EV71感染对神经胶质瘤细胞GSTP1基因表达与细胞迁移及侵袭的影响

目的分析肠道病毒71型(EV71)感染对神经胶质瘤细胞谷胱甘肽S-转移酶P-1(GSTP1)基因表达及细胞迁移、侵袭的影响。方法培养神经胶质瘤U251细胞,行EV71感染,分为EV71感染和空白对照组,分析EV71感染对神经胶质瘤细胞GSTP1基因表达及细胞迁移、侵袭的影响。结果光镜下可见,与空白对照组相比,经EV71感染处理48 h后的神经胶质瘤U251细胞形态变化,存在典型的细胞病变效应现象,细胞钝化、变小,细胞间隙增大。聚合酶链反应(PCR)检测结果显示,与空白对照组比较,EV71感染组细胞中GSTP1基因表达量升高,12、24、48 h细胞迁移率和细胞侵袭数均升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论 EV71感染可明显增加GSTP1基因在神经胶质瘤细胞中的表达,促进细胞迁移、侵袭,这可能是EV71感染引起神经系统功能紊乱的机制之一。     

Adv-shRNA抑制CXCR4基因表达对人前列腺癌细胞PC-3增殖和侵袭力的影响

目的 通过特异性抑制前列腺癌细胞株PC-3中趋化因子受体4(CXCR4)基因的表达,检测RNA干扰片段对PC-3细胞增殖及侵袭转移能力的影响.方法 将CXCR4的特异性RNA干扰腺病毒载体转染至前列腺癌PC-3细胞72 h后荧光显微镜观察转染情况;采用RT-PCR法检测转染后CXCR4基因mRNA表达情况;Western blot检测转染后CXCR4蛋白表达情况;MTT法检测PC-3细胞增殖情况;Transwell小室侵袭实验检测对PC-3细胞侵袭转移能力.结果 (1)成功将CXCR4-shRNA重组腺病毒载体转染至前列腺癌细胞PC-3; (2)重组腺病毒转染组CXCR4基因mRNA及蛋白均低于阴性对照组和空白组,差异有统计学意义(P＜0.01),而阴性对照组与空白组之间差异无统计学意义(P＞0.05); (3)阴性对照组与空白组细胞增殖迅速,两组之间差异无统计学意义(P＞0.05),实验组经腺病毒载体转染后细胞增殖程度显著减少,与前两组相比差异有统计学意义(P＜ 0.05); (4) CXCR4-shRNA腺病毒载体与空白组及对照组相比能显著抑制PC-3细胞的侵袭力(P＜0.05),抑制率为57.01％,空白组与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 重组腺病毒载体CXCR4-shRNA可有效抑制前列腺癌细胞PC-3中CXCR4基因的mRNA和蛋白的表达,并在一定程度上抑制癌细胞增殖及远处侵袭转移,可作为动物实验的理论基础和前期条件.     

β-淀粉样蛋白对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤克隆株内质网钙库的影响

目的探讨β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤克隆株(PC-12细胞)内质网钙库的影响。方法用已老化的Aβ25-35[浓度分别为0(对照)、10、15、20μmol/L]对经神经生长因子(NGF)处理过的PC-12细胞染毒24、48、72 h。测定PC-12细胞内[Ca2+]i及内质网Ca2+-ATP、IP3m RNA的表达水平。结果与对照组比较,15、20μmol/L Aβ25-35染毒各时间点PC-12细胞内[Ca2+]i均较高,差异均有统计学意义(P0.05);与染毒24 h比较,各剂量Aβ25-35染毒48 h、72 h时PC-12细胞内[Ca2+]i均增高,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各剂量Aβ25-35染毒各时间点PC-12细胞内质网IP3m RNA表达水平均较高,差异均有统计学意义(P0.05);与染毒24 h比较,各剂量Aβ25-35染毒48 h、72 h时PC-12细胞IP3m RNA表达水平均增高,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,20μmol/L Aβ25-35染毒24、48 h及各剂量Aβ25-35染毒72 h后PC-12细胞内质网Ca2+-ATP mRNA表达水平均较高,差异均有统计学意义(P0.05);与染毒24 h比较,20μmol/L Aβ25-35染毒48 h及各剂量Aβ25-35染毒72 h时PC-12细胞内质网Ca2+-ATP mRNA表达水平均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。随着Aβ25-35染毒剂量的升高和染毒时间的延长,PC-12细胞内[Ca2+]i及内质网Ca2+-ATP、IP3mRNA的表达水平均呈上升趋势。结论 Aβ具有神经毒性,可抑制PC-12细胞的生长,破坏神经细胞内质网及细胞内钙稳态。     

