨组织及软骨细胞退变情况进行检测。方法取健康雄性家兔12只,体质量2.0~3.0kg,随机分为2组,假手术组、模型组,每组6只,取右膝关节内侧纵切口切断前后交叉韧带和内侧副韧带并切除内侧半月板,逐层缝合伤口。术后每日肌肉注射青霉素2×105 U,连续7d,预防感染。每日强迫家兔活动60min。12周后,处死全部动物,取完整膝关节作为实验标本。进行形态学分析,对2组分别进行细胞培养,观察兔软骨细胞的形态学特性。结果组织形态学分析显示:假手术组藏红固绿染色显示正常组关节软骨表层光滑、平整,软骨细胞分布均匀,排序整齐,各层次清晰。模型组显示关节面软骨表层裂隙,有些出现局部缺损,软骨细胞数量明显减少,软骨层面染色不均匀,局部甚至出现失染。假手术组培养的软骨细胞大多呈梭形或短梭形,少部分呈多角形,细胞核为圆形或椭圆形,Ⅱ型胶原的表达明显;模型组培养的软骨细胞大多呈出现许多指状突起,呈多角形变化,核仁多染,细胞增殖速度明显减慢,Ⅱ型胶原的表达明显降低。结论成功制作了兔膝关节骨性关节炎动物模型,并首次运用现代技术手段进行了分析,此模型操作简单,可重复性强,为进一步研究中医药防治膝关节骨性关节炎奠定了基础。     

伤柏膏治疗气滞血瘀型膝关节骨性关节炎的效果及机制

目的：探讨伤柏膏治疗气滞血瘀型膝关节骨性关节炎(KOA)的临床效果及其潜在的疗效机制。方法选择2012年1月~2015年1月就诊于广州市天河区中医院的气滞血瘀型KOA患者120例,将其随机分为伤柏膏组(伤柏膏外敷+口服塞来昔布)、冷感好及施组(伤柏膏外敷+口服塞来昔布)以及塞来昔布组(口服塞来昔布),治疗3个疗程。治疗前后进行西安大略麦马斯特大学骨性关节炎指数可视化量表(WOMAC)疼痛评分和视觉模拟量表(VAS)疼痛评分,在疗程结束时抽取静脉血用于检测外周血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1(IL-1)的表达。结果与治疗前比较,三组患者治疗后WOMAC疼痛评分和VAS疼痛评分均明显降低(P<0.05);治疗后,三组患者WOMAC疼痛评分和VAS疼痛评分比较差异有统计学意义(P<0.05),其中,与冷感好及施组以及塞来昔布组比较,伤柏膏组WOMAC疼痛评分和VAS疼痛评分较低(P<0.05);治疗后,三组患者血清TNF-α和IL-1表达差异有统计学意义(P<0.05),其中,与冷感好及施组以及塞来昔布组比较,伤柏膏组TNF-α和IL-1表达水平较低(P<0.05)。结论伤柏膏能够有效改善气滞血瘀型KOA患者临床症状,其作用机制与抑制炎症关系密切。     

关节镜清理及透明质酸钠注射治疗膝关节骨性关节炎的疗效评价

膝关节骨性关节炎是临床最常见的一种慢性、进展性膝关节疾病.临床症状以关节疼痛,僵硬,肿胀伴活动受限为特点.绝大多数的患者适合于保守治疗,但疗效均不满意.自2004年3月～2007年3月,笔者在陈建锋老师的指导下,对35例膝关节骨性关节炎,采用关节镜清理、透明质酸注射为治疗,并设对照组进行了临床疗效对比观察,现将报告结果报告如下.     

