KPC酶在肺炎克雷伯菌碳青霉烯类耐药中的研究

目的运用RNA干扰技术探讨blaKPC表达与碳青霉烯类耐药的关系。方法用电转移法将双链小RNA（SiRNA）转入到2株产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶-2（KPC-2）的肺炎克雷伯菌中,检测RNA干扰前后菌株blaKPC的RNA水平和亚胺培南、厄他培南的最低抑菌浓度（MIC）值的变化。结果菌株在RNA干扰前后blaKPC-2的RNA水平有差异,但干扰前后亚胺培南和厄他培南的MIC值没有变化。结论 SiRNA虽然能在RNA水平上抑制blaKPC的表达,但对产KPC-2菌株碳青霉烯类耐药的影响不明显,证明革兰阴性杆菌对碳青霉烯类耐药由多种因素共同引起。     

KPC酶在肺炎克雷伯菌碳青霉烯类耐药中的研究

目的运用RNA干扰技术探讨blaKPC表达与碳青霉烯类耐药的关系。方法用电转移法将双链小RNA(SiRNA)转入到2株产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶-2(KPC-2)的肺炎克雷伯菌中,检测RNA干扰前后菌株blaKPC的RNA水平和亚胺培南、厄他培南的最低抑菌浓度(MIC)值的变化。结果菌株在RNA干扰前后blaKPC-2的RNA水平有差异,但干扰前后亚胺培南和厄他培南的MIC值没有变化。结论 SiRNA虽然能在RNA水平上抑制blaKPC的表达,但对产KPC-2菌株碳青霉烯类耐药的影响不明显,证明革兰阴性杆菌对碳青霉烯类耐药由多种因素共同引起。     

碳青霉烯类抗菌药物不敏感的肺炎克雷伯菌产KPC酶监测

目的了解武汉地区肺炎克雷伯菌产KPC型碳青霉烯酶的耐药基因流行状况及型别,为有效监测和控制医院感染提供实验室依据。方法收集2014年6月至2015年10月武汉地区3家三甲医院对碳青霉烯类抗菌药物敏感性下降的肺炎克雷伯菌53株,均采用Phoenix-100全自动系统进行鉴定和药敏试验,采用改良Hodge试验进行KPC初筛,聚合酶链反应对53株菌分别进行blaKPC基因扩增,阳性扩增测序验证型别。结果 53株菌中38株菌改良Hodge试验阳性,阳性率为71.70%(38/53);32株扩增出780bp左右的目的条带,阳性率为60.38%(32/53);经测序和比对分析为blaKPC-2基因。结论武汉地区对碳青霉烯酶类抗菌药物不敏感的肺炎克雷伯菌的碳青霉烯酶基因主要为KPC-2型,临床感染和控制部门应加强监控,防范产KPC-2型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌在院内暴发和流行。     

产KPC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的检测与耐药状况分析

目的：了解该院肺炎克雷伯菌产KPC型碳青霉烯（KPC酶）的情况。方法收集临床分离的肺炎克雷伯菌756株,采用K‐B法进行药敏试验,筛选出耐碳青霉烯的肺炎克雷伯菌,采用改良的Hodge试验、PCR检测产KPC酶的肺炎克雷伯菌。结果在756株肺炎克雷伯菌中,检出耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌41株,进行Hodge试验,检出36株KPC酶阳性菌株,阳性率87．8％。PCR扩增检出KPC酶阳性菌株39株。结论该院内发现了产KPC酶的肺炎克雷伯菌,但其分型还有待于进一步检测。     

对肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶的研究进展

碳青霉烯类抗菌药物在临床上可用于多重耐药的细菌感染,随着临床上碳青霉烯类抗菌药物的广泛使用,产生了对亚胺培南或美罗培南耐药的肠杆菌。至今为止对碳青霉烯类耐药的肠杆菌还比较少见,     

肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶型碳青霉烯酶的研究进展

肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶(Klebsiella pneumoniaecarbapenemases,KPC)是碳青霉烯类抗生素耐药机制中的重要一环。自2000年美国报道了第1例病例后,产KPC的菌株便开始在全球陆续报道。一些国家和地区如以色列、希腊、波多黎各、美国东北部等均曾多次发生疫情爆发或流行[1]。由于KPC能迅速水解碳青霉烯类抗生素,并产生广谱耐药,故     

