卵巢恶性肿瘤p53基因表达产物及检测p53第七外显子突变的初步 …

为探讨ｐ５３基因突变表达产物与卵巢恶性肿瘤临床生物学行为以及ｐ５３第七外显子突变情况之间的关系，采用聚合酶链反应单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）对５０例卵巢恶性肿瘤中的２３例病人新鲜组织标本进行了ｐ５３基因突变蛋白表达检测，结果显示：卵巢恶性肿瘤免疫组化ｐ５３阳性表达率２４％，２３例新鲜组织标本中４例ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测第七外显子异常。提示ｐ５３阳性表达可能与遗传因素有关（Ｐ＝０．０３８），     

卵巢恶性肿瘤p53基因表达产物及检测p53第七外显子突变的初步分析研究

为探讨ｐ５３基因突变表达产物与卵巢恶性肿瘤临床生物学行为以及ｐ５３第七外显子突变情况之间的关系。采用聚合酶链反应单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）对５０例卵巢恶性肿瘤中的２３例病人新鲜组织标本进行ｐ５３基因突变蛋白表达检测。结果显示：卵巢恶性肿瘤免疫组化ｐ５３阳性表达率２４％。２３例新鲜组织标本中４例ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测第七外显子异常。提示ｐ５３阳性表达可能与遗传因素有关（Ｐ＝０．０３８）；卵巢恶性肿瘤第七外显子突变可出现ｐ５３蛋白高表达；第七外显子突变可出现于不同临床分期及组织分型     

p53基因突变及染色体倍性与大肠癌转移之间关系初探

目的研究大肠癌转移与ｐ５３基因突变及染色体倍性之间的关系。方法采用特异合成引物对ｐ５３基因的有关外显子进行ＰＣＲ扩增，结合单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和银染技术，检测１５例大肠癌手术标本ｐ５３基因的突变；使用流式细胞仪（ＦＡＣＳ）分析其染色体的倍性。结果８例有转移灶大肠癌病人中７例表现有ｐ５３基因的突变，而７例未转移大肠癌病人只显示３例有ｐ５３基因的突变。异倍体的９例病人中７例有ｐ５３基因突变，二倍体的６例病人中有３例有ｐ５３基因突变。结论大肠癌转移与ｐ５３基因突变细胞染色体异倍性三者相互存在着密切联系     

银染PCR—SSCP方法检测恶性纤维组织细胞瘤P53基因点突变

应用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测常规石蜡包埋恶性纤维组织细胞瘤（ＭＦＨ）中ｐ５３基因点突变。结果显示，１６例ＭＦＨ中，９例ＳＳＣＰ阳性，表明这些病例相应ＤＮＡ片段中发生了点突变，其中第５、６、７、８外显子ＳＳＣＰ阳性出现的例次数分别为１、４、４、３次（２例转移的病例同时有６、７、８三个外显子异常）。微波处理ＡＢＣ法检测突变型ｐ５３蛋白表达，１０例为阳性，ＳＳＣＰ与ｐ５３蛋白表达的阳性符合率为９０．０％，ｐ５３基因点突变及蛋白表达与ＭＦＨ的组织学亚型无关。ｐ５３基因突变可能在ＭＦＨ的发生发展及转移中起作用。本研究结果表明，银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法。     

24例肾母细胞瘤WT1基因突变筛查

目的筛查ＷＴ１基因在肾母细胞瘤中的改变情况。方法我们采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术及多重ＰＣＲ方法对２４例肾母细胞瘤标本ＷＴ１基因第４，６－１０外显子进行筛查，结果发现２例标本存在ＳＳＣＰ电泳迁移率的异常。应用双重ＰＣＲ方法证实一例为ＷＴ１基因第８外业子的纯合性缺失。结论提示ＷＴ１基因多种形式的突变均可导致肾母细胞瘤的发生，但可能并不是导致散发型肾母细胞瘤的主要因素。     

