褪黑素对氧自由基诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的：探讨氧自由基在阿尔茨海默病(Alzheimer Disease，AD)发生中的作用及可能机制，评价褪黑素(Melatonin，MT)的临床应用价值。方法：采用超氧自由基产生系统黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶系统(X／XO)作用于PC12细胞，以褪黑素拮抗其作用，观察细胞的形态学变化；MTT法检测细胞存活率，DNA电泳和流式细胞术分析细胞凋亡情况，RT-PCR技术测定凋亡相关基因bcl-2、bax的表达。结果：X/XO作用后，PC12细胞出现凋亡特征性改变，凋亡率增加，电泳呈现DNA ladders，凋亡相关基因bax上调：而10^-5M褪黑素即能改善凋亡情况。结论：氧自由基可诱导神经元凋亡从而促进AD发生，其机制与促凋亡相关基因Bax表达增高有关；褪黑素可减缓神经元凋亡，可用于临床预防与治疗。     

氧化应激及其介导的细胞凋亡在糖尿病肾病中的作用

氧化应激产生的活性氧簇(ROS)在糖尿病肾病(DN)的发病机制中起重要作用.ROS通过激活线粒体、DNA氧化损伤、NF-κB及影响基因表达等途径诱导细胞凋亡,促进DN病的发生发展.减少ROS的生成及阻断ROS产生后所激活的细胞凋亡途径可成为治疗DN的新靶点.     

氧化应激与胰岛β细胞的关系

正常生理状态下,机体的活性氧簇(ROS)的产生与消除处于一个动态平衡中;糖尿病患者,一方面由于ROS的产生明显增多,而另一方面胰岛β细胞内的抗氧化系统处于一个较低的水平,因此易于发生胰岛β细胞氧化应激反应,从而造成胰岛β细胞的凋亡及功能下降,胰岛素合成分泌明显减少。近年来,一些动物、细胞实验及临床试验对抗氧化剂的应用展开了研究,可望将来对糖尿病的防治能提供更多的帮助。     

异氟醚对Aβ25-35诱导大鼠PC12细胞氧化应激损伤的影响及海藻糖的保护作用

目的:探讨吸入麻醉药异氟醚对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导大鼠PC12细胞氧化应激损伤的影响,阐明海藻糖对其可能的预防及保护作用。方法:将大鼠PC12细胞随机分为正常对照组(Control组)、异氟醚组(Iso组)、Aβ25-35组(Aβ组)、异氟醚+Aβ25-35组(Iso+Aβ组)、异氟醚+Aβ25-35+海藻糖组(Iso+Aβ+Tre组)和海藻糖组(Tre组)。正常对照组,PC12细胞给予正常细胞培养基培养;Iso组,PC12细胞给予2%异氟醚;Aβ组,PC12细胞给予10 μmol·L^-1 Aβ25-35;Iso+Aβ组,PC12细胞给予2%异氟醚和10 μmol·L^-1 Aβ 25-35;Iso+Aβ+Tre组,PC12细胞给予2%异氟醚、10 μmol·L^-1 Aβ25-35和200 mmol·L^-1海藻糖;Tre组,PC12细胞给予200 mmol·L^-1海藻糖。采用MTT法检测细胞存活率;Hoechst 33342荧光染色检测细胞凋亡率;二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)荧光法检测细胞中活性氧(ROS)水平;化学发光法测定细胞中丙二醛(MDA)水平,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及过氧化氢酶(CAT)活性。结果:与正常对照组比较,Iso组、Aβ组和Iso+Aβ组PC12细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.01),细胞存活率明显降低(P<0.05或P<0.01),细胞中ROS和MDA水平(P<0.05或P<0.01)明显升高,细胞中SOD、GSH-Px和CAT活性明显降低(P<0.05或P<0.01);与Iso和Aβ组比较,Iso+Aβ组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),但细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞中ROS、MDA水平(P<0.05)明显升高,细胞中SOD和GSH-Px和CAT活性明显降低(P<0.05);与Iso+Aβ组比较,Iso+Aβ+Tre组细胞凋亡率(P<0.05)明显降低,细胞存活率明显升高(P<0.05),细胞中ROS和MDA水平明显降低(P<0.05),细胞中SOD、GSH-Px和CAT活性明显升高(P<0.05)。结论:吸入麻醉药异氟醚能够加剧Aβ25-35诱导PC12细胞氧化应激损伤和细胞凋亡,海藻糖能够通过抗氧化和抗凋亡作用拮抗异氟醚的细胞毒性。     