儿童患者临床标本中产KPC碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药性分析

目的研究儿童患者临床标本中,对厄他培南耐药的肺炎克雷伯菌KPC型碳青霉烯酶存在情况及对各类抗生素的耐药性,并对结果进行分析。方法对我院儿内科病房和儿外科病房分离的8株对厄他培南耐药的肺炎克雷伯菌进行KPC酶特异性PCR扩增,并对阳性结果进行测序,用E-test法测定菌株对亚胺培南、美罗培南、厄他培南、哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、头孢西丁、阿莫西林/棒酸、左氧氟沙星、阿米卡星和庆大霉素的耐药性。结果 8株肺炎克雷伯菌对美罗培南、厄他培南、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、头孢西丁、阿莫西林/棒酸均耐药;对阿米卡星、庆大霉素和左氧氟沙星均敏感;有5株对亚胺培南耐药,3株中介;仅1株对哌拉西林/他唑巴坦和氨曲南耐药。8株肺炎克雷伯菌经测序均携带KPC-2型碳青霉烯酶。结论我院儿童患者感染的对厄他培南耐药的肺炎克雷伯菌均产KPC-2型碳青霉烯酶,产酶菌株对碳青霉烯类抗生素的耐药性明显高于氨曲南和哌拉西林/他唑巴坦。     

产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药基因及流行病学研究进展

肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制主要包括产碳青霉烯酶、外膜蛋白缺失或突变、外排泵过度表达以及青霉素结合蛋白变异等,其中最主要的是产碳青霉烯酶。虽然各种肠杆菌科细菌的耐药机制大体相同,但是各种耐药基因在不同种属细菌中的分布和流行情况并不相同。肺炎克雷伯菌是临床上最常见的条件致病菌之一,也是检出率最高的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌。由于临床上治疗耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌感染的药物非常有限,此类患者的病死率较高［1］。自1997年在美国北卡罗莱纳州发现第1株耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌以来［2］,对碳青霉烯类耐药或敏感性降低的肺炎克雷伯菌检出率呈持续上升趋势,在肺炎克雷伯菌中发现的耐药基因突变类型也越来越多,这些基因大多存在细菌质粒上,往往通过细菌间的传播导致医院感染的流行。     

碳青霉烯耐药非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的敏感性及分子特点分析

目的分析碳青霉烯耐药非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae without producing carbapenemase,CRKPPC)的抗菌药物敏感性、β-内酰胺酶基因和外排泵基因的分布及外排泵抑制剂的抑制作用。方法收集2012—2014年我院碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌108株,用Mastdiscs combi Carba plus纸片系统检测碳青霉烯酶表型。用微量肉汤稀释法测定CRKPPC菌株对抗菌药物的敏感性;用PCR和DNA测序技术检测β-内酰胺酶耐药基因,包括超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lactamase,ESBL)和质粒介导的头孢菌素酶(Amp C)编码基因及外排泵基因acr AB-tolC、kex D、kde A、kpn EF和kpn GH;外排泵抑制剂羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)和利血平抑制试验分析外排泵在碳青霉烯耐药中的作用;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析细菌外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36的表达。结果碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌菌株中有26株细菌为CRKPPC;这26株细菌对β-内酰胺类药物高度耐药,对阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星和环丙沙星的耐药率均较高,但对替加环素、多黏菌素、头孢他啶/阿维巴坦和氨曲南/阿维巴坦等有很好的敏感性; blaCTX-M和blaSHV检出率依次为76.9%和57.7%;外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36均有不同程度的缺失,缺失率分别为57.7%和19.2%;80%以上的细菌中存在acr AB-tolC、kex D、kde A、kpn EF和kpn GH基因; CCCP对碳青霉烯类药物具有显著的抑制作用,而利血平没有明显的抑制作用。结论替加环素、多黏菌素可以作为CRKPPC联合用药的基础药物。CRKPPC菌株中存在Amp C、ESBLs及不同程度的外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36缺失,但外排泵对碳青霉烯类药物的外排作用是CRKPPC对碳青霉烯耐药的主要机制,外排泵抑制剂可能在这种细菌引起的感染治疗中有重要价值。     

有关肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯酶的研究进展

1KPC型酶的简介1996年，产KPC型酶的肺炎克雷伯菌首次在北卡罗来纳州发现[1]。属于分子分类的A类，功能分类的2f组。命名为KPC－1，可以被克拉维酸和他唑巴坦所抑制，但不能被EDTA所抑制。目前有11种亚型，分别命名为KPC－1／2－KPC－12[1]。     