双酚A对雌性小鼠血清性激素及卵巢氧化损伤的影响

目的探讨双酚A(bisphenol A,BPA)对雌性小鼠血清性激素水平影响及卵巢氧化损伤作用。方法将30只1周龄健康SPF级昆明雌性小鼠按体重随机分为对照(玉米油)组和100、200 mg/kg BPA染毒组,每组10只。采用灌胃方式进行染毒,染毒容量为0.01 ml/g,每天1次,每周连续染毒5 d,共染毒12周。测定小鼠血清中雌二醇(E_2)、孕酮(P)、卵泡刺激素(FSH)及卵巢细胞活性氧(ROS)的水平;通过免疫组化SP法检测卵巢Bcl-2及Bax蛋白的表达,并计算Bcl-2/Bax值。结果与对照组相比,各剂量BPA染毒组小鼠血清中E_2、P的水平均降低,而FSH的水平均升高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着BPA染毒剂量的升高,小鼠血清中E_2、P的水平均呈下降趋势,而FSH的水平呈上升趋势。与对照组相比,各剂量BPA染毒组小鼠卵巢细胞ROS的水平均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着BPA染毒剂量的升高,小鼠卵巢细胞ROS的水平呈上升趋势。与对照组相比,各剂量BPA染毒组小鼠卵巢细胞BAX蛋白的表达水平均较高,而Bcl-2蛋白的表达水平及Bcl-2/BAX值均降低,差异均有统计学意义(P0.05);且随着BPA染毒剂量的升高,小鼠卵巢细胞BAX蛋白的表达水平呈上升趋势,而Bcl-2蛋白的表达水平及Bcl-2/BAX值均呈下降趋势。BPA染毒组卵巢颗粒细胞和卵泡的形态结构病理学变化明显。结论 BPA可致小鼠卵巢组织发生明显的氧化损伤。     

Caveolin-1在人雄激素非依赖性前列腺癌细胞系中的表达

目的 研究人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3和PC-3m细胞中Caveolin-1mRNA的表达,分析Caveolin-1与前列腺癌发生发展的关系,探讨Caveolin-1表达在PC-3m具有高侵袭性和转移性中的作用.方法 以PC-3和PC-3m细胞系为研究对象,采用RT-PCR检测PC-3和PC-3m细胞系中Caveolin-1 mRNA的表达.结果 PC-3、PC-3m细胞中均有Caveolin-1 mRNA的表达,其在Pc-3m细胞中的表达水平明显高于PC-3细胞,两者差异有统计学意义(P<0.01).结论 Caveolin-1在人前列腺癌的侵袭和转移过程中发挥作用.     

miR-30c-5p通过调节Notch1的表达抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成

目的：探讨miR-30c-5p通过调节Notch1表达对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭和管状形成调控的机制,确定其在子痫前期发病中的潜在作用。方法：在体外对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo进行培养,慢病毒系统构建miR-30c-5p过表达及敲低稳转HTR-8/SVneo细胞系。分为对照组、导入miR-30c-5p过表达质粒组和导入miR-30c-5p敲低质粒组。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-30c-5p和Notch1基因的表达量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中Notch1蛋白的表达量,划痕愈合实验、Transwell侵袭实验和管状形成实验分别检测各组细胞的迁移、侵袭和管状形成能力。结果：与对照组比较,miR-30c-5p过表达质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平升高(P<0.0001),细胞Notch1蛋白表达水平下降(P<0.01),细胞迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.001)和管状形成能力(P<0.05)均受到抑制。反之,miR-30c-5p敲低质粒组中细...     