黄连素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其相关的氧化应激机制

目的已有较多研究表明黄连素对许多肿瘤有治疗作用。文中探讨黄连素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其相关的氧化应激机制。方法 MTT法检测不同浓度黄连素(10、25、50、75、100μmol/L)对细胞活力的影响,Hochest33342检测不同浓度黄连素(10、25、50、75、100μmol/L)对细胞凋亡的影响;2,7-二氯荧光黄双乙酸盐(2’,7’-dichlorofluorescein diace-tate,DCFH-DA)荧光探针检测黄连素(50μmol/L)处理后MCF-7细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的变化;5,5’,6,6’-四氯-1,1’,3,3’-四乙基苯丙咪唑羰花青碘化物(JC-1)荧光探针检测黄连素处理后MCF-7细胞线粒体膜电位(mitochon-drial membrane potential,△Ψm)的变化。结果黄连素作用MCF-7细胞48 h,呈浓度依赖性致MCF-7细胞活力降低,诱导其凋亡。黄连素作用诱导MCF-7细胞内ROS大量生成并伴随△Ψm降低。结论黄连素具有抑制乳腺癌细胞活力,诱导其凋亡的作用,黄连素可能通过对乳腺癌细胞内氧化还原状态的调节,诱导ROS大量生成,从而损伤线粒体功能,诱导△Ψm降低,参与抗肿瘤作用。     

槲皮素对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用及机制研究

目的 探讨槲皮素对H2O2损伤的大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的保护作用及机制.方法 先选取不同浓度H2O2(100、200、300、400、500μmol/L)干预PC12细胞,确定氧化损伤模型的条件,然后将PC12细胞分为对照组、模型组和槲皮素(6.25、12.5、25μmol/L)组.通过MTS法、Hoechst...     

高热预处理对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨高热预处理（HPC）对过氧化氢（H2O2）所致大鼠嗜铬细胞瘤株（PC12）细胞氧化应激损伤的影响。方法 体外培养PC12细胞,将细胞分为正常对照组、HPC组、H2O2组、HPC＋H2O2组,采用MTT法测定细胞活力,乳酸脱氢酶（LDH）检测细胞损伤,流式细胞术分析细胞凋亡。结果 与正常对照组相比,H2O2组引起PC12细胞MTT活力明显下降（P〈0．01）,LDH释放量增多（P〈0．01）,凋亡明显;而与H2O2处理组相比,HPC＋H2O2组则表现为MTT活力升高（P〈0．05）,LDH释放量减少（P〈0．05）,且没有出现明显凋亡。结论 高热预处理对H2O2所致PC12细胞氧化应激损伤产生保护作用。     

氧化应激与肾脏细胞凋亡

氧化应激产生的活性氧(ROS)与细胞凋亡存在密切的关系。ROS可通过激活线粒体、Bcl-2家族、NF-κB及MAPKS家族、Caspase家族等途径引起细胞凋亡,细胞凋亡在肾脏疾病的发病过程中起着重要作用。本文就氧化应激在肾脏疾病发生发展中的作用及其诱导细胞凋亡的机制进行了综述。     

酸枣仁汤含药血清对皮质酮诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究酸枣仁汤(Suan zao ren tang,SZRT)含药血清对皮质酮(CORT)诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法:运用MTT法检测细胞增殖率,流式细胞仪法、Giemsa染色法测定细胞凋亡率和细胞DNA周期拟合以及凋亡细胞的显微形态学改变。结果:CORT组细胞增殖率显著下降,凋亡率明显增高,光镜可见明显凋亡形态改变及多个凋亡小体;SZRT含药血清组细胞增殖率升高,凋亡率降低,细胞形态完整,偶见凋亡小体。结论:CORT可引起PC12细胞增殖率下降并伴随细胞凋亡,SZRT含药血清可保护CORT诱导的PC12细胞损伤,提高其存活率,对抗凋亡。     

褪黑素对过氧化氢诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞氧化应激的改善作用及其机制

目的:研究褪黑素对过氧化氢(H2O2)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)氧化应激损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法:体外培养SH-SY5Y细胞,将SH-SY5Y细胞分为对照组、H2O2组、不同浓度褪黑素组和2-苯基-N-乙酰色胺(Luzindole)组.对照组为正常培养SH-SY5Y细胞,H2O2组加入...     

