一步法实时荧光RT-PCR在快速检测甲型流感病毒中的应用

目的建立一种能快速检测甲型流感病毒的一步法实时荧光PCR方法,对样本进行准确检测。方法以甲型流感病毒特异M基因的保守区为靶区域设计特异引物和TaqMan荧光探针,建立一步法实时荧光RT-PCR方法,并对乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒Long株、冠状病毒OC43及229E、副流感病毒1、2、3型以及季节性流感病毒H1、H3进行检测,验证该方法的特异性和灵敏度,并对临床样本进行检测应用。结果所建立的一步法实时荧光RT-PCR可对甲型流感病毒进行特异扩增,操作方便快速,对H1和H3亚型的最低检出限可达0.01TCID50/ml;对384例临床咽拭子样本的检测准确度达99.5%。结论本研究建立的一步法实时荧光RT-PCR方法可实现对甲型流感病毒快速准确的检测,有助于对临床流感病例的快速诊断。     

自制扣式负压抽提装置在甲型流感病毒检测中的应用

目的:探讨自制扣式负压抽提装置在甲型流感病毒检测中的应用效果。方法:随机抽取2015年7月～2017年7月我院420份呼吸道分泌物样本,随机分成实验1组(180份)与实验2组(240份),实验1组采用的采用柱式抽提法,实验2组是自制扣式负压抽提法,观察两种方法的抽提效率与定量检测结果,同时观察两种方法对RNA的完整性的影响。结果:实验2组的抽提效率明显高于实验1组,并且定量检测结果的准确性与一致性明显优于实验1组;自制扣式负压抽提法对RNA完整性的影响低于柱式抽提法(P0.05)。结论:自制扣式负压抽提装置在甲型流感病毒检测中效率更好,并且提取纯度更高于柱式抽提法。     

应用胶体金免疫层析法快速检测甲型流感病毒

目的应用胶体金免疫层析法调查本地甲型流感病毒（FluA）的流行情况。方法利用免疫层析技术,采用双抗体夹心法,对1 031例鼻咽拭子样本进行特异性FluA抗原检测。结果 1 031例鼻咽拭子样本FluA抗原总阳性率为6.69%;男性阳性率为6.58%,女性阳性率为6.79%;按年龄分组统计,11~20岁和21~30岁年龄组FluA抗原阳性率均较高,分别达到7.43%和7.95%。结论采用胶体金免疫层析法可快速检测呼吸道标本中的FluA抗原,用于人群FluA病例筛查和疫情监测,对预防控制流感疫情蔓延具有重要意义。     

呼吸道病原体核酸检测对小儿呼吸道感染的临床诊治意义

目的 研究分析呼吸道病原体核酸检测对小儿呼吸道感染的临床诊治意义。方法 选取我院诊治100例呼吸道感染患儿,采集其咽拭子样本对呼吸道病原菌类型进行筛查,根据检测结果精准科学用药。结果 所有受检患儿均有相关类型的病原体感染,SP感染率最高,占44%,其次为MP感染;其中单一病原体感染率为59.0%,两种及以上病原体混合感染率为41.0%,小儿呼吸道感染病原体在冬季感染率最高、夏季最低,混合感染率秋季最高、夏季最低,不同季节病原体及感染情况均有明显差异（P<0.05）。结论 通过对呼吸道病原体核酸检测,可准确诊断小儿呼吸道感染,对指导临床用药意义重大。     

呼吸道病原体抗体检测在呼吸道感染中的应用效果

目的 探讨呼吸道病原体IgM抗体检测在呼吸道感染中的应用效果.方法 选择2018年8月—2020年2月该院收治1800例呼吸道感染患者作为研究对象.所有患者均以间接荧光免疫法对8种呼吸道病原体IgM抗体进行检测,包括甲型流感病毒(InfluenzaA virus,IFA)、乙型流感病毒(InfluenzaB virus...     