一种新微小RNA 在BPDE抑制滋养层细胞侵袭迁移中的作用和调控机制

目的 探索新微小RNA miR-hz01在二羟环氧苯并芘(BPDE)抑制滋养层细胞侵袭迁移中的作用和机制，揭示BPDE抑制滋养层细胞侵袭迁移的新机制。方法 采用女性永生化滋养层细胞系Swan 71,进行BPDE染毒，并转染miR-hz01抑制剂对其进行敲低，通过细胞侵袭(Transwell)与划痕实验测定滋养层细胞侵袭迁移情况，采用逆转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定miR-hz01含量，免疫印迹实验(Western blot, WB)实验测定细胞中蛋白激酶B(protein kinase B,PKB or AKT)蛋白表达水平。采用t检验比较两组数据之间的差异。结果 BPDE染毒的滋养层细胞中，miR-hz01表达水平是对照组的2.98倍，AKT蛋白表达水平是对照组的45.30%,滋养层细胞的侵袭迁移被抑制。BPDE染毒的滋养层细胞中再转染miR-hz01抑制剂(Inhibitor)或其相应阴性对照(Inhibitor-NC or NC),BPDE+Inhibitor组的AKT蛋白水平是BPDE+NC组的2.08倍，且滋养层细胞侵袭迁移功能有所恢复。结论 BPDE染毒的滋...     

Caveolin-1在人雄激素非依赖性前列腺癌细胞系中的表达

目的研究人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3和PC-3m细胞中Caveolin-1 mRNA的表达，分析Caveolin—1与前列腺癌发生发展的关系，探讨Caveolin—1表达在PC-3m具有高侵袭性和转移性中的作用。方法以PC-3和PC-3m细胞系为研究对象，采用RT-PCR检测PC-3和PC-3m细胞系中Caveolin-1 mRNA的表达。结果PC-3、PC-3m细胞中均有Caveolin-1 mRNA的表达，其在PC-3m细胞中的表达水平明显高于PC-3细胞，两者差异有统计学意义（P〈0．01）。结论Caveolin-1在人前列腺癌的侵袭和转移过程中发挥作用。     

活化T细胞核因子在双酚A调控巨噬细胞分泌IL-10中的作用

研究活化T细胞核因子(NFAT)在环境内分泌干扰物双酚A(BPA)调控小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)分泌白细胞介素-10(IL-10)蛋白中的作用,为进一步研究BPA的免疫毒作用机制提供理论依据。将不同剂量的BPA(0.1、1、10、100及1000μmol/L)作用于RAW264.7细胞24 h、48 h,用CCK8试剂盒检测细胞活性。以1μg/ml脂多糖(LPS)为激活剂,以1、10、50、100μmol/L BPA作用细胞24 h,ELISA试剂盒检测细胞上清液中IL-10蛋白含量。10、100μmol/L BPA作用细胞4 h、12 h,用实时定量PCR方法测定IL-10、NFATc、NFATp基因表达。与对照组比较,1000μmol/L BPA无论作用24 h还是48 h均能明显抑制细胞活性(P0.01);LPS显著促进巨噬细胞分泌IL-10蛋白,50和100μmol/L BPA作用细胞24 h,与LPS组比较,显著抑制IL-10蛋白的分泌(P0.01);10μmol/L、100μmol/L BPA染毒4 h能明显促进NFATp mRNA表达(P0.01);染毒12 h时,IL-10 mRNA水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。提示本实验条件下,NFATp在BPA调控巨噬细胞分泌IL-10蛋白中具有一定的作用。     

慢病毒介导HMGN5基因沉默对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的观察慢病毒介导的高迁移率族核小体结合域5(HMGN5)基因沉默对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并对其机制进行初步探讨。方法 RT-qPCR法检测人卵巢上皮细胞株IOSE及4株不同卵巢癌细胞中HMGN5的表达情况,将HMGN5 shRNA慢病毒载体转染至人卵巢癌细胞SKOV3中,RT-qPCR和Western blot检测SKOV3细胞中HMGN5 mRNA和蛋白表达情况,MTT法检测沉默HMGN5基因对细胞增殖能力的影响,划痕实验检测沉默HMGN5基因对细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测沉默HMGN5基因对细胞侵袭能力;Western blot检测SKOV3细胞中PCNA、MMP-9、Wnt1和β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达水平。结果与卵巢上皮细胞株IOSE相比,HMGN5在卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、HO-8910、Caov3中的表达明显升高(P<0.05)。与Blank组和NC组相比,sh-HMGN5组SKOV3细胞中HMGN5 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显下降(P<0.05),细胞中PCNA、MMP-9、Wnt1和β-catenin蛋白表达水平明显下调(P<0.05)。结论沉默HMGN5可能通过阻碍Wnt/β-catenin信号通路的激活抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