白藜芦醇对高糖诱导足细胞损伤的改善作用及机制探讨

[目的]观察白藜芦醇（RSV）对高糖诱导足细胞凋亡的影响及作用机制。[方法]采用体外高糖诱导作为足细胞损伤模型,细胞分为3组：对照组为5 mmol/L低糖培养液（LG）;模型组为30 mmol/L高糖培养液（HG）;RSV干预组：HG+5 μmol/L RSV;HG+10 μmol/L RSV,培养48 h后采用流式细胞术检测足细胞的凋亡情况;DHE探针观察细胞内活性氧自由基（ROS）生成;激光共聚焦检测线粒体膜电位及线粒体内ROS合成;Western blot检测线粒体凋亡途径相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（caspase）3、caspase 9的表达情况。[结果]与HG组相比,RSV可呈剂量依赖性的抑制高糖诱导的足细胞凋亡;荧光探针结果显示,RSV干预后细胞内及线粒体ROS生成明显低于HG组;JC-1染色显示,与HG组相比,RSV干预可显著提高线粒体膜电位;Western blot结果显示,随RSV干预浓度的提高,caspase 3、caspase 9表达水平明显下调,差异具有统计学意义（P<0.05）。[结论]RSV呈浓度依赖性的抑制高糖诱导的足细胞凋亡,其保护作用可能与抑制氧化应激,改善线粒体功能障碍相关。     

芍药苷对LPS诱导H9C2细胞氧化应激损伤的作用

目的探讨芍药苷对脂多糖（1ipopolyrsaccharides,LPS）诱导H9C2细胞氧化应激损伤的作用。方法采用LPS刺激H9C2细胞来检测相应的氧化应激指标从而间接反映细胞损伤程度,通过检测细胞内活性氧团基（reactiveoxygenspecies,ROS）水平的变化来观察芍药苷对其作用。本实验将细胞分为正常对照组、LPS氧化损伤组、LPS加芍药苷组（低、中、高剂量）,按实验设计因素处理后,用荧光酶标仪及流式细胞仪检测细胞内ROS水平。结果芍药苷对H9C2细胞具有低毒性,它可以降低胞内ROS的水平,且在本实验使用浓度范围内,芍药苷使细胞内ROS降低呈浓度依赖性;在本实验设计的时问范围内,芍药苷使细胞内ROS下降呈时间依赖性。结论芍药苷对LPS诱导H9C2细胞氧化应激损伤具有明显的改善作用。     

氧化应激调控细胞外基质代谢的研究进展

机体遭受有害刺激引起活性氧簇(ROS)生成增加或抗氧化防御能力减弱时,可导致氧化-抗氧化失衡,引起氧化应激(OS)。OS可通过激活TGF-β1/Smad3、MAPK/ERK、PI3K/Akt、JAK/STAT、Nrf2/ARE、Wnt/β-catenin等一系列信号通路及其相关效应因子,造成组织器官细胞外基质(ECM)成分代谢及相关因子表达异常,参与骨关节、心血管、肝、肾等组织器官ECM代谢异常疾病的发生发展。目前关于OS和盆腔器官脱垂的关联性的报道较少。     