透明质酸关节腔内注射对膝关节骨性关节炎患者血清炎症因子水平的影响及疗效

目的：探讨透明质酸关节腔内注射对膝关节骨性关节炎（OA）患者血清炎症因子水平影响及疗效。方法选取2010年1月~2013年12月在丽水市中医院骨科门诊治疗的膝关节OA患者72例,将其分为观察组和对照组。对照组予以芬必得胶囊0.3 g,口服,2次/d,连用4周。观察组予以透明质酸关节腔内注射2 mL/次,每周1次,连用4周。观察两组治疗前后血清超敏C反应蛋白（hs-CRP）、白介素-6（IL-6）和白介素-18（IL-18）水平变化,并比较其临床效果及不良反应。结果治疗4周后,两组血清hs-CRP、IL-6和IL-18水平[观察组：（5.69±0.85）mg/L、（1.97±0.32）ng/L、（146.18±30.61）ng/L,对照组：（7.86±0.47）mg/L、（2.75±0.56）ng/L、（184.21±35.24）ng/L]均较治疗前明显下降[观察组：（8.94±2.13）mg/L、（3.51±0.56）ng/L、（211.24±40.31）ng/L,对照组：（9.07±2.05）mg/L、（3.45±0.67）ng/L、（208.07±39.82）ng/L],差异均有统计学意义（t=3.15、3.52、2.90,t=2.29、2.42、2.21,P〈0.05或P〈0.01）,且观察组下降值明显大于对照组,差异均有统计学意义（t=2.37、2.40、2.21,P〈0.05）;观察组患者的临床总有效率（94.44%）明显高于对照组（77.78%）,差异有统计学意义（χ2=4.18,P〈0.05）;观察组和对照组治疗中分别发生不良反应3例和11例,症状均较轻微,观察组不良反应发生率明显低于对照组（8.33%比30.56%）,差异有统计学意义（χ2=6.29,P〈0.05）。结论透明质酸关节腔内注射治疗膝关节OA效果及安全性均较佳,作用与降低血清hs-CRP、IL-6和IL-18等炎症因子水平密切相关。     

β-1,4-半乳糖基转移酶-I在大鼠骨性关节炎模型中滑膜组织表达的意义

背景：观察β-1,4-半乳糖基转移酶-I（β-1,4-GalT-I）在手术诱导的大鼠骨性关节炎模型中的表达情况及细胞定位,并探讨其在OA病理过程中可能的生物学作用。 方法：健康成年SD大鼠90只随机分为三组：OA模型组（40只）、假手术组（40只）和正常组（10只）。采取前交叉韧带切断加内侧半月板前1/3切除法破坏SD大鼠右膝关节稳定性以建立大鼠OA模型。于术后1、2、4、6、10周取实验动物右膝关节的滑膜与软骨组织,并分离获取成纤维样滑膜细胞进行培养,利用real-time PCR检测软骨、滑膜组织及TNF-α刺激成纤维样滑膜细胞后β-1,4-GalT-I在mRNA水平的表达变化;运用Western-blotting和免疫组化检测β-1,4-GalT-I在蛋白水平的表达情况;利用免疫荧光双标法检测β-1,4-GalT-I与巨嗜细胞样滑膜细胞、成纤维细胞样滑膜细胞、中性粒细胞及TNF-α的定位情况;运用ELISA检测成纤维样滑膜细胞在脂多糖及脂多糖联合β-1,4-GalT-I抗体等刺激下TNF-α的表达情况。 结果：β-1,4-GalT-I mRNA在OA组大鼠的滑膜组织中表现出上调趋势,于术后2w、4w达到高峰;在蛋白水平,β-1,4-GalT-I在OA术后4w组的滑膜组织中达到高峰。但是,β-1,4-GalT-I在软骨组织中的表达未检测到明显差异。在OA滑膜炎症过程中,β-1,4-GalT-I主要表达于巨嗜细胞样滑膜细胞、成纤维细胞样滑膜细胞和中性粒细胞,并且β-1,4-GalT-I与TNF-α共定位。在体外细胞培养中,成纤维样滑膜细胞中β-1,4-GalT-I的表达与TNF-α刺激呈浓度和时间依赖性。此外,β-1,4-GalT-I抗体可减弱脂多糖刺激成纤维样滑膜细胞产生TNF-α的能力。 结论：β-1,4-GalT-I可能参与了OA的滑膜炎症反应,并在这一过程中发挥重要作用。 [关键词] β-1,4-半乳糖基转移酶-I;骨性关节炎;滑膜炎症;肿瘤坏死因子α;大鼠     