利多卡因抑制乳腺癌和前列腺癌细胞侵袭的作用和机制研究

目的 研究利多卡因对乳腺癌和前列腺癌细胞侵袭、迁移的作用及作用机制。方法 不同浓度利多卡因处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞和前列腺癌PC-3细胞。采用MTT试验测定细胞活力,划痕实验评估细胞迁移距离,Transwell试验检测细胞侵袭能力。同时,使用Fluo-3 AM荧光探针对细胞内游离 Ca2+([Ca2+]i)进行测量,并测定各细胞中瞬时受体电位阳离子通道亚家族V成员6(TRPV-6)mRNA和蛋白质的表达水平。结果 划痕试验及Transwell侵袭试验结果显示:与0μM利多卡因相比,100μM、1mM利多卡因处理后对MDA-MB-231、PC-3癌细胞迁移(MDA-MB-231:q100μM=4.549,q1mM =6.675;PC-3:q100μM =3.618,q1mM=5.992)、侵袭(MDA-MB-231:q100μM=3.480,q1mM =4.156;PC-3:q100μM =4.828,q1mM=7.331)均存在抑制作用。Fluo-3 AM染色后发现100μM、1mM处理的MDA-MB-231、PC-3 的[Ca2+]i下降(P<0.05)。qPCR与Western blot结果显示,100μM、1mM利多卡因处理后,两类癌细胞中的TRPV-6 mRNA及蛋白表达含量均降低(P＜0.05)。结论 利多卡因在低于临床浓度的情况下可抑制MDA-MB-231,PC-3细胞的侵袭和迁移,此机制可能与钙流入速率及TRPV-6表达下调相关。     

下调DJ-1基因对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭影响的研究

目的 探讨下调DJ-1基因对甲状腺乳头状癌细胞体外增殖和侵袭能力的影响。方法 下调人甲状腺乳头状癌细胞TPC-1中DJ-1的表达,应用Western印迹法检测细胞经过转染前后DJ-1蛋白表达水平;通过迁移和侵袭实验检测下调DJ-1表达前后甲状腺乳头状癌细胞发生迁移和侵袭行为的情况。结果 转染si DJ-1组DJ-1蛋白的相对表达量明显较空白对照组和转染非特异性对照组减弱(P<0.05),而后两者之间比较,DJ-1蛋白相对表达量相似,差异无统计学意义(P>0.05)。在细胞迁移和侵袭实验中,转染si DJ-1组中迁移穿膜和侵袭穿膜的细胞数量均明显少于空白对照组和转染非特异性对照组(t迁移=4.494,4.481,t侵袭=4.039,3.594,P<0.05),而空白对照组和转染非特异性对照组之间,差异无统计学意义(t=2.068,2.141,P>0.05)。结论 DJ-1基因在人甲状腺乳头状细胞迁移、侵袭中发挥着重要的作用。     

lncRNA DDX11-AS1靶向miR-299-3p调控宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)DDX11反义RNA1(DDX11 antisense 1,DDX11-AS1)靶向miR-299-3p对宫颈癌细胞增殖、迁移侵袭的影响。 方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测宫颈癌组织、癌旁组织中DDX11-AS1和miR-299-3p表达水平。将小干扰RNA阴性对照(si-NC组)、DDX11-AS1小干扰RNA组(si-DDX11-AS1组)、miR-299-3p模拟物组(miR-299-3p组)、miRNA模拟物阴性对照组(miR-NC组)、si-DDX11-AS1+miRNA抑制物阴性对照组(si-DDX11-AS1+anti-miR-NC组)、si-DDX11-AS1+miR-299-3p抑制物组(si-DDX11-AS1+anti-miR-299-3p组)分别转染HeLa细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、transwell实验分别检测细胞活力、迁移侵袭能力。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR验证DDX11-AS1对miR-299-3p的靶向调控作用。 结果 与癌旁组织相比,宫颈癌组织中DDX11-AS1表达显著升高,miR-299-3p表达显著降低(P<0.05)。与si-NC组相比,si-DDX11-AS1组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-299-3p组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。与si-DDX11-AS1+anti-miR-NC组比较,si-DDX11-AS1+anti-miR-299-3p组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著升高(P<0.05)。miR-299-3p是DDX11-AS1的靶基因,DDX11-AS1负调控miR-299-3p表达。 结论 宫颈癌中DDX11-AS1呈高表达。沉默DDX11-AS1通过上调miR-299-3p能够降低宫颈癌细胞增殖、迁移侵袭能力。     