雷公藤甲素对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制研究

探讨雷公藤甲素对β- 淀粉样蛋白25-35（Aβ25-35）诱导PC12 细胞损伤的保护作用及其机制。方法通过噻唑蓝（MTT）法确立Aβ25-35诱导PC12 细胞损伤模型的工作浓度;同时利用MTT 法检测1×10-11、1×10-10和1×10-9 mol/L雷公藤甲素对细胞活性的影响,以及雷公藤甲素和Aβ25-35同时处理细胞后对细胞活性的影响。PC12细胞随机分为3组：对照组、Aβ25-35处理组、Aβ25-35和雷公藤甲素处理组。细胞处理24 h后,利用免疫荧光法检测细胞中活化Caspase-3的表达,同时采用逆转录聚合酶链反应检测凋亡相关基因-2 和的表达水平。结果Aβ25-35在10 μmol/L工作浓度下可诱导PC12 细胞复制阿尔茨海默病体外细胞损伤模型,其细胞存活率为（58±6）%;单纯雷公藤甲素在1×10-11、1×10-10和1×10-9 mol/L浓度下处理细胞对细胞活性无显著影响。Aβ25-35处理细胞后,细胞活性降低,活化Caspase-3在细胞中表达升高,同时Bax mRNA表达升高,而Bcl-2 mRNA 的表达下降。然而,雷公藤甲素和Aβ25-35同时处理细胞时,前者能够降低Aβ25-35对PC12 细胞的毒性损伤,且细胞活性随雷公藤甲素浓度的增加而升高;同时活化Caspase-3在细胞中的表达,Bcl-2 和Bax mRNA 表达水平也受抑制。结论雷公藤甲素可能通过调节-3、及-2 基因的表达以抑制细胞凋亡,从而对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤发挥保护作用。     

蒺藜皂苷对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨蒺藜皂苷(GSTT)对H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤的保护作用.方法 用H2O2刺激PC12细胞使其发生氧化应激损伤,MTT法检测PC12细胞活性,流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率及线粒体膜电位变化,Hoechst33258染色观察PC12细胞核形态,琼脂糖凝胶电泳观察DNA ladder图谱.结果 与模型组比较,GSTT各剂量组可使PC12细胞存活率提高(P<0.001,P<0.01),凋亡率降低,线粒体膜电位回升,细胞核浓染致密数减少,无典型DNA ladder条带,且在一定范围呈剂量依赖性.结论 蒺藜皂苷对H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能与稳定线粒体膜电位有关.     

呼吸机相关性肺损伤中氧化应激诱导的细胞凋亡机制及乌司他丁的改善作用

目的:分析呼吸机相关性肺损伤中氧化应激介导的细胞凋亡机制及乌司他丁的改善作用,为相关研究及临床治疗提供借鉴.方法:40只SD大鼠随机分为4组:对照组、大潮气量模型组、乙酰香草素及乌司他丁组(n=10),除对照组外,其余各组大鼠给予大潮气量造模,乌司他丁组大鼠在通气前预灌注乌司他丁,乙酰香草素组给予乙酰香草素治疗,模型组大鼠给予等剂量0.9％ NaCl溶液.分析各组大鼠支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子及谷胱甘肽过氧化物酶水平的变化,western blotting分析氧化应激相关蛋白及细胞凋亡蛋白的变化.结果:模型组灌洗液中肿瘤坏死因子水平明显增高,而谷胱甘肽过氧化物酶明显降低,NADPH氧化酶亚基p22、p47及细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase3和Caspase9表达上调,而抑制凋亡蛋白Bcl2表达降低,乙酰香草素及乌司他丁可以显著逆转上述指标的异常.结论:乌司他丁可以通过抑制氧化应激细胞凋亡缓解呼吸机相关性肺损伤.     