非小细胞肺癌患者ＸＲＣＣ１基因多态性对ｐ５３基因突变发生的影响

目的：观察非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者ＸＲＣＣ１基因３９９位点多态性以及吸烟对ｐ５３基因突变发生的影响。方法：运用不对称ＰＣＲ技术扩增ｐ５３基因的第５～８外显子,用聚合酶链反应 单链构象多态性分析法（ＰＣＲ-ＳＳＣＰ）检测ｐ５３基因突变,并对有差异的结果测序验证;运用ＰＣＲ技术扩增ＸＲＣＣ１基因的第１０外显子,从正反两个方向对扩增片段进行ＤＮＡ测序分析其多态性;同时了解吸烟与它们的关系。结果：３８例可手术的ＮＳＣＬＣ患者中发现１６例有ｐ５３基因的突变,发生突变的１６例中６例至少携带１个ＸＲＣＣ１-３９９Ｇｌｎ等位基因,１０例为野生基因型ＸＲＣＣ１-３９９Ａｒｇ／Ａｒｇ,用二项分类Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归模型分析ＸＲＣＣ１-３９９Ｇｌｎ多态性与ｐ５３基因突变两者的关系,优势比（ＯＲ）为１.５３６（９５％ＣＩ：０.３７６～６.２８０）;该模型中吸烟与ｐ５３基因突变的ＯＲ为１.５２４（９５％ＣＩ：０.２５０～９.２９５）。结论：ＮＳＣＬＣ患者中,ＸＲＣＣ１基因３９９位点多态性和吸烟情况对ｐ５３基因突变发生无明显影响。     

肺癌支气管活检组织及痰液中p53基因突变的检测及临床应用

采用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法，从分子水平探讨了ｐ５３基因突变与肺癌发生之间的关系。对４３例肺癌支气管活检组织及１０例痰液标本进行了ｐ５３基因第５～８外显子突变的检测，发现４３例中有１７例发生了ｐ５３突变，突变率为３９．５％（１７／４３），其中鳞癌为３０．８％（４／１３），腺癌为３５．３％（６／１７），小细胞癌为５８．３％（７／１２），大细胞癌为０％（０／１）。本文对同一患者的痰液标本检测结果与组织标本中ｐ５３基因突变检出率一致，均为３０．０％（３／１０）。采用χ２检验表明，ｐ５３突变在性别构成、临床分期、组织类型及淋巴结转移等方面两组均无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。但吸烟组ｐ５３突变率（５３．８％）明显高于非吸烟组（１７．６％）；低中分化组ｐ５３突变率（５１．７％）明显高于高分化组（１４．３％），提示ｐ５３基因突变与吸烟及细胞的分化程度存在相关性（Ｐ＜０．０５）。     

非小细胞肺癌中p53基因突变的初步研究

为了解非小细胞肺癌中ｐ５３基因突变的情况，应用改良聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术检测１７例非小细胞肺癌中ｐ５３基因第５～８外显子的突变情况，有８例存在ｐ５３基因突变，突变率为４７．００％（８／１７），其中鳞癌为５５．５６％（５／９），腺癌为３７．５０％（３／８）。本研究结果表明：非小细胞肺癌中ｐ５３基因突变较为常见；改良后的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术对非小细胞肺癌的基因诊断具有潜在性应用价值     

喉鳞癌中人乳头瘤病毒感染与p53基因突变的关系

目的：探讨抑癌基因ｐ５３突变和人乳头状瘤病毒１６,１８型（ＨＰＶ１６,１８）感染与喉鳞癌的关系及二者在喉鳞癌中的相关性。方法：应用聚合酶链反应结合单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术对４０例喉鳞癌组织中ＨＰＶ１６,１８ＤＮＡ及ｐ５３基因第５,７外显子的突变进行检测。结果：ＨＰＶ１６,１８的检出率分别为３５％（１４／４０）和１０％（４／４０）。１２例（３０％）标本ｐ５３基因突变,其中第５外显子     

林县食管癌中p53基因突变与P^53高表达相关性的研究

用免疫组织化学染色和ＰＣＲ直接测序法分别检测了食管癌高发区林县食管癌组织中Ｐ５３蛋白表达水平和基因突变以及二者的相关性。在３３例食管癌标本中，２３例发现有Ｐ５３的高表达，１０例未发现可检测到的Ｐ５３蛋白，其阳性率为６９．７％。Ｐ５３基因第５→８外显子出现点突变和缺失者１２例，其频率为３６％。在１２例ｐ５３基因突变的病例中，９例均有Ｐ５３蛋白的高度表达，提示ｐ５３基因突变与Ｐ５３蛋白的表达密切相关，并是造成Ｐ５３高表达的重要原因之一。Ｐ５３突变和Ｐ５３蛋白表达在食管癌组织中发生的高频率说明：Ｐ５３的改变是食管癌癌变过程中重要的生物学事件之一。     