临床上小儿呼吸道感染病原体检测结果分析

呼吸道病原体是一类通过呼吸道侵入人体后引起呼吸道和（或）全身感染的病原体，多数情况下此类病原体经呼吸道进入人体后，感染宿主细胞诱导机体免疫应答，病程呈自限性，但在一定的人群中，病原体直接或加剧原有病情，能引起严重的疾病。本院采用检测血清中肺炎支原体、肺炎衣原体、呼吸道合胞病毒、腺病毒的方法，对小儿门诊及病区呼吸道感染的情况作初步调查。     

快速检测方法在呼吸道感染病原体检测的临床价值

目的探讨快速检测方法对呼吸道流感病毒、肺炎支原体检测的临床应用价值。方法选取该院2011年1月至2015年12月收集的386例上呼吸道感染患者标本进行检测,采用胶体金免疫沉积法检测患者鼻咽部分泌物中的A、B型流感病毒,采用快速培养法检测肺炎支原体,以间接免疫荧光法检测患者的血清病原体抗体IgM结果作为金标准,判断2种快速方法检测的临床价值。结果间接免疫荧光法共检出A型流感病毒感染患者54例,检出率13.59%;检出B型流感病毒感染患者37例,检出率9.59%;检出肺炎支原体感染患者61例,检出率15.80%。胶体金免疫沉积法检出A型流感病毒感染的敏感度为20.37%,特异性为92.77%;胶体金免疫沉积法检出B型流感病毒感染的敏感度为18.92%,特异性为93.41%;快速培养法检出肺炎支原体感染的敏感度为37.70%,特异性为89.85%。结论快速检测方法对呼吸道流感病毒、肺炎支原体检出的敏感度较低,临床上只能作为间接免疫荧光法检测的1种辅助手段。     

22种呼吸道病原体核酸多重联检试剂盒检测效能评估

目的 通过对1种新型呼吸道病原体核酸多重联检试剂盒检测效能评价,为新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、流行性感冒(流感)病毒等叠加流行的大规模检测提供适宜技术方法.方法 收集北京地区急性呼吸道感染病例阳性标本252份,采用4种核酸检测试剂盒(3种核酸多重检测试剂盒A、B、C及1种SARS-CoV-2检测试剂盒D)分别...     

灭活型保存液对甲型流感病毒核酸检测结果的影响

目的 通过大样本甲型流感病毒感染阳性标本的检测,明确灭活型样本保存液在不同保存条件和保存时间对甲流病毒核酸检测结果的影响。方法 对2022年2月至2022年3月山西白求恩医院疑诊流行性感冒的2 377名患者同时采集两份口咽拭子标本,一个拭子放在含有灭活型保存液的采集管中,另外一个拭子放在含有非灭活型保存液的采集管中。标本在生物安全二级实验室中分装在3个EP管中,1管即刻（采集后4小时内）进行核酸检测,另外两管分别保存在冷藏条件（2～8℃）和冷冻条件（-20℃以下）,48小时后进行核酸检测。采用实时荧光逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）方法对其进行病毒核酸检测。结果不一致时采用第二种核酸检测试剂进行比对。比较两种保存方法、保存条件和保存时间对病毒载量的检出差异。结果 即刻检测时两组甲型流感病毒的阳性检出率相同,均为74.5%(1 771/2 377),非灭活组平均循环阈值（Ct）值为（29.60±3.99）,灭活组为（31.30±2.67）,差异无统计学意义（t=0.35,P>0.05）;2～8℃和-20℃以下分别保存48小时后两组甲型流感病毒的阳性检出率无变化：非灭活组的平均C...     

常见呼吸道病原体的实验室检测

性疾病仍然是威胁人类健康的主要杀手,占世界人口死因的32．7％,其中呼吸道感染位居首位［1］。特别是甲型流感病毒基因变异重排,曾引起百年来数次世界范围内流感爆发流行,死亡人数超过2000万。从1997年香港发现首例禽流感（H5N1）患者至今,国内数省市有禽流感（H7N9）散发,死亡人数已达数百人［2-3］。2003年因冠状病毒所致严重急性呼吸道综合征,死亡1千余人［4］。因艾滋病、糖尿病和耐药等因素影响,国内结核菌感染及肺结核患者居高不下［5］。不仅造成患者死亡,同时严重影响经济发展。呼吸道病原体的实验室检测,可以明确感染病原体,有利于对疾病做出及时诊断、治疗,制定防控策略,阻止传播和流行。呼吸道病原体的实验室检测技术有多种,主要分为病原体分离培养、血清学检测和分子生物学检测。本文通过查阅文献,将主要检测技术及其在呼吸道病原体检测中的具体应用作一概述。     