AML-SCID 小鼠模型的建立及鉴定*

目的筛选出高表达HOXA9、HOXA10基因的急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia,AML)细胞株,并建立AML模型,为研究HOXA9、HOXA10与AML的关系奠定基础。方法经RT-PCR检测HOXA9、HOXA10在U937、HL-60、NB4、Jurkat中的表达情况,筛选出高表达的细胞株;外周血瑞氏染色、骨髓流式细胞仪、脏器HE染色鉴定移植性U937人白血病重度联合免疫缺陷(Severe combined immunodeficiency,SCID)小鼠模型。结果 HOXA9、HOXA10在U937中均高表达,在HL-60、Jurkat中不表达(或表达水平较低),NB4高表达HOXA10;U937细胞在濒死小鼠骨髓细胞所占的比例为(20.62±9.66%)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);病理检查发现U937细胞可浸润肝、脾、肺、肾器官。结论 U937高表达HOXA9、HOXA10,是研究HOXA9、HOXA10基因与白血病关系的合适细胞株,并成功建立U937-SCID人M5型急性髓性白血病模型。     

小鼠大肠癌肝转移微创模型的建立与评价

目的：根据大肠癌肝转移模型的手术损伤程度筛选合适的建模方法。方法：以BALB/c小鼠为对象,随机分为3组,分别经直肠黏膜内、腹腔外脾内和腹腔内脾原位等方法注射0.2 mL鼠结肠癌细胞株CT26（浓度106个/mL）,观察小鼠成瘤情况、肝转移率,并用酶联免疫吸附实验检测各组小鼠建模后5 d INF-γ的表达水平。结果：3种方法均能建立大肠癌肝转移模型,直肠黏膜内、腹腔外脾内和腹腔内脾原位注射法的肝转移率分别为37.5%、87.5%和87.5%;各组建模7 d后血清中INF-γ的水平分别为345.8、1 085.2和680.4 pg/mL,腹腔外脾内注射法INF-γ的表达水平较其它2组明显增高（P〈0.05）。结论：脾内原位注射法是一种建立大肠癌肝转移最有效且损伤最小的一种方法,比较适合用来研究大肠癌肝转移的相关分子机制。     

一种C57BL/6小鼠的dMCAO模型建立及评估*

目的: 运用电凝法制备C57BL/6小鼠远端大脑中动脉闭塞(Distal middle cerebral artery occlusion,dMCAO)模型,完善急性缺血性脑卒中(Stroke)的小鼠模型方案。方法: 54只雄性8～10周龄的C57BL/6小鼠,随机数字表法分为正常组6只,假手术组6只,dMCAO模型组42只。造模采用双电凝一侧大脑中动脉皮层支,同时结扎同侧颈总动脉。评估小鼠造模3 d、7 d存活率与7 d造模成功率;造模7 d采用2,3,5-三苯基四唑氮(Triphenyltetrazolium Chloride,TTC)染色评估脑梗死体积占比、激光微循环血流成像仪评估脑血流情况;造模3 d、7 d转棒实验评估小鼠运动协调能力。结果: 3 d和7 d正常组与假手术组存活率100 %,dMCAO模型组3 d和7 d平均存活率分别为83.35 %、78.43 %,dMCAO模型组造模成功率为66.7 %;通过TTC染色评估模型小鼠梗死体积,正常组与假手术组梗死体积占比为0 %,dMCAO模型组(6只)梗死体积占比为(18.22±0.89) %,95 %可信区间(17.28,19.15) %。通过激光微循环血流成像仪评估模型小鼠脑血流,正常组与假手术组两侧脑血流占比之间差异无统计学意义。dMCAO模型组(6只)梗死侧脑血流较对侧降低占比(53.85±1.22) %,95 %可信区间(52.57,55.13) %;通过转棒实验的在棒时间评估模型小鼠3 d和7 d运动能力,正常组与假手术组3 d、7 d在棒时间差异无统计学意义,dMCAO模型组(6只)与假手术组相比明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论: 通过双电凝一侧大脑中动脉同时结扎同侧颈总动脉可以建立可靠的C57BL/6小鼠dMCAO模型。     