miRNA转录组学分析镉致小鼠睾丸间质细胞毒性作用机制

目的 运用转录组测序及生物信息学技术，探讨镉通过调控微小RNA(microRNA, miRNA)引起小鼠睾丸间质细胞(TM3)毒性的机制。方法 选取TM3为细胞模型，分为对照组(不予镉处理)和镉染毒组(20μmol/L CdCl₂),24 h后收获细胞提取总RNA,通过RNA质量检测后上机执行测序程序得到miRNA的表达谱。以差异倍数(fold change, FC)>2,P<0.05作为标准筛选显著差异表达miRNA,并采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)对差异表达miRNA进行验证。同时，利用miRanda软件预测其靶基因，构建miRNA-靶基因互作网络并对靶基因进行基因本体学(gene ontology, GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)功能富集分析。结果 筛选出镉致TM3细胞毒性相关的26个显著差异表达miRNA,其中19个显著上调，7个显著下调。qRT-PCR对其中3个差异miRNA进行表达...     

邻苯二甲酸二乙基己酯与双酚A联合染毒对大鼠肝脏损伤及其氧化应激机制

目的观察邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)与双酚A(BPA)联合染毒对大鼠肝脏损伤,探讨其氧化应激机制。方法无特定病原体级健康雄性SD大鼠随机分为对照组、DEHP组、BPA组和联合染毒组,每组8只。采用经口灌胃法,DEHP组大鼠予750 mg/kg体质量DEHP,BPA组大鼠予100 mg/kg体质量BPA,联合染毒组大鼠予750mg/kg体质量DEHP和100 mg/kg体质量BPA,连续染毒6周,每周7 d,1次/d。观察大鼠肝脏脏器系数和组织病理学改变,采用分光光度法检测大鼠肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测大鼠肝脏组织抗氧化基因核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(Gclc)、硫氧还蛋白还原酶(Txnrd)、Sod3和Gpx1的相对表达水平。结果 DEHP组大鼠从第2周、联合染毒组大鼠从第3周开始体质量低于对照组(P0.05)。DEHP组和联合染毒组大鼠肝脏质量及脏器系数均高于对照组(P0.05)。肝脏组织病理学检查结果显示:DEHP组大鼠出现肝细胞坏死,BPA组大鼠肝细胞胞浆呈空泡样变,联合染毒组大鼠出现严重的炎细胞浸润。与对照组比较,3个染毒剂量组大鼠肝脏组织SOD和GSH-Px活力均下降(P0.05),H2O2水平均升高(P0.05);BPA组和联合染毒组大鼠肝脏组织MDA水平均升高(P0.05)。与对照组比较,3个染毒组大鼠肝脏Nrf2、HO-1和Gpx1 mRNA相对表达水平均下降(P0.05),DEHP组和联合染毒组大鼠肝脏Gclc、Txnrd和Sod3mRNA相对表达水平均下降(P0.05);联合染毒组大鼠肝脏Nrf2、HO-1、Gclc、Txnrd和Sod3 mRNA相对表达水平均低于BPA组(P0.05)。结论本研究条件下,DEHP、BPA单独及联合染毒均可导致大鼠肝脏损伤,联合作用大于单独作用,DEHP的影响大于BPA;DEHP和BPA所致大鼠肝脏损伤与Nrf2信号通路有关。     

MiR-191靶向调控TIMP3促进肺癌细胞恶性转化进程的研究

目的探索miR-191靶向调控基质金属蛋白酶抑制剂3(TIMP3)对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭影响及相关机制,为深入了解肺癌发生发展机制及寻找新的诊断和治疗靶标提供新思路。方法 Target Scan软件预测miR-191的潜在靶基因;双荧光素酶报告实验检测miR-191对TIMP3调控作用; Western blot和实时定量聚合酶链式反应(qPCR)检测正常肺细胞CCD-19Lu和肺癌细胞A549中TIMP3、miR-191表达水平;肺癌细胞A549中转染anti-miR-191后检测TIMP3蛋白表达变化;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力; Transwell检测细胞迁移、侵袭能力; Western blot检测细胞中MMP2、JNK、p-JNK、β-actin蛋白表达水平。结果 Target Scan预测软件发现TIMP3是miR-191的潜在靶基因;双荧光素酶报告实验证实TIMP3是miR-191的靶标;正常肺细胞CCD-19Lu中miR-191表达较低,TIMP3 mRNA表达较高;肺癌细胞A549中miR-191表达较高,TIMP3 mRNA表达较低;肺癌细胞A549中转染anti-miR-191可显著增加TIMP3蛋白表达;MTT结果显示肺癌细胞增殖未受明显影响; Transwell实验结果表明anti-miR-191可抑制细胞迁移和侵袭; Western blot结果显示TIMP3下游癌蛋白MMP2、p-JNK显著下调。结论 TIMP3是miR-191的一个靶标,肺癌中高表达的miR-191可靶向抑制TIMP3激活MMP2、JNK等癌基因促使肺癌细胞发生恶性转化; miR-191/TIMP3信号轴在肺癌恶性病变过程中可能起重要作用,可成为肺癌早期诊断与靶向治疗的分子靶标。     