氧化应激在高糖诱导成骨细胞凋亡中的作用

目的：探讨氧化应激在高糖诱导成骨细胞凋亡中的作用。方法：体外培养的MC3T3-E1细胞,分为正常对照组、N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)组、11.0 mmol/L高糖组、11.0 mmol/L高糖+NAC组、22.0 mmol/L高糖组、22.0 mmol/L高糖+NAC组。应用Annexin V-FITC/PI处理不同组别细胞,流式细胞术检测细胞凋亡;Honchest33258 染色观察细胞核形态;采用MTT法检测细胞增殖;采用DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧类（reactive oxygen species,ROS）的生成。结果：①11.0 mmol/L高糖组较正常对照组MC3T3-E1细胞凋亡率显著增加（P=0.004）;22.0 mmol/L高糖组较正常对照组和11.0 mmol/L高糖组MC3T3-E1细胞凋亡率明显增加（P=0.000;P=0.000）。②11.0 mmol/L高糖组较正常对照组MC3T3-E1细胞增殖轻微下降（P=0.305）;与正常对照组和11.0 mmol/L高糖组相比,22.0 mmol/L高糖组MC3T3-E1细胞增殖显著降低（P=0.001;P=0.009）。③11.0 mmol/L和22.0mmol/L高糖组MC3T3-E1细胞胞内ROS水平均明显增加（P=0.000;P=0.000）,但无明显浓度依赖性,抗氧化剂NAC可明显降低ROS水平,改善高糖所致的凋亡增加和增殖下降。结论：高糖可通过增加成骨细胞胞内ROS生成引起MC3T3-E1成骨细胞凋亡增加、增殖下降。     

细胞受到氧化应激后损伤的检测方法

正常生理状态下,机体活性氧的产生与消除处于一个动态平衡中。而在某些病理生理状态下,细胞内的自由基产物超出其自身的抗氧化能力时,便会产生氧化应激。活性氧基团引起的氧化损伤在许多慢性疾病中起着重要作用,如糖尿病、动脉粥样硬化等。近年来,一些动物、细胞实验及临床试验对细胞氧化损伤的方法展开了研究。对目前国内外常用的检测细胞氧化损伤的方法予以综述,以期为检测细胞氧化受损提供更好的参考。     

姜酚肟对谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用

【目的】探讨姜酚肟对谷氨酸（glutamate，Glu）诱导PC12细胞损伤的保护作用。【方法】体外培养PCI2细胞，建立谷氨酸诱导PC12细胞损伤的模型；采用MTT法检测细胞活力，流式细胞术和Hoechst 33258 DNA染色法检测细胞凋亡。【结果】经5mmol／L的谷氨酸处理24h后，PC12细胞活力比对照组降低，仅为对照组的58．3％。在一定浓度范围内，姜酚肟能保护PC12细胞免受谷氨酸（5mmol／L）的影响，但较高浓度时对细胞有一定的毒性。经不同浓度姜酚肟（3.125、6．25、12．5、25μg／mL）预处理后，细胞活力明显提高，其保护作用随浓度降低而升高，当浓度为6．25μg／mL时效果最好，使PC12细胞的存活率达到75．2％（P〈0．01），浓度为3．125μg／mL时，细胞存活率降为70．2％（P〈0．01）。谷氨酸（5mmol／L）能诱导PCI2细胞凋亡，处理24h后细胞凋亡率为20．1％，经姜酚肟（3．125、6．25、12．5、25μg／mL）预处理后，细胞凋亡率明显降低，分别为3．5％（P〈0．01），2．8％（P〈O．01），9．6％（P〈0．01），17．7％（P〈0．05）。【结论】谷氨酸能诱导PCI2细胞凋亡，较低浓度的姜酚肟能有效保护PC12细胞免受谷氨酸诱导的细胞损伤。其中6．25μg／mL的姜酚肟效果最好。     

多巴胺诱导PC12细胞凋亡的机制

目的　探讨多巴胺 (DA)诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞株 (PC12 )细胞凋亡的机制。　方法　采用 PC12细胞为模型 ,以 0 .45 mmol/ L的 DA来诱导细胞凋亡的发生 ,用流式细胞仪检测 PC12细胞的亚二倍体峰 ,按 Griess法测定 NO代谢产物 NO2 -的浓度 ,用 Ac- DEVD- AMC为酶作用底物 ,在荧光分光光度计下检测 CPP32活力。　结果　 DA处理组的凋亡率为 5 4.49%± 1.6 0 % ,与阴性对照组 (1.6 1%± 0 .18% )比较差异有显著性 (P<0 .0 1) ;NO2 -浓度的升高和 CPP32活化程度与阴性对照组比较差异亦有显著性 (P<0 .0 1)。　结论　 CPP32的激活是 DA诱导 PC12细胞凋亡的重要通路 ,而合成增多的 NO可能是 DA激活 CPP32的信号传递分子。