P~(53)基因突变及P~(53)突变蛋白在卵巢上皮肿瘤中表达检测方法的探讨

采用改进的ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术和ＳＰ免疫组化技术检测３６例卵巢上皮癌，１２例卵巢上皮交界瘤和１５例良性卵巢上皮肿瘤的Ｐ５３基因的突变和突变蛋白的表达。结果卵巢上皮癌Ｐ５３基因突变率为３０．６％，突变蛋白表达为５８．４％。Ｐ５３基因突变主要发生在外显子５～８上，以第７外显子突变率最高。交界性肿瘤个别出现Ｐ５３基因突变和突变蛋白表达，而在良性肿瘤无一例出现。提示Ｐ５３基因突变是卵巢癌形成过程中的晚期事件。Ｐ５３基因突变可作为肿瘤标记物判定卵巢癌的预后。ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ非同位素基因突变技术克服了常规ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测方法的缺陷，可提高准确性。     

155例肺癌中p53基因突变的研究

ｐ５３基因在肺癌中有很高的突变率。为观察ｐ５３基因突变与肺癌临床病理类型之间的关系,我们应用ＰＣＲＳＳＣＰ方法检测了１５５例原发性肺癌手术标本中的ｐ５３基因５～８外显子。材料与方法１标本：１５５例原发性肺癌手术标本取自我院１９９１～１９９７年住院...     

乳腺癌p53基因突变规律及其预后意义

目的 探讨ｐ５３基因突变在乳腺癌发生发展中的演变规律及其与预后的关系。方法 应用ＰＣＲ－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析方法检测５５例原发性乳腺癌患者ｐ５３基因５～８外显子的突变情况。结果 ｐ５３基因突变发生的频率为３６．４％（２０／５５）,Ｉ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌中ｐ５３基因突变阳性率分别为４７．２％（１７／３６）和１５．８％（３／１９）,而且突变多发生在５～６外显子。突变阳性患者其无病生     

胆管癌p53基因突变和蛋白表达的研究

目的了解胆管癌ｐ５３基因突变和蛋白表达的变化。方法应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术检测胆管癌中ｐ５３基因突变，并用亲和素－生物素－过氧化物酶复合物（ＡＢＣ）免疫组织化学染色方法检测胆管癌ｐ５３蛋白的表达。结果１１例胆管癌中，３例胆管癌样品ＰＣＲ－ＳＳＣＰ单链电泳带迁移异常，依据ＤＮＡ单链构象与分子电泳迁移的关系，胆管癌ｐ５３基因５～８外显子的突变率为２７％；６例有ｐ５３蛋白异常表达，阳性率为５５％。结论导致ｐ５３蛋白异常表达的ｐ５３基因突变是胆管癌的一种分子结构改变，可能在胆管癌的发生和发展中起着一定的作用。     

p53基因在鼻咽癌中的热点突变

采用ＤＮＡ测序和免疫组织化学技术对２３例鼻咽癌标本ｐ５３基因第７、８外显子的突变和该基因突变后的表达情况进行了检测，发现６５．２％（１５／２３例）的标本存在ｐ５３基因突变，且突变点均位于第２７３密码子第２个碱基，均为Ｇ：Ｃ→Ａ：Ｔ颠换，所编码的精氨酸为组氨酸所取代。免疫组化结果显示，除上述１５例突变标本外，另有１例存在ｐ５３过量表达。研究提示：鼻咽癌中ｐ５３基因突变率较高，该基因的突变和表达可能在鼻咽癌的发病中起着重要的作用；ｐ５３基因突变以第２７３密码子为突变热点，可能是由于患者接触了环境中目前尚未确知的某种特殊致癌物所致，或该点突变为鼻咽癌发病过程中的必要因素。     

银染PCR－SSCP法检测人纤维源性肿瘤p53基因点突变

应用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法检测８７例良恶性人纤维源性肿瘤ｐ５３基因５～８号外显子点突变。结果显示：人纤维源性肿瘤ｐ５３基因总的点突变率为２１．８％，其中５、６、７、８号外显子所占百分率分别为７．７％、３８．５％、２６．９％和２６．９％。随着肿瘤恶性程度的增加，ｐ５３基因点突变增加。ｐ５３基因点突变与肿瘤的分化程度及转移有密切关系，ｐ５３基因点突变的检测有可能成为判断纤维源性肿瘤恶性程度，转移潜能及预后的一项指标。我们的结果还显示银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法是检测基因突变的有效、快速、简便的方法。     