胆囊癌肝脏侵袭动物模型的建立及初步评估

目的建立胆囊癌肝脏侵袭动物模型,并对其进行初步评估。方法取皮下移植瘤瘤块接种于裸鼠肝包膜下,接种后第45天对肝脏行CT检查,并处死裸鼠后取下肝脏行病理检查。结果 CT检查发现侵袭成功率为100%（10/10）,探查发现肝脏侵袭模型的成功率为100%（10/10）,其侵袭程度为III～IV级,CT检查的阳性率为100%（10/10）,组织病理学证实肝脏肿块均为瘤结节。结论将瘤块直接接种于肝包膜下可以成功建立胆囊癌肝脏侵袭动物模型,结合半定量组织学分级法可以对其进行组织学评估,CT可以作为初步评估该模型的影像学工具。     

小鼠肺癌原位模型的建立

目的肺癌的发病率和病死率居高不下,而目前用于实验研究的肺癌动物模型存在较大的局限性,故本研究认为建立一个稳定、类似于人体肿瘤微环境的肺癌原位模型是深入研究肺癌的基础。方法直接将稳定表达虫萤光素酶的鼠Lewis肺腺癌细胞与基质胶的混悬液注射于C57 BL/6小鼠左肺,无需打开胸腔只需将小鼠左胸部皮肤剪开约1 cm小口,定期利用小动物活体成像系统中的生物发光技术监测小鼠肿瘤形成及转移情况,并将小鼠处死后立即进行肺部组织活体取材,采用石蜡包埋、切片、HE染色做出病理学诊断。结果采用肺内注射的原位造模法成瘤率高,Lewis肺腺癌细胞数量只需0.5×105个即可成瘤,成功率达90%以上,且利用活体成像系统中的生物发光技术能监测到模型小鼠肿瘤可转移至对侧胸廓、对侧肺组织、双侧腋下及腹股沟淋巴结等。结论注射虫萤光素酶稳定表达的鼠Lewis肺腺癌细胞与基质胶混悬液构建的肺癌原位模型所需细胞数量少,成瘤率高,无手术死亡风险,转移性好,监测方便,操作简单且可重复性高,为深入研究肺癌提供了良好模型。     

冠心病痰瘀互结证小鼠模型的建立与评价研究

[目的]应用冠状动脉左前降支结扎联合高脂饲料喂养建立冠心病痰瘀互结证小鼠模型,以模拟心肌缺血复合动脉粥样硬化（AS）病理特征,从而达到模拟小鼠冠心病痰瘀互结证的病理变化。[方法]健康C57BL/6J雄性小鼠随机分为空白组和假手术组,载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）雄性小鼠随机分为血瘀组、痰浊组、痰瘀互结组。痰浊组和痰瘀互结组给予高脂饲料喂养12周,其余各组给予普通饲料喂养12周。在8周末时,对血瘀组和痰瘀互结组进行冠状动脉左前降支结扎,假手术组行穿线不结扎。[结果]观察各组小鼠一般状态,超声心动图,对小鼠血清血脂水平进行检测,并对心脏组织进行苏木精-伊红（HE）染色、对主动脉组织进行油红O染色,进而评价冠心病痰瘀互结证小鼠模型建立。[结论]ApoE^-/-小鼠采用冠状动脉左前降支结扎联合高脂饲料喂养12周,明显出现心肌缺血及AS病理特征,提示本实验方法可成功建立冠心病痰瘀互结证小鼠模型。     