AMPK-mTOK信号通路参与百草枯致PC12细胞的自噬抑制作用

目的探讨AMPK-mTOR信号转导通路在百草枯(paraquat,PQ)诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(PC12)自噬异常中的调控作用。方法用终浓度0、25、50、100、200、300、400 μmol/L PQ处理PC12细胞24 h,300 μmol/L PQ处理细胞不同时间(6、12、24、48 h),四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞相对存活率,确定剂量/时间-效应关系;终浓度0、100、200、300 μmol/L PQ处理细胞24 h,分光光度法检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活力;二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)法检测细胞内活性氧(ROS)水平;单丹磺酰尸胺(MDC)染色法观察自噬溶酶体的表达及分布变化;免疫荧光(IF)检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达水平;免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ、p62、Beclin1及AMPK-mTOR信号通路蛋白p-AMPK、p-mTOR表达水平。结果与对照组比较,100、200、300、400 μmol/L PQ染毒组的细胞存活率明显降低,且呈剂量依赖关系,差异有统计学意义(P<0.05)。300 μmol/L PQ处理细胞不同时间(6、12、24、48 h),细胞存活率随染毒时间的延长而下降,其中12、24、48 h染毒组的差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,100、200、300 μmol/L PQ染毒组细胞上清液中LDH活力明显升高,细胞内ROS荧光强度明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);MDC染色结果显示,PQ染毒组的自噬溶酶体在核周分布密度降低、荧光强度减弱、自噬水平降低;免疫荧光结果显示,PQ染毒组的LC3荧光强度减弱,细胞自噬水平下降,与MDC染色结果一致。Western blot结果显示,与对照组比较,PQ染毒组的自噬相关蛋白LC3Ⅱ、Beclin1表达水平均明显降低,而p62蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。200、300 μmol/L PQ染毒组的p-AMPK蛋白表达水平降低,p-mTOR蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PQ致PC12细胞损伤过程中,细胞自噬水平降低,AMPK-mTOR信号通路发挥调节作用。     

番茄汁对人前列腺癌细胞DNA损伤作用的影响

目的探讨番茄汁对人前列腺癌细胞株(PC-3)DNA损伤作用的影响。方法于人前列腺癌PC-3细胞的细胞培养液中分别加入番茄汁40,80,120μl/ml,培养48h;用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测番茄汁对人前列腺癌PC-3细胞DNA损伤程度。结果番茄汁可引起PC-3细胞DNA链断裂,细胞尾长与拖尾率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论番茄汁能导致人前列腺癌PC-3细胞的DNA损伤。     

LncRNA PTPRG-AS1通过靶向miR-5590-3p调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探讨LncRNA PTPRG-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法以正常乳腺上皮细胞MCF-10A为对照,qRT-PCR法检测乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D和BT549)中 LncRNA PTPRG-AS1 和 miR-5590-3p 表达。分别转染 si-LncRNA PTPRG-AS1、miR-5590-3p mimics、共转染si-LncRNA PTPRG-AS1与anti-miR-5590-3p至乳腺癌MCF-7细胞,用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法检测细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA PTPRG-AS1和miR-5590-3p的调控关系。结果与MCF-10A细胞比较,乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D和BT549)中LncRNA PTPRG-AS1表达升高,差异有统计学意义(P<0.05),miR-5590-3p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。敲减LncRNA PTPRG-AS1或过表达miR-5590-3p后,MCF-7细胞增殖活性、迁移数、侵袭数及细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA PTPRG-AS1靶向负调控miR-5590-3p。敲减miR-5590-3p逆转了敲减LncRNA PTPRG-AS1对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论 LncRNA PTPRG-AS1可能靶向下调miR-5590-3p促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。