肺癌组织抑癌基因P53异常分析

Ｐ５３基因５－８外显子ＰＣＲ产物的ＤＮＡ序列分析及石蜡包埋组织Ｐ５３鼠抗人单克隆抗体（Ｄｏ－１）免疫组化分析发现：５７例原发性肺癌中３７例有Ｐ５３蛋白积累。ＤＮＡ／ＰＣＲ产物直接测序发现：９／１２例小细胞肺癌（ＳＣＬＣ），８／１５非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）Ｐ５３基因突变，错义突变为１２／１７，Ｇ→Ｔ突变为６／１７。免疫组化发现：１１／１９例ＳＣＬＣ，１９／３７例ＮＳＣＬＣ Ｐ５３蛋白染色阳性。４／     

肝细胞癌组织和癌周组织中p53基因密码子249突变的比较研究

目的：本研究通过比较研究ＨＣＣ 癌组织和癌周组织中ｐ５３ 基因密码子２４９ 特征性突变来进一步阐明该基因在ＨＣＣ 发生机制中的意义。方法：收集９ 份癌组织中经单链构型多态性分析研究证实存在密码子２４９ 突变的ＨＣＣ 标本和１１ 例无此突变的ＨＣＣ 标本,采用等位基因特异性ＰＣＲ（ＡＳ－ ＰＣＲ） 方法比较研究癌组织和癌周组织中密码子２４９ 突变情况。结果：２０ 例ＨＣＣ 中,癌周组织中密码子２４９ 特征性突变检出率为７０ ％ 。９ 例ＳＳＣＰ 阳性者的癌周组织中的特征性突变检出率达１００ ％ 。１１ 例阴性患者的癌组织和癌周组织也能检出一定水平的突变。结论：ｐ５３基因密码子２４９ 突变在非癌肝组织中广泛存在。癌组织中密码了２４９ 特征性突变可能发生在肿瘤形成之前。     

卵巢上皮性癌p53基因改变,蛋白过度表达及临床意义

目的：检测卵巢上皮性癌ｐ５３基因改变、蛋白过度表达，探讨其与临床病理和预后的关系。方法：应用ＡＢＣ免疫组化法检测５６例卵巢上皮性肿瘤ｐ５３蛋白表达，对其中４０例应用聚合酶链反应单链构象多态性（ＰＣＲＳＳＣＰ）溴乙锭染色法检测ｐ５３基因５～８外显子突变及杂合性缺失（ＬＯＨ）。结果：（１）ｐ５３蛋白表达阳性率：良性肿瘤０／１０；交界性肿瘤１／４；卵巢上皮性癌２２／４２（５２．３８％），浆液性与粘液性癌表达相似，且３例原发灶与转移灶表达一致。（２）ｐ５３基因突变率：良性肿瘤０／１０；交界性肿瘤１／３；卵巢上皮性癌１３／２７（４８．１５％），其中８例杂合型基因的病例中４例基因突变伴等位基因杂合性缺失。本研究１３例ｐ５３基因突变者中１２例ｐ５３蛋白过度表达。ｐ５３蛋白过度表达与卵巢上皮性癌组织学类型、临床分期及预后无关（Ｐ＞０．０５）。而与卵巢上皮性癌病理有关（Ｐ＜０００５）。结论：ｐ５３基因改变及蛋白过度表达在卵巢癌中较常发生，且与卵巢上皮性癌病理分级有关，这些改变可能是卵巢上皮性癌的早发事件，亦在卵巢上皮性癌的发生发展过程中起重要作用。     

人乳头瘤病毒感染和p53基因突变与宫颈癌的关系

目的：探讨人乳头瘤病毒１６ 和１８ 型及抑癌基因ｐ５３ 突变对宫颈的致癌作用以及 Ｈ Ｐ Ｖ 感染与ｐ５３ 基因突变的相关性。方法：采用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 技术和限制性酶切片段多态性分析（ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ） 技术对３４ 例原发性宫颈癌组织及３０ 例正常宫颈组织 Ｈ Ｐ Ｖ１６ ,１８ 型 Ｄ Ｎ Ａ 及抑癌基因ｐ５３ 的突变进行了检测。结果： Ｈ Ｐ Ｖ１６ ,１８ Ｄ Ｎ Ａ 在宫颈癌的总阳性率为６４７ ％ （２２／３４） ,正常宫颈组织只有６７ ％ 阳性,８例宫颈癌组织出现ｐ５３ 基因第６ 外显子突变,其中２ 例为 Ｈ Ｐ Ｖ１６ Ｄ Ｎ Ａ 阳性、１ 例 Ｈ Ｐ Ｖ１８ Ｄ Ｎ Ａ 阳性。结论：宫颈癌的发病与 Ｈ Ｐ Ｖ 感染及ｐ５３ 基因突变有关,宫颈癌组织中ｐ５３ 基因突变与 Ｈ Ｐ Ｖ 感染无关。