纹状体注射不同剂量6-OHDA制备帕金森病小鼠模型的评价

目的纹状体内注射6-OHDA可用于制备帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型,其在小鼠模型上的行为学、形态学及多巴胺水平的变化需要进行系统评价。方法在小鼠右侧纹状体背外侧部立体定位分别注入4、6、8及10μg的6羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA),动态观察各剂量组小鼠的基本生理状况。旋转行为和转棒行为可评价PD小鼠的运动症状;酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组化染色可反映黑质-纹状体内多巴胺能系统的功能改变;高效液相色谱法能检测多巴胺(dopamine,DA)及其代谢产物的含量并分析DA代谢率。结果除了10μg 6-OHDA组的小鼠体质量呈一过性下降,其他剂量对小鼠体质量无显著影响。在6-OHDA注射一周后,各组小鼠均出现了持续性的异常旋转行为增加。此外,高剂量组(8μg及10μg)小鼠的转棒时间较低剂量组(4μg及6μg)小鼠明显缩短。TH组织化学染色显示,低剂量组小鼠损伤侧丢失了约60%的多巴胺神经元及40%的多巴胺神经纤维;而高剂量组小鼠则有超过80%的多巴胺神经元丢失和70%的多巴胺神经纤维减少。各组小鼠损伤侧纹状体内的DA水平及其代谢产物含量也显著降低,与6-OHDA注射量具有剂量依赖性;而DA代谢率却出现了代偿性增加改变。结论纹状体内注射不同剂量6-OHDA均能引起一定程度的PD病理表型,其损伤程度与6-OHDA剂量相关,为研究PD不同病理阶段及其干预策略提供了新的模型。     

糖尿病大鼠模型的建立及评价

目的：探讨链脲佐菌素（STZ）制备可靠稳定糖尿病大鼠模型的理想剂量及模型评价。方法采取一次性腹腔注射不同剂量 STZ 45 mg/kg 的方法制备糖尿病大鼠模型,于给药后5 d、15 d 检测大鼠空腹血糖值（FBG）及观察一般生理情况。结果试验组造模后第5天、15天空腹血糖值为（16.82±1.44）mmol/L、（24.70±2.36）mmol/L;试验组大鼠血糖值随时间推移逐渐升高,试验组的 FBG 与对照组比较差异显著（P<0.01）,成模率高,糖尿病模型大鼠血糖稳定。结论腹腔一次性注射 STZ 45 mg/kg 剂量是制备糖尿病大鼠模型的理想剂量。     

动脉粥样硬化兔模型的建立及评价

目的 探索制备快速、稳定可靠的动脉粥样硬化家免模型.方法 采用高脂饲料喂养与免疫损伤相结合的方法 建立家兔动脉粥样硬化模型.于第10周末颈动脉取血测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的含量,并作形态学观察.结果 饲养10周后,模型组血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白含量(LDL)显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01).模型组主动脉内壁肉眼及光镜下均可见典型动脉粥样斑块.结论 高脂饲料喂养加免疫损伤法可以快速短期内成功复制出动脉粥样硬化模型.     

Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型的制备及评价

目的提取纯化Ⅱ型胶原蛋白(CⅡ)并制备胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型。方法采用胃蛋白酶消化法从鸡胸骨剑突上提取CⅡ,通过DEAE-52纤维树脂处理、NaC l的反复盐析纯化并采用SDS-PAGE鉴定和吸收光谱分析。所提CⅡ加以完全弗氏佐剂采用皮内注射的方法建立大鼠C IA模型。容积法检测大鼠足爪肿胀度并进行评分;HE染色法对关节组织作病理检查;ELISA法检测体内抗CⅡ抗体的含量;放免法检测血清细胞因子IL-1β、TNFα-含量。结果自提的CⅡ与标准品分子量一致,最大吸收峰为226 nm。CIA大鼠足爪的炎症反应强烈,关节肿胀明显;病理检查关节组织可见其组织纤维化,伴有大量炎性细胞浸润;血清中抗CⅡ抗体水平和IL-1β、TNFα-显著升高。结论该方法提纯CⅡ简单、高效,用以制备大鼠CIA模型成功。