碳青霉烯耐药非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的药物敏感性及分子特征分析

目的分析碳青霉烯耐药非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae without producing carbapenemase,CRKPPC)的抗菌药物敏感性、β-内酰胺酶基因和外排泵基因的分布及外排泵抑制剂的抑制作用。方法收集2012—2014年我院碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌108株,用Mastdiscs combi Carba plus纸片系统检测碳青霉烯酶表型。用微量肉汤稀释法测定CRKPPC菌株对抗菌药物的敏感性;用PCR和DNA测序技术检测β-内酰胺酶耐药基因,包括超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lactamase,ESBL)和质粒介导的头孢菌素酶(Amp C)编码基因及外排泵基因acr AB-tolC、kex D、kde A、kpn EF和kpn GH;外排泵抑制剂羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)和利血平抑制试验分析外排泵在碳青霉烯耐药中的作用;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析细菌外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36的表达。结果碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌菌株中有26株细菌为CRKPPC;这26株细菌对β-内酰胺类药物高度耐药,对阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星和环丙沙星的耐药率均较高,但对替加环素、多黏菌素、头孢他啶/阿维巴坦和氨曲南/阿维巴坦等有很好的敏感性; blaCTX-M和blaSHV检出率依次为76.9%和57.7%;外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36均有不同程度的缺失,缺失率分别为57.7%和19.2%;80%以上的细菌中存在acr AB-tolC、kex D、kde A、kpn EF和kpn GH基因; CCCP对碳青霉烯类药物具有显著的抑制作用,而利血平没有明显的抑制作用。结论替加环素、多黏菌素可以作为CRKPPC联合用药的基础药物。CRKPPC菌株中存在Amp C、ESBLs及不同程度的外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36缺失,但外排泵对碳青霉烯类药物的外排作用是CRKPPC对碳青霉烯耐药的主要机制,外排泵抑制剂可能在这种细菌引起的感染治疗中有重要价值。     

广东省东莞地区发现1株泛耐药产KPC一2型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌

目的研究泛耐药肺炎克雷伯菌的相关耐药机制和治疗对策。方法细菌鉴定采用VITEK2全自动细菌鉴定系统,药敏试验采用K—B法,通过产碳青霉烯酶确证试验（改良Hodge试验）及聚合酶链反应（PCR）检测KPC-2基因,并进行序列测定。同时调查感染患者的诊疗情况。结果常规药敏试验显示,该菌株对阿米卡星敏感,对其他抗菌药物均耐药;Hodge试验阳性,PCR检测到KPC-2基因,序列测定与GenBank1i844849序列一致。患者经拔除气管插管,人住隔离病房,加强支持治疗后,1个月内未检测到泛耐药肺炎克雷伯菌。结论加强泛耐药肺炎克雷伯菌监测,提高对泛耐药菌的认识有助于感染疾病的治疗和预防。     

产KPC酶肺炎克雷伯菌中ESBL的检测

目的 了解某医院产KPC酶肺炎克雷伯菌中产ESBL的情况,并建立一种有效的ESBL表型检测方法.方法 收集82株产KPC酶的肺炎克雷伯菌,纸片扩散法进行药物敏感试验;PCR和DNA测序鉴定超广谱β内酰胺酶基因型;脉冲场凝胶电泳进行同源性分析;CLSI推荐的ESBL表型确证试验、利用3-氨基苯酚硼酸的改良ESBL表型确证试验和改良Hodge试验进行表型试验.结果 含blaESBL的产KPC菌株对β-内酰胺类药物耐药率普遍高于单产KPC菌株.ES-BL基因检出率为79.3％,基因型以SHV型和CTX-M型为主.PFGE显示菌株间的相似性系数≥94％.改良Hodge试验均为阳性结果.ESBL表型确证试验检出率低,改良ESBL表型确证试验的检出率与PCR结果相符.结论 大多数产KPC菌株含ESBL基因,因此对β内酰胺类药物具备了更强的耐药性.利用3-氨基苯酚硼酸的改良ESBL表型确证试验能有效地检测合并产KPC菌株中ESBL的表型.     

产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌感染的临床和微生物学特点

目的 研究分析产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌感染的临床和微生物学特点.方法 收集2011年1-12月武警总医院18株产KPC酶的肠杆菌科细菌,使用PCR和测序的方法对菌株进行鉴定,用微量肉汤稀释法检测其对常用抗菌药物的耐药性,并对产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌感染的病例临床资料进行调查分析.结果 2011年从临床送检的标本中,通过表型鉴定和PCR检测,共分离出产KPC型碳青霉烯酶细菌18株,其中肺炎克雷伯菌13株,大肠埃希菌4株,产气肠杆菌1株.90％患者在产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌分离之前,使用过头孢菌素类(包括第二、三、四代头孢菌素)、头霉素、氨曲南和β内酰胺酶抑制剂复方制剂,70％患者使用过碳青霉烯类抗生素.所有菌株对头孢菌素类和碳青霉烯类抗生素耐药,对阿米卡星的敏感率为60.0％,对替加环素的敏感率为100％.经过治疗后,7例患者死亡,病死率43.8％.结论 产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的出现,提示临床上应严格控制抗生素的使用,加强医院感染控制措施,防止和减少此类耐药菌在医院内的传播.     

产碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌耐药机制及流行病学研究进展

正自2009年报道产NDM-1的肠杆菌后,"超级细菌"这一概念为公众所熟知,这一类耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌常表现为多重耐药菌(MDR),甚至泛耐药菌(PDR),对几乎所有β-内酰胺类抗生素耐药,并使酶抑制剂(克拉维酸等)失效,使临床治疗陷入被动。肠杆菌主要耐药机制为产碳青霉烯酶,水解β-内酰胺类抗生素而表现耐药性状。肺炎克雷伯菌(CPKP)常见于人体呼吸道、消化道,是一种条件致病的肠杆菌科细菌,临床检出率高。近年来产碳青霉烯酶类CPKP报道日渐增多,[1-2]     

三种表型试验筛选产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的临床效能评价

目的 比较改良Hodge试验(modified Hodge test, MHT)、改良碳青霉烯灭活试验(modified carbapenem inactivation method, m CIM)和EDTA-碳青霉烯灭活试验(EDTA-carbapenem inactivation method,e CIM)对产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌耐药表型的筛选能力。方法 收集2019年1月—2021年12月成都地区5家医院临床分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)菌株,并随机收集同时期分离的碳青霉烯敏感肺炎克雷伯菌(carbapenem sensitive Klebsiella pneumoniae, CSKP)。以聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增碳青霉烯耐药基因作为金标准,比较3种表型试验结果与基因检测结果的一致性。结果 共分离CRKP 160株,CSKP 120株。在160株CRKP中,156株检出碳青霉烯耐药基因,其中105株携带b_laKPC-...     

耐亚胺培南的肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因检测及其同源性分析

目的 了解南京市鼓楼医院碳青霉烯酶在耐亚胺培南的肺炎克雷伯菌中的分布情况,并进行其同源性分析.方法 收集耐亚胺培南的肺炎克雷伯菌34株,K-B纸片法测定菌株对药物的敏感性;采用改良Hodge试验及EDTA协同试验进行A,B类碳青霉烯酶初筛试验;PCR法扩增碳青霉烯酶基因并进行序列分析,ERIC-PCR后进行同源性分析.结果 34株肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗生素呈现泛耐药现象,耐药率达100％,仅对丁胺卡那、复方新诺明、左氧氟沙星敏感性相对较高,分别为17.6％,50％和23.5％.ERIC分析结果显示34株菌株主要分为两型,其中A型27株,B1型2株,B2型5株.结论 南京市鼓楼医院的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素耐药的首要原因是产KPC-2酶.     

多重耐药肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶的检测和分析

目的研究多重耐药肺炎克雷伯菌临床分离株的碳青霉烯酶的流行情况。方法收集该院从2007年1月至2012年12月临床分离的151株多重耐药肺炎克雷伯菌,并对其药敏结果进行归纳整理,用碳青霉烯酶表型试验进行检测,再用聚合酶链反应(PCR)检测已知的碳青霉烯酶基因,并对扩增产物进行DNA测序,确定其基因型。结果在151株多重耐药肺炎克雷伯菌中,通过改良Hodge试验筛选出12株可能产碳青霉烯酶的菌株,其中有1株的金属酶试验为阳性,该12株菌经PCR扩增及测序确定产碳青霉烯酶菌株有5株,金属酶阳性株为IMP-4型金属酶,另外4株产碳青霉烯酶菌株为KPC-2型。结论近年来该院多重耐药肺炎克雷伯菌出现了产碳青霉烯酶菌株,临床应根据药敏结果合理选用碳青霉烯类药物,以减少耐药菌株的产生。     

全球产KPC肺炎克雷伯菌的KPC分布与序列分型分析

目的 分析全球产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)的肺炎克雷伯菌的序列分型数据,探讨KPC-2、KPC-3与主要流行克隆之间的关系.方法 从NCBI中下载全球肺炎克雷伯菌的基因组,分析KPC的分布情况.对产KPC肺炎克雷伯菌基因组进行多位点序列分析,确定其序列分型(sequence type,ST).分析KPC在不同克隆...