双重荧光定量RT-PCR快速检测甲型和甲型H1N1流感病毒

目的建立双重荧光RT-PCR快速检测方法,用于甲型和甲型H1N1流感病毒的同时检测和鉴别诊断。方法针对甲型流感病毒M基因和甲型H1N1流感病毒NA基因的保守区序列分别设计特异性引物和Taqman探针,建立优化双重荧光RT-PCR反应体系,评价所建双重RT-PCR反应体系的特异性、敏感性和稳定性,并应用于疑似流感或甲型H1N1流感含漱液标本检测。结果该方法对甲型、甲型H1N1流感病毒检测具有高度特异性,检出限分别为0.01 TCID50和0.1 TCID50,具有较好的稳定性。可从疑似流感或甲型H1N1流感患者含漱液中直接检测到流感病毒核酸。结论本研究建立的双重荧光定量RT-PCR可以同时准确检测甲型和甲型H1N1流感病毒,灵敏度高,稳定性好,是一种快速检测流感病毒的新方法。     

直接免疫荧光法快速检测甲型流感病毒抗原的临床意义

目的探讨直接免疫荧光法快速检测早期甲型流感病毒抗原及其临床应用。方法选择临床上诊断为急性呼吸道感染入院的患者,采集标本200例,将其分为两组:冬春两季流行季节儿童组(100例)和夏秋两季非流感流行期间儿童组(100例),使用美国D3Ultra甲型流感病毒抗原检测试剂,采用荧光标记的单克隆抗体对感冒患者进行甲型流感病毒抗原检测。结果在冬春两季流感流行期间,100例儿童检测有8例阳性,阳性率为8%;在夏秋两季非流感流行期间100例儿童检测有2例阳性,阳性率为2%;两组阳性率比较差异有统计学意义(P0.05)。结论运用直接免疫荧光法快速检测甲型流感毒感抗原是一种经济、高效、快速、特异的检测方法,能指导临床快速诊断,合理用药。     

生物芯片在病原体检测中的应用

近几年发展起来的生物芯片技术为病原微生物检测提供了一种强有力的手段。现在 ,国内外利用生物芯片进行病原体检测研究的报道已不少 ,主要集中在病毒和细菌两个方面 ,如HIV、HCV、HCMV、分枝杆菌等。生物芯片在病原体检测中虽已发挥了一定的潜力 ,但有些方面仍需改进 ,不过 ,总的来说 ,生物芯片在病原体检测中的应用前景很广阔     

生物芯片在病原体检测中的应用

近几年发展起来的生物芯片技术为病原微生物检测提供了一种强有力的手段，现在，国内外利用生物芯片进行病原体检测研究的报道已不少，主要集中在病毒和细菌两个方面，如HIV、HCV、HCMV、分枝杆菌等，生物芯处在病原体检测中虽已发挥了一定的潜力，但有些方面仍需改进，不过，总的来说，生物芯片在病原体检测中的应用前景很广阔。     

广州地区2460例呼吸道感染患者7种呼吸道病原体RNA检测结果分析

目的 通过检测7种呼吸道病原体RNA,了解广州地区呼吸道病原体的分布和流行情况.方法 采用核酸双扩增法检测2019年3月至2020年2月广东省人民医院2460例呼吸道感染门诊和住院患者咽喉拭子中7种呼吸道病原体RNA,并对患者的性别、年龄、病原体的季节分布等进行统计分析.结果 广州地区2640例呼吸道疾病患者7种呼吸道...     

一种快速核酸提取试剂在流感病毒检测中的应用评价

目的 探讨一种快速核酸提取试剂在流感病毒检测中的适用性及有效性。方法 选取流感病毒H3亚型、乙型Yamagata系细胞株和甲型H1N1型鸡胚株各1株,对其倍比稀释液及2015年北京市流感病原学监测阳性的67份咽拭子样本,同时采用快速提取法及离心柱提取法提取病毒核酸,经实时荧光PCR法进行定性、定量检测,检测结果采用SPSS 19.0软件进行统计分析。结果 快速提取法提取细胞培养液、鸡胚培养液中流感病毒核酸的最低检测限高于离心柱法10倍,咽拭子样本则高100倍;快速提取法提取核酸后检测到的病毒载量均低于离心柱法,其中对含有病毒量较高的毒株检测到的病毒载量低于离心柱法10倍,而对病毒量较少的咽拭子样本,则低100倍;快速提取法稳定性优于离心柱法;提取后的核酸-80℃保存10 d后冻融复测,快速提取法核酸损失量大于离心柱法。67份离心柱提取法检测阳性咽拭子样本使用快速提取法提取核酸后检测,两种方法阳性符合率总计为92.54%,其中10～102拷贝/ml组,阳性符合率为76.92%,102～103拷贝/ml组,阳性符合率为92.59%,103拷贝/ml组,阳性符合率为100%。结论 快速提取法具有稳定性高、易于操作、不易污染的优势,适用于细胞培养液、鸡胚培养液等病毒含量较高的大量样本中流感病毒核酸提取,适于检测样本量大、人手不足、设备欠缺的基层实验室使用;但-80℃冻融后核酸损失量较大,不宜反复冻融后使用;传统的离心柱法对于病毒含量较少的咽拭子样本及核酸需被反复冻融使用时具有优势。     

呼吸道病原体检测平台应用进展

呼吸道感染(RTIs)是临床感染性疾病的主要死因。随着医学技术的高速发展,呼吸道病原体检测技术取得了巨大进展,其中高通量测序技术平台在呼吸道罕见病原体诊断中发挥了重要作用。该文基于传统病原体检测技术、生物芯片技术以及二代测序技术,结合呼吸道病原体检测平台的应用,从技术原理、临床应用展开述评,以期为呼吸道病原体高通量检测的临床实践提供参考。     

甲型H1N1流感病毒临床实验室诊断策略

目的 探讨用于甲型H1N1流感患者临床实验室诊断的策略.方法 采用Dot-ELISA法检测流感患者中的甲型流感病毒的抗原,初步明确为甲型流感或排除非甲型流感;采用real-time RT-PCR法检测甲型流感病毒抗原阳性患者中的甲型H1N1流感病毒特异性核酸,进一步确定甲型H1N1流感病毒.结果 对44 448例在西安地区就诊的发热伴有流感样症状者的鼻咽腔取分泌物进行甲型流感病毒抗原筛查,其阳性筛检率为28.25%;对甲型流感病毒抗原筛查阳性的17 714例患者进行甲型H1N1流感病毒核酸检测,其阳性检出率为41.92%.结论 首先用甲型流感病毒抗原筛查,排除非甲型流感病毒;进而在甲型流感病毒的范围内进行甲型H1N1流感病毒的检测,即加快了甲型流感病毒的排查效率,又减轻了甲型H1N1流感病毒核酸检测的压力;进而又减轻了大部分非甲型H1N1流感患者核酸检测的经济负担.该文认为该检测策略为甲型H1N1流感病毒的临床实验室诊断提供了参考,可为甲型H1N1流感病毒感染的控制、诊断,以及合理用药和针对性治疗提供依据.     

多重PCR病原体分子检测技术在下呼吸道感染诊断中的应用价值

目的 分析多重PCR病原体分子检测技术在下呼吸道感染诊断中的应用价值.方法 随机选取2019年1月至2019年12月于两家医院接受治疗的128例下呼吸道感染患者作为研究对象,提取患者的痰液标本后分别使用多重PCR和直接免疫荧光法进行病原体检测,对比不同检查方式的检查结果.结果 128例患者经多重PCR检测后共检出阳性标...     

两种国产甲型流感病毒抗原试剂检测2009 H1N1流感病毒敏感性实验研究

目的评价两种国产甲型流感病毒抗原试剂盒检测2009H1N1流感病毒的敏感性。方法用这两种试剂检测已知病毒滴度和血凝素基因拷贝数的2009H1N1流感病毒毒株,计算试剂敏感性;同时与real—time RT PCR方法比较,探讨其临床应用。结果免疫渗滤法对2009H1N1流感病毒敏感性为2．58&#215;10^5copies／ml,检测底线TCID50为10^2.33／ml;胶体金法为2．58&#215;100^8copies／ml,TCID50为10^5.33／ml。对59份核酸阳性标本进行检测,免疫渗滤法34份阳性,胶体金法21份阳性,两种方法检出率比较差异有统计学意义（Х^2=5．76,P〈0．05）。结论免疫渗滤法虽然操作繁琐,但在对2009H1N1流感病毒进行检测时敏感性明显高于胶体金法。